[LT] Atskleisti cholesterolio koncentracijos plazmoje sumažinimo ir arterosklerozės gydymo arba apsisaugojimo nuo arterosklerozės metodai, apimantys cholesterolio biosintazės inhibitoriaus ir b-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus derinio efektyvių kiekių panaudojimą, taip pat formos ir rinkiniai šiems metodams.
[EN]
[0001] Pateikiamas išradimas susietas su cholesterolio biosintezės inhibitoriaus ir p-laktamcholesterolio absorbcinio inhibitoriaus deriniu, skirtu naudoti cholesterolio kiekio plazmoje sumažinimui.
[0002] Cholesterolio koncentracija plazmoje tiesiogiai koreliuoja su klinikinėmis pasekmėmis, susietomis su koronarinėmis širdies ligomis. Viso kūno cholesterolio homeostazės reguliavimas žmonėms ir gyvūnams apima cholesterolio biosintezės moduliaciją, tulžies rūgšties biosintezę ir cholesterolio turinčių plazmos lipoproteinų katabolizmą. Kepenys yra pagrindinis organas, atsakingas už cholesterolio biosintezę ir katabolizmą ir, šiuo požiūriu, jie pagrindinai apsprendžia cholesterolio koncentraciją plazmoje. Kepenys yra labai mažo tankumo lipoproteinų (VLDL), kurie po to metabolizuojami į cirkuliuojančius žemo tankumo lipoproteinus (LDL), sintezės ir ekspresijos vieta. LDL yra dominuojantys cholesteroli, turintys lipobaltymai, esantys plazmoje, ir jų koncentracijos padidėjimas koreliuoja su aterosklerozės padidėjimu.
[0003] Kitas pagrindinis faktorius, apsprendžiantis cholesterolio homeostazę, yra cholesterolio adsorbcija plonose žarnose. Pagal šių dienų duomenis, žmogus su maistu sunaudoja vidutiniškai nuo 300 iki 500 mg cholesterolio. Nuo 600 iki 1000 mg cholesterolio gali būti pernešama kiekvieną dieną per žarnas. Šis cholesterolis yra tulžies komponentas ir yra sekretuoj amas kepenyse. Cholesterolio absorbcijos procesas yra kompleksinis ir daugiaaspektis. Buvo aprašyta, kad apytikriai 50% bendro cholesterolio, esančio žarnose, yra absorbuota žarnų surišančiomis ląstelėmis (pvz., enterocitais). Šis cholesterolis yra iš maisto ir tulžies arba susidaręs kepenyse. Didesnė dalis naujai absorbuoto enterocitų cholesterolio yra esterifikuota fermento acilCoA: cholesterolaciltransferazės (ACAT) pagalba. Vėliau šie cholesterolio esteriai supakuojami kartu su trigliceridais ir kitais junginiais (pvz., fosfolipi-dais, apoproteinais), susidarant kitai lipobaltymų klasei, chilomikronams.
[0004] Chilomikronai yra sekretuojami žarnų ląstelių d, limfą, per kurią jie gali būti pernešami i, kraują. Faktiškai visas cholesterolis, absorbuotas žarnose, patenka šiuo būdu i, kepenis. Kai cholesterolio absorbcija bet kokiu būdu žarnose yra sumažėjusi, mažiau cholesterolio patenka i, kepenis. Todėl sumažėja kepenų lipoproteinų (VLDL) produkcija ir padidėja plazmos cholesterolio išvalymas kepenyse, pagrinde LDL. Todėl cholesterolio absorbcijos inhibavimo tinklinis efektas žarnose sumažina cholesterolio koncentraciją plazmoje.
[0005] Beta-laktamai, tokie kaip (3R-4S)-1,4-bis-(4-metoksi-fenil)-3- (3-fenilpropil)-2-azetidinonas, atskleistas PCT/US92/05972, yra potencialus cholesterolio absorbcijos inhibitorius, kurio dėka sumažėja cholesterolio koncentracija plazmoje kai kurioms gyvūnų rūšims (žiurkėnams, žiurkėms, triušiams, beždžionėms).
[0006] Cholesterolio biosintezės inhibavimas 3-hidroksi-3-metilglutarilo Kofermento A reduktazės (EC1.1.1.34) inhibitoriaus pagalba yra efektyvus kelias cholesterolio koncentracijai sumažinti plazmoje (Witzum, 1989) ir sumažinti aterosklerozę. Kombinuota terapija HMG CoA reduktazės inhibitoriumi ir tulžies rūgšties izoliavimu buvo pademonstruota, kad yra efektyvesnis hiperlipideminiams pacientams, nei naudojant atskirai monoterapijoje (Illingworth, 1988).
[0007] Mes nelauktai nustatėme, kad beta-laktamo cholesterolio absorbcijos inhibitoriaus ir HMG CoA reduktazės inhibitorius lovastatino (MEVACOR™) derinys daug labiau sumažina cholesterolio kieki, plazmoje nei bet kuris iš jų agentų atskirai šunims, rezus beždžionėms ir cholesteroliu šeriamiems žiurkėnams ir triušiams. Šie duomenys yra netikėti, nes HMG CoA reduktazės inhibitorius nesumažina cholesterolio koncentraciją žiurkėnų ir beždžionių plazmoje.
