[LT] Išradimas aprašo piridin -2,4-dikarboksi rūgšties N,N'-bis-(alkoksialkil) diamidus, turinčius formulę @kurioje R1, R2,n ir R1, R2, n' turi tam tikras reikšmes. Junginiai inhibuoja prolinhidroksilazę ir lizinhidroksilazę ir tinkami naudoti kaip fibro- ir imunodepresantai.
[EN]
[0001] Junginiai, inhibuojantys prolin- ir lizinhidroksilazę, labai selektyviai stabdo kolageno sintezę veikdami spe-cifines kolagenui hidroksilinimo reakcijas. Šiose reak-cijose su baltymu surišti prolinas arba lizinas hidrok-silinami dalyvaujant fermentui - prolin- arba lizin-hidroksilazei. Jei šios reakcijos sustabdomos inhibi-torių pagalba, tai susidaro neveikli, nepakankamai (ne iki galo) suhidroksilinta kolageno molekulė, kuri tik mažu kiekiu gali būti "pernešta" iš ląstelės i, tarp-ląstelinę sritį. Be to, nepakankamai suhidroksilintas kolagenas negali įsikomponuoti į kolageninę matricą ir labai lengvai proteolitiškai suskaldomas. Šio efekto pasėkoje sumažėja bendras kolageno, esančio tarpląs-telinėje srityje, kiekis.
[0002] Žinoma, kad prolinhidroksilazės inhibavimas žinomais inhibitoriais, tokiais kaip a, a'-dipiridilas, stabdo makrofagų Clg biosintezę (W. Mūller et al., FEBS Lett., 90(1978), 218; Immunology, 155(1978), 47). Dėl to nebe-lieka klasikinių papildomo aktyvavimo kelių. Todėl pro-linhidroksilazės inhibitoriai taip pat veikia kaip imunodepresantai, pavyzdžiui, esant sunkiems imuniniams susirgimams.
[0003] Žinoma, kad prolinhidroksilazę efektingai slopina (stabdo) piridin-2,4-dikarboninės rūgšties pagalba (K. Majamao et al., Eur. I. Biochem. 138(1984)239-245). Tiesa, ląs-telių kultūroje šie junginiai veikia stabdančiai (slo-pinančiai) tik esant labai aukštoms jų koncentracijoms (Tschank G. et al. Biochem., 238,625-633,1987).
[0004] VFR paraiškoje DE-A 3432 094 kaip vaistinės medžiagos prolin- ir lizinhidroksilazės inhibavimui aprašyti piridin-2,4-dikarboksirūgšties diesteris ir piridin-2,5-dikarboksirūgšties diesteris, turintys 1-6 anglies ato-mus esterinės grupės alkilo dalyje.
[0005] Šie esteriai su trumpa alkilo grandine, vienok, turi tą trūkumą, kad organizme jie greitai suskyla i, rūgštis ir jų veikimo ląstelėje vietoje nebūna pakankamai didelės jų koncentracijos, ir tuo pačiu jie menkai tinka ga-limam panaudojimui kaip vaistai.
[0006] VFR paraiškos DE-A 37 03 959, DE-A 37 03 963 ir DE-A 37 03 963 aprašo bendru atveju piridin-2,4- ir -2,5-dikarboksirūgščių mišinius esterius/amidus, ilgą alkilo grandinę turinčius diesterius ir diamidus, kurie veikliai stabdo (slopina) kolageno biosintezę gyvuliniame modelyje.
[0007] Taip, tarp kitko, VFR paraiškoje DE-A 3703-959 aprašyta piridin-2, 4-dikarboksirūgšties N,N' -bis- (2-metoksietil) - diamido (III) sintezė,
[0008]
[0009] Vokiečių paraiškose patentams P 38 26 471.4 ir P 38 28 140.6 siūlomas pagerintas piridin-2,4-dikarboksirūgš-ties N,N'-bis-(2-metoksietil)-diamido (III) gavimo bū-das .
[0010] Daugelio junginių, aprašytų VFR paraiškoje DE-A 37-03 959 enterinis įsiurbimas yra nepatenkinamas, todėl yra poreikis pateikti naudojimui tokius junginius, kurie, naudojant juos peroraliniu būdu jau esant mažoms dozėms veikliai stabdytų prolin- ir lizinhidroksilazę.
