[LT] I formulės peptidai:@ A - B - C - E - F - K - (D) - Tic - G - M - F'- I (I),@kurioje@A yra vandenilis, alkilas, alkanoilas, alkoksikarbonilas, alkilsulfonilas, cikloalkilas, arilas, arilsulfonilas, heteroarilas arba aminorūgštis, kuriuose esant reikalui, gali būti pakaitalai,@B yra bazinė aminorūgštis,@C yra di-arba tripeptidas,@E yra alifatinės arba alicikliškai-alifatinės aminorūgšties liekana,@F yra, nepriklausomai viena nuo kitos, esant reikalui, turinti šoninėje grandinėje pakaitalus aminorūgštis, arba tiesiog jungtis,@G yra aminorūgštis,@F' turi tas pačias reikšmes kaip F, arba gali būti -NH-(CH2)2-8 - arba tiesioginė jungtis,@I yra -OH, -NH2 arba -NHC2H5 ir@K yra -NH-(CH2)1-4-CO- liekana arba tiesioginė jungtis, pasižymi antagonistiniu poveikiu bradikininui. Jų terapinė nauda apima įvairias patogenines būsenas, kurias skatina, sukelia ir palaiko bradikininas ir bradikininui giminingi peptidai. I formulės peptidai gaunami žinomais sintezės būdais.
[EN]
[0001] tidinio hormono arba kito bradikinino analogo 7-tos padėties L-Pro yra pakeistas D-aminorūgštimi, tokia kaip D-Phe, D-Thia,
[0002]
[0003] A a^) yra vandenilis, (C^-Cg)-alkilas, (C^-Cg)-alkanoilas,
[0004] (C,-CQ)-alkoksikarbonilas arba (C,—CQ)-alkilsulfonilas, kuriuose 1 o l o
[0005] grupė, halogenas, di-(C-^-C^ )-alki laminogrupė , karbamoilas, sulfamoilas, (C-^-C^ )-alkoksikarbonilas , ( Cg-C12 )-arilas ir (C6-Ci2^~ -ari 1-(C^-C^)-alkilas; arba kuriuose, esant reikalui, vienas vandenilio atomas, šiuo atveju, pakeistas viena liekana, tokia kaip (C^-Cg ) -cikloalkilas , (C^-C^-alkilsulf onilas, (C1~C4 )-alkilsul-finilas, (Cg-C12)-aril-(C1-C4)-alkilsulfonilas, (C6~C12)-aril--(Ci_C4)-alkilsulfinilas, (Cg-C12)-ariloksigrupė, (-C g)-heteroarilas ir (C^-C^)-heteroariloksigrupė; ir vienas arba du vandenilio atomai pakeisti viena arba dviem vienodomis arba skirtingomis liekanomis, tokiomis kaip karboksilas, aminogrupė, (C1~C4)-alkil-aminogrupė, hidroksilas, (C^-C^)-alkoksigrupė, halogenas, di-d^-C^) -alkilaminogrupė, karbamoilas, sulfamoilas, (C^-C4)-alkoksikarbonilas, (Cg-C12)-arilas ir (Cg-C12)-aril-(C^-C^ )-alkilas;a2) yra (C^-Cg)-cikloalkilas, karbamoilas, kuriame, esant reikalui, prie azoto atomo gali būti (C^-Cg)-alkilo arba (Cg-C^2)-arilo pakaitai; (Cg-C^)-arilas, (C7"C13)-aroilas, (Cg-C12)-arilsulfonilas, (C^-C^)-heteroarilas arba (C^-C^)-heteroaroilas;be to, a^) ir a2) p. pažymėtose liekanose, tokiose kaip arilas, heteroarilas, aroilas, arilsulfonilas ir heteroaroilas gali būti, esant reikalui, 1, 2, 3 arba 4 vienodi arba skirtingi pakaitai, tokie kaip: karboksilas, aminogrupė, nitrogrupė, (C^-C4)-alkilaminogrupė, hidroksilas, (C1"C4)-alkilas, (C^-C4)-alkoksigrupė, halogenas, ciano grupė, di-(C^-C4)-alkilaminogrupė, karbamoilas, sulfamoilas ir (C^-C4)-alkoksikarbonilas, arba
[0006]
[0007] B yra L- arba D-konfigūracijos bazinė aminorūgštis, kuri šo-ninėje grandinėje gali turėti pakaitus;
[0008]
[0009] kur
[0010] R 4 ir R 5, kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterociklinę mono-, bi- arba triciklinę sistemą su 2-15 C-atomų ir n = 2-8;
[0011] E yra neutralios, rūgščios arba bazinės, alifatinės arba ali-cikliškai-alifatinės aminorūgšties liekana;
[0012] F, nepriklausomai viena nuo kitos, yra neutralios, rūgščios arba bazinės, alifatinės arba aromatinės aminorūo5ties .liekana, kuri šoninėje grandinėje* gali turėti pakai t v s; arba yra tiesio-ginė jungtis;
[0013]
[0014] G yra toks pats, kaip ir G', kurio reikšmės yra duotos aukš-čiau, arba yra tiesioginė jungtis;
[0015] F' yra toks pat kaip ir F, yra -NHCCE^) - liekana, kur n = = 2-8, arba, jeigu G nėra tiesioginė jungtis, gali būti tiesio-ginė jungtis;
[0016] I yra -0H, -NI^ arba -NHC2HJ-;
[0017] K yra -NH-(CH_) X-C0- liekana, kur x = 1-4, arba yra tiesiogi-nė jungtis, o
[0018] M turi tas pačias reikšmes, kaip ir F;
[0019] Jeigu kitaip nenurodyta, tai aminorūgšties sutrumpinimas, nenurodant stereo-ženkliuko, reiškia L-formos aminorūgšties lie-kaną (Žr. Schrodes, JLiibke, The Peptides, Vol.l, New-York, 1965, XXII-XXV; Houbęn-Weyl, Methoden der Organische Chemie, Bd.XV/I
[0020] Aad, Abu, jr-Abu, AB z, 2ABz, £ Aca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, pAib, Ala, pAla, aAla, Alg, Ali, Araa, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc, Fel, Gln, Glu, Gly, Guv,
[0021] l
[0022] hAla, hArg, hCys, hGln, hGlu, His, hlle, hLeu, hLys, hMet, hPhe,
[0023] hPro, hSer, hThr,,hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, 3Hyp, Ile, Ise, Iva, Kyn, Lant, Lcn, Leu, Lsg, Lys, p Lys, 4Lys, Met, Mira, Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, Pic, Pro, ^Pro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, ^>Thi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, Tly, Trp, Trta, Tyr, Vai.
