[LT] Junginiai pagal šį išradimą yra tarpiniai produktai priešuždegiminio poveikio junginiams gauti ir yra apibrėžti formule X:@@@@@@kurioje: 1,2-pozicija prisotinta arba turi dvigubą jungtį;@X1- Vandenilis, fluoras, chloras ir bromas;@X2- vandenilis, floras, chloras ir bromas;@R2- linijinė arba išsišakojusi angliavandenilių grandinė, turinti 1-10 anglies atomų, ir@R7-vandenilis arba acilo grupė, turinti linijinę arba išsišakojusią angliavandenilių grandinę, turinčią 1-10 anglies atomų.
[EN]
[0001] Šis išradimas susijęs su naujų, farmakologiškai aktyvių junginių,esančių farmaciškai aktyviais junginiais uždegiminių ligų, alergijų gydymui, skeleto raumenų ir odos susirgimų gydymui, tarpinių produktų gavimo būdu.
[0002] Yra žinoma,jog tam tikrus gliukokortikosteroidus (GKS) galima naudoti kvėpavimo takų uždegiminių, alerginių ar imuninių susirgimų vietiniam gydymui (pvz.: astmai, nosies gleivinės uždegiminiam susirgimui (rinitui), odos susirgimams (egzemai, psoriazei), taipogi žarnyno susirgimams (opiniam kolitui, Krono ligai)). Šalia tokios vietinės terapijos gliukokortikoidais, pasiekiamas klinikinis pranašumas bendros terapijos metu (pvz., naudojant gliukokortikoidų tabletes), ypač nepageidautino gliukokortikoidų poveikio ne susirgimo vietoje, atžvilgiu. Tokiam teigiamam klinikiniam pranašumui pasiekti ,pavyzdžiui, esant sunkiems kvėpavimo takų susirgimams, GKS turi pasižymėti tinkamu farmakologiniu profiliu. Jis privalo pasižymėti dideliu, jam būdingu gliukokortikoidiniu aktyvumu jo panaudojimo vietoje, tačiau tuo pat metu greitai inaktyvuotis, pavyzdžiui hidrolizės būdu organe-taikinyje arba jam patekus į bendrą kraujotaką.
[0003] Tam, kad GKS pasižymėtų priešuždegiminiu ir priešalerginiu poveikiu, būtina išankstinė sąlyga yra GKS jungimasis prie gliukokortikoidinio receptoriaus, tai steroidų sugebėjimą prisijungti jiems tinkančius receptorių ar receptorius galima panaudoti kaip tinkamą būdą GKS biologinio aktyvumo įvertinimui. Tiesioginį santykį tarp GKS su receptoriumi, bei GKS priešuždegiminį poveikį iliustruoja bandymas su žiurkėmis, stebint jų ausų patinimą.
[0004] (Kai kurių naujų, labai aktyvių 16a, 17a -acetil pakeistų gliukokortikoidų santykiai tarp cheminės struktūros, jungimosi su receptoriumi ir su biologiniu aktyvumu žr. E. Dahlberg, T. Thalen, R. Brattsand, I.A. Gustafsson, U. Johansson, K. Rolnsper and T. Saantok, Mol. Pharmacol., 25 (1984), 70).
[0005] Konkrečiau, šis išradimas susijęs su gavimu naujų tarpinių produktų, naudojamų gavimui naujų, 3-okso- androsta- 1,4-dien 17[3- karboksirūgšties esterių, pasižyminčių aukštu specifiškumu GKS receptoriams, kuriuos galima taikyti uždegiminių būklių gydymui ir sustabdymui.
[0006]
[0007] kurioje: 1, 2 pozicija prisotinta arba turi dvigubą jungtį
[0008] Xį vandenilis, fluoras, chloras ir bromas;
[0009] R2 linijinė arba išsišakojusi angliavandenilių grandinė, turinti 1-10 anglies atomų ir
[0010] R7 vandenilis arba acilo grupė, turinti linijinę arba išsišakojusią angliavandenilių grandinę, turinčią 1-10 anglies atomų
[0011]
[0012] kurioje ištisinės ir punktyrinės linijos tarp C-l ir C-2 reiškia viengubą arba dvigubą jungtj;Xj, X2 ir R7 yra kaip aprašyti aukščiau, su aldehidu pagal formulę: 0=CHR2,
[0013] Pageidautina, kad aldehidu būtų acetaldehidas, propanalis, butanalis, izobutanalis, pentanalis, 3-metilbutanalis, 2,2-dimetilpropanalis, heksanalis, heptanalis, oktanalis, nonanalis ir dodekanalis. Reakcija vykdoma, į aldehido ir rūgštinio katalizatoriaus pvz. chloro perrūgšties, p-toluensulforūgšties, druskos rūgšties tirpalą eterio , pageidautina dioksano arba halogenintų angliavandenilių, pageidautina metilchlorido arba chloroformo terpėje, pridedant steroidą.
[0014] Junginiai X taip pat gaunami , atitinkamų 16a, 17a -acetonidų XIV transacetilinimo būdu:
[0015] kur ištisinė ir punktyrinė linijos reiškia paprastą arba dvigubą jungtį tarp C-l ir C-2 ; o Xį, X2 ir R7 yra kaip aprašyti aukščiau, su aldehidu pagal formulę 0=C(H)R2, kurioje R2 yra kaip aprašytas aukščiau.
[0016] Pageidautina, kad aldehidu būtų acetaldehidas, propanalis, butanalis, izobutanalis, pentanalis, 3-metilbutanalis, 2,2-dimetilpropanalis, heksanalis, heptanalis, oktanalis, nonanalis ir dodekanalis. Reakcija vykdoma, į aldehido ir stiprios neorganinės rūgšties, kaip katalizatoriaus, pageidautina perchlorato rūgšties arba druskos rūgšties tirpalą eterio, pageidautina dioksano arba tetrahidrofurano, halogenintų angliavandenilių, pageidautina- tolueno, aciklinio angliavandenilio, pageidautina-heptano arba izooktano, terpėje, pridedant steroidą.