[0011] Dabar yra atrasta, kad junginiai, kurių formulė (1)
[0012]
[0013] kurioje R1 yra linijinis arba šakotas Cx - C4 alkandiilas;
[0014] R 2 - nešakotas Cį - C4 alkilas arba vandenilis;
[0015] n - 1 arba 2;
[0016] y 2' 12 1 R , R , n' reiškia tą patū, kaip ir R , R , n, be to R ir R1 , R2 ir R2 , n ir n' vienodi arba skirtingi, o taip pat jų fiziologiškai toleruotinos druskos, išskyrus piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N1-bis-(2-metoksietil)di-amidą ir piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N'-bis - (2-hidroksietil)-diamidą tenkina anksčiau suformuluotą už-duoti •
[0017] Palyginus su VFR paraiškoje DE-A 37 03 959 aprašytais junginiais - piridin -2,4-dikarboksirūgšties N,N'-bis-
[0018] (2-metoksietil)-diamidu ir piridin-2,4-dikarboksirūgš-ties N,N'-bis-(3-izopropoksipropil)-diamidu, junginiai, turintys 1 formulę, pasižymi tiek geresniu farmako-loginiu veikimu, tiek geresniu enteriniu įsiurbimu.
[0019] Toliau, išradimas apima piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N'-bis(alkoksialkil)-diamidu, turinčių formulę 1:
[0020] kurioje R1 yra linijinis arba šakotas C: - C4 - alkandiilas ;
[0021] n - 1 arba 2;
[0022] R 1' , R 2' , n' turi tas pačias reikšmes kaip ir R', R 2, n, be to, R1 ir R1 , R2 ir R2 , n ir n1 vienodi arba skirtingi, išskyrus piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N'-bis-(2-metoksietil)-diamidą ir piridin-2,4-dikarboksi-rūgšties N,N'-bis(2-hidroksietil)-diamidą, gavimo būdą, besiskirianti, tuo, kad piridin-2,4-karboksirūgšties halogenanhidridas reaguoja su alkoksialkilaminu arba hidroksialkilaminu.
[0023] Išradimas taip pat apima piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N 1-bis(alkoksialkil)diamidu, turinčių formulę 1
[0024] R2 - nešakotas Ci - C4 - alkilas arba vandenilis;
[0025] n - 1 arba 2;
[0026] R1 , R2 , n' turi tas pačias reikšmes kaip ir R1, R2, n; be to, R1 ir R1 , R2 ir R2 , n ir n' vienodi arba skirtingi;
[0027] a)
[0028] 1 a. Piridin-2,4-dikarboksirūgšti, sumaišo su mažiausia
[0029] 2 a. Mažiausia 2 ekvivalentai hidroksialkilamino arba alkoksialkilamino, turinčio formulę II arba II'
[0030]
[0031] kurioje R1 ir R1 yra linijinis arba šakotas C1 - C4 alkandiilas;
[0032] 1 1' 2 2r
[0033] R ir R , R ir R , o taip pat n ir n' vienodi arba skirtingi, tuo tarpu kai II ir II' skirtingi, ištirpina tirpiklyje; ir kad po to paruoštą pagal (1 a.) būdą tirpalą įveda į reakciją su tirpalu, paruoštu pagal 2 a. būdą, arba kad b) Tokiu būdu gautas piridin-2,4-dikarboksirūgšties N, N'-bis(alkoksialkil)-diamidą paverčia bis(hidroksial-kil) - junginiu; arba kad c) Gautą pagal 1 a. būdą piridin-2,4-dikarboksirūgšties halogenanhidridą įveda i, reakciją su pakeistu arba nepakeistu benzilo alkoholiu, kurioje gaunamas piridin-2,4-dikarboksirūgšties benzilo esteris; benzilo esteri, selektyviai hidrolizuoja piridino 2-oje padėtyje; lais-vą karboksirūgšti, 2-oje padėtyje pagal 1 a. būdą vėl paverčia rūgšties halogenanhidridu ir tokiu būdu gautą jungini,, esant junginiui, turinčiam formulę II1, su-maišo su tirpalu, paruoštu pagal 2 a. būdą; susidaro piridin-2,4-dikarboksirūgšties 2-amido-4-benzilo esteris; ir kad po to apsauginę benzilo grupę 4-padėtyje atskelia; laisvą karboksirūgšti, pagal 1 a. būdą vėl paverčia rūgšties chloranhidridu, kuris po to, dalyvauja junginiui, turinčiam II formulę, sumaišomas su tirpalu, paruoštu pagal 2 a. būdą; susidaro nesi-metriškai pavaduotas junginys, turintis I formulę; ir pabaigoje gautą jungini,, turinti, I formulę, paverčia i, jo fiziologiškai toleruotiną druską.