[0008] Pateikiamas išradimas susietas su cholesterolio koncentracijos sumažinimo plazmoje metodu, apimančiu efektyvaus kiekio cholesterolio biosintezės inhibitoriaus ir p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus derinio panaudojimą žinduoliams. Tai yra, pateikiamas išradimas susietas su P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus panaudojimu derinyje su cholesterolio biosintezės inhibitoriumi (ir, panašiai, cholesterolio biosintezės inhibitoriaus panaudojimu su P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriumi) gydymui arba apsisaugojimui nuo aterosklerozės arba cholesterolio koncentracijos plazmoje sumažinimui.
[0009] Kitas aspektas, išradimas susietas su vaistine forma, apimančia efektyvius cholesterolio biosintezės inhibitoriaus, p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus ir tinkamus užpildo kiekius. Kitu aspektu, išradimas susietas su rinkiniu, kuriame yra viena fasuotė su efektyviu cholesterolio biosintezės inhibitoriaus kiekiu su tinkamu užpildu ir atskira fasuotė su efektyviu P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus kiekiu su tinkamu užpildu.
[0010] Cholesterolio biosintezės inhibitoriai, naudojami deriniuose šiame išradime, yra HMG CoA reduktazės inhibitoriai tokie kaip lovastatinas, pravastatinas, fluvastatinas, simvastatinas ir CI-981; HMG CoA sintezės inhibitoriai, pavyzdžiui, L-659,699 ((E,E-11-[ 3'R-(hidroksimetil)-4'-okso-2'R-oksetanil] -3,5,7R-trimetil-2,4-undekadieno rūgštis); skvaleno sintezės inhibitoriai, pavyzdžiui, skvalestatatinas 1; ir skvaleno epoksidazės inhibitoriai, pavyzdžiui, NB-598 ((E)-N-etil-N-(6,6-dimetil-2-hepten-4-inil)-3-[ (3,3'-bitiofen-5-il) metoksi] benzenometanamino hidrochloridas) . Tinkamiausi HMG CoA reduktazės inhibitoriai yra lovastatinas, pravastatinas ir simvastatinas.
[0011] P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriai, įskaitant ir šiuos, yra identifikuoti kaip nauji junginiai, kurių formulė I patente PCT/US92/05972, pateikta-me 1992 m. liepos 21 d. ir publikuotame kaip W093/02048 1993 m. vasario 4 d., o taip pat jie identifikuoti formule II šiame PCT patente cholesterolio kiekio sumažinimui. Anksčiau minėtame PCT patente jie įtraukti kaip palyginamieji pavyzdžiai; junginiai, kurių formulės I ir II, yra pateiktos žemiau:
[0012] - (CH2) p-X-B, kur p yra 0,1 arba 2 ir X yra jungtis, -NH-arba S(O)0_2;
[0013] heteroarilas, heteroarilas, sujungtas su benzenu-, W-pakeistas heteroarilas arba W-pakeistas heteroarilas, sujungtas su benzenu, kur heteroarilas yra pasirenkamas iš grupių, kuriose yra pirrolil-, piridinil-, pirimi-dinil-, pirazinil-, triazinil-, imidazolil-, tiazolil-, pirazolil-, tienil-, oksazolil- ir furanil-, ir
[0014] heteroarilai, kurių sudėtyje yra azotas, jų N-oksidai, ir kur W yra 1-3 pakaitai anglies atomų žiede, pasirenkami iš grupių, kuriose yra žemesnysis alkilas, hidroksi žemesnysis alkilas, žemesnysis alkoksilas, alkoksialkilas, alkoksialkoksilas, alkoksikarbonilalkoksilas (žemesnysis alkoksiimino) žemesnysis alkilas, žemesnysis alkandioilas, žemesnysis alkil-žemesnysis alkandioilas, aliloksilas, -CF3, -OCF3, benzilas, R14-benzilas, benziloksilas, R14-benziloksilas, fenoksilas, R14-fenoksilas, dioksolanilas, N02, -NR10RU, -NR10R11 (žemesnysis alkil)-NR10Rn (žemesnysis alkoksi) OH, halogenas, -NHC(0)0R5, -NHC(0)R5, R602SNH-, (R602S)2N-, -S(0)2NH2, -S (0) 0-2R10,tret-butildimetilsililoksimetil-, C(0)R12, ir
[0015] " (CH2)
[0016]
[0017] B'-(C2-C6 alkilen)-; B'-(C4-C6 alkadienilen)-;
