[LT] Išradimas susietas su veterinarija, o būtent su gyvulių trichofitijos profilaktika ir gydymu. Siūloma vakcina prieš gyvulių trichoftiją skiriasi nuo žinomų vakcinų tuo, kad papildomai turi grybo Trychophyton mentagrophytes kamieno VGNKI Nr. 27 antigeno kiekį, kurio užtenka, kad būtų iššaukta gyvulio imuninė reakcija.
[EN]
[0001] Išradimas yra susietas su biotechnologija, konkrečiai su vakcinomis prieš gyvulių trichofitiją.
[0002] Žinoma vakcina LTF-130 ir vakcina TF-130/K prieš gyvulių, pagrindinai stambiųjų raguočių, trichofitiją, turinti antigeną iš kamieno Trichophyton faviafomie Nr. 130 (Sin. Tr . vemicosum ) arba antigeną iš kamieno Tr . favifonne 1'30L ir želatinos-sacharozės stabilizatorių (žr. GB patentą Nr. 1330240, buv. SU autoriuj liudijimą Nr. 955571).
[0003] Žinomų vakcinų trūkumas yra tas, kad jomis profilaktiškai galima užkirsti kelią tik vienos rūšies gyvulių - stambiųjų raguočių susirgimui ir tik nuo vienos rūšies sukėlėjo Tr . favifonne .
[0004] Pagal Bodiną (1902) (žr. V. M. Leščenko, "Laboratornaja diagnostika gribkovych zabolevanij", M., "Medicina'', 1982, psl. 109) patiksliname kamieną Tr . flavifonne 130L į Tr . vemicosum t , Nkadangi pagal Georgą (1957) (žr. ten pat, psl. 34) gyvulių trichofitijos sukėlėjo pagrindinis pavadinimas yra Tr . vemicosum .
[0005] Išradimo tikslas yra sukūrimas didelio imunogeniškumo vakcinos prieš gyvulių trichofitiją, vadinamą Tr . vemicosum , Tr . vemicosum var autotrophicum , Tr . mentagrophytes , Tr . eąuimen , Tr . sarkisovii .
[0006] Nurodytas tikslas pasiekiamas tuo būdu, kad vakcina papildomai turi antigeną iš kamieno Tr . mentagrophytes VGNKI Nr.27, esant žemiau nurodytiems komponentų santykiams (svorio/tūrio %): Antigenas iš kamieno 7r. vemcosum 130L 300-600 mln m ikrokonidijų/cni'5 Antigenas iš kamieno Tr . Mentagrophytes VGNKI Nr.27 300-600 mln. mikrokonidijų/cmJ
[0007] Kamienas Tr . mentagrophytesVGNKl Nr.27 yra gautas iš epizootinio, išskirto iš baltosios pelės, naudojant kryptingos laipsninės atrankos metodą pagal greičiausiai augančių kolonijų su aktyviu mikrokonidijų susikaupimu požymį.
[0008] Kamienas Tr. mentagrophytes Nr.27 yra deponuotas Rusijos valstybinio mokslo-tiriamojo veterinarinių preparatų kontrolės, standartizacijos ir specifikacijos instituto mikroorganizmų kolekcijoje ir jo registracijos numeris yra 27.
[0009] Grybo Tr. meiitagivpllytės VGNKI Nr.27 kamieną apibūdina šie požymiai ir savybės: Morfologiniai požymiai. Micelė nespalvota, lygi, šakota, septiruota, gali suskilti į fragmentus, terminaliniai gifai nevisada sudaro spirales (paprastai 3-5 vingiai), micelės diametras 2,0-3,0 (.un. Mikrokonidijų daug, jos apvalios, kriaušės formos, pailgėjusios, artimos lazdelių formai, micelės paviršiuje būna kekėmis, dažniau atskirai, dydis 1,5 - 5,2 j.un. Mikrokonidijos vienetinės. Pertvarėlių kiekis 1 - 5, dažniau 1 - 2, dydis 13-30 x 3-8 jum. 20 - 30 dienų amžiaus kultūrose gali būti stebimos apvalainės formos su dviejų kontūrų apvalkalu chlamidosporos, visada atskiros, diametras 3.0 - 5,0 |.im. Artosporos atsiranda ant atskirų micelės dalių, jos plonasienės, jų forma primena 3,0 -9,0 jom ovalines arba lazdelės formos mikrokondinijas.