[0034] Junginių, turinčių I formulę, gamybos procese pradinė medžiaga - piridin-2,4-dikarboksirūgštis, kuri yra prekyboje, suspenduojama tirpiklyje, pvz., toluene,ir kambario temperatūroje sumaišoma su halogeninančiu junginiu, dažniausia su chlorinančiu; tokiu kaip, pa-vyzdžiui, S0C12• Priklausomai nuo naudojamo molinio piridin-2, 4-dikarboksirūgšties kiekio, naudojami 2 3 ekvivalentai chlorinančios medžiagos, dažniausia 2,5 ekvivalento. Gautos reakcijos mišinys kaitinamas iki 90-110°C, dažniausiai iki 100°C, iki tol kol nepa-stebima dujų išsiskyrimo ir kol susidaro skaidrus tirpalas. Po to nugarinama 10% tirpalo, pageidautina aukš-tame vakuume (iki maždaug 10"3 Tor) ir gautas karboksi-rūgšties halogenanhidridas dalyvauja tolimesnėse reak-cijose .
[0035] Priklausomai nuo naudojamo molinio piridin-2,4-dikar-boksirūgšties kiekio, 2-4 ekvivalentai alkoksialkilamino arba hidroksialkilamino (kurių yra prekyboje) iš-tirpina tirpiklyje, pvz., toluene ir prideda geriausia 2-4-kart tiek molių šarmų, pvz., trietilamino. Karbok-sirūgšties anhidridas reaguoja su alkoksialkilaminu ar-ba su hidroksialkilaminu. Reakcija realizuojama daž-niausia taip, kad nurodyto -alkilamino tirpalą sulašina j, ištirpintą piridin-2,4-dikarboksirūgšties halogenan-hidridą. Bet galima ir karboksirūgšties halogenanhidrido tirpalą lašinti į alkoksialkilamino arba hidroksialkilamino tirpalą. Lašinimas vyksta -5°C - h +5°C temperatūroje, geriausia, esant 0°C. Reakcijai leidžia vykti iki galo; tuo tarpu reakcijos mišinys sušyla iki kambario temperatūros ir dar 2-5 vai., geriausia 3 vai., maišomas. Po to gautas produktas parūgštinamas, kad atsiskirtų nesureagavęs hidroksi- arba alkoksial-kilaminas nuo galutinio produkto. Parūgštinti galima, pavyzdžiui, 0,2M citrinos rūgštimi. Po to organinis sluoksnis atskiriamas ir praplaunamas vandeniu, po to džiovinamas, geriausia magnio sulfatu ir pabaigoje nugarinamas tirpiklis. Nugarinus tirpikli,, produktas iškrenta kietos baltos medžiagos arba alyvos pavidalu.
[0036] Norint gauti piridin-2, 4-dikarboksirūgšties N,N'-bis (hidroksialkil)-diamidus, atitinkamą bis(alkoksialkil) diamidą, geriausia, bis (metoksialkil) , paverčia i, ati-tinkamą bis(hidroksialkil)diamidą žinomais literatūroje būdais, pvz., panaudojant boro tribromidą. Nesimetriškai pakeisti formulę I turintys junginiai ga-li būti susintetinti, pavyzdžiui,tokiu būdu: piridin-2,4-dikarboksirūgšties halogenanhidrido, geriausia, chloranhidrido, reakcijoje su pakeistu arba nepakeistu benzilo alkoholiu, susidarant piridin-2, 4-dikarbok-sirūgšties benzilo esteriui; po to seka selektyvi esterio 2-oje padėtyje hidrolizė (panaudojant, pavyz-džiui, vario katalizatorių, Actą Helv., 44, 1963,637), laisvos rūgšties 2-oje padėtyje pavertimas halogenanhidridu, reakcija su formulę II1 turinčiu junginiu, susidarant piridin-2,4-dikarboksirūgšties 2-amido-4-benzilo esteriui, hidrolitinis apsauginės benzilo gru-pės atskėlimas (pvz., panaudojus H2/Pd, Houben-Weyl.,t.lV/Ic (1980),381-82) ir laisvos rūgšties piridino žiedo 4-oje padėtyje pavertimas i, rūgšties halo-genanhidridą.