[0017] Šio išradimo junginiai X (XI ir XII) naudojami kaip tarpiniai produktai 16, 17-acetalpakeistos androstan-17 p karboksirūgšties pagal I formulę
[0018]
[0019] kurioje 1, 2 pozicijos, Xj, X2, R2 yra kaip aprašyti aukščiau esterių gavimui;
[0020] Rj - vandenilis, linijinė arba išsišakojusi angliavandenilių Cj - C4 grandinė,
[0021]
[0022] Y reiškia O arba S;
[0023] R4 - vandenilis, linijinė arba išsišakojusi angliavandenilių grandinė, turinti 1-10 anglies atomų arba fenilą;
[0024] R5 vandenilis arba metilas ir Rg - vandenilis, linijinės arba išsišakojusios prisotintos arba nesočios angliavandenilių grandinės, turinčios 1-10 anglies atomų, alkilo grupė pakeista mažiausiai vienu halogeno atomu heterocikline žiedine sistema, turinčia 3-10 atomų žiedinėje sistemoje, -(CH2)mCH(CH2)n (m=0, 1, 2; n=2, 3, 4, 5, 6), fenilo arba benzilo grupėmis, kurios pakeistos arba nepakeistos viena arba dideliu skaičiumi grupių : alkilo, nitro, karboksi,alkoksi, halogeno, ciano, karbalkoksi arba trifluormetilo grupe ar grupėmis, numatant, kad jeigu R2 - vandenilis, tai Rj - metilas.
[0025] Atskirus stereoizomerinius komponentus, esančius steroido pagal aukščiau nurodytą formulę (I) mišinyje , galima paaiškinti sekančiai:
[0026]
[0027] Diastereoizomerai, panašūs j II, III, VI, VII, VIII, ir IX, skiriasi tik vieno iš skirtingų asimetrinių anglies atomų konfigūracija. Tokius diasteroizomerus vadiname epimerais.
[0028] Alkilas aukščiau pateiktuose pavyzdžiuose reiškia alkilą su linijine ar išsišakojusia angliavandenilių grandine, turinčią 1-5, bet pageidautina 1-4 anglies atomus.
[0029] Alkoksi aukščiau pateiktame apibūdinime reiškia -O-alkilo grupę, kur alkilo pusė turi aukščiau aprašytą reikšmę.
[0030] Halogenas aukščiau aprašytame apibūdinime reiškia pageidautina chloro, bromo arba fluoro atomą.
[0031] Karbalkoksi aukščiau aprašytame apibūdinime reiškia -COO-alkilo grupę, kur alkilo pusė apibrėžta kaip aprašyta aukščiau.
[0032] Heterociklinio žiedo sistema reiškia žiedinę sistemą, kur heteroatomais yra azotas, deguonis arba siera.
[0033] Pageidautinos sistemos: pirilas, piridilas, pirimidilas, pirazinilas, furilas, piranilas, benzofuranilas, indanilas ir tienilas.
[0034] 1) l'-Etoksikarboniloksietil 6 a, 9 a-difluor-lip -oksi- 16a, 17a- [(1-metil-etiliden) bis (oksi)]-androsta-l,4 -dien -3 -on- 17(3 -karboksilatas, A+B epimerų ir B epimero mišinys. 2) l'-Izopropoksikarboniloksietil 9 a-fluor-lip -oksi- 16a, 17a- [(1-metil-etiliden)bis (oksi)]-androsta-l,4 -dien -3 -on- 17p -karboksilatas, B epimeras. 3) l'-Propoksikarboniloksietil 6 a, 9 a-difluor-lip -oksi- 16a, 17a- [(1-metil-etiliden)bis (oksi)]-androsta-l,4 -dien -3 -on- 17(3 -karboksilatas, B epimeras. 4) l'-Izopropoksikarboniloksietil 6 a, 9 a-difuor-lip -oksi- 16a, 17a- [(1-metil-etiliden)bis (oksi)]-androsta-l,4 -dien -3 -on- 17p -karboksilatas, A+B epimerų ir B epimero mišinys. 5) l'-Acetoksietil (20R)- 9 a-fluor-llp -oksi- 16a, 17a-propilmetilendioksiandrosta-1,4 -dien -3 -on- 17p -karboksilatas, B epimeras. 6) l'-Etoksikarboniloksietil (22R)- 9 a-fluor-lip -oksi- 16a, 17a-propilmetilendioksiandrosta-1,4 -dien -3 -on- 17p -karboksilatas, B epimeras. 7) l'-Izopropoksikarbonileksietil (20R)- 9 a-fluor-lip -oksi- 16a, 17a-propilmetilendioksiandrosta-1,4 -dien -3 -on- 17p -karboksilatas, B epimeras. 8) l'-Etoksikarbonil oksietil (20R)- 6 a, 9 a-difluor-lip -oksi- 16a, 17a-propilmetilendioksiandrosta-1,4 -dien -3 -on- 17p -karboksilatas, A+B epimerų ir B epimero mišinys.
[0035] Junginiai pagal formulę I gaunami, oksiduojant junginius, turinčius formules X (XI ir XII) iki atitinkamų 17p- karboksirūgščių:
[0036] kur vientisa arba punktyrinė linija reiškia viengubą arba dvigubą jungtį,
[0037] Xj, X2 , Rj ir R-2 turi aukščiau minėtas reikšmes, o Ry yra vandenilis arba acilo grupė su 1-10 anglies atomų, išdėstytų linijine ar šakota grandine.
