[LT] Išradime aprašomi oksalilaminorūgščių dariniai, kurių formulė I, kurioje@R ir R' yra vienodi arba skirtingi ir yra C1-C6-alkilas arba vandenilis,@R1 yra vandenilis arba C1-C4-alkilas,@R2 yra vandenilis, C1-C6-alkilas, C1-C3-alkoksigrupė, karboksilas, C1-C6-alkoksikarbonilas, arilas, SH, NH2 arba halogenas, kur alkilo liekanose nėra pakaitų arba turi pakaitus, tokius kaip arilas, OH,SH arba NH2, arba @R1 ir R2 kartu sudaro alkileno grandinėlę C2-C4, o taip pat junginiai, kuriuose vyrauja grynas D- arba L- izomeras, bei šių junginių fiziologiškai tinkamos druskos.@Buvo rasta, kad šie junginiai yra geri prolin- ir lizin-hidroksilazių inhibitoriai.
[EN]
[0001] Išradimas skirtas oksalilaminorūgščių dariniams, skirtiems prolinhidroksilazės inhibavimui ir jų panaudojimui vaistinių preparatų gamyboje.
[0002] Oksalilamino rūgščių dariniai yra žinomi ir aprašyti, pa-vyzdžiui, FR- A 2010601, JP 43/ 10614 arba Biochemistry, 27( 8), 2934- 2943 ( 1988). Tačiau šių junginių panaudojimas vaistams iki šiol neaprašytas.
[0003]
[0004] R ir R' yra vienodi arba skirtingi ir yra C^- Cg- alkilas arba vandenilis;
[0005] las, C^- Cg- alkoksikarbonilas, arilas, SH, NH2' arba halogenas;
[0006] be to, alkiolo liekanose nėra pakaitų arba yra pakaitai, tokie kaip arilas, OH, SH arba NH2, arba
[0007] 1 . 2
[0008] o taip pat junginiai, kuriuose vyrauja grynas D- arba grynas L-- izomeras, ir jų fiziologiškai tinkamos druskos yra puikūs prolino ir lizino hidroksilazių inhibitoriai.
[0009] Taigi išradimas skirtas vaistinių medžiagų, kuriose kaip vei-klioji medžiaga panaudojami aukščiau minėti junginiai, turintys įtaką kolageno ir panašių į kolageną medžiagų metabolizmui, t. y. kolageno biosintezei, gavimui.
[0010] išradimas pirmoje eilėje skirtas junginių, kurių formulė I, kurioje
[0011] R ir R' yra vienodi arba skirtingi ir yra C^- C^- alkilas, Na ar-ba K;
[0012] R^" yra vandenilis, metilas arba etilas;
[0013] yra pakaitai, tokie kaip fenilas arba SH;
[0014] R 1 ir R 2 kartu sudaro arba ^ C^- alkileno grandinėlą.
[0015] Labiausiai tinkami naudoti yra junginiai, kurių formulė I, kurioje
[0016] R ir R' yra vienodi ir yra metilas, etilas, Na arba K;
[0017] R^" yra vandenilis arba metilas;
[0018] arba
[0019] Alkilo grandinės iš trijų ir daugiau anglies atomų gali būti tiek linijinės, tiek ir šakotos. Arilas yra aromatinių anglia-vandenilių liekana, pirmiausia fenilas ir naftilas. Halogenai yra fluoras, chloras, bromas ir jodas, geriausia chloras ir bromas.
[0020] Junginių, kurių formulė I, gavimas yra žinomas ir aprašy-tas, pvz., FR- A 2 010 601. Paprasčiausiai juos galima gauti tuo atveju, kai 1- 3 aminorūgšties esterio hidrohalogenido, geriausia hidrochlorido, ekvivalentai sumaišoma su 1-5 ekvivalentais bazės, pavyzdžiui, karbonato arba hidrokarbonato, tokio kaip natrio arba kalio karbonatai arba natrio arba kalio hidrokarbonatai, arba tretinio amino, tokio kaip trietilaminas, tributilaminas, etil-diizopropilaminas, arba heterociklinio amino, tokio kaip N-alkil-morfolinas, piridinas, chinolinas, arba dialkilanilino.