[0037] Rūgšties halogenanhidridą dabar galima paversti i, mišrų diamidą (I), panaudojus aminą II (žiūr. reakcijos sche-mą) .
[0038] Šiuo atveju produktą galima gryninti ekstrakcijos arba chromatografijos (pvz.,silikagelyje) būdu. Išskirtą produktą galima perkristalinti ir paversti i, fizio-logiškai toleruojamą druską, panaudojus tinkamą rūgšti,. Tinkamos rūgštys yra, pavyzdžiui, mineralinės rūgštys - chloro vandenilio, bromo vandenilio, sieros, fosforo, azoto rūgštys, arba organinės - skruzdžių, acto, pro-pano, gintaro, glikolio, pieno, obuolių, vyno, citrinų, maleino, fumaro, fenilacto, benzoinė, metansulfo, tolu-ensulfo, rūgštynių, 4-aminobenzoinė, naftalin-1,5-di-sulfo arba askorbino rūgštys.
[0039] Formulę I turintys junginiai gali būti naudojami kaip aktyvūs ingredientai farmacinėse kompozicijose, kur jie būtų kartu su tinkamu farmaciniu užpildu (pagrindu). Šie junginiai gali būti panaudoti gamybai vaistinių preparatų, kuriuose jie yra mišinyje su tinkamais en-teraliniam, poodiniam ar parenteraliniam įvedimui farmacijoje priimtinais organiniais arba neorganiniais už-pildais, pavyzdžiui, vandeniu, gumiarabiku, želatina, pieno cukrumi, krakmolu, magnio stearatu, talku, auga-liniais aliejais, polialkilenglikoliais, vazelinu ir t.t.
[0040] Vaistiniai preparatai gali būti kietoje vaisto formoje, pvz., tablečių, dražė, žvakučių arba kapsulių pavidale; pusiau kietoje formoje, pvz., tepalų pavidale; arba skystoje formoje, pvz., tirpalų suspensijų ar emulsijų formoje. Šiuo atveju jie turi būti sterilizuojami ir/arba turėti pagalbinių medžiagų, tokių kaip kon-servantai, stabilizatoriai, drėkintojai ar emulga-toriai, druskos osmotinio slėgio palaikymui arba bu-feris. Jie gali turėti ir kitų medžiagų, turinčių te-rapini, poveiki,.
[0041] Nustatyta, kad formulę I turintys junginiai pasižymi ypatingai geru enteraliniu įsiurbimu. Sugebėjimas įsi-siurbti buvo tiriamas su žiurkėmis, kurioms išradime siūlomi junginiai būdavo įvedami intragastraliniu būdu (per virškinamąjį traktą). Serumo rodikliai ("serumo veidrodis") pirmas valandas po įvedimo krenta ir, maž-daug po 5 vai. nuo junginių įvedimo, pasiekia tik šiek tiek besikeičiantį plato. Iš pradiniu momentu labai aukštų serumo rodiklių galima spręsti apie gerą me-džiagų įsiurbimą.
[0042] Toliau išradimas smulkiai paaiškinamas pavyzdžiais.
[0043] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties bis-N,N'-(metoksipropil) amidas 3 g piridin-2,4-dikarboksirūgšties ištirpina 50 ml tolueno ir 1 ml DMF ir į tirpalą sulašina 2,7 ml tionilo chlorido. Mišini, kaitina tol, kol nepastebime dujų išsiskyrimo (apie 2,5 vai.). Po to mišinys atšaldomas, nudistiliuojama 5 ml tolueno ir į tirpalą sulašinama 4,6 ml 3-metoksipropilamino ir 5 ml trietilamino. Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 4 vai., po to tirpiklis nugarinamas, o liekana išpilama i, vandenį ir 4 kartus ekstrahuojama metilenchloridu. Sujungti organiniai sluoksniai išdžiovinami magnio sulfatu ir tirpiklis nugarinamas. Nevalytas produktas chromatografuojamas silikagelyje (tirpiklis-etilacetatas).
[0044] 1H-BMR(CDC13) : 5, m.d=l, 6-2, 3 (4H,m) ; 3,2-3,8(14H,m); 7,8-8,0(1H,m) ; 8,3-8,5(lH,m); 8,6-8,8 (lH,m) .