[0038] Po to 17p-karboksirūgštys dalyvauja esterio susidarymo reakcijoje, kuomet susidaro junginiai, turintys formules I-IX, kur - Xj, X2 , Rj ir R3 turi aukščiau minėtas reikšmes.
[0039] Metodui, kurį taikant, junginiai pagal formulę X (XI arba XII) virsta atitinkamomis 17p-karboksirūgštimis, naudojamas tinkamas turinčio deguonį angliavandenilio tirpiklis, toks kaip žemesnysis alkanolis, metanolis ir etanolis. Pageidautini metanolis ir etanolis, ypač pirmasis.Reaguojantis mišinys pasiekia silpnai šarminę terpę, pridėjus tinkamą silpną neorganinę bazę, tokią kaip šarminio metalo karbonatas, pvz. Na, Li arba K karbonatas. Pageidautinas pastarasis. Junginio pagal formulę X, XI, arba XII pavertimas iki 17 p karboksirūgšties pagal formulę I, II arba III (R3=H) vyksta 20 - 25°C aplinkos temperatūroje.
[0040] Reakcijai vykti reikalingas deguonis. Deguonį galima tiekti barbatuojant, oro arba deguonies srovę nukreipiant į reaguojantį mišinį.
[0041] Junginių pagal formulę X (XI arba XII) 17p- šoninės grandinės oksiduojantį susidarymą iki 17p-karboksirūgščių įmanoma atlikti ir su perjodato rūgštimi, Na hipobromatu arba Na bismutatu. Reakcija atliekama vandens ir tinkamo deguonį turinčio angliavandenilio tirpiklio, tokio kaip eteris, mišinyje.Pageidautini dioksanas ir tetrahidrofuranas, ypač pirmasis.
[0042] Gautas junginių pagal formulę I, II ir III (R3=H) 17p-karboksirūgštis reaguojant įprastu būdu, galima paversti esteriais, tokiu būdu I formulėje atsiras 17p-karboksilo esteriai. Pvz. 17p-karboksirūgštis gali reaguoti su atitinkamu alkoholiu ir karbodiimidu, pvz. dicikloheksilkarbodiimidu, dalyvaujant tinkamam tirpikliui, tokiam kaip dietilo esteris, tetrahidrofuranas, metilenchloridas arba piridinas 25-100°C temperatūroje. Galimo varianto atveju 170- karboksirūgšties druska ,sudaryta šarminio metalo, pvz., Li, Na arba K, arba keturvalenčio amonio junginio druska, pvz. trietil- arba tributilamino arba tetrabutilamonio, gali reaguoti su tinkama alkilinančia medžiaga, pvz. aciloksialkilhalogenidu, arba halogenalkilo alkilkarbonatu, geriau polinio tirpiklio, tokio kaip acetonas, metiletilketonas arba dimetilformamidas, dimetilsulfoksidas, metilenchloridas arba chloroformas, aplinkoje, 25-100°C temperatūros ribose. Reakcija taip pat gali vykti, dalyvaujant Krauno (Crown) eteriui.
[0043] Po išskyrimo susidariusieji neišgryninti steroidinio esterio dariniai gryninami chromatografijos bu- du, esant tinkamai medžiagai, pvz. "Sephadex (S) LH" tipo "susiūtiems" skersinėmis jungtimis dekstrano geliams, praplovimui iš adsorbento naudojant tinkamus tirpiklius. Pavyzdžiais galėtų būti halogeninti angliavandeniliai, eteriai, esteriai- tokie kaip etilacetatas arba acetonitrilas.
[0044] Atskiri epimerai, susidarantys 16a, 17a- oksi grupių acetolizės būdu arba susidarant 170- karboksirūgščių esteriams, pasižymi praktiškai identiškomis tirpumo charakteristikomis. Iš to seka, jog darosi neįmanoma juos išskirti ir izoliuoti iš epimerinio mišinio, naudojant įprastinius atskyrimo būdus, pvz. frakcinę kristalizaciją. Individualių epimerų, išskirtų iš stereoizomerinių mišinių, atitinkančių aukščiau paaiškintas I, IV ir V formules, gavimui, mišinys išskaidomas chromatografijos kolonėle. Tokiu būdu išskiriami II, III, VI, VII, VIII ir IX epimerai - skirtingo judrumo stacionarioje fazėje dėka. Chromatografija gali vykti "Sephadex LH" tipo "susiūtuose" skersinėmis jungtimis dekstrano geliuose, pvz. "Sephadex LH -20", išplovimui iš adsorbento kartu naudojant tinkamą organinį tirpiklį. "Sephadex LH-20" gamina akcinė bendrovė "Pharmacia Fine Chemicals", esanti Upsaloje, Švedijoje. Tai karoliukų formos oksipropilintas dekstrano gelis, kuriame dekstrano grandinės "susiūtos" tarpusavyje, sudarydamos karkaso formos trimatę išsišakojusią polisacharidinę sistemą.
[0045] Išplovimo iš adsorbento priemone tarnauja halogeninti angliavandeniliai, pvz. chloroformas arba heptano-chloroformo- etanolio mišinys santykiu 0-50:50-100:10-1, kuris yra sėkmingai naudojamas, labiausiai pageidautina santykiu 20:20:1.
[0046] Junginius pagal formulę I galima naudoti kaip gydomąją priemonę įvairių lokalizacijų vietiniam gydymui, priklausomai nuo uždegimo vietos. Vietinio panaudojimo pavyzdžiais gali būti inhaliacijos kvėpavimo takams, jvedimas per odą, ir parenteralinis įvedimas, aplenkiant virškinamąjį traktą.Svarbia tiksline priemone receptūros sudarymui yra aktyviojo steroidinio ingrediento optimalaus biologinio įsisavinimo pasiekimas. Receptūrose, kurios naudojamos įvedimui per odą, tai sėkmingai pasiekiama, aukštu termodinaminiu aktyvumu pasižymintį steroidą ištirpinant indiferentinėje vaistui priimančioje terpėje. Šitai pasiekiama, naudojant tinkamus tirpiklius, tame tarpe tinkamus glikolius, tokius kaip propilenglikolį, 1,3- butandiolį-vieną arba su vandeniu.