[0010] Kultum savTbės. Misos agare auga kaip plokščia, balta, aksominė kolonija su nedideliu iškilimu viduryje, augantis kraštas lygus, apatinė pusė raudonai ruda, kolonijos diametras 50 - 90 mm (15 - 20 dienų kultūra).
[0011] Saburo agare auga kaip plokščia, balta, aksominė su kreminiu atspalviu kolonija su nedideliu iškilimu centre, augantis kraštas lygus, apatinė pusė blyškiai geltona, kartais tamsesnė centre, kolonijos dydis 50 - 90 mm (15 - 20 dienų kulhira).
[0012] Hennebergo terpėje auga kaip balta, aksominė, radialinė-klostuota kolonija, augantis kraštas voratinklio formos, apatinė pusė raudonai violetinė, kolonijos diametras 50 - 80 mm (15 - 20 dienų kultūra).
[0013] Sporų susidarymas. Maksimalus sporų susidarymo kiekis misos agare 198,4 - 259,2 mln/cm3.
[0014] Virulentinės savybės. Suleidus į raumenis kamieno Tr. mentagrophytes Nr.27 kultūrą, jūros kiaulytėms, triušiams, avims, ožkoms, veršeliams po 2 - 3 savaičių injekcijos vietoje išsivysto specifinis lokalizuotas paviršinis 2,0 - 2,5 cm židinėlis, kuris per 15 - 20 dienų savaime užgyja. Mikologiškai išskirti sukėlėją nepavyksta. Uždėjus kamieno kultūrą neimunizuotiems gyvuliams ant skarifikuotos odos (dozė - 0.25 mln/cm3 mikrokonidijų) per 10 - 20 dienų aplikacijos vietoje išsivysto tipiškas grichofitinis židinys. Iš patologinės medžiagos išskirto kamieno savybės atitinka pradinio kamieno savybes.
[0015] Antigeninės savybės. Suleidus kamieno kultūras, prieš jas veršelių, avių, triušių organizme susidaro specifiniai agliutininai, kurių titrai 1:40 - 1:1280.
[0016] Imunogeninės savybės. Du kartus suleidus į raumenis veršeliams, triušiams vakcinos, pagamintos iš šio kamieno, dozę, turinčių 10 - 20 mln. gyvų mikrokonidijų, gyvuliams susidaro imunitetas užsikrėtimui trichofitįja, imuniteto trukmė ne mažiau 5 metų
[0017] Kamienas Tr. mentagrophytes VGNKI Nr.27 skiriasi nuo epizootinių silpnu virulentiškurnu, neužsikrėtimu, esant kontaktui tarp gyvulių, dideliu mikrokonidijų susikaupimo aktyvumu ir imunogeniškumu, suleidus į raumenis gyvuliams.
[0018] 1 pavyzdys Vakcinai gauti 15 - 20 dienų kamienų Tr. venucosum 130L ir Tr. meniagrophytes VGNKI Nr.27 kultūras atskirai augina 12 - 20 dienų matracinėse kolbose misos agare (pH 6 , 2 - 6,8) 26 - 28 °C temperatūroje.
[0019] Išaugintą kiekvienos kultūros grybieną aseptiškomis sąlygomis specialiais gremžtukais nuima nuo maitinančiosios terpės paviršiaus ir patalpina į sterilius stiklainius. Kiekvieno kamieno grybienos masę homogenizuoja mikseriuose arba koloidiniame malūne, o po to, naudojant sterilų vandenį, gautą Tr. verrucosurn 130 L homogenatą resuspenduoja iki mikrokonidijų koncentracijos 300 mln.,cm3, o homogenatą Tr. mentagrophytes VGNKI Nr.27 - iki 600 mln./cmJ. Resuspendavimą atlieka esant penicilinui arba streptomicinui, skaičiujant 100 vnt. 1 cm^ homogenato. Sumaišomi lygūs tūriai grybo Tr. vernicosum 130L kamieno ir grybo Tr. mentagrophytes VGNKI Nr.27 kamieno homogenatų. Į gautą grybienos masės suspensiją prideda lygų kiek} stsbilizatoriaus (pH 6,2 - 6,8), turinčio 10 % sacharozės ir 1,5 % želatinos vandenyje. Viską kruopščiai sumaišo, ispilsto j sterilius flakonus ii" liofiliškai išdžiovina.