[0045] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties bis-N, N ' - (etoksipropil) amidas
[0046] Sintezės eigą žiūr. 1-ame pavyzdyje; amino-komponentas-etoksipropilaminas.
[0047] Išeiga: 4,5 g; lydymosi temperatūra: 46-48°C;
[0048] 1H-BMR(CDC13) : 8, m.d=l,3(6H,t) ; 1,7-2,1(4H,ra) ; 3,3-3,8 (12H,m) ; 7,8-8,0 (1H,m); 8,4-8,5 (1H,m); 8,5-8,8 (lH,m).
[0049] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties bis-N,N'-(2-dimetoksi-etil)amidas
[0050] Sintezės eigą žiūr. 1-ame pavyzdyje; amino-komponentas-2-dimetoksietilaminas;
[0051] Išeiga: 1,6 g (iš 3 g piridin-2,4-dikarboksirūgšties) ; alyva;
[0052] 1H-BMR(CDC13) : 8, m. d=3, 4 (12H, s) ; 3,7(4H,m); 4,5(2H,m); 7, 8-8,0(lH,m); 8,4-8,5(lH,m); 8,7-8,8(1H,m) .
[0053] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties bis-N,N'-(2-metoksi-izo-propil)-amidas
[0054] Sintezės eigą žiūr. 1-ame pavyzdyje; amino-komponentas-2-metoksiizopropilaminas.
[0055] Išeiga: 3,3 g (iš piridin-2,4-dikarboksirūgšties) ; alyva.
[0056] 1H-BMR(CDC13) :, m. d=l, 3 (6H, d) ; 3,2(6H,s); 3,5(4H,d); 4,4(2H,m); 7,9-8,0(1H,m); 8,4-8,5(1H,m); 8,7-8,8(1H,m).
[0057] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties bis-N,N'(2-etoksietil) amidas
[0058] Sintezės eigą žiūr. 1-ame pavyzdyje; amino-komponentas-etoksietilaminas.
[0059] Išeiga: 7,8 g (iš 10 g piridin-2,4-dikarboksirūgšties).
[0060] 1H- BMR( CDC13) : 6, m. d=l, 2 ( 3H, t) ; 3, 3- 3, 8( 12H, pd ir m) ; 7, 9( lH, m) ;8, 4- 8, 5( lH, m) ; 8, 7- 8, 8 ( 1H, m) .
[0061] Piridin- 2, 4- dikarboksirūgšties bis- N, N'( 3- hidroksietil) amidas
[0062] Išeiga: 0, 5 g piridin- 2, 4- dikarboksirūgšties bis- N, N'-( 3- metoksietil) amido ištirpinama 10 ml dichlormetano ir - 7 8°C temperatūroje sulašinama boro tribromido ( 11 ml, 1M tirpalas dichlormetane) . Sulašinus boro tribromidą, tirpalas paliekamas sušilti iki kambario temperatūros ir 3 vai. maišomas. Po to, reakcijos mišinį išpila i, 100 ml sotaus bikarbonato tirpalą ir triskart ekstra-huoja etilacetatu. Sujungti organiniai sluoksniai džio-vinami magnio sulfatu ir tirpiklis nugarinamas. Nevalytas ( žalias) produktas chromatografuojamas silikagelyje.
[0063] 1H- BMR( CDC13) : 6, m. d=l, 5- 2, 2 ( 4H, m) ; 3, 4 ( 4H, m) ; 3, 6( 4H, m) ; 7, 9- 8, 0 ( lH, m) ; 8, 4- 8, 5( lH, m) ; 8, 7- 8, 8( lH, m) .
[0064] 30 g piridin- 2, 4- dikarboksirūgšties su 30 ml tionilo chlorido, būdu, analogišku aprašytam 1- ame pavyzdyje, paverčiama i rūgšties halogenanhidridą, kuris toliau reaguoja su 43, 8 g benzilo alkoholio. Produktas per-kristalinamas iš diizopropilo alkoholio.
[0065] 40 g piridin- 2, 4- dikarboksirūgšties dibenzilo esterio iš 7a pavyzdžio įdedama i, 27, 8 g vario ( II) nitrato suspensiją 700 ml metanolio. Mišinys 1 vai. virinamas su grįžtamu šaldytuvu; atšaldžius nufiltruojamas vario kompleksas. Kompleksas suspenduojamas dioksane ir pri-dedama anglies disulfido. Iškritęs vario sulfidas nufiltruojamas, o organinis tirpiklis nugarinamas. Pro-duktą sumaišo su petrolio eteriu.