[0047] Steroidą taip pat galima arba pilnai arba dalinai tirpinti lipoidinėje fazėje, naudojant paviršiaus aktyvią medžiagą, padedančią tirpinti arba disperguoti. Kompozicijų, skirtų įvedimui per odą, sudėtyje gali būti tepalas, emulsija "aliejus vandenyje", emulsija "vanduo aliejuje" arba losjonas. Sistemos, kurioje yra ištirpintas aktyvus komponentas, emulsinėse inertinėse terpėse fazė gali būti paruošta kaip dispersinė arba vienalytė. Aukščiau minėtose kompozicijose steroidas taip pat gali dalyvauti mikrosusmulkintos kietos medžiagos pavidalu.
[0048] Suslėgti steroidų aerozoliai yra skirti burnos ertmės ir nosies inhaliacijoms. Aerozolinė sistema sudaroma tokiu būdu, kad vienkartinėje dozėje būtų 10 - 1000 jig, pageidautina 20 - 250 ^g aktyvaus steroido. Gydymo tikslu aktyviausieji steroidai įvedami mažiausiomis dozėmis. Mikrosusmulkintas steroidas sudarytas iš dalelių, iš esmės mažesnių nei 5 jam, suspenduotų mišinyje medžiagos, skirtos aerozolio su padidintu slėgiu sudarymui, naudojant disperguojančią medžiagą, tokią kaip sorbitano trioleatas, oleino rūgštis, lecitinas arba dioktilsulfogintaro rūgšties natrio druska.
[0049] Išradimas papildomai paaiškinamas sekančiais neapribojančiais pavyzdžiais. Pavyzdžiuose, atliekant preparatyvinės chromatografijos bandymus, naudojamas srauto judėjimo turinis greitis 2.5 ml/cm 2 x vai 1. Visuose pavyzdžiuose molekuliniai svoriai nustatomi elektroninės smūginės masių spektrometrųos būdu. Lydymosi taškai išmatuoti "Leitz" fiemos (Wetzlar, VFR) mikroskope su apšildomu stulpeliu. Visi ASSC (Aukšto Slėgio Skysčių Chromatografijos) duomenys gauti "Waters ^ Bondapak" Clg (vidinis diametras 300 x 3.9 mm) kolonėle, esant srauto tūriniam greičiui 1.0 ml/min ir kaip judriai fazei dalyvaujant etanolio mišiniui su vandeniu, santykiu nuo 50:50 iki 60:40, nesant ypatingų nurodymų.
[0050] Šiame pavyzdyje išdėstytas (22RS)-, (22R)- ir (22S)- 11(3, 16a, 17a, 21-tetraoksipregna-1,4- dien- 3, 20- dion- 16a, 17a- acetalių gavimo būdas.
[0051] (22RS)-, (22R)- ir (22S)- 16a, 17a-butilidendioksi- 6a, 9a- difluor-lip, 21-dioksipregna-1,4- dien- 3, 20- diono gavimas.
[0052] A. Į 1.0 g 6a, 9a- difluor-ll(3,16a, 17a, 21-tetraoksipregna -1,4- dien- 3, 20-diono suspensijos, 500.0 -se ml metilenchlorido pridėta 0.32 ml šviežiai distiliuoto n-butanolio ir 2.0 ml 72% perchlorato rūgšties. Reaguojantis mišinys maišytas kambario temperatūroje 24 vai. Reaguojantis mišinys praplautas 10% vandeniniu kalio karbonato tirpalu ir vandeniu, išdžiovintas virš natrio sulfato ir išgarintas. Likutis ištirpintas etilacetate ir nusodintas petroleteriu. Liko 883 mg (22RS)- 16a, 17a-butilidendioksi- 6a, 9a- difluor-11(3, 21-dioksipregna- 1,4- dien- 3, 20- diono.ASSC analize nustatytas 99% grynumas ir 22S- ir 22R- epimerų santykis 16:84. Molekulinis svoris : 466.
[0053] (Išskaičiuota 466.5) (22RS) epimerų mišinys chromatografuotas "Sephadex LH-20" ( 76x 6.3 cm) kolonėlėje, panaudojus kaip judrią fazę heptaną: chloroformą: etanolį santykiu 20: 20: 1. 12315- 13425 ml (A) ir 13740-15690 ml (B) frakcijos surinktos , išgarintos, liekana ištirpinta metilenchloride ir nusodinta petroleteriu. Iš (A) frakcijos gauta 62 mg (22S)- ir iš (B)-frakcijos 687 mg (22R)- 16a, 17a-butilidendioksi-6a, 9a-difluor-lip, 21-dioksipregna-l,4-dien-3,20-diono. (22S)- epimeras : molekulinis svoris 466 (išskaičiuota 466,5), lyd. temperatūra 196-200 0 C. (22R)-epimeras: molekulinis svoris 466 (išskaičiuota 466,5), lyd. temperatūra 169-172 0 C.
[0054] B.Į 1,0 g 6a, 9a-difluor-lip, 21-dioksi-16a,17a-[(l-metiletiliden) bis(oksi)] pregna-l,4-dien-3,20-diono tirpalo 500,0 ml metilenchlorido pridėta 0,30 ml šviežiai distiliuoto n- butanolio ir 2,0 ml 72% perchlorato rūgšties. Reaguojantis mišinys maišytas 33°C temperatūroje 24 vai. Ekstrahuotas vandeniniu kalio karbonato tirpalu ir vandeniu, išdžiovintas virš natrio sulfato ir išgarintas. Liekana ištirpinta metilenchloride ir nusodinta petroleteriu. Išeiga: 848 mg (22RS)-16a,17a-butilidendioksi-6a, 9a-difluor-lip,dioksipregna-l,4-dien-3,20-diono. ASSC analize nustatytas 93% grynumas, 22S- ir 22R- epimerų santykis 12/88.