[0024] Kaip heterociklinės sistemos liekana, nurodyta aprašant IV formulę, priimtinos dėmesin heterociklų liekanos iš šios grupės:
[0025] piperidin-2-karboninė rūgštis;
[0026] 1,3,3,4-tetrahidroizochinolin-3-karboninė rūgštis, dekahidroizochinolin-3-karboninė rūgštis,
[0027] oktahidroindol-2-karboninė rūgštis,
[0028] dekahidrocinolin-2-karboninė rūgštis,
[0029] oktahidrociklopenta(b)pirol-2-karboninė rūgštis, 2-aza-biciklo(2.2.2)-oktan-3-karboninė rūgštis,
[0030] 2-azabiciklo(2.2.1)-heptan-3-karboninė rūgštis, 2-azabicik-lo(3.1.0)-heksan-3-karboninė rūgštis,
[0031] 2-azaspiro-(4.4)-nonan-3-karboninė rūgštis,
[0032] 2-azaspiro-(4.:)-dekan-3-karboninė rūgštis,
[0033] spiro//biciklo(2.2.1)-heptan/-2,3-pirolidin-5-karboninė rūgš-tis/ ,
[0034] spiro//biciklo(2.2.2)oktan/-2,3-pirolidin-5-karboninė rūg-štis,
[0035] 2-azatriciklo(4.3.0.1 6 ' 9 )dekan-3-karboninė ru_gstis, dekahidrociklohepta(b)pirol-2-karboninė rūgštis,
[0036] dekahidrociklookta(b)pirol-2-karboninė rūgštis, oktahidrociklopenta(c)pirol-2-karboninė rūgštis,
[0037] oktahidroizoindol-1-karboninė rūgštis,
[0038] 2,3,3a,4,6a-heksahidrociklopenta(b)pirol-2-karboninė rūgštis, 2,3,3a,4,5,7a-heksahidroindol-2-karboninė rūgštis, tetrahidrotiazol-4-karboninė rūgštis,
[0039] izoksazolidin-3-karboninė rūgštis,
[0040] pirazolidin-3-karboninė rūgštis/
[0041]
[0042] 37 4 847, US-A 4 350 704, EP-A 29 488, EP-A 31 741, EP-A 46 953
[0043] -A 49 605, EP-A 49 658, EP-A 50 800, EP-A 51 020, EP-A 52 870, -A 79 022, EP-A 84 164, EP-A 89 637, EP-A 90 341, EP-A 90 362, -A 105 102, EP-A 109 020, EP-A 111 873, EP-A 271 865 ir,EP-A 4 682.
[0044] .ti linijinės arba šakotos grandinės. Tas pats tinka ir alkilo irinių liekanoms, tokioms kaip alkoksigrupė, aralkilas arba al-moilas.
[0045] (Cg-C-^2)-arilas reiškia geriausia fenilą, naftilą arba bi-2nilą. Tą patį galima pasakyti ir apie jo darinių liekanas, to-ias kaip ariloksigrupė, aralkilas arba aroilas.
[0046] Halogenas reiškia fluorą, chlorą, bromą arba jodą, geriausia hlorą.
[0047] Priimtinos dėmesin druskos yra ypač šarminių arba žemės šar-.inių metalų druskos, fiziologiškai priimtinų aminų druskos ir .eorganinių arba organinių rūgščių, tokių kaip, pavyzdžiui, HCl, tBr, H^SO^, H^PO^> maleino, fumaro, citrinos, vyne, acto rūgščių iruskos .
[0048] B yra Arg, Lys, Orn, 2,4-diaminobutirilas arba L-homoarginino liekana, be to, esant reikalui, amino arba atitinkamai guanidino grupė šoninėje grandinėje gali būti pakeista A grupe, kurios reikš-mės aprašytos ) ir a^) punktuose;
[0049] E yra L- arba D-konfigūracijos alifatinės arba alicikliškai-alifatinės aminorūgšties, kuri šoninėje grandinėje turi 1-14 C-ato-mų, tokios kaip alaninas, serinas, treoninas, O-(C^-Cg)-alkilu
[0050] o iu
[0051] norvalinas, leucinas, izoleucinas, norleucinas,,.neopentilglicinas,
[0052] tret. -butilglicinas arba (C^-C_ )-cikloalki 1-(C-^-C^ )-alkilglici-nas
[0053] F' yra L- arba D-konfigūracijos bazinės aminorūgšties, tokios kaip Arg arba Lys, liekana, kur šoninės grandinės guanidino grupė arba aminogrupė gali būti pakeista A, kaip aprašyta a^) ir a^) punktuose, arba yra -NH-()n~, kur n = 2-8, liekana;
[0054] K yra -NH-(CI^ ) X-C0- liekana, kur x = 2-4, arba tiesioginė jungtis:
[0055] B yra Arg, Orn arba Lys, kur guanidino, arba atitinkamai aminogrupės, esančios šoninėje grandinėje yra nepakeistos, arba gali turėti pakaitus, tokius kaip (C-^-Cg )-alkanoilas , ~ -aroilas, (C^-C^)-heteroaroilas, (C-^-Cg )-alkilsulf onilas arba
[0056] o
[0057] sulfonilo ir heteroaroilo liekanose, kaip aprašyta a„) punkte, esant reikalui, gali būti 1, 2, 3 arba 4 vienodi arba skirtingi pakaitai;
[0058] E yra leucinas, izoleucinas, norleucinas, tret.-butilglicinas , serinas, treoninas arba cikloheksilalaninas;
[0059] A yra vandenilis, (D)- arba (L)-H-Arg, (D)- arba (L)-H-Lys arba (D)- arba (L)-H-Orn;
[0060] B yra Arg, Orn arba Lys, kur šoninės grandinės guanidino arba aminogrupėje gali būti pakaitai, tokie kaip vandenilis, (Cl-C8)-alkanoilas, (C^-C^)-aroilas, (C^-C^)-heteroaroilas,
[0061] (C^-Cg)-alkilsulfonilas arba (Cg-C^)-arilsulfonilas, kurių arilo, heteroarilo, aroilo, arilsulfonilo ir heteroaroilo liekanose, esant reikalui, gali būti 1, 2, 3 arba 4 vienodi arba skir-
[0062] tingi pakaitai, tokie kaip metilas, metoksigrupė ir halogenas;
[0063] C yra Pro-Pro-Gly, Hyp-Pro-Gly arba Pro-Hyp-Gly;
[0064] E yra Leu, Ile, Tbg arba Cha;
[0065] F yra Ser, hSer, Lys, Leu, Vai, Nle, Ile arba Thr;
[0066] K yra tiesioginė jungtis;
[0067] M"yra tiesioginė jungtis;
[0068] G yra IV formulės heterociklinės sistemos liekana, kur tin-kamiausios liekanos yra šios: piroiidin-2-karboninės rūgšties, piperidin-2-karboninės rūgšties; tetrahidroizochinolin-3-karbo-ninės rūgšties; eis- ir trans-dekahidroizochinolin-3-karboninės rūgšties; cis-endo-, cis-egzo-, trans-oktahidroindol-2-karboninės rūgšties; cis-endo-, cis-egzo, trans-oktahidrociklopenta.( b) pirol--2-karboninės rūgšties arba hidroksiprolin-2-karboninės rūgšties;
[0069] Ypatingai tinkamų I formulės peptidų pavyzdžiais gali būti: H- ( D)-Arg-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ser-(D)- Tic-Oic-Arg-OH; H-(D)-Arg-Pro-Hyp-Gly-Cha-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH;
[0070] Be to, išradimas skirtas ir I formulės peptidų gavimo būdui, kuris skiriasi tuo, kad a) fragmentas su laisva C-galine karboksilo grupe arba jes aktyvuotu dariniu veikiamas atitinkamu fragmentu su N-galine amino-grupe arba
[0071] po to iš gauto pagal a) arba b) punktus junginio, esant reikalui,
[0072] atskeliama viena arba daugiau laikinai įvestų funkcinėms grupėms apsaugoti apsauginių grupių, ir taip gauti I formulės junginiai, jeigu reikia, paverčiami į jų fiziologiškai tinkamas druskas.
[0073] Šio išradimo peptidai gaunami žinomais peptidų chemijos metodais (žr. pvz., Houben-Weyl, Methcden der Organische Chemie, 15/2 Bd.), geriausia panaudojant kietafazinę sintezę, aprašy-
[0074] tą, pavyzdžiui, B. Merrfield, J. Araer. Chem.Soc., 8_5, 2149 (1963), arba B.C. Sheppard, Int. J. Peptide and Protein Res., 21_, 118 (1983 ), arba panašiais žinomais metodais. £ >c-Aminogrupei apsaugoti naudojamos uretano apsauginės grupės, tokios kaip, pavyz-džiui, tret.-butoksikarbonilo (Boc) arba fluorenilmetiloksikarbo-nilo (Fmoc) apsauginės grupės. Jeigu reikia išvengti pašalinių reakcijų, arba specialių peptidų sintezės atveju, aminorūgščių šoninės grandinės funkcinės grupės blokuojamos papildomai, panaudojant tinkamas apsaugines grupes (žr. pvz., T.W. Greene, Protec-tive Groups in Organic Synthesis); dažniausiai naudojama: Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Asp(OBzl), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys(Amc), Cys(SBut), Glu(OBzl), Glu(OBut), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-Z), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(But), Thr(Bzl), Thr(But), Trp(Mts), Trp(CHO), Tyr(Br-Z), Tyr(Bzl) arba Tyr(But).
[0075] Kietafazinė sintezė prasideda nuo peptido terminalinio anglies atomo sąveikos su sujungta su atitinkama derva blokuotos aminorūgšties. Tokio tipo pradinės medžiagos gali būti gautos, sujungiant blokuotą aminorūgštį su modifikuota chlormetilo, oksimetilo, benzhidrilamino (BHA), metilbenzhidrilamino (MBHA) gru-pėmis polistirolo arba poliakrilamido derva, sudarant esterinę arba amidinę jungtį. Medžiagos-nešėjo vaidmenį atliekančios dervos yra parduodamos. BHA ir MBHA dervos paprastai naudojamos ta-da, kai sintezuojamas peptidas C-gale turi turėti karbamoilo gru-pę. Jeigu peptidas turi turėti antrinę amido grupę prie galinio
[0076] c anglies atomo, naudojama chlormetilo arba oksimetilo derva, o at-
[0077] skeliama atitinkamais aminais. Jeigu pavyzdžiui, gaminamas etilami-das, tai peptidą nuo dervos galima atskelti etilaminu; po to atskeliamos šoninių grandinių apsauginės grupės kitais tinkamais reagentais. Jeigu peptide turi išlikti aminorūgšties šoninės gran-dinės apsauginės tret.-butilo grupės, tai aminorūgšties cy-amino-grupės blokavimui panaudojama Fmoc grupė, ir sintezė vykdoma pagal metodiką, aprašytą, pavyzdžiui, R.C. Sheppard, J.Chem. Soc. Chem. Commun., 19 82, 537, o arginino guanidino grupė apsaugoma, protonuojant piridinio perchloratu; kitos aminorūgščių šoninės gra-ndinės funkcinės grupės blokuojamos, panaudojant benzilines grupes, kurios paskui atskeliamos katalitinio transforhidrinimo būdu (A. Felix et al., J. Org. Chem., _lj3, 4194 ( 1978 )) arba panaudojant natrį skystame amoniake (W. Roberts, J. Amer. Chem. Soc., 7_6, 6203 1954) .
[0078] Atskėlus apsauginę grupą, blokuojančią su derva sujungtos ami-norūgšties aminogrupę, tinkamu reagentu, pavyzdžiui, trifluoracto rūgštimi metileno chloride Boc apsauginės grupės atveju, arba 20 %-niu piperidino tirpalu dimetilformamide Fmoc apsauginės grupės atveju, kitos blokuotos aminorūgštys laipsniškai jungiamos reikia-ma seka. Susidariusioa tarpinės peptidinės dervos su N-blokuo-tais galais, prieš jungiant jas su sekančiais aminorūgščių dari-niais, deblokuojamos, panaudojant aukščiau minėtus reagentus.
[0079] Sujungiančiu reagentu gali būti naudojami visi įmanomi, pep-tidų sintezėje naudojami aktyvuojantys reagentai (žr.pvz., Houben-Weyl, Methoden der Organische Chemie, Bd.15/2), tarkim, acto rūgšties diimidai, tokie kaip, pavyzdžiui, N,N'-diizopropilkarbo-diimidas, .N T N'—dicikloheksilkarbodiimidas arba N-ėtil-N'-(3-di-metilaminopropil) karbodiimidas. Sujungimą galima vykdyti tiesio-
[0080] i
[0081] giai, jungiant aminorūgšties darinį, su aktyvuojančiu reagentu ir, esant reikalui, priedu, kuris slopina racemizaciją, tokiu kaip, pavyzdžiui, 1-oksibenzotriazolas (HOBt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber., 103, 708 (1970)) arba 3-oksi-4-okso-3,4-dihidrobenzo-triazinas įHOObt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber., 103 , 2054
[0082] (1970)), prie dervos, arba galima atskirai atlikti aminorūgšties darinio pirminį aktyvavimą, paverčiant jį į simetrinį anhidridą arba HOBt- arba HOObt-esterį, ir aktyvuoto darinio tirpalą tin-kamame tirpiklyje sumaišyti su peptidine derva, galinčia susijung-ti su šiuo dariniu.
[0083] Sujungimą arba aminorūgščių darinių aktyvavimą vienu iš au-kščiau minėtų aktyvuojančių reagentų galima atlikti dimetilformamide, N-metilpirolidone arba metileno chloride, arba aukščiau minėtų tirpiklių mišinyje. Paprastai naudojamas 1,5-4 kartų aktyvuoto aminorūgšties darinio perteklius. Tais atvejais, kai įvyk-sta nepilnas susijungimas, sujungimo reakcija kartojama, nedeblo-kuojant peptiainės dervos c<-aminogrupės, ko paprastai reikia, norint prijungti tolimesnę aminorūgštį.
[0084] Susijungimo reakcijos eigos sėkmingumą galima patogiai kont-roliuoti ninhidrino reakcija, kaip aprašyta E. Kaiser et. al., Anai. Biochem. , _34_, 595 (1970 ). Sintezę galima atlikti automati-zuotai, pavyzdžiui, panaudojant Applied Biosystems 430A modelio peptidų sintezatorių; šiuo atveju gali būti naudojamos arba prietaiso gamintojo pateikiamos sintezės programos, arba paties nau-dotojo sukurtos programos. Šios pastarosios naudojamos tada, kai aminorūgščių dariniai yra blokuoti Fmoc-grupėmis.
[0085] Aukščiau aprašytu būdu susintetintus peptidus galima atskelti nuo dervos reagentais, tokiais kaip, pavyzdžiui, skystas fluoro vandenilis (geriausia tinka Boc-metodu gautų peptidų atveju) arba trifluoracto rūgštis (geriausia tinka Fmoc-metodu gautų peptidų atveju). Šie reagentai ne tik atskelia peptidą nuo dervos, bet taip pat ir kitas aminorūgščių darinių šoninių grandinių apsaugines grupes. Tuo būdu, naudojant BHA ir MBHA dervas, yra gaunamas laisvos rūgšties formos peptidas. Atskeliant fluoro vandeniliu arba trifluormetansulforūgštimi, BHA ir MBHA dervų atveju gaunamas amido formos peptidas. Kiti peptidamidų gavimo būdai apra-šyti EP-A 287 882 ir EP-A 322 348. Čia peptidai atskeliami nuo dervos veikiant paprastai peptidų sintezėje naudojamomis viduti-nio stiprumo rūgštimis (pavyzdžiui, trifluoracto rūgštimi); kati-jonų surišimui pridedamos medžiagos, tokios kaip fenolis, krezo-lis, tiokrezolis, anizolas, tioanizclas, etanditiolis, dimetilsul-fiaas, etilmetilsulfiaas arba panašios, t.y. įPrasti kietafazinėje sintezėje katijonų surišėjai, tiek atskiri, tiek ir mišiniai iš dviejų arba daugiau šių pagalbinių medžiagų. Trifluoracto rūgš-tis gali būti naudojama ir praskiesta kitais tinkamais tirpikliais, kaip pavyzdžiui, metileno chloridu. Jeigu reikia, kad iš-liktų peptidų šoninių grandinių apsauginės tret.-butilo arba benzilo grupės, tai peptido, sintezuoto ant modifikuotos dervos-nešė-jo$, atskėlimas atliekamas 1 % trifluoracto rūgštimi metileno chloride, pavyzdžiui, pagal R.C. Sheppard, J. Chem. Soc. Chem. Conun. , 1982 , 587 aprašytą metodiką. Jeigu reikia, kad išliktų atskiros tret.-butilo arba benzilo grupės šoninių grandinių apsaugai, naudojama tinkama sintezės ir atskėlimo būdų kombinacija.
[0086] Peptidų su C.-galine amido grupe arba to-amino-, atitinkamai feO-guanidinalkilo,grupuote sintezei taip pat naudojama Sheppard aprašyta modifikuota derva-nešėja. Susintetintas peptidas, kurio šoninės grandinės yra pilnai blokuotos, atskeliamas nuo dervos ir po to pagal klasikinę sintezę tirpaluose veikiamas atitinkamu aminu, ^-aminoalkilaminu arba w-guanidinoalkilaminu; be to, esant reikalui, kitos funkcinės grupės gali būti blokuojamos ži-nomais būdais.
[0087] Kitas peptidų su co-aminoalkilo grupuote gavimo būdas yra aprašytas EP-A 264 802.Šio išradimo peptidai buvo sintezuoti, panaudojant kieta-fazinę sintezę pagal dvi universalias taktikas apsauginių gru-pių atžvilgiu.
[0088] Sintezė atliekama Applied Biosystems 430A modelio automatiniu peptidų sintezatoriumi, O--aminogrupės laikinai apsaugai naudojant Boc- (atitinkamai Fmoc-) apsaugines grupes.
[0089] Naudojant Boc-apsauginę grupę, sintezė atliekama pagal prietaiso gamintojo užprogramuotus sintezės ciklus.
[0090] Peptidų su laisva karboksilo grupe C-gale sintezė atliekama, naudojant funkcionalizuotą atitinkama Boc-aminorūgštimi Applied biosystems firmos gaminamą 4-(hidroksimetil)-fenilacet-amidometilpolistirolo dervą (R.B. Merrifield, J. Org. Chem., 43, 2845 (1978)). Peptidamido gavimui buvo naudota tos pačios firmos MBHA derva.
[0091] Aktyvuojančiais reagentais naudojami N ,N'-dicikloheksilkar-bodiimidas arba N,N'-diizopropilkarbodiimidas. Aktyvuojama gaunant simetrinį anhidridą, HOBt-esterį arba HOObt-esterį metileno chloride, CP^C^-DMF mišiniuose arba NMP. Sujungimui naudojama 2-4 ekvivalentai aktyvuoto aminorūgšties darinio. Tais atvejais, kai susijungimas nepilnai įvyksta, reakcija pakartojama.
[0092] Jeigu laikinai cc-aminogrupės apsaugai naudojama Fmoc-ap-sauginė grupė, sintezuojant Applied Biosystems firmos 430A modelio automatiniu peptidų sintezatoriumi naudojama savo sukurta programa. Sintezė atliekama, naudojant p-benziloksibenzilo al-koholio tipo dervą (S. Wang, J. Amer. Chem. Soc. , 9J3, 1328
[0093] (1973)), gaminamą Bachem firmos; ši derva esterinama atitinkama aminorūgštimi pagal žinomą būdą (E. Atherton ir.kt., J.Chem. Soc. Chem. Comiri. , 1981, 336). Aminorūgščių darinių aktyvavimas gaunant HOBt- arba HOObt-esterį, atliekamas tiesiogiai prie prietaiso pridedamame aminorūgščių patrone, pridedant diizopropilkarbodiimido tirpalo DMF-e į pasvertą aminorūgšties darinio ir HOBt ar-ba HOObt mišinį. Taip pat galima naudoti ir kaip atskirą medžia-gą pagamintus Fmoc-aminorūgštis-OObt-esterius, aprašytus EP-A247 573 . Fmoc apsauginė grupė atskeliama, naudojant 20 % piperidino tirpalą DMF, tiesiog reakcijos inde. Reaktingo aminorūgšties darinio naudojamas perteklius sudaro 1,5-2,5 ekvivalentus, Jeigu sujungimas įvyko nepilnai, jis kartojamas, kaip ir Boc-metode.išradime siūlomi peptidai (atskiri arba kombinacijoje) pasi-žymi antagonistiniu braaikininui poveikiu, kuris gali būti išban-dytas, naudojant įvairius modelius (žr. Handbook of Exp. Pharma-col., Vol.25, Springer Ed., 1970, p.53-55), pavyzdžiui, izoliuo-tą žiurkės gimdą, jūrų kiaulytės klubinę žarną arba jūrų kiauly-tės izoliuotą plaučių arteriją.
[0094] Išradime siūlomų peptidų išbandymui, panaudojant izoliuotą plaučių arteriją, 400-500 g svorio jūrų kiaulytės (Dunkin Hart-ley) užmušamos smūgiu į pakaušį, atveriama krūtinės ląsta ir atsargiai išimama plaučių arterija. Aplinkiniai audiniai atsargiai pašalinami, o plaučių arterija supjaustoma spiralėmis 45° kampu.
[0095] Kraujagyslių juostelės, kurių ilgis 2,5 cm ir plotis 3-4 mm, fiksuojamos 10 ml talpos organinėje vonelėje, užpildytoje Ringerio tirpalu.
[0096]
[0097] Tirpalas prapučiamas 95 % C>2 įr 5 %. CC>2 ir pašildomas iki 37 °C. pH yra 7,4; pirminė apkrova ant kraujagyslių juostelių - 1 g. Izometriniai susitraukimo pokyčiai stebimi svirtelės priedu ir HF-modemu (kelio matuoklis) (Hugo Sachs firma) ir registruojami kompensaciniu saviraščiu (BEC, Goerz Metrawalt SE 460).
[0098] Palaikius 1 valandą, kad nusistovėtų pusiausvyra, pradeda-mas bandymas. Po to, kai kraujagyslių juostelės pasiekia maksi-
[0099] — 7 v
[0100] malu jautrumą 2x10 mol/1 bradikinino atžvilgiu (bradikininas susiaurina kraujagyslių juosteles), pridedama peptidų 5x10— 8
[0101] - 1x10 ^ mol/1 dozėmis ir laikoma 10 minučių, po to vėl pridedama bradikinino ir palyginamas bradikinino poveikio sumažėjimas kontrolės atžvilgiu. Parcialinio-antagonistinio efekto nustatymui naudojamos 1x10 ^ -3
[0102] išr. j adime aprašomų~peptidų.IC-^ <• U^reikšmės, išskaičiuotos iš dozė-poveikis kreivių, duotos 1-je lentelėje.
[0103]
[0104] H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH 5,9.10
[0105] — 8 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Cha-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH 3,7.10 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Tbg-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH 6,0.10 ^ D-Arg/Hyp2, Thia5"8, D-Phe?/BK
[0106] H- ( D) -Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser- ( D ).-Phe-Thia-Arg-OH 6,4.10 ^
[0107] Terapinis išradime siūlomų peptidų panaudojimas apima vi-sokias patologines būsenas, kurias sukelia, skatina arba palaiko bradikininas ir giminingi bradikininui peptidai. Prie tokių būsenų priklauso ir traumos, kaip žaizdos, nudegimai, taip pat išbėrimai, eritemos, edemos, anginos, artritai, astma, alergi-jos, rinitai, šokas, uždegimai, žemas kraujo spaudimas, skaus-mas, niežėjimas ir spermos motorikos sutrikimai.
[0108] Todėl išradimas skirtas ir I formulės junginių panaudojimui vaistinėms medžiagoms ir farmaciniams preparatams, į kuriuos šie junginiai įeina.
[0109] Farmaciniuose preparatuose yra I formulės veikliosios medžia-gos efektyvus kiekis - vienos medžiagos arba kombinacijoje - kartu su neorganine arba organine farmacijoje naudojama msdžia-ga-nešėja.
[0110] Junginiai gali būti naudojami enteriniu būdu, parenteriniu būdu, pavyzdžiui, po oda, į raumenis, į veną, po liežuviu, ant odos, į nosį, rektaliniu būdu, į makštį, per burnos ertmę arba inhaliacijoms. Veikliosios medžiagos dozė priklauso nuo šilta-kraujo rūšies, kūno svorio, amžiaus ir vartojimo būdo.
[0111] Šio išradimo farmacinius preparatus galima gauti gerai ži-nomais būdais, kaip tirpalus, mišinius, granules arba dražė.
[0112] Gaminant oralinio vartojimo formą, arba formą, skirtą dė-ti ant gleivinės, veiklieji junginiai sumaišomi su šiam tikslui tinkamais priedais, tokiais kaip nešėjai, stabilizatoriai
[0113] arba inertiniai skiedikliai, ir įprastais būdais paverčiami į tinkamas vartojimo formas/ tokias kaip tabletės, dražė, kapsu-lės, suspensijos vandenyje, alkoholyje, aliejuje arba tirpalai vandenyje, alkoholyje arba aliejuje. Inertiniais nešėjais gali būti naudojami, pavyzdžiui, Gummi arabicum, magnezija,magnio
[0114] karbonatas, kalio fosfatas, pieno cukrus,, gliukozė, magnio ste-arilfumaratas arba krakmolas, ypatingai kukurūzų krakmolas. Pa-ruošti galima tiek sauso, tiek ir drėgno granuliavimo būdu. Alie-jaus tipo nešėjais arba tirpikliais priimtini dėmesin yra, pa-vyzdžiui, augaliniai arba gyvuliniai aliejai, tokie kaip saulė-grąžų aliejus arba žuvų taukai.
[0115] Preparatas, skirtas vietiniam vartojimui, gali būti tirpalas vandenyje arba aliejuje, losjonas, emulsija arba želė, tepalas arba riebus tepalas, arba, jeigu galima, aerozolis, o prilipi-mas gali būti pagerintas, pridedant polimero.
[0116] su įprastais šiam tikslui priedais, tokiais kaip stabilizatoriai arba inertiniai skiedikliai, ir įprastais būdais pagaminamos tinkamos vartojimui formos, tokios kaip suspensijos vandenyje, alkoholyje arba aliejuje, arba tirpalai vandenyje, alkoholyje arba aliejuje. Vandeninės kompozicijos, skirtos vartojimui į nosį, kaip priedus gali turėti ir komponentes, sudarančias chelatus, pvz. , etilenaiamin-N,N,N', N'-tetraacto rūgštį, citrinos rūgštį, vyno rūgštį arba jų druskas. Tirpalus galima įpurkšti į nosį dozuojan-čiu purkštuku arba kaip nosies lašus su padidintu klampumu, kaip gelį arba kremą į nosį.
[0117] Intraveniniam, poodiniam, intraderminiam vartojimui arba dėji-mui ant odos skirtos vaistinės formos gaunamos tirpinant, suspen-duojant arba emulguojant veikliąsias medžiagas arba jų fiziologiš-kai tinkamas druskas pageidautina su įprastomis farmacijoje pagal-binėmis medžiagomis, pavyzdžiui, medžiagomis tirpalo izotonišku-mui arba pH sureguliuoti, o taip pat tirpikliais-tarpininkais, emul-gatoriais arba kitomis pagalbinėmis medžiagomis.
[0118] Kadangi kai kurių aprašytų vaistinių medžiagų skilimo puspe-riodžiai yra trumpi, labai svarbu panaudoti injekuojamas inhibuo-jančias formas. Tokiomis vaistinėmis formomis gali būtijpanaudo jama, pavyzdžiui, kristalinės suspensijos aliejuje, mikrokapsulės, stry-peliai arba implantantai; šie pastarieji gali būti pagaminti iš suderinamų su audiniais polimerų, būtent bioskaidomų polimerų, to-kių kaip, pavyzdžiui, poilpieno ir poliglikolio rūgšties arba žmogaus albumino pagrindu pagamintų kopolimerų.
[0119] Vaistinių formų, skirtų vietiniam ir inhaliaciniam vartojimui, tirpalų koncentracijų ribos yra 0,01-5 mg/ml, o sisteminių vaistinių formų atveju - 0,01-10 mg/kg.
[0120] Naudojami aminorūgščių sutrumpinimai atitinka peptidų chemi-joje priimtą trijų raidžių kodą, aprašytą Eur. J. Biochem., 138, 9 (1984). Kiti naudojami sutrumpinimai duodami žemiau:
[0121] t
[0122] Tos - 4-raetilfenilsulfonilas
[0123] Toliau duodami pavyzdžiai paaiškina tinkamiausius išradime aprašomų peptidų kietafazinės sintezės būdus; tačiau išradimas jais neapsiriboja.
[0124] Fmoc-Arg(Mtr)-0H, Boc-(D)-Arg-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Hyp-OH, Fmoc-Pro-OObt, Frnoc-Gly-OObt, Fmoc-Phe-OObt, Fmoc-Ser(tBu)-OObt, Fmoc-(D)-Tic-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Aoc-OH, Fmoc-Thia-OH, Fmoc-Opr-OH, Fmoc-(D)-Asn-OH, Fmoc-B-Ala-OH, Fmoc-Oic-OH.
[0125] 1 pavyzdys
[0126] Peptidas sintezuojamas laipsniškai, panaudojant Applied Biosystems firmos 430A modelio peptidų sintezatorių, Fmoc-metodu, imant Novabiochem firmos gaminamą dervą p-benziloksibenzilo al-koholio pagrindu, esterintą Fmoc-Arg(Mtr)-OH (įkrova apie 0,5 mmol/g dervos). Naudojama 1 g dervos, ir sintezė atliekama pagal modifikuotą Fmoc-metodo sintezės programą.
[0127] Sintezatoriaus patronai pasveriami ir kiekvieną kartą įdeda-ma 1 mmol aminorūgšties darinio su laisva karboksilo grupe kartu su 0,95 mmol HOObt. Preliminarinis aktyvavimas atliekamas tiesiai patrone, tirpinant 4 ml DMF ir pridedant 2 ml 0,55 mol/1 diizopropilkarbodiimido tirpalo DMF-e. Kitų aminorūgščių HOObt-esteriai tirpinami 6 ml NPM ir po to visos iš anksto in situ aktyvuotos aminorūgštys sujungiamos su 20%-niu piperidino tirpalu DMF-e deblokuota derva. Pabaigus sintezę, panaudojant trifluoracto rūgštį, bei tioanizolą ir etantiolį kaip katijonų su-rišę jus, atskeliamas nuo dervos peptidas ir kartu atskeliamos apsauginės grupės nuo šoninių grandinių. Pašalinus trifluoracto rūgštį, liekana daug kartų trinama su acto rūgšties esteriu ir
[0128] (R)
[0129] centrifuguojama. Likusi liekana chromątografuojama per Sefadeks; eliuentu naudojama 10 % acto rūgštis. Frakcijos su grynu peptidu valomos ir džiovinamos iššaldant. Gaunamas norimas produktas 43% išeiga.
[0130] Kiti pavyzdžiai atliekami pagal 1 pavyzdyje aprašytą metodiką.
[0131] 2 pavyzdys
[0132] 3 pavyzdys
[0133] Produkto išeiga 35 %.
1. Nauji peptidai, kurių bendra formulė I:
2. I formulės peptidas pagal 1 p. besiskirian tis tuo, kad gautame peptideB yra Arg, Lys, Orn, 2, 4- diaminobutirilas arba L- homoarginino liekana, kur visais atvejais šoninės grandinės guanidino arba aminogrupės gali būti pakeistos A grupe, kurios reikšmės duotos išradimo apibrėžties a^) ir a2) 1- o punkto dalyse;E yra L- arba D- konfigūracijos alifatinės arba alicikliškai-alifatinės aminorūgšties liekana, kuri šoninėje grandinėje turi 1- 14 C- atomų;F yra L- arba D- konfigūracijos bazinės aminorūgšties, tokios kaip Arg arba Lys, liekana, kur šoninės grandinės guanidino grupė arba aminogrupė gali būti pakeista A, kaip aprašyta iš-radimo apibrėžties 1 p. a^) arba a^) dalyse, arba yra - NH- tCI^) - liekana, kur n = 2- 8;K yra - NH-( CH^) - CO- liekana, kur x = 2- 4, arba tiesioginė jungtis.
3. I formulės peptidas pagal 1 ir/ arba 2 p. besiskiriantis tuo, kad gautame peptideB yra Arg, Orn arba Lys, kur guanidino arba aminogrupės, esančios šoninėje grandinėje, yra nepakeistos arba gali turėti pakaitus, tokius kaip ( C^- Cg )- alkanoilas , ( C_,- C13 )- aroilas , ( C^- Cg)-heteroaroilas, ( C^- Cg)- alkilsulfonilas arba { Cg- C-^)- arilsulfonilas, kur arilo, heteroarilo, aroilo, arilsulfonilo ir heteroaroilo liekanose, kaip aprašyta apunkte, esant reikalui, gali bū-ti 1, 2, 3 arba 4 vienodi arba skirtingi pakaitai;E yra leucinas, izoleucinas, norleucinas, tret.- butilglici-l nas, serinas, treoninas arba cikloheksilalaninas;K yra tiesioginė " jungtis ir M yra tiesioginė jungtis.
4. I formulės peptidas pagal 1- 3 punktus, besiskiriantis tuo, kad gautame peptideA yra vandenilis, ( D)- arba ( L)- H- Arg, ( D)- arba ( L)- H- Lys arba ( D)- arba ( L)- H- Orn;B - yra Arg, Orn arba Lys, kur šoninės grandinės guanidino arba aminogrupėje gali būti pakaitai, tokie kaip vandenilis, ( Ci~ Cg )- alkanoilas , ( C- y- C^ ) - aroilas , ( C^- Cg)- heteroaroilas, ( Ci"- Cg ) - alkilsulf onilas arba ( cg- cj_ 2 )- arilsulf onilas , kurių arilo, heteroarilo, aroilo, arilsulfonilo ir heteroaroilo liekanose, esant reikalui, gali būti 1, 2, 3 arba 4 vienodi arba skirtingi pakaitai, tokie kaip metilas, metoksigrupė ir halogenas;C yra Pro- Pro- Gly, Hyp- Pro- Gly arba Pro- Hyp- Gly;E yra Leu, Ile, Tbg arba Cha;F yra Ser, hSer, Lys, Leu, Vai, Nle, Ile arba Thr;K ir M yra tiesioginės jungtys;G yra IV formulės heterociklinės sistemos liekana, kur tin-kamiausios liekanos yra šios: pirolidin- 2- karboninės rūgšties, piperidin- 2- karboninės rūgšties, tetrahidroizochinolin- 3- karboni-nės rūgšties, eis- ir trans- dekahidroizochinolin- 3- karboninės rūgšties, cis- endo-, cis- egzo-, trans- oktahidrociklopenta( b) pi-rol- 2- karboninės rūgšties arba hidroksiprolin- 2- karboninės rūg-šties;F' yra Arg, o I yra OH.
F' yra Arg, o I yra OH.5. I formulės peptidas pagal 1- 4 punktus, skirtas panaudoti kaip vaistinė medžiaga.
6. I formulės peptidas pagal 1- 4 punktus, skirtas panaudoti patologinių būsenų, kurias sukelia bradikininas ir bradikininui giminingas peptidas, gydymui.
7. Farmacinės kompozicijos, į kurias įeina veiklioji medžia-ga..ir, esant reikalui, farmaciškai tinkamas nešėjas, besis-kiriančios tuo, kad veikliąja medžiaga naudojami I ben-dros formulės junginiai pagal 1-4 p.