[0020] Vakciną gauna taip pat, kaip aprašyta 1 pavyzdyje. Jos paruošimui naudoja grybų Tr. vemicosurn 130L ir Tr. mentagrophytes VGNKI Nr.27 kamienų honiogenatus, kuriuose mikrokonidijų koncentracija yra 450 mln./cnr\ o stabilizatoriumi naudojamas vandeninis tirpalas, kuriame yra 15% sacharozės ir 2.5% želatinos.
[0021] Vakciną prieš gyvulių trichofitiją ruošia taip pat, kaip aprašyta 1 pavyzdyje. Jai gauti naudoja grybo Tr. verrocosum 130L kamieno homogeriatą, kuriame mikrokonidijų koncentracija yra 600 mln./cm3, ir kamieno Tr. mentagrophytes Nr.27 homogenatą, kuriame mikrokonidijų koncentracija yra 300 mln./cm3. Stabilizatoriumi naudojamas vandeninis tirpalas, turintis 20% sacharozės ir 4% želatinos.
[0022] Paruošta vakcina yra vienalytė korėta sausa masė. pilkos spalvos tabletės formoje. Vakcina išlaiko savo biologines savybes, jei laikoma uždarose, tamsiose patalpose 2 - 10 °C temperatūroje. Galiojimo laikas - 12 mėnesių. Prie vakcinos pridedami flakonai su steriliu1 skiedikliu.
[0023] Serijas vakcinų prieš gyvulių trichofitiją, paruoštų pagal 1, 2 , 3 pavyzdžius, prieš naudojit mą ištirpina skiediklyje, skaičiuojant 1 dozė 1 cm - j. Gauna vakcinų serijas, turinčias skiepyjamoje dozėje šias antigenų koncentracijas mln./'cm3 (1 lentelė).
[0024] Vakciną pagal 1, 2, 3 pavyzdį naudoja veršelių iniunizavimui, suleisdami 1 cm" dozę į raumenis du kartus 10 - 14 dienų intervale.
[0025] Kaip kontrolinį pavyzdį naudoja analogiškai pagamintas vakcinas iš kamieno 77. vemicosum 130L ir Tr. mentagrophytes VGNKI Nr.27. kuriose skiepyjimo dozėje antigeno mikrokonidijų koncentracija yra 7.5 mln./cm3. Praėjus 35 dienoms po antrosios imunizacijos, veršelius užkrečia kamienų Tr. vemicosum Nr.153 (TB-153), Tr. mentagrophytes Nr.251 (TC-25J), Tr. sarkisovii 721 (TC-724), Tr. vemicosum va r. antothrvpiern 118 (TB-118). Tuo pat metu tomis pačiomis kultūromis užkrečia 6 kontrolinius (neimunizuotus) veršelius.
[0026]
[0027] Iš lentelės matyti, kad 1, 2 ir 3 serijos vakcinos imunizuotiems veršeliams išvysto aukšto laipsnio (100%) imunitetą prieš trichofitiją eksperimentinio užkrėtimo atveju. Veršelių imunizacija monovakcinomis neišvysto pakankamai atsparaus imuniteto, jei po to užkrečiama heterologinėmis trichofitijos sukėlėjų kultūromis. Aukščiau neiniunizuoti ir nesirgę triehol'itija veršeliai linkę eksperimentiniam užsikrėtimui virulentinėmis trichofitijos sukėlėjų kultūroms.
[0028] Analogiškai 4 pavyzdžiui, trimis bandomosiomis vakcinos serijomis imunizuoja 14 ožkų, o po to jas užkrečia kamienų Tr. vetmcosum Nr.153 ir Tr. metUagrvphytes Nr.251 virulentinėmis kultūromis. Kontroliniai gyvuliai (2 gyvuliai) neimunizuoįanii.
[0029] Visi vakcinuoti gyvuliai nesusirgo trichofitiją, pas kontrolinius gyvulius buvo pastebėti visi susirgimo požymiai, iš pažeidimo židinių išskirti virulentinių kultūrų nurodyti kamienai.
[0030] 10 šinšilų veislės triušių, kurių gyvas svoris 2,5 - 3,0 kg, imuniząvimui naudoja 2 pavyzdžio vakciną. Prieš naudojimą vakciną ištirpina skiediklyje, skaičiuojant 1 dozė 1 cmJ.
[0031] Gauna šią antigenų koncentraciją 1 skiepyjimo dozėje: 7,5 mln mikronidijų Tr. vemicosum 130L ir 7,5 mln. mikrokonidijų T r. mentagrophytes VGNKI Nr.27.
[0032] Vakciną du kartus suleidžia triušiams j raumenis, vienkartinė dozė - 0,5 cm3. Kontrolei 10 triušių vakcinacijai naudoja vakciną iš kamieno Tr. mentagrophytes Nr.135, kurioje 1 skiepyjimo dozėje yra 20 mln. mikrokonidijų 1 cmJ, šią vakciną suleidžia j raumenis sėdmenų raumenų srityje. Po 30 dienų triušius odos paviršiuje užkrečia kamienų 7r. mentagropfrytes Nr.251 ir Tr. mentagrophytes Nr.18 virulentinėmis kultūromis. Per 25 dienas registruojami užkrėtimo rezultatai. Nustatyta, kad vakcinos panaudojimas padeda užtikrinto imuniteto susidarymui pas visus imunizuotus triušius, tuo pat metu žinomos vakcinos Mentavak panaudojimas neduoda patikimo efekto - 2 iš 10 triušių susirgo trichofitija, o iš pakenkimo židinių išskirtos virulentinių kamienų kultūros.
[0033] 20 veršelių imunizuoja 1 ir 3 pavyzdžio vakcinos variantais, kuriuose skiepyjimo dozėje antigenų koncentracija atitinka 4 pavyzdį. Kiekvienoje veršelių grupėje (10 gyvulių) vakcina du kartus leidžiama j raumenis po 1 cm3 su 10 - 14 dienų intervalu. Praėjus 4 ir 9 mėnesiams po antrosios imunizacijos abi veršelių grupes užkrečia kamienų Tr. vemicosum Nr.153 ir Tr. mentagrophytes Nr.251 virulentinėmis kultūromis. Nei vienas veršelis nesusirgo. Taigi, išradimą atitinkanti vakcina išlaiko patvarų imunitetą praėjus 4 ir 9 mėnesiams po užkrėtimo.
[0034] Vakcina pasižymi dideliu efektyvumu prieš gyvulių trichofitiją. Profilaktiniam tikslui vakciną naudoja du kartus su 10 - 14 dienų intervalu šiomis dozėmis: veršeliams nuo 14 dienų iki 4 mėnesių - 1 cm3, vyresniems nei 5 mėnesiai - 2 cm", ir smulkiesiems raguočiams (avys, ožkos) nuo 3 iki 6 mėnesių - 0,5 cm\ vyresniems nei 6 mėnesiai - 1 cm3. 2,5 - 3,0 kg masės triušiams profilaktiniu tikslu suleidžia 0,3 - 0,5 cm3. Gydymo tikslu sergantiems gyvuliams vakciną leidžia du kartus su 10 - 14 dienų intervalu, naudojant dvigubą dozę.
[0035] Išradimą atitinkančios vakcinos panaudojimas veterinarinėje praktikoje leis padidinti priemonių kovai su gyvulių trichofitija efektyvumą.
Vakcina prieš gyvulių trichofitiją. turinti antigeną iš kamieno Trychophyton vetmeosum 130L, sacharozę. želatiną ir vandenj, besiskirianti tuo, kad joje papildomai yra antigenas iš kamieno Trychophyton mcntagrophytes VGN'KI Nr.27, kurioje komponentų santykiai (svorio/tūrio %) yra tokie:antigenas iš kamieno