[0055] B 1. Į 4,0 g 6a,9a-difluor-lip,21-dioksi-16a,17a-[(l-metiletiliden) bis(oksi)] pregna-l,4-dien-3,20-diono suspensijos 100,0 ml heptano pridėta 1,2 ml šviežiai distiliuoto n-butanolio ir 3,8 ml 72 % perchlorato rūgšties. Reaguojantis mišinys intensyviai maišytas kambario temperatūroje 5 vai, ekstrahuotas vandeniniu kalio karbonatu ir vandeniu, išdžiovintas virš natrio sulfato ir išgarintas. Išeiga : 4,0 g (22RS)-16a,17a-butilidendioksi-6a, 9a-difluor-lip,21--dioksipregna-l,4-dien-3,20-diono.ASSC analize nustatytas 98,5 % grynumas ir epimerų 22S- ir 22R- santykis 3/97. Po 2 perkristalinimų iš chloroformo su petroleteriu gauta 3,1 g 22R- epimero, kurio sudėtyje buvo vos 1,1 % 22S- epimero ir 1,3 % kitų teršalų . C. Panašiu būdu, pagal procedūrą, išdėstytą Pavyzdyje, 6a,9a-difluor-ll(3, 16a, 17a, 21-tetraoksipregna- 1,4- dien- 3,20-dioną pakeitus 11 p, 16a, 17a, 21-tetraoksipregna- 1,4- dien- 3,20-dionu, gautas 9a-fluor - ir 6a-fluor -lip, 16a, 17a, 21-tetraoksipregna- 1,4- dien- 3,20-dionas arba atitinkami 16a, 17a- acetonidai nefluorintų ir fluorintų nesimetrinių (22RS)- (22R)- ir (22S)-lip, 16a, 17a, 21-tetraoksipregna- 1,4- dien- 3,20-dion 16a, 17a-acetaliai iš acetaldehido, propanalio, butanalio, izobutanalio, pentanalio, 3-metilbutanalio, heksanalio, 2,2- dimetilpropanalio, heptanalio, oktanalio, nonanalio ir dodekanalio.
[0056] A. Prednacinolon 16a, 17a-acetonidas (250 mg; 0.6mmol) ištirpintas 75.0 ml metilenchlorido. Pridėta n-butanolio (130 mg; 1.8 mmol) ir 70% perchlorato rūgšties (0.025 ml). Tirpalas maišytas 15 vai, esant 33°C temperatūrai. Geltonas tirpalas praplautas 2 x 10.0 ml 10% kalio karbonato tirpalu ir 4 x 10.0 ml vandens, išdžiovintas ir išgarintas. Išeiga: 257 mg (97.7%). ASSC analize nustatytas 91.1% grynumas. Nesureagavęs acetonidas sudarė 7.4 % teršalų. Epimerų santykis 14.6/85.4.
[0057] B. Triamcinolon 16a, 17a-acetonidas (0.5 g; l.lmmol) ištirpintas 150.0 ml metilenchlorido. Pridėta n-butanolio (260 mg; 3.6 mmol) ir 70% perchlorato rūgšties (0.22 ml). Tirpalas maišytas 16 vai., esant 33°C temperatūrai. Į dalijamąjį piltuvą perneštas metilenchloridas. Kolba, kurioje vyko reakcija, keletą kartų praplauta atitinkamai 10.0 ml kalio karbonatu ir metilenchloridu. Po to tirpalas praplautas 2 x 10.0 ml 10% K2CC>3 ir 4 x 10.0 ml vandens, išdžiovintas ir išgarintas. Išeiga: 438 mg (84.9% ). ASSC analize nustatytas 80.2% grynumas. Epimerų santykis 19/81. C. Fluocinolon 16a, 17a-acetonidas (0.5 g; 1 mmol) ištirpintas 150.0 ml metilenchlorido. Pridėta n-butanalio (260 mg; 3.6 mmol) ir 70% perchlorato rūgšties (0.22 ml). Tirpalas maišytas 24 vai., esant 33°C temperatūrai. Metilenchlorido fazė perkelta j dalijamąjį piltuvą. Kolba, kurioje vyko reakcija, keletą kartų praplauta atitinkamai 15.0 ml 10% kalio karbonatu ir metilenchloridu. Po to tirpalas praplautas 2 x 15.0 ml 10% K2C03 ir 4 x 15.0 ml vandens, išdžiovintas ir išgarintas. Išeiga: 513 mg (100% ). ASSC analize nustatytas 97.4% grynumas. Epimerų santykis 8.6/91.4.
[0058] Šiame pavyzdyje išdėstomas lip-oksi-16a,17a-[(l-metiletiliden)bis(oksi)] -ir (20RS) ,(20R)- ir (20S)-lip~oksi- 16a, 17a-alkilmetilendioksinandrosta-1,4-dien- 3 on-17(3- karboksirūgšties ir 4- oksi-3-on- 17(3 karboksirūgšties gavimo būdas.
[0059] 6a,9a-difluor-ll(3-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden)bis(oksi)]androsta- 1,4-dien- 3 on-17(5- karboksirūgšties gavimas.