[0066] Piridin- 2, 4- dikarboksirūgšties 2-( 3- metoksipropil) ami-do- 4- benzilo esteris
[0067] 3, 9 g piridin- 2, 4- dikarboksirūgšties 4- benzilo esterio iš 7b pavyzdžio su 1, 2 ml tionilo chlorido, kaip ap-rašyta 1- ame pavyzdyje, paverčiama i, rūgšties chlo-ranhidridą, o toliau reakcijoje su 3- metoksipropilaminu gaunamas amidas. Produktas išvalomas chromatografuojant silikagelyje; tirpiklis- cikloheksanas- etilacetatas ( 1:1).
[0068] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties 2- (3-metoksipropil)amidas
[0069] 4,3 g junginio iš 7c pavyzdžio ištirpinama 100 ml dioksano ir hidrinama su 500 mg 10% Pd/C kataliza-toriaus 4 vai., esant normaliam slėgiui. Kai vandenilis nustoja adsorbuotis, mišinys nusiurbiamas nuo katali-zatoriaus, o tirpiklis nugarinamas.
[0070] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties 2- (3-metoksipropil)-4-(2-metoksietil)diamidas
[0071] 1,8 g junginio iš 7d pavyzdžio su 0,6 ml tionilo chlorido paverčiama i, rūgšties chloranhidridą (kaip aprašyta 1-ame pavyzdyje), kuris toliau reaguoja su 2-metoksietilaminu. Produktas išvalomas chromatografuojant silikagelyje; tirpiklis-dichlormetano-metanolio mišinys 20:1.
[0072] ^-BMFUCDCla) : 5, m. d=l, 90-2, 0 (2H, pd) ; 3,4(6H,s); 3,5-3, 7 (8 H, m) ; 6,9(lH,ps); 8,0(lH,dd); 8,4(lH,ps); 8,55(1H,s); 8,7(lH,d>.
[0073] Piridin-2,4-dikarboksirūgšties 2-(2-metoksietil)-4-(3-metoksipropil)diamidas
[0074] Analogiškai pavyzdžių 7a-e atvejams 8-ame pavyzdyje gaunamas junginys tokiu būdu, kad 7c pavyzdžio etape panaudojamas 2-metoksietilaminas, o 7e pavyzdžio etape panaudojamas 3-metoksipropilaminas.
[0075] 1H-BMR(CDC13) : 6, m.d=l, 9-2,0 (2H,pd) ; 3, 4( 3H, s); 3, 45 (3H, s) ; 3, 6- 3, 7 (8H,m) ; 7,4(lH,ps); 7,9(lH,dd); 8, 3 (1H, ps) ; 8, 4 (1H, d) ; 8,7(lH,d).
[0076] Žiurkių patelėms, sveriančioms apie 150 g, i, virški-namąja, traktą (intergastraliniu būdu) per rijimo zondą įvedama 50 mg/k g reikiamos ištirti medžiagos. Po 5, 10, 15, 30, 60, 120, 180, 240 minučių 4 žiurkės užmig-domos ir iš venos (Vena Cava) paimamas kraujas. Kraujas tuoj pat centrifuguoj amas ir įvestas junginys ekstra-huojamas iš serumo eteriu. Nugarinus eterį, liekana ištirpinama 100 ml skysčio (skysčio-nešiklio) , kuris yra 0,05 M fosforo rūgšties ir acetonitrilo mišinys (4:1). Iš šios prabos 50 įj.1 įvedama į HPLC-kolonėlę. Nustatymas vyksta UV srityje ties 200 nm, išsilaikant 2,2 min.
[0077]
[0078] II - medžiaga iš 1 pavyzdžio III - medžiaga iš 2 pavyzdžio IV - medžiaga iš 3 pavyzdžio X - 4 matavimų vidurkis
[0079] SD - standartinis nukrypimas
[0080] <NR - žemiau nustatymo ribos
[0081] Siekiant įrodyti, kad išradime siūlomi junginiai efek-tyviai slopina prolin- ir lizinhidroksilazių veikimą, buvo išmatuota hidroksiprolino koncentracija kepenyse ir y-(IV)-kolageno koncentracija serume: a) žiurkių, kurios negavo tiriamų junginių (kontro-linėms) ; b) žiurkių, kurioms buvo įvesta anglies tetrachlorido (CC14 - kontrolė); c) žiurkių, kurioms buvo pirmiausia įvesta CC14, o po to išradime siūlomas junginys;
[0082] (šie tyrimo metodai aprašyti Ruilerio: Rouiller C., Experimental Toxic Injury of the Liver: knygoje The liver, C. Rouiller, vol 2, p.935-976, New Yourk, Akademic Press, 1964).
[0083] Išradime siūlomų junginių efektyvumas apibūdinamas hidroksiprolino sintezės kepenyse ir 7S-(IV)-kolageno sin-tezės serume stabdymo procentais, įvedus šiuos junginius per burną, lyginant su kontroliniais gyvuliu-kais, kuriems įvesta tik anglies tetrachlorido (CC14 - kontrolė). Rezultatai pateikti 2 lentelėje. Lentelėje palyginimui pateikti ir VFR paraiškos DE-A 37 03 959 2 ir 3 pavyzdžių junginiai - piridin-2,4-dikarboksi-rūgšties N,N'-bis(2-metoksietil)-diamidas ir piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N'-bis(3-izopropoksipropil)di-amidas. Išradime siūlomi junginiai netikėtai parodė di-desnį efektyvumą netgi įvesti peroraliniu būdu, negu VFR paraiškos DE-A 37 03 959 2 pavyzdžio junginys, įvestas po oda.
1. Piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N-bis-(alkoksialkil)diamidų, turinčių formulę I
1' 2' 12 R , R , n' turi tas pačias reiksmes, kaip ir R , R , n, be to, R1 ir R1 , R2 ir R2 , n ir n' yra vienodi arba skirtingi, išskyrus piridin-2,4-dikarboksirūgšties N, N'-(2-metoksietil)diamidą ir piridin-2,4-dikarboksi-rūgšties N,N'-bis(2-hidroksietil)diamidą,gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad piridin-2,4-dikarboksirūgšties halogenanhidridas reaguoja su alkoksialkilaminu arba hidroksialkilaminu.
2. Piridin-2,4-dikarboksirūgšties N,N1-bis(alkoksialkil)diamidų, turinčių formulę I
3. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad priklausomai nuo aplinkybių, I formulėje R1 ir R1 , R2 ir R2 , n ir n' turi vienodas reikšmes.
4. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad formulėje I pakaitai -(R1)-(OR2)n ir -(R1 ) - (OR2 )n' yra skirtingi.
5. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad R1 reiškia tiesios grandinės arba šakotą C1-C2-alkilą arba vandenili,.
6. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna junginį, kurio formulė yra
7. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna jungini,, turinti, formulę
8. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna jungini,, kurio formulė yra
9. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna jungini,, kurio formulė yra
10. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna junginį, kurio formulė yra
11. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna jungini,, kurio formulė yra
12. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna junginį, kurio formulė
13. Gavimo būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad gauna jungini,, kurio formulė
14. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad ji sudaryta iš junginio, turinčio formulę I, kuris gali būti gautas pagal vieną iš 1-13 punktų ir/arba iš vienos šio junginio fiziologiškai priimtinų druskų su priimtinu farmacijoje užpildu.
15. Junginiai, turintys formulę I, kurie gali būti gauti pagal vieną iš 1-13 punktų ir/arba viena iš jų fi-ziologiškai priimtinų druskų, skirti panaudoti paveikti kolageno ir i, ji, panašių medžiagų arba prolinhidrok-silazės biosintezę.
16. Junginiai, turintys formulę I, kurie gali būti gauti pagal vieną iš 1-13 punktų ir/arba viena iš jų fi-ziologiškai priimtinų druskų, skirti panaudoti kolageno ir i, ji, panašių medžiagų arba lizinhidroksilazės bio-sintezės sutrikimų profilaktikai.
17. Vaistinio preparato, veikiančio i, kolageno ir i, ji, panašių medžiagų biosintezę, gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad sumaišo jungini,, turinti, formulę I, kuris gali būti gautas pagal vieną iš 1-13 punktų ir/arba šio junginio fiziologiškai priimtiną druską su farmacijoje priimtinais organiniais arba neorganiniais užpildais.