[0018] B' - (CH2) t-Z-(C2-C6 alkilen)-, kur Z yra apibrėžtas anksčiau ir t yra O, 1, 2 arba 3 taip, kad suma t su anglies atomų skaičiumi alkilen- grandinėje būtų 2, 3, 4, 5 arba 6;
[0019] B ' - (CH2) f-V- (CH2) g-, kur V yra C3-C6 cikloalkileno, f yra 1, 2, 3, 4 arba 5 ir g yra 0, 1, 2, 3, 4 arba 5 taip, kad suma f ir g būtų lygi 1, 2, 3, 4, 5 arba 6;
[0020] B ' - (CH2) t-V- (C2-C6alkilen) - arba B ' - (C2-C6alkilen) -V-(CH2)t-, kur V ir t yra apibrėžtos aukščiau taip, kad t suma su anglies atomų skaičiumi alkileno grandinėje būtų lygi 2, 3, 4, 5 arba 6;
[0021] B 1 - (CH2) a-Z- (CH2) b-V- (CH2) d-, kur Z ir V yra apibrėžtos aukščiau ir a, b ir d nepriklausomai vienas nuo kito gali būti 0, 1, 2, 3, 4, 5 arba 6, taip, kad suma a, b ir d būtų lygi 0, 1, 2, 3, 4, 5 arba 6;
[0022] T-(CH2)s-, kur T yra cikloalkilas su 3-6 anglies atomais ir s yra 1, 2, 3, 4, 5 arba 6; arba
[0023] naftilmetil-, heteroarilmetil- arba W-pakeistas heteroarilmetilas, kurioje heteroarilas ir W yra apibrėžti aukščiau;
[0024]
[0025] B' yra naftilas, heteroarilas- arba W-pakeistas heteroarilas, kurioje heteroarilas yra apibrėžtas aukščiau arba
[0026]
[0027] R8 yra H, žemesnysis alkilas, fenilas su žemesniuoju alkilu arba -C(0)R9;
[0028] R9 yra H, žemesnysis alkilas, fenilas arba fenilas su žemesniuoju alkilu;
[0029] R10 ir R1X yra nepriklausomai pasirenkami iš H arba žemesniojo alkilo;
[0030]
[0031]
[0032] R20 yra fenilas, W-pakeistas fenilas, naftilas, W-pakeistas naftilas, benzodioksolilas, heteroarilas, W-pakeistas heteroarilas, benzenas sujungtas su heteroarilu ir W-pakeistas benzenas, sujungtas su heteroarilu, kur hete oarilas yra apibrėžtas aukščiau;
[0033] R2i, R22 ir R23 yra nepriklausomai pasirenkamas iš H arba R2o ;
[0034] W yra nuo 1 iki 3 pakaitų, nepriklausomai pasirenkamų, kaip apibrėžta aukščiau;
[0035] E, F ir G yra nepriklausomai jungtis; C3-C6 cikloalkilenas; Cį-Cįo alkilenas, Ci~Cio alkenilenas; C1-C10 alkinilenas; alkilenas, alkenilenas arba alkinileno grandinė, kaip nurodyta, pakeista vienu arba daugiau pakaitų, nepriklausomai pasirenkamų iš grupės, kurioje yra fenilas, W-pakeistas fenilas, heteroarilas ir W-pakeistas heteroarilas, kur heteroarilas yra apibrėžtas aukščiau; alkilenas, alkenilenas arba alkinileno grandinė, kaip nurodyta, nutraukta daugiau grupių, nepriklausomai parinktų iš -0-, -S-, -S0-, -S02_, NR8, —C(0)—, C3-C6 cikloalkileno, fenileno, W-pakeisto fenileno, heteroarileno ir W-pakeisto heteroarileno, arba su intarpais alkileno, alkenileno arba alkinileno grandine, apibrėžiama vienu arba daugiau nepriklausomų pakaitų iš grupės, kurioje yra: fenilas, W-pakeistas fenilas, heteroarilas ir W-pakeistas heteroarilas, arba vienas iš R2i~E ir R22~F yra pasirenkamas iš grupės, kurioje yra: halogenas, OH, žemesnysis alkoksilas, -0C(0)R5, -NR10Rii, -SH arba -S(žemesnysis alkilas);
[0036] ir kur Rs, R6 ir R8-R14 yra apibrėžti aukščiau;
[0037] su ta sąlyga, kad jei G yra ryšys, tai R23 negali būti H, ir jei R23 W-pakeistas fenilas, tai W negali būti halogenas para padėtyje;
[0038] Tinkamiausi junginiai, kurių formulė yra I, kurioje R yra H. Kita tinkamiausių junginių, grupė, kurių bendra formulė yra tie junginiai, kuriuose D yra B'-(CH2)q-, B,-(CH2)e-Z-(CH2)r-, B 1 - (C2-C6alkilen) -, arba B'-(CH2)f-V-(CH2)g-, kur B1, Z, V, q, e, r, f ir g yra apibrėžti aukščiau. Trečia tinkamiausių junginių grupė, kurių bendra formulė I yra ta, kurioje R4 yra fenilas, R7 pakeistas fenilas arba indanilas. Kita tinkamiausių junginių grupė, kurių bendra formulė yra ta, kurioje A yra -(CH2)p-X-B, kur X, B ir p yra apibrėžti aukščiau.
[0039] Ypatingai tinkami junginiai, kurių formulė I, kurioje D yra: B'( £ H2)q"r kur B' yra fenilas ir q yra 3 arba 4 ; B ' - (CH2) e-Z-(CH2) r-, kur B' yra p-fluorfenilas arba p-metoksifenilas, e lygus nuliui, Z yra -0-, ir r yra 2; B'-(C2-C6 alkilen)-, yra 3-fenil-l-propenilas; arba B'-(CH2) f-V- (CH2) g-, kur B' yra fenilas, f yra 1, V yra ciklopropilenas ir g lygus nuliui. Taip pat ypatingai tinkami junginiai, kurių bendra formulė I, kurioje A yra -(CH2)p-X-B, kai p yra lygus nuliui ir X yra ryšys. Formulėje I pageidautina, kad Rlf R2 ir R3 būtų pasirenkami iš: H, OH, N02, žemesniojo alkoksilo, alkoksialkoksilo, žemesniojo alkilo, žemesniojo alkandioilo, halogeno meta padėtyje, -NR10RU (žemesniojo alkoksi)-, aliloksilas, fenoksilas, alkoksikarbonilalkoksilas ir -C(0)R12. Junginiai, kurių bendra formulė I, kurioje pakaitai RL ir R3 kiekvienas yra H ir R2 yra para padėtyje, yra labiausiai tinkami.
[0040] R7 formulėje I pageidautina, kad būtų žemesnysis alkilas, žemesnysis alkoksilas, halogenas, -OCF3, žemesnysis alkiltio, -NR10RU, -CN, OH ir -COR12. Labiau pageidautina, kad junginiuose, kurių bendra formulė I, n būtų lygu 1 ir pakaitas R7 būtų para padėtyje.
[0041] Tinkamiausias (3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra (3R-4S)-1,4-bis-(4-metoksifenil)-3-(3-fenil-propil)-2-azetidinonas.
[0042] Šio išradimo efektyvių junginių derinių cholesterolio koncentracijos plazmoje sumažinimui efektyvumas įrodomas pateikiamomis testų procedūromis. Šiose
[0043] procedūrose (i-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra (3R-4S)-1,4-bis-(4-metoksifenil)-3-(3-fenil-propil)-2-azetidinonas (toliau žymimas kaip Junginys A) ir HMG CoA reduktazės inhibitorius yra lovastatinas. 1 eksperimentas - Hipocholesteroleminis efektas, pasi-reiškiantis cholesteroliu maitinamiems žiurkėnams, naudojant Junginio A ir lovastatino derinį
[0044] Sirijos aksininių žiurkėnų patinai (Charles River labs, Wilmington, M.A.), sveriantys nuo 100 iki 125 g iki tyrimų maitinami Wayne graužikų pašaru. Tyrimų pradžioje (1 diena) gyvūnai buvo suskirstomi i, grupes (n=4-6 vienoje grupėje) ir šeriami Purina pašaru #5001, papildant ji, 0.5%, pagal svori,, cholesteroliu (Research Diets Inc., New Brunswick, NJ). 7 dienas, kasdien sušeriama po 3 mg/kg Junginio A ir lovastatino 10 mg/kg, pradedant 1 diena, sumaišius juos su 0.2 ml kukurūzų aliejaus. 7 dieną gyvūnai dekapituojami, kraujas surenkamas i, mėgintuvėlius, turinčius etilen-diamintetraacto rūgšties (EDTA), plazma atskiriama lėtai centrifūguojant 4°C temperatūroje.
[0045] Nesurištas cholesterolis plazmoje nustatomas modifikuotu cholesteroloksidazės metodu pagal Allain ir kt. ( Clin. Chem., 20 (1974) p. 470-475), reagentai naudojami iš rinkinio, gaminamo Wako Pure Chemicals Industries, Ltd. (Osaka, Japan) . Dešimt fj.1 serumo naudojama bendram cholesterolio kiekiui nustatyti 1 ml 0.15 M Tris buferiniame tirpale, pH 7.0, kuriame buvo p-chlorfenolio (0.1%), cholesteroloksidazės (0.13 U/ml), cholesterolio esterio hidrolazės (0.13 U/ml), peroksidazės (2.4 U/ml) ir 4-aminoantipirino (0.015%). Reakcija vykdoma 10 minučių 37°C temperatūroje, lygiagrečiai su cholesterolio standartais, gauto raudono chinono pigmento absorbcija buvo matuojama spektrofotometriškai 505 nm bangoje.