[0060] A. Į 1,99 g fluocinolon 16a,17a-acetonido tirpalą 120,0 ml metanolio pridėta 40,0 ml 20 % vandeninio kalio karbonato tirpalo. Šis tirpalas barbatuotas oro srove maždaug 20 vai., maišant kambario temperatūroje. Metanolis išgarintas ir vėl j likutį pridėta 200.0 ml vandens. Tirpalas ekstrahuotas metilenchloridu. Vandens fazė parūgštinta praskiesta druskos rūgštimi. Susidariusios nuosėdos surinktos filtravimo būdu ir išdžiovintos. Gauta 1.34 g 6a,9a-difluor-lip-oksi
[0061] -16a,17a-[(l-metiletiliden)bis(oksi)]androsta- 1,4- dien- 3 on-17p-karboksirūgšties, lyd. t.264-268°C, molekulinis svoris 438. ASSC analize
[0062] nustatytas 94.0% grynumas. Vandens fazė ekstrahuota etilacetatu. Išdžiovinus, tirpiklis išgarintas, o tai papildomai davė 0.26 g rūgšties. Grynumas 93. 1%.
[0063] B. Į 5.0 g fluocinolon 16a,17a-acetonido tirpalą 55.0 ml dioksano pridėta perjodato rūgšties (15.1 g) 16.5 ml vandens. Reaguojantis mišinys maišytas 20 vai. kambario temperatūroje, neutralizuotas prisotintu vandeniniu natrio bikarbonato tirpalu ir išgarintas. Liekana ištirpinta 200.0 ml metilenchlorido ir praplauta 8 x 100.0 ml 10% K karbonato. Vandens fazė parūgštinta koncentruota druskos rūgštimi ir ekstrahuota 6 x 100.0 ml etilacetato. Išdžiovinus, tirpiklis išgarintas. Liekana ištirpinta 400.0 ml etilacetato ir nusodinta petroleteriu. Gauta: 3.96 g 6a,9a-difluor-ll(3-oksi-16a,17a-[(l-metiletiliden)bis(oksi)]androsta-l,4-dien-3on-17(3- karboksirūgšties.ASSC analize nustatytas 99.5% grynumas. C. Analogišku būdu, pagal procedūrą, aprašytą Pavyzdyje, fluocinolon 16a,17a-acetonidą pakeičiant lip, 16a, 17a, 21 -tetraoksipregna-1,4- dien-3,20 dionu; 6a-fluor-llp, 16a, 17a, 21 -tetraoksipregna-1,4- dien- 3,20 dionu, gaunamos triamcinolon 16a,17a-acetonid lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis(oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgštys. Pakeičiant 16a,17a-acetonido grupę į 16a,17a-acetalius, tarp 16a-oksiprednizolono, 6a-fluor-16a-oksiprednizolono, triamcinolono ir fluocinolono ir acetaldehido, propanalio, butanalio, izobutanalio, pentanalio, 3-metilbutanalio; 2,2-dimetilpropanalio, heksanalio, heptanalio, oktanalio, nonanalio ir dodekanalio gaunami jų 21- esteriai ir (20RS)-(20R)- ir (20S)-llp-oksi- 16a, 17a-alkilmetilendioksinandrosta- 1,4- dien- ir 4-en- 3 on-17p-karboksirūgštys.
[0064] 1'- etoksikarboniloksietil 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p- karboksilatas.
[0065] A. 6a,9a-difluor-ll(3-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgštis (600 mg) ir kalio bikarbonatas (684 mg) ištirpinti 45.0 ml dimetilformamido. Pridėta 2 ml 1- brometilo etilo karbonato ir reaguojantis mišinys maišytas per naktį kambario temperatūroje. Pridėta vandens (200.0 ml), ir mišinys ekstrahuotas metilenchloridu. Sudėtiniai ekstraktai praplauti 5 % vandeniniu Na bikarbonatu ir vandeniu. Liekana išgryninta "Sephadex LH- 20" chromatografijos kolonėle (72 x 6.3 cm), kaip judrią fazę panaudojus chloroformą. Frakcija 1515-2250 ml surinkta ir išgarinta. Galutinė išeiga 480 mg 1'- etoksikarboniloksietil 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17(3-karboksilato. ASSC analize nustatytas 98.1% grynumas, o epimerų A/B santykis 48/ 52. Lyd. t.: 218-227°C. [a]25D = +63.2° (c = 0.214, CH2C12). Molekulinis svoris 554.
[0066] 1'- etoksikarboniloksietil 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17p- karboksilatas (480 mg) chromatografuotas "Sephadex LH- 20" kolonėle (76 x 6.3 cm), kaip judrią fazę panaudojus heptano: chloroformo: etanolio mišinį santykiu 20: 20: 1. Frakcija 2325-2715 ml surinkta, išgarinta, o liekana ištirpinta metilenchloride ir nusodinta petroleteriu. Gauta 200 mg (A) junginio, kurio grynumas 97.3%
[0067] (nustatytas ASSC analize). Lyd. t. 246-250 °C [a]25D — +100.5° (c = 0.214, CH2C12). Molekulinis svoris 554.
[0068] Frakcijos 4140-5100 ml išeiga buvo 250 mg (B) junginio, kurio grynumas 99.0%. Lyd. t. 250-255 °C [a]25D = +28.5° (c = 0.246, CH2C12). Molekulinis svoris 554. Esterinės grupės metino signalas 0.13 m.d. pasistūmėjo į silpnesnio lauko pusę ^-BMR spektre, B lyginant su A, tuo tarpu likusios spektrų dalys beveik identiškos. Signalai A ir B masių spektruose yra identiški, išskyrus intensyvumą. Šie spektroskopiniai skirtumai ir panašumai rodo, kad dėka chiralinio centro, esančio esterinėje grupėje, A ir B yra epimerai.