[0021] Norint galima vienu metu panaudoti keletą bazių. Reakcijos temperatūra yra nuo -30 °C iki 150 ^C, geriausia nuo 20 °C iki 100 °C. Esant reikalui, galima naudoti tirpiklius, tokius kaip dietilo eteris, dimetilcelozolvas arba tetrahidrofuranas, chlo-rintus angliavandenilius, tokius kaip metileno chloridas, chloroformas, tri- arba tetrachloretilenas, benzolas, toluolas, o taip pat ir poliarinius tirpiklius, tokius kaip dimetilformamidas, acetonas, alkoholius, pvz., metanolį arba etanolį, arba dimetil-sulfoksidą. Tuoj pat po to -78 °C - 100 °C temperatūrų interva-
[0022] le, geriausia -20 °C - +20 °C temperatūrų intervale, lėtai pridedama 1-3 ekvivalentai oksalo rūgšties esterio chloranhidrido. Esant reikalui, galima panaudoti aukščiau minėtą tirpiklį. Reakcijos pabaiga nustatoma, pavyzdžiui, plonasluoksne chromatografija.
[0023] Reakcijos produktus galima išskirti, pavyzdžiui, ekstrahuo-jant arba chromatografuojant, pavyzdžiui, per silikagelį. išskir-tą produktą galima perkristalinti.
[0024] I formulės junginiai, kuriuose R ir/arba R' yra šarminis me-talas, pavyzdžiui, Na arba K, gali būti gaunami iš atitinkamų
[0025] I formulės junginių, kuriuose R ir/arba R' yra C^-C^-alkoksigru-pė, šarminėje terpėje hidrolizuojant juos iki atitinkamų druskų, pavyzdžiui, natrio hidroksidu arba kalio hidroksidu žemo moleku-linio svorio alkoholio, tokio kaip etanolis arba metanolis, tirpale, arba eterių, tokių kaip dimetilcelozolvas arba tetrahidrofuranas, tirpale; šiuo atveju reikalinga, kad būtų ir vandens. Gautų druskų šarminio metalo katijonas gali būti pakeistas, panaudojant jonitus, bet kokiu kitu katijonu įprastu būdu parūgš-tinant. Tam tikslui, pavyzdžiui, rūgštys perleidžiamos per ko-lonėlę, užpildytą polistirolo/divinilbenzolo sistemos katijoni-tu (tokiu kaip ®Amberlite CG-150 arba ®Dowex-ČCR-2). Prie šio katijonito yra prijungiamas reikiamas katijonas, pavyzdžiui, amonio jonai, gauti iš pirminio, antrinio arba tretinio amino, išgarinus eliuatą, gaunama norima druska.
[0026] Rūgščių amonio druskos, kuriose yra pirminio, antrinio arba tretinio amino katijonai, gali būti gaunamos, pridedant laisvą rūgštį į ekvimolinį atitinkamo amino kiekį alkoholio tirpale ir nugarinant tirpiklį.
[0027] Enantiomeriniai D- arba L-junginiai iš racematų gali būti gaunami pagal literatūroje aprašytas metodikas, pavyzdžiui, frak-cinės kristalizacijos būdu arba apdorojant fermentais. Kita gavimo galimybė yra tiesioginė enantiomerinių junginių sintezė iš atitinkamų D- arba L-konfigūracijos tarpinių produktų.
[0028] Išradime aprašomi junginiai veikia kaip grįžtami prolilhid-roksilazės inhibitoriai. Dėl šios priežasties jie selektyviai inhibuoja specifinę kolagenui hidroksilinimo reakciją, kurioje baltymo surištą proliną hidroksilina fermentas prolinhidroksila-zė. Nutraukus šią reakciją inhibitoriumi, atsiranda negalinti funkcionuoti nepilnai hidroksilinta kolageno molekulė, kurią ne-dideliais kiekiais gali grąžinti ląstelė į neląstelinę aplinką. Be to, nepilnai hidroksilintas kolagenas negali įsikomponuoti į kolageno matricą, ir todėl vyksta jo proteolitinė destrukcija. Dėl šio efekto sumažėja bendras neląstelinio kolageno kiekis. Todėl prolinhidroksilazės inhibitoriai tinka gydyti susirgimams, kurių atveju kolageno susikaupimas turi esminės įtakos kliniki-niam vaizdui. Jiems, tarp kitko, priklauso plaučių, kepenų ir odos fibrozės ( sklerodermija), o taip pat ir aterosklerozė.
[0029] Be to, yra žinoma, kad inhibuojant prolinhidroksilazę žino-mais inhibitoriais, tokiais kaip <?C<k- dipiridi las, inhibuojama makrofagų Clg- biosintezė ( W. Miiller ir kt. , FEBS Lett. , 9_ 0, 218f ( 1978)). Dėl šios priežasties nukrypstama nuo papildomo aktyva-vimo klasikinio kelio: šiuo atveju prolinhidroksilazės inhibitoriai tuo pačiu metu veikia kaip imunodepresantai, pavyzdžiui, esant bendriems imuniniams susirgimams.
[0030] išeinant iš to, išradime aprašomos medžiagos gali būti panau-dotos kaip fibrodepresantai, imunodepresantai ir preparatai prieš sklerozę, sumaišius jas su farmacijoje tinkamais nešikliais.
[0031] Priešfibrozinis poveikis gali būti ištirtas, nustatant anglies tetrachlorido sukeltą kepenų fibrozę. Šiam tikslui du kartus per savaitę žiurkės buvo paveikiamos CCl^ ( 1 mg/ kg), ištirpintu alyvų aliejuje. Tiriamosios medžiagos tirpalas tinkamame tirpik-lyje įvedamas kasdien, šiuo atveju netgi du kartus per dieną, per-oraliniu būdu arba suleidžiamas į pilvą. Kepenų fibrozės lygis nustatomas histoligiškai, o kolageno kiekis kepenyse nustatomas iš hidroksiprolino kiekio pagal Kivirik ir kt. ( Anai. Biochem., 19 , 249f ( 1967)). Fibrogenezės aktyvumas gali būti nustatytas radio-imunologiškai, nustatant kolageno fragmentus ir prokolageninius peptidus serume. Šiuose bandymuose išradime aprašomų junginių aktyvumas stebimas, kai koncentracija yra nuo 1 iki 100 mg/ kg. Kitas antibiotinio poveikio nustatymo modelis yra Keli ir kt. ( Lab. Clin. Med., 9_ 6, 956 ( 1980)) aprašyta bleomicino sukelta plau-
[0032] čių fibrozė. Išradime aprašomų junginių efektyvumo įvertinimui granuliacinis audinys gali būti analizuojamas, lyginant su va-tos tampono modelio granulema; tai aprašė Mayer ir kt., Expe-
[0033] • Toliau išradimas smulkiau išaiškinamas pavyzdžiais.
[0034] 1 - 6 pavyzdžiuose aprašytų junginių gavimo bendroji metodika
[0035] Kambario temperatūroje ir azoto atmosferoje ištirpinama vienas aminorūgšties esterio hidrochlorido ekvivalentas, 2 trietilamino ekvivalentai ir 2 N, N- dimetilaminopiridino ekvivalentai nie-tileno chloride. Po to, 0- 10 °C temperatūroje lėtai sulašinamas v vienas ekvivalentas oksalo rūgšties esterio chloranhidrido, ištir-pinto metileno chloride, ir kambario temperatūroje maišoma 12 va-landų. Po to pridedama sotaus natrio hidrokarbonato tirpalo ir ekstrahuojama. Organinis sluoksnis atskiriamas , plaunamas natrio chlorido tirpalu, džiovinamas magnio sulfatu ir nugarinamas. Nevalytas produktas chromatėgrafuojamas.
[0036] iš 5 g L- alanino metilo esterio hidrochlorido ir 3, 3 ml oksalo rūgšties metilo esterio chloranhidrido gaunama 6 g alyvos pavidalo 1 junginio.
[0037] 1 7
[0038] J Z d b
[0039] ml oksalo rūgšties metilo esterio chloranhidrido gaunama 6, 5 g alyvos pavidalo 2 junginio.
[0040] Iš 15 g glicino metilo esterio hidrochlorido ir 11 ml oksalo rūgšties monometilo esterio chloranhidrido gaunama 23 g 3 junginio. Lyd. temp. : 49 °C.
[0041] Iš 2 g L- prolino metilo esterio hidrochlorido ir 2, 9 g oksalo rūgšties monometilo esterio chloranhidrido gaunama 1, 5 g alyvos pavidalo 4 junginio.
[0042] Iš 2 g L- valino metilo esterio hidrochlorido ir 2, 8 g oksalo rūgšties monometilo esterio chloranhidrido gaunama 2 g alyvos pavidalo 5 junginio.
[0043] Iš 2 g L- cisteino metilo esterio hidrochlorido ir 3, 9 g oksalo rūgšties monometilo esterio chloranhidrido gaunama 1, 5 g alyvos pavidalo 6 junginio.
[0044] 2 g sarkozino etilo esterio hidrochlorido ištirpinama 50 rnl etanolio ir kambario temperatūroje į šį tirpalą sulašinama 3,5
[0045] ml (2 ekvivalentai) dietiloksalato ir 1,8 ml trietilamino tirpalas 25-se ml etanolio. Maišoma 5 valandas 50 °C temperatūroje,
[0046] po to, 2 valandas virinama su grįžtamu šaldytuvu. Tirpalas atšaldo-mas ir sausai išgarinamas. Liekana tirpinama metileno chloride, vieną kartą perplaunama vandeniu, organinis sluoksnis džiovina-mas magnio sulfatu ir nugarinamas.
[0047] Nevalytas produktas chromatografuojamas: eteris/chloroformas 1/1. Išeiga: 0,35 g.
[0048] 8- 14 pavyzdžiuose aprašytų junginių gavimo bendroji metodika
[0049] Kambario temperatūroje ištirpinamas vienas ekvivalentas 1-7 pavyzdžiuose gauto junginio 2-se ekvivalentuose 0,1 N alkoholi-nio šarmo tirpalo. Maišoma 12 valandų kambario temperatūroje ir sausai nugarinama. Dūmų pavidalo produktai pašalinami apdorojant 2 kartus toluolu, kelis kartus plaunama pentanu ir išdžiovinama gerame vakuume.
[0050] Atliekama 300 mg 1 junginio mainų reakcija su 32,5 ml 0,1 N kalio šarmo tirpalo etanolyje.
[0051] Atliekama 420 mg 2 junginio mainų reakcija su 32, 5 ml 0, 1 N natrio šarmo tirpalo etanolyje.
[0052] Išeiga: 440 mg baltų kristalų; lyd. temp. : > 300 °C.
[0053] Atliekama 5, 5 g 3 junginio mainų reakcija su 314 ml 0, 1 N kalio šarmo tirpalo metanolyje.
[0054] Atliekama 300 mg 4 junginio mainų reakcija su 1, 5 ml 0, 1 N natrio šarmo tirpalo etanolyje.
[0055] Atliekama 300 mg 5 junginio mainų reakcija su 14 ml 0, 1 N natrio šarmo tirpalo etanolyje.
[0056] Atliekama 300 mg 6 junginio reakcija su 13, 7 ml 0, 1 N natrio
[0057] Išeiga: 300 mg baltų kristalų; lyd. temp. : >300 °C.
[0058] Atliekama 120 mg 7 junginio mainų reakcija su 11, 4 ml 0, 1 N kalio šarmo tirpalo etanolyje.
[0059] išeiga: 130 mg baltų kristalų; lyd. temp. : >300 °C.
[0060] 1- 14 pavyzdžiuose gauti junginiai duoti 1- je lentelėje.
[0061]
[0062] Išradime aprašomų junginių inhibuojantis poveikis buvo nustatytas pagal fermentinį testą, analogišką V.Peterkowski and de Blasiot, Anai. Biochem. , 6_6, 279-286 ( 1975). Šiame bandyme nepilnai hidroksilintą kolageną hidroksilina prolinhidroksilazė, esant geležies(II) jonams, a-ketogliutaratui ir askorbatui, ir nustatoma tokia išradime siūlomo junginio koncentracija, kuri inhibuoja 80 % fermento aktyvumo. Inhibavimas išreiškiamas dydžiu.
[0063] 8 ir 10 bandymuose gautų junginių inhibavimo reikšmės duo-tos 2-je lentelėje.
[0064] Inhibuojantį poveikį galima taip pat nustatyti ląstelių ar-ba audinio kultūroje. Šiam tikslui galima panaudoti fibroplastus arba kitas kolageną produkuojančias ląsteles, pavyzdžiui, Calvarien, arba kitus kolageną produkuojančius organus. 3-je lentelė-je duotas išradime aprašomų junginių inhibuojantis poveikis bandymuose su Calvarien kultūra. Nurodyta koncentracija, kuri suke-lia hidroksiprolino/prolino santykio 50 %-nį sumažėjimą, gauta
[0065] 14
[0066]
1. Junginiai, kurių formulė I:
2. Junginiai pagal 1 punktą, besiskiriantys tuo, kad juoseR ir R' yra vienodi arba skirtingi ir yra C^-C^-alkilas, Na ar-ba K,R"*" yra vandenilis, metilas arba etilas,R 2 yra vandenilis arba C-^-C^-alkilas, kuriame nera pakaitų arbayra pakaitai, tokie kaip fenilas arba SH, arba1.2 R ir R kartu sudaro C?- arba C^-alkileno grandinėlę.
R"*" yra vandenilis, metilas arba etilas,1.2 R ir R kartu sudaro C?- arba C^-alkileno grandinėlę.3. Junginiai pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantys tuo, kad juoseR ir R' yra vienodi ir yra metilas, etilas, Na arba K,R"*" yra vandenilis arba metilas,R 2 yra vandenilis, C^-C^-alkilas, benzilas arba tiometilas, arba R"*" ir R^ kartu sudaro etileno grandinėlę.
R"*" yra vandenilis arba metilas,4. Junginiai pagal bet kurį iš 1-3 punktų, besiskiriantys tuo, kad jie yra skirti panaudoti vaistinių pre-paratų, reikalingų kolageno ir panašių į kolageną medžiagų metabolizmo, t.y. kolageno biosintezės, reguliavimui, gamybai.
5. Junginiai pagal bet kurį iš 1-4 punktų, besiskiriantys tuo, kad jie yra skirti panaudoti vaistinių preparatų, reikalingų kolageno ir panašių į kolageną medžiagų metabolizmo, t.y. kolageno biosintezės, sutrikimų gydymui, gamybai .
6. Junginiai pagal bet kurį iš 1-5 punktų, besiskiriantys tuo, kad jie yra skirti vaistinių preparatų, to-kių kaip fibrodepresantai, imunodepresantai ir vaistai nuo skle-rozės, gamybai.
7. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad joje yra bent vieno iš I formulės junginių pagal 1-6 punk-tus efektyvus kiekis kartu su farmaciškai tinkamais nešikliais, skiedikliais ir pagalbinėmis medžiagomis.
8. Farmacinė kompozicija pagal 7 punktą, besiskirianti tuo, kad ji yra skirta panaudoti kaip fibrodepre-santas, imunodepresantas arba vaistas prieš sklerozę.