[0046] Šeriant žiurkėnus pašaru, praturtintu 0.5% cholesterolio, 7 dienas cholesterolio koncentracija plazmoje padidėja-, du kartus. Cholesterolio kiekis plazmoje padidėja visų pirma VLDL-e ir LDL-e (Schnitzer-Polokoff ir kt., Comp. Biochem Physiol, 99A (1991) p. 665-670). Duodant Junginio A 3 mg/kg per dieną, cholesterolio kiekis plazmoje sumažėja 15%, tuo metu, kai duodant 10 mg/kg per dieną lovastatino, cholesterolio kiekis plazmoje nepakinta (1 lentelė). Kai duodamas junginys A kartu su lovastatinu, buvo nustatyta, kad cholesterolio kiekis sumažėja plazmoje 31%, tai žymiai daugiau, nei naudojant juos atskirai (1 lentelė).
[0047] Dydžiai pateikti kaip reikšmė ± SEM. ap<0.05 palyginus su kontroline grupe. bp<0.05 palyginus arba vien tik su junginiu A, arba tik su lovastatinu atskirai. 2 eksperimentas - Hipocholesteroleminis efektas, pasireiikiantis cholesteroliu maitinamiems triudiams, naudojant Junginio A ir lovastatino derini Metodika: Naujosios Zelandijos baltieji triušiai, sveriantys nuo 2.4 iki 2.6 kg, šeriami vieną savaitę, pridedant i, pašarus 1% cholesterolio ir 6% žemės riešutų aliejaus. Hiper- ir hipoatsako triušiai, kuriuose cholesterolio kiekis serume buvo didesnis nei vienas, standartinis nukrypimas nuo cholesterolio kiekio reikšmės, buvo nenaudojami tyrimuose, suskirstomi i, keturias triušių grupes (n=8 kiekvienoje grupėje), su ekvivalentiniu cholesterolio kiekiu serume. Po to triušiai šeriami pašaru, i, kuri, būdavo pridedama 0.5% cholesterolio ir 6% žemės riešutų aliejaus ir papildomai nieko nepridedama arba pridedama 0.03% Junginio A, arba 0.015% lovastatino, arba 0.03% Junginio A ir 0.015% lovastatino. Serumo pavyzdžiai buvo imami kas savaitę 4 savaites ir nustatoma cholesterolio koncentracija serume, aprašytu 1 eksperimente būdu.
[0048] Šeriant vieną savaitę, pridėjus i, pašarus 1% cholesterolio / 6% žemės riešutų aliejuje, cholesterolio kiekio vidurkis serume padidėdavo apytikriai iki 1000 mg/ml (2 lentelė). Panašus pašaro suvartojimas ir svorio padidėjimas buvo stebimas visose keturiose triušių grupėse per visas 4 tyrimo savaites. 0.03% Junginio A dozė buvo duodama tokia, kad būtų lygi 14 mg/kg per dieną ir 0.015% lovastatino kiekis buvo duodamas toks, kad sudarytų 7 mg/kg per dieną. Cholesterolio koncentracija serume nepertraukiamai didėjo kontrolinėje grupėje nuo 1015 iki 1358 mg/dl per visas 4 savaites (2 lentelė) . Naudojant vieną Jungini, A atskirai, cholesterolio koncentracija serume sumažėja 29% po 4 savaičių, palyginus su 0 savaite, naudojant vieną atskirai lovastatiną - sumažėja 33% per 4 savaites, bet šis sumažėjimas nėra žymus pagal ANOVA. Naudojant kartu Jungini, A ir lovastatiną, stebimas žymus cholesterolio kiekio sumažėjimas serume per visą laiką, po keturių savaičių jis sumažėja 61%, lyginant su 0 savaite (2 lentelė). Santykinis cholesterolio kiekio sumažėjimas serume yra didesnis, kai lyginamos 4 savaitės cholesterolio koncentracijos reikšmės su kontroline grupe po 4 savaičių, 47% sumažėja, kai naudojamas vienas Junginys A, 72% sumažėja, kai naudojamas Junginys A ir lovastatinas.
[0049] Dydžiai pateikti kaip reikšmė ± SEM, esant 8 triušiams vienoje grupėje. ap<0. 05 palyginus su kontroline grupe. bp<0. 05 palyginus su 0 savaitės reikšmėmis pagal ANOVA kiekvieno tyrimo metu. 3 eksperimentas - Hipocholesteroleminis efektas pasireiškiantis rezus beždžionėms, maitinant maistu be cholesterolio, naudojant Junginio A ir lovastatino derini.
[0050] Dvidešimt rezus beždžionių (17 patinų, 3 patelės), sveriančių nuo 4.4 iki 8.5 kg, maitinamos beždžionių pašaru be riebalų (Purina #5038-7) su 5% kukurūzų aliejaus priedu, dvi savaites. Sudarytos keturios beždžionių grupės su ekvivalentinėmis cholesterolio koncentracijomis serume ir vienodu svoriu (n=5/gru-pėje) . Beždžionės toliau buvo šeriamos pašaru be riebalų su 5% kukurūzų aliejaus, be arba pridedant 3 mg/kg per dieną Junginio A; 20 mg/kg per dieną lovastatino; arba Junginio A (3 mg/kg per dieną) kartu ir lovastatino (20 mg/kg per dieną). Serumo pavyzdžiai paimami kas savaitę, tris savaites, ir cholesterolio koncentracija serume matuojama kaip aprašyta 1 eksperimente. Statistiniai skirtumai cholesterolio koncentracijoms apskaičiuojami pagal ANOVA ir Dunnett t metodiką. Patikimumo lygis buvo imamas p<0.05.
[0051] Kontrolinėje beždžionių grupėje, kuri buvo šeriama maistu be riebalų su 5% kukurūzų aliejaus priedu, serume cholesterolio koncentracija buvo stabili visas tris savaites (3 lentelė). Duodant su maistu atskirai tik Jungini, A po 3 mg/kg per dieną ir tik lovastatiną po 20 mg/kg per dieną, cholesterolio kiekis serume nežymiai sumažėjo po trijų savaičių, bet šie pokyčiai yra visai nežymūs, jei lyginama su kontroline grupe po trijų savaičių. Duodant kartu Jungini, A ir lovastatiną, cholesterolio kiekis serume žymiai sumažėjo, palyginus su tais atvejais, kai duodami šie junginiai atskirai visuose tyrimuose, ir tas sumažėjimas sudaro 25% po trijų savaičių (3 lentelė).
[0052] Dydžiai pateikti kaip reikšmė ± SEM, esant 4 beždžionėms vienoje grupėje. * p<0. 05, palyginus su kontroline grupe. 4 eksperimentas - Hipocholesteroleminis efektas pasireiškiantis šunims, naudojant Junginio A ir lovastatino derini,
[0053] Penkiolika skalikų patinų suskirstyti i, tris grupes su ekvivalentine cholesterolio koncentracija serume ir svoriu (n=5 vienoje grupėje). Šunys šeriami septynias dienas Purina Dog pašaru (#5006), kuriame buvo maltodekstrino ir/arba 0.0234% Junginio A; arba 0.0234% lovastatino; arba Junginio A (0.0234%) kartu su lovastatinu (0.0234%). Serumo pavyzdžiai imami 0, 3 ir 7 dienomis, bendras cholesterolio kiekis serume nustatomas būdu, aprašytu 1 eksperimente.
[0054] Statistiniai skirtumai buvo įvertinami pagal ANOVA ir patikimumo lygis buvo imamas p<0.05.
[0055] Duodant šunims maistą, kuriame buvo arba tik Junginio A 0. 0234% ( 5 mg/ kg per dieną) arba tik lovastatino 0. 0234% ( 5 mg/ kg per dieną), cholesterolio koncentracija serume buvo tokiame pat lygyje, kaip ir pradžioje ( 0 diena, tiriant 3 dieną arba 7 dieną ( 4 lentelė) . Duodant su maistu Jungini, A po 5 mg/ kg per dieną kartu su lovastatinu po 5 mg/ kg per dieną, cholesterolio koncentracija serume sumažėjo 33% 7 tyrimų dieną, palyginus su 0 diena ( 4 lentelė). Cholesterolio koncentracija serume kombinuotoje grupėje taip pat buvo mažesnė 7 tyrimų dieną nei grupėse, kai buvo duodami preparatai, Junginys A arba lovastatinas, atskirai ( 4 lentelė).
[0056] Dydžiai pateikti kaip reikšmė ± SEM, esant 5 šunims vienoje grupėje.
[0057] bp<0. 05, palyginus su tyrimų 7 diena, duodant atskirai Jungini A arba atskirai lovastatiną.
[0058] Kadangi pateikiamas išradimas susijęs su dviejų preparatų derinio naudojimu, komponentai gali būti vartojami kartu arba vienas po kito arba vaistinės formos, kurioje yra cholesterolio biosintezės inhibitorius ir (3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius su farmaciškai tinkamu nešikliu. Komponentai gali būti vartojami atskirai arba kartu valgant --arba apeinant virškinimo traktą tokiomis vaistinėmis formomis kaip kapsulės, tabletės, milteliai, kachetai, suspensija arba tirpalas. Vaistinės formos gali būti paruoštos naudojant farmacijoje tinkamus nešiklius ir priedus, naudojant įprastus būdus. Tokie farmaciniai nešikliai ir priedai gali būti netoksiški suderinami filtrai, surišėjai, susmulkintoj ai, buferiniai tirpalai, konservantai, antioksidantai, aliejai, kvapai, sluoksniuotoj ai, spalvinės medžiagos, emulgatoriai ir kiti.
[0059] Pateikiamos vaistinės formos, kuriose yra 3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius, yra apgintas paraiška PCT/US92/05972, kuri buvo cituota aukščiau. Pateikiamos vaistinės formos, kuriose yra cholesterolio biosintezės inhibitorius, yra gerai žinomos. Manoma, kad dvi veikliosios medžiagos vartojamos kartu, kurių dozavimo formos atskleistos PCT paraiškoje, lengvai gali būti keičiamos.
[0060] Junginių pagal ši, išradimą dienos dozės tam, kad sumažėtų cholesterolio koncentracija serume, yra sekančios: cholesterolio biosintezės inhibitoriaus įprasta dozė yra nuo 0.1 iki 80 mg/kg žinduolio svorio per dieną, naudojant viena doze arba dalimis, paprastai vieną arba du kartus per dieną; p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus įprasta dozė yra nuo 0.1 iki 10 mg/kg žinduolio svorio per dieną vienu kartu arba dalimis. Tiksli dozė bet kurio šio derinio komponento nustatoma gydytojo ir ji priklauso nuo komponentų stiprumo, pacientų amžiaus, svorio, būsenos ir reakcij os.
[0061] Bendrai, tam, kad sumažėtų cholesterolio koncentracija žinduolių, kuriems to reikia, serume, šio išradimo junginių derinio vartojimo pacientams dozių ribos gali būti sekančios: HMG CoA reduktazės inhibitoriaus apytikriai nuo 10 iki 40 mg dozėje, naudojant nuo 1 iki 2 kartų per dieną, bendra dienos dozė - nuo 10 iki
[0062] 80 mg, ir kitiems cholesterolio biosintezės inhibitoriams apytikriai nuo 1 iki 1000 mg dozėje, naudojant 1 arba 2 kartus per dieną, bendra dienos dozė - apytikriai nuo 1 mg iki 2 g. Apytikriai nuo 1 iki 1000 mg dozė P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus vartojama nuo vieno iki keturių kartų per dieną. Jei derinio komponentai vartojami atskirai, tai dozių skaičius kiekvieno komponento, suvartojamo per dieną, nebūtinai turi būti tas pats, pavyzdžiui, jei vienas komponentas pasižymi didesniu aktyvumu, tai jis gali būti vartojamas rečiau.
[0063] Kadangi, pagal ši, išradimą, cholesterolio koncentracijos sumažinimui serume naudojamas nurodytų aktyvių ingredientų derinys, o jie gali būti naudojami ir atskirai, todėl išradimas taip pat susietas su atskirtų vaistinių formų rinkiniu. Rinkinio sudėtyje yra du atskiri komponentai, kuriuose yra: cholesterolio biosintezės inhibitoriaus vaistinė forma ir 0-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus vaistinė forma. Rinkinyje turi būti šių atskirų komponentų vartojimo instrukcija. Rinkinys ypatingai naudingas, kai atskiri komponentai turi būti naudojami skirtingu būdu (pavyzdžiui, peroraliai arba parenteraliai) arba turi būti naudojami skirtingais intervalais.
1. {3-Laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus panaudojimas gamybai medikamentų, naudojamų gydymui arba apsisaugojimui nuo aterosklerozės arba cholesterolio koncentracijos serume sumažinimui, kartu su cholesterolio biosintezės inhibitoriumi.
2. Panaudojimas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame 3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra struktūrinės formulės
3. Panaudojimas pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame 3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra apibrėžtas 2 punkte , kuriame R yra H;D yra B'-(CH2)q-, B ' - (CH2) e-Z-(CH2) r-, B'-(C2-C6alkenilen)-, arba B ' - (CH2) f-V-(CH2) g-, kur B', Z, V, q, e, r, f ir g yra apibrėžti 4 punkte ;R< į yra fenilas, R7-pakeistas fenilas arba indanilas, kuriame R7 yra žemesnysis alkilas, žemesnysis alkoksilas, halogenas, -OCF3, žemesnysis alkiltio, NR10RU, -CN, OH arba -COR12, kur R10, Ru ir R12 yra apibrėžti 4 punkte; ir A yra -(CH2)p-X-B, kur X, B ir p apibrėžti 4 punkte.
4. Panaudojimas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame J3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra apibrėžtas 2 punkte, kuriameD yra B'-(CH2)q-, kuriame B' yra fenilas ir q yra 3 arba 4; B ' - (CH2) e"z~ (CH2) r r kuriame B' yra p-f luorfenilas arba p-metoksifenilas, e lygus 0, Z yra -O- ir r yra 2; B ' - (C2-C6alkenilen)- yra 3-fenil-l-propenilas; arba, B'-(CH2) f-V- (CH2) g-, kurioje B' yra fenilas, f yra 1, V yra ciklopropilenas, ir g lygus 0;A yra -(CH2)p-X-B, kurioje p lygus nuliui, X yra jungtis ir B kaip apibrėžtas 2 punkte;Rlf R2 ir R3 pasirenkami iš grupės, kurioje yra H, OH, - N02, žemesnysis alkoksilas, alkoksialkoksilas, žemesny-sis alkilas, žemesnysis alkandiolas, meta padėtyje halogenas, NR10Rn (žemesnysis alkoksi)-, aliloksilas, fenoksilas, alkoksikarbonilalkoksilas ir-C(0)R12, kur R10, Rn ir R12 yra apibrėžti 2 punkte;R4 yra (R7)n~ pakeistas fenilas, kuriame n yra 1 ir (R7)-žemesnysis alkilas, žemesnysis alkoksilas, halogenas, -OCF3, žemesnysis alkiltio, -NR10Rn, -CN, -OH arba-COR12, kur R10, Rn ir R12 yra apibrėžti 2 punkte.
-COR12, kur R10, Rn ir R12 yra apibrėžti 2 punkte.5. Panaudojimas pagal 4 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra (3R-4S)-1,4-bis-(4-metoksifenil)-3-(3-fenilpropil)-2-azetidinonas.
6. Cholesterolio biosintezės inhibitoriaus panaudojimas kombinuotų medikamentų gamyboje kartu su J3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriumi gydymui arba apsisaugojimui nuo aterosklerozės, arba cholesterolio koncentracijos plazmoje sumažinimui.
7. Panaudojimas pagal 6 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas cholesterolio biosintezės inhibitorius yra pasirenkamas iš grupės, kurioje yra 3-hidroksi-3-metil-glutarilo kofermento A reduktazių inhibitoriai, skvaleno sintezės inhibitoriai ir skvaleno epoksidazės inhibitoriai.
8. Panaudojimas pagal 7 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas cholesterolio biosintezės inhibitorius yra pasirenkamas iš grupės, kurioje yra lovastatinas, pravastatinas, fluvastatinas, simvastatinas, CI-981, E,E-ll-[ 3'R-(hidroksimetil)'-4-okso-2'R-oksetanil] -3,5,7R-trimetil-2,4-undekandieno rūgštis (L-659699), skvalestatinas 1 ir (E)-N-etil-N-(6,6-dimetil-2-hept-4-inil)-3-[ (3,3'-bitiofen-5-il)] benzen-ometanamino hidrochloridas (NB-598).
9. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-5 punktų, besiskiriantis tuo, kad jame cholesterolio biosintezės inhibitorius yra toks, kaip apibrėžtas 7 arba 8 punkte.
10. Panaudojimas pagal vieną iš 6-8 punktų, besiskiriantis tuo, kad jame P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra toks, kaip apibrėžtas bet kuriame iš 2-5 punktų.
11. Farmacinė kompozicija, skirta aterosklerozės gydymui arba profilaktikai arba cholesterolio koncentracijos plazmoje sumažinimui, besiskirianti tuo, kad ji savo sudėtyje turi p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorių, cholesterolio biosintezės inhibitorių ir farmaciškai tinkamą nešiklį.
12. Farmacinė kompozicija pagal 11 punktą, besiskirianti tuo, kad joje cholesterolio biosintezės inhibitorius yra 7 arba 8 punkte apibrėžtas inhibitorius.
13. Farmacinė kompozicija pagal 11 ir 12 punktus, besiskirianti tuo, kad joje P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius yra apibrėžtas bet kuriame viename 2-5 punkte.
14. Farmacinės kompozicijos pagal 11-13 punktus gamybos būdas, besiskiriantis tuo, kad cholesterolio biosintezės inhibitorių ir P-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorių maišo su farmaciškai tinkamu nešikliu.
15. Gamybos būdas pagal 14 punktus, besiskiriantis tuo, kad cholesterolio biosintezės inhibitorių pagal 7 arba 8 punktus ir p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorių pagal bet kurį iš 2-5 punktų maišo su farmaciškai tinkamu nešikliu.
16. Komplektas, susidedantis iš atskirų farmacinės kompozicijos įpakavimo vienetų, skirtas naudoti kombinacijoje aterosklerozės gydymui ar profilaktikai arba cholesterolio koncentracijos kraujyje sumažinimui, besiskiriantis tuo, kad viename dozės įpakavimo vienete yra efektyvus kiekis cholesterolio biosintezės inhibitoriaus farmaciškai tinkamame nešiklyje, o kitame dozės įpakavimo vienete yra efektyvus kiekis p-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus farmaciškai tinkamame nešiklyje.
17. Komplektas pagal 16 punktą, besiskiriantis tuo, kad viename dozės įpakavimo vienete yra efektyvus kiekis cholesterolio biosintezės inhibitoriaus pagal 7 arba 8 punktą farmaciškai tinkamame nešiklyje, o antrame dozės įpakavimo vienete yra efektyvus kiekis (3-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitoriaus pagal 2-5 punktus farmaciškai tinkamame nešiklyje.
18. Cholesterolio biosintezės inhibitorius ir (}-laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius, skirtas naudoti žinduoliams kartu arba atskirai, vieną po kito, aterosklerozės gydymui ar profilaktikai arba cholesterolio koncentracijos serume sumažinimui.
19. Cholesterolio biosintezės inhibitorius pagal 7 arba 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis skirtas naudoti pagal 18 punktą aterosklerozės gydymui ar profilaktikai arba cholesterolio koncentracijos serume sumažinimui.
20. p-Laktamcholesterolio absorbcijos inhibitorius pagal bet kuri, iš 2-5 punktų, besiskiriantis tuo, kad jis skirtas naudoti komplekte pagal 16 arba 17 punktą.