[0069] B. 6a,9a-difluor-ll(3-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgštis (200 mg) ištirpinta 25.0 ml dimetilformamido. Pridėta 1- chloretilo etilo karbonato (100 mg), kalio bikarbonato (70 mg) ir 18- kraun (crown)-6- eterio. Reaguojantis mišinys maišytas 80°C temperatūroje 3 vai., atšaldytas, pridėjus 150.0 ml vandens, ekstrahuotas metilenchloridu, išdžiovintas ir išgarintas. Negrynas produktas išgrynintas tuo pat būdu, kaip A procedūroje. Liko 207 mg 1'-etoksikarboniloksietil 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17(3- karboksilato, grynumas (ASSC analize) buvo 98.4% , ir epimerų A/B santykis 54/46. C. 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgštis (200 mg) ir 1,5- diazabiciklo [5.4.0] undekanas- 5(140 mg) suspenduoti 25.0 ml benzeno ir šildyti su grįžtamu šaldytuvu. Pridėta 1- brometilo etilo karbonato (175 mg) tirpalo 5.0 ml benzeno ir mišinys šildytas 2.5 vai. Atšaldžius, pridėta 50.0 ml metilenchlorido, tirpalas praplautas vandeniu, išdžiovintas ir išgarintas. Negrynas produktas išgrynintas tuo pat būdu, kaip A procedūroje. Išeiga- 207 mg 1'- etoksikarboniloksietil 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17p- karboksilato, grynumas (ASSC analize) buvo 96.4% , ir epimerų A/B santykis 44/56. D. Į 6a, 9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgšties (100 mg) tirpalą 25.0 ml acetono pridėta 175 mg a-bromdietilkarbonato ir 45 mg bevandenio kalio karbonato. Mišinys šildytas 6 vai. su grįžtamu šaldytuvu. Atšaldytas reaguojantis mišinys išpiltas į 150.0 ml vandens ir ekstrahuotas metilenchloridu. Ekstraktas praplautas vandeniu, išdžiovintas virš natrio sulfato ir išgarintas. Išeiga 65 mg kieto 1'-etoksikarboniloksietil 6a,9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17p- karboksilato. Grynumas, nustatytas ASSC analize, sudarė 97.6% ir epimerų A/B santykis 49/51.
[0070] E. Į 3.0 ml 1M Na hidroksido pridėta 6a,9a-difluor-lip-oksi -16ct,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgšties (500 mg) ir rūgštaus tetrabutilamonio sulfato (577 mg). Taip pat pridėta 435 mg 1-brometilo karbonato tirpalo 50 ml metilenchlorido. Mišinys šildytas su grįžtamu šaldytuvu. Išsiskyrė 2 sluoksniai. Organinis sluoksnis praplautas 2 x 10 ml vandens, išdžiovintas ir išgarintas. Negrynas produktas išgrynintas "Sephadex LH- 20" chromatografijos kolonėlėje (72 x 6.3 cm), kaip judrią fazę panaudojus chloroformą. Surinkta 1545-1950 ml frakcija išgarinta, o liekana nusodinta metilenchlorido-petroleterio mišiniu. Galutinė išeiga 341 mg 1'- etoksikarboniloksietil 6a, 9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3 on-17p- karboksilato. ASSC analize nustatytas 99.2% grynumas, o epimerų A/B santykis 56/44.
[0071] F. Į 5.0 ml prisotinto vandeninio NaHC03 tirpalo pridėta 6a, 9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p-karboksirūgšties (200 mg) ir trikaprilmetilamonio chlorido (200 mg). Pridėta 100 mg 1-brometilkarbonato 10.0 ml metilenchlorido. Mišinys maišytas 45°C temperatūroje 20 vai., praskiestas 10.0 ml metilenchlorido, išskirtas ir išgrynintas E procedūroje aprašytu būdu. Išeiga 254 mg 1'-etoksikarboniloksietil 6a, 9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3- on-17p- karboksilato. Grynumas (ASSC): 97.4% . Epimerų A/B santykis 60/40.
[0072] G. 6a, 9a-difluor-llp-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3 on-17p- karboksirūgštis (200 mg), 1-brometilkarbonatas (135 mg) ir trietilaminas (275 mg) ištirpinti 20.0 ml dimetilformamido. Mišinys maišytas 80°C temperatūroje 3 vai., praskiestas 200.0 ml metilenchlorido, praplautas vandeniu, išdžiovintas ir išgarintas. Negrynas produktas išgrynintas A procedūroje aprašytu būdu. Gauta: 69 mg 1'- etoksikarboniloksietil 6a, 9a-difluor-lip-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4- dien- 3-on-17p- karboksilato. Grynumas (ASSC): 97.8% ir epimerų A/B santykis 48/52.
[0073] l'-Acetoksietil-6a, 9a-difluor-llp-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta-1,4- dien- 3- on-17p- karboksilatas.
[0074] 6a, 9a-difluor-ll(3-oksi -16a,17a-[(l-metiletiliden) bis (oksi)] androsta- 1,4-dien- 3- on-17p- karboksirūgštis (500 mg) ir kalio bikarbonatas (575 mg) ištirpinti 40.0 ml dimetilformamido. Pridėta 1-chloretilacetato (1.0 ml), ir reaguojantis mišinys maišytas kambario temperatūroje 40 vai. Reaguojantis mišinys išpiltas į 50.0 ml vandens ir ekstrahuotas metilenchloridu. Ekstraktas praplautas vandeniniu natrio bikarbonatu ir vandeniu, išdžiovintas ir išgarintas. Liekana chromatografuota "Sephadex LH- 20" chromatografijos kolonėlėje (72 x 6.3 cm), kaip judrią fazę panaudojus chloroformą. Frakcijos 1755-2025 ir 2026-2325 ml surinktos ir išgarintos.
[0075] Kietas frakcijos 1755-2025 ml produktas, toliau išgrynintas chromatografijos būdu, "Sephadex LH- 20" kolonėlėje (76 x 6.3 cm vidinis diametras), kaip judrią fazę panaudojus heptano: chloroformo: etanolio mišinį santykiu 20: 20: 1. Frakcija 2505-2880 ml surinkta ir išgarinta. Liekana ištirpinta metilenchloride ir nusodinta petroleteriu. Gauta 167 mg kieto produkto (A).
[0076] ASSC analize nustatytas 99.1% grynumas. Lyd. t. 238-259°C. [oc]25D = +94°
[0077] Kietas, aukščiau minėtos frakcijos 2026-2325 ml produktas papildomai išgrynintas chromatografijos būdu, nurodytu aukščiau. Frakcija 5100-5670 ml surinkta ir išgarinta. Liekana ištirpinta metilenchloride ir nusodinta petroleteriu. Gauta 165 mg kieto (B) produkto. ASSC analize nustatytas 99.4% grynumas. Lyd. t. 261-265°C. [a]25D = 34° (c = 0.262, CH2C12). Molekulinis svoris 524.
[0078] H-BMR A ir B spektrai yra beveik tapatūs, išskyrus esterinės grupės metino kvartetą, kuris, palyginus su A junginiu, B junginyje yra 0.16 m.d. pastumtas j silpnesnio lauko sritį. A ir B dispergavimo charakteristikos elektronų veikimo masių spektre yra identiškos, išskyrus masių pikų intensyvumus. Tokios A ir B spektroskopinės charakteristikos parodo, kad dėl esterinėje grupėje esančio chiralinio centro abu jie yra epimerai.
[0079] Medžiagos, nurodytos toliau pateiktose 1-3 lentelėse, paruoštos, išskirtos ir išgrynintos tais pačiais būdais, kurie aprašyti 4 ir 5 pavyzdžiuose.
[0080]
[0081] Sekantys neapribojantys pavyzdžiai paaiškina receptūras, naudojamas įvairioms vietinėms vaisto įvedimo formoms. Aktyvaus steroido kiekis receptūrose, skirtose poodiniam įvedimui, paprastai sudaro 0.001-0.2% (pagal svorį svoriui), pageidautina 0.01-0.1% (pagal svorį svoriui).
[0082]
[0083] Nauju androstan- 17 13- karboksirūgšties esteriu preparatu sąveika su gliukokortikoidiniais receptoriais
[0084] Visi steroidai pagal formulę I yra fiziologiškai aktyvūs junginiai. Nauji androstan-17 P-karboksirūgšties esterių preparatai gliukokortikoidinių receptorių atžvilgiu vartoti kaip modelis jų priešuždegiminio poveikio nustatymui. Jų receptoriniai sugebėjimai lygintini su budezonid ([22R,S]- 16a,17a-butilidendioksi-lip, 21 dioksipregna-1,4-dien- 3,20-dionu, labai aktyviu gliukokortikoidu, pasižyminčiu tiek vietiniu, tiek bendru poveikiu organizmui (Thalen and Brattsand, Arzheim-Forsch. 29, 1687-90
[0085] (1979)).
[0086] Visiems tyrimams naudoti "Sprague-Dawley" 1-2 mėnesių amžiaus žiurkių patinėliai. Pašalinta užkrūčio liauka (thymus) ir patalpinta j atšaldytą ledu fiziologinį NaCl tirpalą. Audinys homogenizuotas "Potter Elvehjem" homogenizatoriuje, 10.0 ml buferinio tirpalo, turinčio 20 mmol Tris pH=7.4, (svoris/tūriu) 10 % glicerino,
[0087] 1 mmol EDTA (etilendiamintetraacto rūgšties), 20 mmol NaMo04, 10 mmol merkaptoetanolio. Homogenatas centrifuguotas 15 min 20.000 x 1 g. Sluoksnio dalys, atsiskyrę prie 20.000 x 1 g(230 jai), inkubuotos 0° temperatūroje apie 24 vai. su 100 (xl fenilmetilsulfonilfluorido (esterazės inhibitoriumi, galutinė koncentracija 0.5 mmol), 20 jai nežymėto "varžovo" ir 50 jai H- žymėtojo deksametazono 93 nmol). Surištasis ir laisvasis steroidai atskirti, mišinį inkubavus 0° temperatūroje 10 min. su(galutinė kone. su 60 (il 2.5% (svoris/tūriui) aktyvuotos anglies ir 0.25%
[0088] (svoris/tūriui) dekstrano 170 suspensijos 20.0 mmol Tris, pH=7.4, 1 mmol EDTA ir 20mmol NaMo04. Po to centrifuguota 500 x 1 g 10 min., ir 230 (ii išplaukusio sluoksnio suskaičiuota 10.0-yje ml Insta-Gel scintiliaciniame "Packard" spektrofotometre. Išplaukę sluoksniai inkubuoti su a) vienu ['H] deksametazonu,
[0089] b)[3H] deksametazonu su 1.000-kartiniu nežymėtojo deksametazono pertekliumi, c)
[0090] [ H] deksametazonu su 0.03-300-kartiniu "varžovo" pertekliumi. Nespecifinis ryšys
[0091] nustatytas, prie [ H] žymėtojo deksametazono pridėjus 1.000-kartinį nežymetojo deksametazono perteklių.
[0092] Radioaktyvumas, surištas su receptoriumi, dalyvaujant "varžovui", padalintas iš radioaktyvumo, susijusio su receptoriumi, nedalyvaujant "varžovui", ir padaugintas iš 100, išreiškia specifinį žymėtojo deksametazono ryšį, procentais. Kiekvienai "varžovo" koncentracijai specifiškai surišto radioaktyvumo procentai atidedami grafike priklausomai nuo "varžovo" koncentracijos logaritmo. Kreivės lygintos 50% specifinio ryšio lygyje ir atsižvelgta į budezonidą, kuris prilygintas santykiniam medžiagos surišimo vienetui (RBA=1)
1. Tarpinio produkto pagal formulę X: