[LT] Nauji junginiai, aprašomi bendromis formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie,If:@ Y-Z1-R A-Z2-R A-Z3-B-Z4-R@ la lb lc@ A-Z5-B-Z6-C-Z7-R A-Z8-B-Z9-C-Z10-D-Z11-R@ ld le@ A-Z12-B-Z13-C-Z14-D-Z15-E-Z16-R,@ if@ kuriose@ Z1,Z2,Z3,Z4,Z5,Z6,Z7,Z8,Z9,Z10,Z11,Z12,Z13,Z14,Z15 ir Z16 nepriklausomi yra O, S, CH2 arba NR25, kur R25 yra vandenilis, C1-24-alkilas, C1-24-alkenilas, C1-24-alkilkarbonilas arba benzolas, kuris pasirinktinai gali turėti hidroksilo, aminogrupės, C-1-4-alkilo, C1-4-alkoksilo, nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-C1-4-alkilo pakaitalą:@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@šių junginių panaudojimas farmacinių kompozicijų, skirtų gydyti ar vartoti profilaktiškai prieš žmonių ligas, sutelktas žmogaus skrandžio gleivinės užkrėtimo su Helicobacter pylori, gamyboje, o taip pat jų gavimo būdas ir farmacinės kompozicijos.
[EN]
[0001] Šis išradimas susijęs su L-fukozę turinčių glikozidinių darinių panaudojimu, ruošiant farmacines kompozicijas; skirtas gydyti bei atlikti profilaktiką ligų, sukeltų skrandžio ir žarnyno Helicobacter pylori infekcijomis, panaudojant šiuos darinius, o taip pat su naujais glikozidiniais dariniais.
[0002] Helicobater pylori tai mikroaerofilinis spiralinės formos organizmas (pagal kilmę priskiriamas Campylo-bacter genčiai), kuris randamas skrandyje ir, pasirodo, paprastai gyvena išimtinai žmogaus skrandžio gleivi-nėje. Įvertinta, kad ši bakterija užkrėtusi skrandžio gleivinę daugiau kaip 60 % suaugusių žmonių, kai jiems sukanka 60 metų. Be to, numanoma, kad H. pylori daly-vauja sukeliant daugeli, patologinių negalavimų, tarp jų ūmini (B tipo) gastritą, skrandžio ir dvylikapirštės žarnos opą, atrofini, gastritą ir skrandžio adeno-karcinomą.
[0003] Bakterijų audinių tropizmas dalinai gali būti kontro-liuojamas bakterijų štamo sugebėjimu prisitaikyti prie jų gyvenimo vietos lokalios cheminės aplinkos. Be to, kad jų nepašalintų iš naujos gyvenimo vietos, pvz., dėl peristaltinių virškinimo trakto judesių, būtina sąlyga įsikurti yra sukibimas. Žinduoliuose bakterijos pri-limpa prie proteinų arba glikojunginių (glikosfin-golipidų, glikoproteidų) ant bei aplink epitelinių ląstelių paviršius (gleivės), literatūroje aprašyta keletas specifinių bakterinių baltymų bei anglia-vandenių sukibimo sąveikų.
[0004] H. pylori atžvilgiu, tyrimai modelinėse sistemose, kaip antai pelių antinksčių Y-l ląstelėse (žiūrėk D. G. Evans, D. J., Jr. Evans ir D. Y. Graham, (1989) Infect. Immun. 57, 2272-2278) pateikė minti, kad susietos su paviršiumi lanksčios pluoštinės struktūros, apjuosian-čios šią bakteriją, tarnauja kaip rišikliai arba kolonizacijos faktorių antigenai, kad tarpininkautų prisirišant H. pylori prie ląstelės glikoproteidinio receptoriaus, turinčio sialo rūgšties.
[0005] Išradimas skirtas mono-, di-, tri- arba oligosacharidų glikozidinių darinių, turinčių bent vieną galinę grupę Y, kaip apibrėžta žemiau, išvestų iš L-fukozės, kai minė-tieji dariniai yra junginiai, aprašomi bendromis formu-lėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If:
[0006] Z i# Z 2, Z3, Z«, Z 5, Z 6, Z 7, Zg, Zg, Z10, Z n, Z12/ Z13, Z14, Z1 c, ir Z,6 nepriklausomai yra O, S, CH2 arba NR25, kur R25 yra vandenilis, C, ^-alkilas, C2_24-alkenilas, C į.^-alki1karbonilas arba benzoilas, kuris pasirink-tinai gali turėti hidroksilo, aminogrupės, C, ,,-alkilo, C, Ą-alkoksilo, nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-CĮ .,,-alkilo pakaitą;
[0007] Y, A, B, C, D ir E formulėse vingiuota linija pažymėtas ryšys, kuris yra arba a- arba P~ konfigūracijoje;
[0008] RT, R2 ir R3 kiekvienas nepriklausomai yra H, halogeno, azido, guanidinilo, šakota ar nešakota C^^-alkilo, C2.24-alkenilo, C2_24-alkinilo, C3_a-cikloalkilo, C3_e-cikloalkil-C1_24-alkilo arba C^^-alkoksi-C^^-alkilo grupė, kuri pasirinktinai gali turėti hidroksilo, amino, halogeno ar oksogrupės pakaitą; arilas arba arilC, ^-alkilas, kuris pasirinktinai gali turėti arilo grupėje hidroksilo, amino, C^4-alkilo, C,_4-alkoksilog-nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-C^-alkilo pakaita; tri( Cl_ 4-alkil)sililetilas; oksogru-pė;=SR,iR5 grupė, kur
[0009] R4 ir R5 nepriklausomai yra H arba Ct _4-alkilas; arba XR,., grupė, kur
[0010] R10 yra H, šakota ar nešakota C1.24-alkilo, C2_24-alkenilo, C2_24-alkinilo, C3_B-cikloalkilo, C3.8-cikloalkil-C1_24-alkilo arba C1_12-alkoksi-C1_12-alkilo grupė, kuri pasirinktinai gali turėti hidroksilo, amino, halogeno ar oksogrupės pakaitą; arilas, aril-C^-alkilas arba heterociklil-CĮ.^-alkilas, kuris pasirinktinai gali turėti arilo arba heterociklilo grupėje hidroksilo, amino, C^-alkilo, C1.4-alkoksilo, nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-C1_4-alkilo pakaitą; tri (C^-al-kil) sililetilas; tri (C^-alkil) sililas; tri (C^-al-kil)sililetoksimetilas; natūraliai egzistuojančių ami-norūgščių acilo liekanos; C1_24-alkilkarbonilas; C2_24-al-kenilkarbonilas; C3_8-cikloalkil-C1_24-alkilkarbonilas; arilkarbonilas; arba terpenilas; ir
[0011] R20 yra H, C1.24-alkilas, C2_24-alkenilas, C1_24-alkilkarbonilas arba pasirinktinai benzolo žiede turintis hidroksilo, amino, C1.4-alkilo, Cx.4-alkoksilo, nitrogrupės, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-C^-alkilo pakaitą benzoilas ar ftaloilas;
[0012] ^1A/ ^2A' ^-3 A f ^4A' ^1B' ^2B' ^3B' ^4B' ^!C' ^2C ' ^3C' ^40' ^1D' R2 d r R3D, Rie' R2e / R3E/ R4e kiekvienas nepriklausomai yra kaip apibrėžti aukščiau RL, R2 ir R3 arba yra grupė, turinti VII formulę
[0013]
[0014] kur Y ir Z; yra apibrėžti aukščiau;
[0015] su sąlyga, kad vienas iš R1B, R2B, R3B arba R^ yra Z3, Zb, ZH arba Z12, kad vienas iš Rlc, R2C, R3C arba R4C yra Z6, ZQ arba Z13, kad vienas iš R1D, R2D, R3D arba R^D yra Z10 arba Z14, kad vienas iš R1E, R2E, R3E arba R4E yra Z15, kad bent vienas ir ne daugiau kaip penki iš R1A, R2ft,
[0016] ^3A» ^1B' f^2B' ^3B' ^4B' ^1C' ^2C' ^3C' ^4C' ^1D' ^2D' ^3D' R4D, R1e, R2e, R3E ir R4e yra grupė, turinti VII formulę, ir kad A grupės R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 pakaitų konfi-gūracijos, B grupės Rlb, R2b, R3B ir R4BCH2 pakaitų konfi-gūracijos, C grupės Rlc, R2C, R3C ir R4cCH2 pakaitų konfi-gūracijos, D grupės R1D, R2D, R3D ir R4DCH2 pakaitų konfigūracijos, E grupės R1E, R2E, R3E ir R4ECH2 pakaitų konfigūracijos nepriklausomai yra D-gliukozės, L-gliu-kozės, D-galaktozės, L-galaktozės, D-manozės, L-mano-zės, D-tolozės, L-tolozės, D-alozės, L-alozės, D-altro-zės, L-altrozės, D-gulozės, L-gulozės, D-idozės ir L-ido-zės konfigūracijos;
[0017] R yra vandenilis, šakota ar nešakota C^.^-alkilo, C2_24-alkenilo, C2.2/]-alkinilo, C3_8-cikloalkilo, C3_8-cikloalkil-C^^-alkilo, C^^-alkoksiC^^-alkilo, C1.24-alkilkarbonilo, C2.2,,-alkenilkarbonilo arba C3.8-cikloalkil-C1.24-alkilkarbonilo grupė, kuri pasirinktinai gali turėti hidroksilo, amino, halogeno ar oksogrupės pakaitą; arilo arba aril-Cj .4-alkilo, arilkarbonilo ar aril-C^-alkilkarbonilo grupė, kuri pasirinktinai arilo grupėje gali turėti hidroksilo, amino, C^-alkilo, C^-alkoksilo, nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-CĮ.^-alkilo pakaitą; terpenilas; tri (C1.4-alkil) sililetilas; heterociklilas; heterociklil-C^-alkilas; arba heterociklil-C, _4-alkilkarbonilas;
[0018]
[0019] kur R30 yra H, karboksilas, C^-alkoksikarbonilas, hidroksilas, aminogrupė arba MA matrica, q yra sveikas skaičius nuo 1 iki 24 ir m yra 0 arba 2; arba
[0020] grupė, turinti formulę III arba Illa
[0021] kur m apibrėžtas aukščiau, o kiekvienas Phe yra fenilas, kuris pasirinktinai gali turėti hidroksilo, amino, C^-alkilo, C^-alkoksilo, nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-C1.4-alkilo pakaitą; arba fenil-C^-alkilas, kuris pasirinktinai fenilo grupėje gali turėti vieną hidroksilo, amino, C^-alkilo C1.4-alkoksilo, nitro, halogeno, fenoksi arba mono- ar dihalogen-C1_4-alkilo pakaitą;
[0022]
[0023] kur R40 ir R50 nepriklausomai yra halogenas; arba
[0024] Q-(tarpiklis)r-grupė, kur r sveikas skaičius 0 arba 1, o Q yra MA matrica arba -COO-MA grupė;
[0025] panaudojimu terapijoje, ypač žmonių gydymui ir profi-laktikai tais atvejais, kai skrandžio gleivinė užsi-krėtusi Helicobacter pylori. Iš kitos pusės, išradimas susijęs su minėtųjų junginių panaudojimu gaminti farma-ciškai priimtinas kompozicijas, skirtas gydyti aukščiau paminėtas ligas.
[0026] Išradimo kontekste terminai " C^-alkilas" , "C^.g-alkilas" , " C1_24-alkilas" kaip atskira grupė ar grupės dalis reiškia alkilo grupes su 1-4, 1-8 arba 1-24 anglies atomais, kurie gali sudaryti tiesią ar šakotą grandinę, kaip antai metilą, etilą, propilą, izo-propilą, butilą, izobutilą, tret.butilą, dimetilbutilą, pentilą, heksilą, heptilą, oktilą, nonilą, decilą, undecilą, dodecilą, heksadecilą, oktadecilą, ir t.t.
[0027] Pažymėti anglies grandinę čia vartojamas apibrėžimas " C1_24~alkilas" , bet taip pat anglies grandinėje gali būti mažesnis anglies atomų skaičius, kaip "C1.4-alkilas" , " C^g-alkilas" . Terminas " C^-alkilas" čia vartojamas kai apibrėžiami pakaitai.
[0028] Terminas " C3_e-cikloalkilas" kaip grupė arba grupės dalis žymi ciklinę alkilo grupę su 3-8 anglies atomais, pavyzdžiui, ciklopropilą, ciklobutilą, ciklopentilą, cikloheksilą, cikloheptilą arba ciklooktilą.
[0029] Terminas " C2_24-al kenilas" , žymi nesočias alkilo grupes su 2-24 anglies atomais, kurios gali turėti linijinę ar šakotą grandinę, geriau linijinę, kurioje dviguba jung-tis gali būti bet kurioje grandinės vietoje, pa-vyzdžiui, vinilas, 1-propenilas, 2-propenilas, hekse-nilas, decenilas. heksadecenilas, oktadecenilas. Terminas " C2_24-alkinilas" žymi alkilo grupę su 2-24 anglies atomais, turinčią trigubą ryši, pavyzdžiui, etinilas, I-propinilas, 2-propinilas, 2-butinilas ir 1.1. Terminas "halogenas" reiškia Cl, Br, I ir F, labiau priimtini F ir Cl. Terminas " C^-alkoksilas" ir "C1.24-al-koksilas" žymi grupę sudarytą iš okso funkcinės grupės, substituotos alkilo grupe, apibrėžta aukščiau.
[0030] Terminai "arilas" ir "ariloksilas" kaip atskira grupė arba kaip grupės dalis žymi fenilą arba naftilą, labiau priimtinas fenilas.
[0031] Terminas "arilamidas" apibrėžia arba aril-NH-C(0)-, pvz., anilidai, arba ari 1-C(0)-NH-, pvz. benzamidas.
[0032] Terminas "terpenilo grupė" žymi grupes, išvestas iš kelių skirtingų nesočiųjų angliavandenilinių junginių, paprastai vadinamų terpenais, būtent monoterpenų ir seskviterpenų, o taip pat jų hidroksi arba okso dariniai. Mircenilas, (-)-limonenilas, terpineolilas, (+)-a-pinenilas, geraniolilas, (-)-mentolilas, (-)-kam-parilas, farnesolilas, p-eudesmolilas ir manoolilas yra šių grupių pavyzdžiai.
[0033] Šiame kontekste terminas "oligosacharidas" žymi oligosacharidą, turinti, 4-10 monosacharidų, labiau priimtina 4-7 monosacharidai, monosacharidai parenkami iš aldoheksozių (t.y. D-gliukozė, L-gliukozė, D-galak-tozė, L-galaktozė, D-manozė, L-manozė, D-talozė, L-ta-lozė, D-alozė, L-alozė, D-altrozė, L-altrozė, D-gulozė, L-gulozė, D-idozė arba L-idozė) arba jų dariniai, kur oligosachridai gali būti linijiniai arba šakoti, su sąlyga, kad ilgiausioje oligosacharido grandinėje yra ne daugiau kaip septyni monosacharidai.
[0034] Kaip nurodyta aukščiau, Y, A, B, C, D ir E grupėse vingiuotos linijos ties anglies atomais, esančiais šalia žiedo deguonies atomo, reiškia, kad šie ryšiai, kurie yra glikozidiniai, yra arba a- arba p-konfi-gūracijose. Aišku, kad kiekviena iš šių jungčių konkrečioje Y, A, B, C, D ir E grupėje gali būti a- arba 3~konfigūracijoje nepriklausomai nuo atitinkamų jungčių kitose grupėse.
[0035] Mono- ar di-halogen-C^-alkilo grupė gali turėti pakaitą bet kurioje pozicijoje ir jeigu yra dvi halogenų pakaitos, tai halogenų atomai gali būti tie patys arba skirtingi.
[0036] Terminas "heterociklilas" žymi monociklinę 5- arba 6-narę arba kondensuotą biciklinę (kiekvienas žiedas 5-arba 6-naris) , aromatinę dalinai arba pilnai įsotintą heterociklinę grupę, turinčią nuo 1 iki 4 heteroatomų kiekviename žiede, kur heteroatomai gali būti nepriklausomai pasirenkami iš 0, S ir N bei sujungti arba per anglies atomą, arba per azoto atomą. Pirolilas, pirazolilas, piridinilas, tienilas, tiazolilas, oksazolilas, imidazolilas, izoksazolilas, izotiazo-lilas, furilas, pirazinilas, pirimidinilas, piridazi-nilas, 2H-1,3-oksazinilas, 4H-1,3-oksazinilas, 6H-1,3-oksazinilas, 2H-1,3-tiazinilas, 4H-1,3-tiazinilas, 6H-1, 3-tiazinilas, 1H-1, 2, 3-triazolilas, 2H-1,2,3-triazolilas, 1H-1,2,4-triazolilas, 4H-1,2,4-triazolilas, indo-lilas, purinilas, piperidilas arba piperidinas, morfolinilas arba morfolinas, piperazinilas, tetrahi-drofurilas, tiazolidinilas, oksazolidinilas, imidazo-lidinilas, izoksazolidinilas, izotiazolidinilas, piro-lidinilas, lH-tetrazolilas arba 2H-tetrazolilas yra tipiški, bet ne vieninteliai šios grupės pavyzdžiai.
[0037] Terminas "natūraliai egzistuojančių aminorūgščių acilo liekana" žymi L-aminorūgščių, esančių gamtiniuose proteinuose acilo liekanas, pvz., alanilas, valilas, leucilas, izoleucilas, prolinilas, fenilalanilas, trip-tofanilas, metionilas, glicilas, serilas, treonilas, cisteinilas, tirozilas, asparagilas, gliutamilas, lizi-las, arginilas, histidilas ir asparagino bei gliutamino rūgščių acilinės liekanos, acilo liekana nurodo tiek karboksilo grupę, esančią tuoj pat už funkcinės amino grupės, tiek ir karboksilo grupę, esančią atitinkamų šoninių grandinių gale, tačiau labiau priimtinos karboksilo grupės, esančios šalia amino funkcinės grupės.
[0038] Terminas "sfingoidas" nurodo i, D-eritro-2-amino-1,3-oktadekandiolą, jo homologus ir stereoizomerus bei jo hidroksilinius ir nesočiuosius darinius, tame tarpe ceramidą (žr. tolimesnius apibrėžimus Journ. of Lipid Research, vol. 19, (1978), 617-631).
[0039] Terminas " steroidas" nurodo i, tokius gerai žinomus steroidus kaip cholesterolis, kortizonas, hidro-kortizonas, kortikosteronas, betametazonas, predno-zolonas, prednizonas ir kt.
[0040] Terminas "matrica", kaip čia naudojamas ir žymimas "MA", reiškia bet kokią organinę ar neorganinę, poli-merinę ar makromolekulinę struktūrą, prie kurios kovalentiškai arba, pvz., sąvaikaudama hidrofobiškai, prisijungia 0-, S-, C- arba N- glikozidinio junginio, pagal formules Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, aglikoninė dalis. Tokių matricų pavyzdžiais yra proteinų, gli-koproteinų, polipeptidų, polisacharidų, liposomų, emul-sijų, plastikinių polimerų liekanos ir neorganinės medžiagos. Geriau kai proteinų liekanos prisiriša per nukleofilines proteinų grupes, pvz., amino, hidroksilo ir merkaptano grupes. Patys proteinai ir polipeptidai gali būti bet kurie iš įvairiausių medžiagų, ypač biologiškai suderinami proteinai, kaip antai globu-linai, albuminai, pavyzdžiui, žmogaus serumo albuminas (HSA), jaučio serumo albuminas (BSA) arba avies serumo albuminas (SSA), ovalbuminas, fibrinai arba "rakto skylutės" geldelės hemocianinas (KLH) , glikoproteinai, kaip antai jaučio arba žmogaus nepakeistas kazeinas ar lecitinai, bei panašiai. Sintetiniai polimerai, kuriuose viena ar kelios aminorūgštys prijungtos prie apibrėžto dydžio(ių), polimero, pvz., polizinas arba oligolizinas, yra kitais tokių matricų pavyzdžiais. Skirtinguose proteinuose ar polipeptiduose gali būti prisirišama prie R grupės liekanos per amino arba karboksilinę grupę. Polisacharidai, prie kurių prisijungia 0-, S-, C- arba N-glikozidiniai junginiai, taip pat gali būti įvairiausiais polisacharidais. Junginio, aprašomo formulėmis Ia, Ib, Ic Id, Ie arba If, agli-koninė dalis gali būti prijungta prie paprastų polisacharidų, kaip antai celiuliozės, sefarozės, krak-molo ar glikogeno, hidroksilo grupių, prie amino-sacharidų, tokių kaip chitozanas arba amininta sefa-rozė, amino grupių ir prie polisacharidų, modifikuotų siera, merkaptano grupių.
[0041] Liposomomis gali būti bet kokia biologiškai, biolo-giškai suardoma mikrovezikulinė sistema, sudaryta iš vieno ar kelių bisluoksnių, apjuosiančių vandeniu užpildytas kameras, kuriose gali būti įvairiausi reagentai: hidrofobiniai reagentai lipidinių bisluoks-nių viduje, o hidrofiliniai reagentai vidinėje van-deninėje ertmėje. Liposomų fizikinės ir cheminės savybės pagrinde priklauso nuo lipidų sudėties.
[0042] Liposomos sudarytos iš fosfolipidų, kaip antai kiau-šinio trynio fosfolipidų, sojos fosfolipidų, sintetinio fosfotidilcholino, pvz., dimiritoilfosfatidilcholinas (DMPC) ir/arba dipalmtoilfosfatidilchlorinas (DMPC), arba išvalyti augalinės kilmės fosfatidilcholinai arba kiti lipidai, kaip antai galaktolipidai, sfingolipidai arba glikosfingolipidai.
[0043] Emulsijos tai heterogeniniai dviejų ar daugiau nesusi-maišančių skysčių mišiniai. Kad šios sistemos stabi-lizuotųsi, pridedami emulgatoriai. Emulgatorius išsi-dėsto tarp nesusimaišiusių skysčių ir paprastai išlieka tik viena fazė lašelinėje formoje.
[0044] Emulsijos būna dviejų pagrindinių tipų. Heterogeninės sistemos, pasižyminčios organinio skysčio lašelių pasiskirstymu ištisinėje vandens fazėje, vadinamos aliejaus vandenyje emulsijomis (o/w). Iš kitos pusės, hete-rogeninės sistemos, pasižyminčios vandens lašelių pasiskirstymu ištisinėje aliejinėje fazėje, vadinamos vandens aliejuje emulsijomis (w/o).
[0045] Bet koks augalinis aliejus, toks kaip sojos pupelių aliejus, dygminų aliejus, sezamo aliejus, žemės riešutų
[0046] aliejus, medvilnės aliejus, borago aliejus, saulėgrąžų aliejus, kukurūzų aliejus, alyvų aliejus, trigliceridai su vidutinio ilgio grandinėmis (kaip Miglyol1®) ar acetilinti monogliceridai gali būti panaudoti kaip disperguotoj i fazė arba dispersinė terpė.
[0047] Aminintas lateksas, substituotas siera, aminintas arba hidroksilintas polistirolas, poliakrilamidas ir poli-vinilo alkoholis tai pavyzdžiai plastikų, prie kurių gali prisijungti aglikoninės dalys junginių, aprašomų formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If. Tarp kitų galimų nešiklių yra angliavandeninės kilmės rutuliukai ir geliai arba polimerai, kuriuose angliavandeniai naudojami drauge su kitomis polimerinėmis medžiagomis, kaip sefakrilas. Šiuose geliuose toliau atliekamos pakaitos su tokiomis grupėmis kaip amino, tiolių, ciano, aktyvuotų esterių ir disulfidų grupėmis. Apta-riamieji plastikai gali būti rutuliukų arba plėvelės pavidalo.
[0048] Tarp neorganinių medžiagų, prie kurių gali būti prijungta junginių, aprašomų formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If, aglikoninė dalis yra silicio dioksido medžiagos, tokios kaip: silikagelis, ceolitas, diatomitas arba įvairių stiklo ar silikagelio tipų, kaip antai substi-tuotų siera ar aminintų stiklų, paviršiai, kur silikagelis ar stiklas gali būti, pavyzdžiui, rutuliukų formoje. Kitu neorganinės medžiagos pavyzdžiu gali būti aliuminio oksidas.
[0049] Ypač priimtinomis MA matricomis yra žmogaus serumo albuminas (HSA), jaučio serumo albuminas (BSA) ir poliakrilamidas (PAA).
[0050] Įdomus šio išradimo įgyvendinimas yra kai junginys, atitinkantis formulę Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, turi MA matricą, kurioje įjungta daug (t.y 2 ar daugiau,
[0051] pavyzdžiui 10-100, kai matrica yra proteinas, kaip antai: BSA ar HSA, arba 10-10000, kai matrica yra polimeras, toks kaip poliakrilamidas) grupių, atitin-kančių formules Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If. Pastebėta, kad esant kelioms tokioms grupėms žymiai pagerėja viso junginio slopinamasis efektas, dėl daugiavalentinio jo poveikio i, bakterijas. Taip pat gali būti, kad esant kelioms grupėms, atitinkančioms formules Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, bakterijos gali net agliutinuotis.
[0052] Kai, ryšium su formulių Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If apibrėžimu, teigiama, kad A grupės R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 pakaitų konfigūracijos, B grupės R1B, R2B, R3B ir R4BCH2 pakaitų konfigūracijos, C grupės Rlc, R2C, R3C ir R4cCH2 pakaitų konfigūracijos, D grupės R1D, R2D, R3D ir R4DCH2 pakaitų konfigūracijos ir E grupės R1E, R2E, R3E ir R4ECH2 pakaitų konfigūracijos nepriklausomai yra D-gliukozės, L-gliukozės, D-galaktozės, L-galaktozės, D-manozės,
[0053] L-manozės, D-tolozės, L-tolozės, D-alozės, L-alozės, D-altrozės, L-altrozės, D-gulozės, L-gulozės, D-idozės ir L-idozės konfigūracijos, tai norima pasakyti, kad stereocheminis substitucinis išsidėstymas, kuri, gali i,gyti įvairios R-grupės ar grupės, turinčios R-grupes, esančios ciklinėse A, B, C, D ir E grupėse, atitinka 2-, 3- ir 4-hidroksigrupių ir 5-hidroksimetilo grupės stereochemini, išsidėstymą D-gliukozė je, L-gliukozė je, D-galaktozėje, L-galaktozėje, D-manozėje, L-manozėje, D-tolozėje, L-tolozėje, D-alozėje, L-alozėje, D-altro-zėje, L-altrozėje, D-gulozėje, L-gulozėje, D-idozėje ir L-idozėje, atitinkamai.
[0054] Akivaizdu, kad grupės R.,, R2, R3 ir CH3 grupėje Y sudaro tokią konfigūraciją, kad gaunasi L-galaktopiranozinis junginys ir todėl Y grupė yra L-fukozė arba jos darinys.
[0055] Geriau, kai junginiuose, aprašomuose formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, Zlf Z 2, Z3, Z4, Z5, Zg, Z7, Zg, Z9, Z10, 2llf Zl2, Z13, Z14, Z15 ir Zjg yra O.
[0056] Taip pat labiau priimtina, kai ne daugiau kaip keturi, dar geriau ne daugiau kaip trys, ypač vienas ar du iš RlA/ R-2A' ^3A' R?A' RIB, ^2B' ^4B' ^ĮC' ^2C' ??C? ^1D' R2d, R3d, R4D, R1e, R2e, R3e ar R4E yra grupė, aprašoma VII formule.
[0057] Taip pat geriau, kai R1A yra VII grupė a konfigūra-cijoje .
[0058] Taip pat geriau, kai A dalies R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 turi D-galaktozės konfigūraciją, esant A P konfigūracijoje.
[0059] Ypač priimtini junginiai, kuriuose R1A yra VII grupė a konfigūracijoje ir A dalies R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 turi D-galaktozės konfigūraciją, esant A p konfigūracijoje, ypač kai A yra Fucal-2Gaip.
[0060] Taip pat labiau priimtina, kai R2B yra Z3, Z5, Z8 arba Z12 ir B dalies R1B, R2B, R3B ir R4BCH2 turi D-gliukozės konfigūraciją, esant B P konfigūracijoje.
[0061] Taip pat labiau priimtina, kai R1B yra acetamido grupė.
[0062] Ypač priimtini junginiai, kuriuose R1A yra VII grupė a konfigūracijoje; A dalies R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 turi D-galaktozės konfigūraciją, esant A P konfigūracijoje; R2B yra Z3, Z5, Z8 arba Z12; ir B dalies R1B, R2B, R3B ir R4BCH2 turi D-gliukozės konfigūraciją, esant B P konfigūra-cijoje, bei R1B yra acetamido grupė.
[0063] Ypač įdomūs junginiai, kuriuose A-Z3-B yra Fucotl-2-Gaipi-3GlcNAcP arba Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcP, junginiai, kuriuose A-Z5-B-Z6-C yra Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-3Gal(3 arba Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcpl-3Gaip, junginiai, kuriuose A-Z0-B-Z9-C-Z1O-D yra GalNAcal-3 (Fucal-2)Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcpi-3Galp arba Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcpi-3Gaipi-4Glcp, ir junginiai, kuriuose A-Z12-B-Z13-C-ZM-D-Z15-E yra GalNAcal-3 (Fucal-2) Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-4GlcP.
[0064] Taip pat labiau priimtina, kai R3B yra grupė, pagal VII formulę, a konfigūracijoje.
[0065] Ypač priimtini junginiai, kuriuose A dalies R1A, R2A, Rsa ir R4aCH2 bei B dalies R1B, R2B, R3B ir R4BCH2 turi D-galaktozės konfigūraciją ir C dalies Rlc, R2C, Rac ir R4cCH2 turi D-gliukozės konfigūraciją, esant A a konfigūracijoje bei esant B ir C P konfigūracijoje, ir kuriuose R1B bei R3C yra grupės, atitinkančios VII formulę a konfigūracijoje, kuriuose R1A, bei R1C yra acetamido grupės, ir R2B yra Z5, Z8 arba Z12 bei R2C yra Z9 arba Z ^ 3 •
[0066] Ypač įdomi junginių klasė, kurioje angliavandenio dalis turi Y-Zį-A- struktūrą, kurioje Z: yra 0 ir L-fukozės junginys Y prijungtas prie A 2 pozicijos. Šioje klasėje įdomios bazinės angliavandenės struktūros, turinčios formules, kuriose pakaitai Rį , R2, R3/ R1A, R2A, R3A ir R4A kiekvienas yra pažymėtas kaip OH, nors tai nereikėtų laikyti R-pakaitų apibrėžimo apribojimu šiuo atveju; greičiau reiktų sakyti, kad Rlr R2, R3, R1A, R2A, ^3A' ir R4A gali įgyti visas reikšmes, apibrūžtas aukščiau ryšium su formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If. Taigi struktūra Y-Z^A- gali būti:
[0067] Kai Y, A, B, C, D ir E dalių Rlf R2, R3, R1A, R2fl, R3A, ^4A' ^1B' ^2B' ^3B' ^4B' ^1C' ^2C' ^3C ^C' ^-ĮD' ^2D' ^3D' ^4D' R1E, R2ej R3E bei R4E grupės yra ne hidroksilai, tai geriau jas pasirinkti iš šių: H, Cl, F, azidas guanidilas, metilas, etilas, propilas, vinilas, alilas, prop-1-enilas, etinilas, prop-2-inilas, prop-l-inilas, acetilas, ciklopropilas, ciklo-propilmetilas, metoksimetilas, hidroksimetilas, fenilas oksogrupė, metilenas, tiolis, aminas, metoksi-, etoksi-, propoksi-, butoksi-, heksiloksi-, deciloksi-, tetrade-ciloksi-, oktadeciloksi-, viniloksi-, aliloksi-, 1-pro-pen-l-iloksi-, krotiloksi-, 3-buten-1-iloksi-, 2-heksen-l-iloksi-, 5-heksen-l-iloksi-, 5-decen-l-iloksi-, 9-decen-l-iloksi, 11-tetradecen-l-iloksigrupė, oleoli-las, etiniloksi-, 2-propin-l-iloksi-, 1-propin-l-iloksi-, metiltiogrupė, metilaminas, dimetilaminas, ciklo-propoksi-, ciklopropilmetoksi-, metoksimetoksi-, fenoksi-, benziloksi-, 2-furilmetoksi-, 2-tienilmetoksi-, 2-pi-ridilmetoksi-, trimetilsililoksi-, trimetilsililetil-oksi-, acetoksi-, propioniloksi-, butiriloksi-, heksa-noiloksi-, dekanoiloksi-, tatradekanoiloksi-, oktade-kanoiloksigrupė, acetamidas, N-metilacetamidas, acetil-tio-, gliciloksi- ar alaniloksigrupė.
[0068] metilas, etilas, propilas, izopropilas, butilas, sec. butilas, izobutilas, tert.butilas, pentilas, izopen-tilas, 2-metilbutilas, 1-metilbutilas, 1-etilpropilas, heksilas, izoheksilas, 3-metilpentilas, 2-metilpentilas, 1-metilpentilas, 2-etilbutilas, 1-etilbutilas, heptilas, izoheptilas, 4-metilheksilas, 3-metilheksilas, 2-metilheksilas, 1-metilheksilas, 3-etilpentilas, 2-etilpentilas, 1-etilpentilas, 1-propil-butilas, oktilas, decilas, dodecilas, tetradecilas, heksadecilas, oktadecilas, tetrakosilas, ciklopropilas, ciklopropiletilas, ciklobutilas, ciklobutilmetilas, ciklopentilmetilas, cikjlopentilprop-3-ilas, ciklohek-silas, cikloheksilmetilas, cikloheksilprop-3-ilas, cikloheptilas, fenilas, 4-nitrofenilas, benzilas, 4-fe-nilprop-l-ilas, 3-heksiltio-2-(heksiltio)metilprop-1-ilas, 3-heksilsulfonil-2-(heksilsulfonil)metilprop-1-ilas, 3-deciltio-2-(deciltio)metilprop-1-ilas, 3-decilsulfo-ni1-2(decilsulfonil)metilprop-1-ilas, 8-amino-3 grupė, 6-dioksaokt-l-ilas, 1,3-dihidroksiprop-2-ilas, 1,3-dia-minprop-2-ilas, 3-hidroksi-2-(hidroksimetil)prop-l-ilas, 2-feniltioetilas, arba trimetilsililetilas.
[0069] Grupėje R, kuri turi MA matricą ryšys tarp šios MA matricos ir likusios R dalies paprastai gali būti sudaromas panaudojant tarpiklius, kurie gerai žinomi sudėtinių baltymų srityje, palygink, pavyzdžiui, J. H. Pazur, Adv. Carbohydr. Chem. Biochem., Vol 39,
[0070] (1980), 405-447; Y.C. Lee & R. T. Lee, "Glycoconjugates" , Vol. 4 Part B, 57-83, Ed. Horowitz, Academic Press, N. Y. (1982); ir G. Magnusson, FEMS Symposium, 215-228 (1986). Šiame kontekste, terminas "tarpiklis" reiškia molekulės grupę, kuri jungia aktyviają medžiagą su nešikliu. Tarpiklio molekulė sukonstruota taip, kad turėtų dvi skirtingas funkcines grupes, kurių kiekviena specifiškai reaguoja su kita funkcine grupe, o tarp šių dviejų funkcinių grupių yra linijinė grupė. Prijungus aktyviąją medžiagą prie nešiklio per tarpikli,, akty-vioji medžiaga pasidaro labiau prieinama, pvz., H. pylori adhezinėms medžiagoms ar kolonizavimo faktorių antigenams.
[0071] Tarpiklis gali būti apibrėžtas kaip (W)v-S'-P', kur S' yra C[ 24alkilo, C2 24alkenilo, Cj^alkilarilo, arilC1.24alkilarilo, C, ^alkilarilCj 24alkilo grupė, kurios gali būti pertrauktos karbonilo, tiokarbonilo, oksikarbonilo, karboniloksi, karbonilamino, aminokarbonilo, azo-, okso-, arba tiogrupėmis; arilo grupė, ariloksi, Cj.^-alkoksilo, polietilenglikolio grupė, steroidinė grupė, sfingoidinė grupė; visos grupės gali turėti karboksilo, C, _4alkilkarbonilo, amido, hidroksilo, alkoksi, ariloksi, fenoksi pakaitą;
[0072] P' yra NH-C (S) , NH-C(O), C(0), NH, C (S), C(0)0, (O)CO, SO, S02, SO,, S04, POj, P04 ;
[0073] W yra NH-C(S), NH-C(O), C(0), C(S), C(0)0, (0)C0, SO, S02, S03, SO,,, P02, P03, P04, su sąlyga, kad tai Zx, Z2, Z ą , Z7, Zn arba Zlb yra CH2 tai W negali būti P02, su sąlyga, kad kai Zx, Z2, Z4, Z7, Zu arba Z16 yra 0 ar S, tai W negali būti (O)CO, S04, ar P04, ir su sąlyga, kad kai Z;, Z7, ZĄ, Z,, Z,, arba Z-,, yra NH, tai W negali būti NH-C (S), NH-C (0) , (0)C0, (0)C0, S04 ar P0<, ir v yra sveikas skaičius 0 arba 1.
[0074] Cukraus grupės atomas, kuris jungia su tarpikliu, pasirenkamas tarp -0-, -S-, -NH-, CH2-, geriau -0-.
[0075] Junginiuose, apršomuose formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, įvairios R grupės, turinčios MA matricą, gali pačios turėti tarpikli ir ryšį. Būdingais ir įpras-tiniais sujungimo būdais yra sujungiamas per matricas, turinčias aminogrupes arba ketogrupes. Tokie sujungimai tarp tarpiklio ir matricos gali turėti šias bendras stru ktūras:
[0076] kur atomai, pažymėti ryškesniu ir kursyviniu šriftu, priklauso duotajai matricai.
[0077] Struktūrų, aprašomų formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, skaičius ant kiekvieno matricos vieneto gali būti mono- ar multivalentinis ir gali kisti nuo 1 iki 10000, priklausomai nuo matricos prigimties.
[0078] Žemiau pateiktas neapriboj antis tarpiklių pavyzdžių, tinkančių tarp Q ir likusios R dalies, sąrašas:
[0079]
[0080] Sąrašuose, pateiktuose aukščiau ir žemiau, atomai, pažymėti storesniu ir kursyviniu šriftu, priklauso atitinkamai matricai. Vertikali vingiuota linija kairiajame ir dešiniajame tarpiklio, pateikto aukščiau, galuose, žymi, kad galuose yra ryšiai. Tarp junginių, aprašomų formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If ir turinčių matricinę dali,, galima paminėti šiuos:
[0081]
[0082] tai reiškia mono-, di-, tri- arba oligosacharidas, kaip paminėta tekste, ir m' yra sveikas skaičius 0-5, o p yra sveikas skaičius 0-13.
[0083] Kai aukščiau pateiktos matricos iliustruojamos BSA, HSA ir poliakrilamido (PAA), jų vietoje gali būti bet kuris proteinas ar peptidas arba kita matrica, pažymėta tekste.
[0084] Būdingais naudingų junginių, aprašomų formulėmis Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If, pavyzdžiais yra šie:
[0085] Fucal-2Gaipi-O-oktadecilas
[0086] Fucal-2Gaipi-O- (C6bissulfidas)
[0087] Fucal-2Gaipi-0- (C10bissulf idas)
[0088] Fucal-2Gaipi-0- (Cfebissulfonas)
[0089] Fucal-2Gaipi-O- (C10bissulf onas)
[0090] Fucal-2Gaipi-O-(8-amino-3, 6-dioksaokt-l-ilas)
[0091] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-0-propilas
[0092] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-O-izopropilas
[0093] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcpl-O-butilas
[0094] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcpl-0-tert.butilas
[0095] Fucal-2Galpl-3GlcNAcPl-O-heksilas
[0096] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-O-oktilas
[0097] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcpl-O-decilas
[0098] Fucal-2Galpl-3GlcNAcPl-O-tetradecilas
[0099] Fucal - 2Gal(3l - 3GlcNAcPl-0-oktadecilas
[0100] Fucal-2Gaipi-3GlcNAcP-l-0- (C6bissulfidas) Fucal-2Gaip1-3GlcNAcP~1-0- (C6bissulf onas) Fucal-2Gaipi-3GlcNAcP-l-0-(8-amino-3,6-dioksaokt-l-ilas)
[0101] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-0-propilas
[0102] Fucal-2Galpl-3GlcPl-0-izopropilas
[0103] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-O-butilas
[0104] Fucal-2Gaipi-3Glcpi-0-tert.butilas
[0105] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-0-heksilas
[0106] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-0-oktilas
[0107] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-O-tetradecilas
[0108] Fucal-2Galpi-3GlcPl-O-oktadecilas
[0109] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-0-(C6bissulfidas)
[0110] Fucal-2Gaipi-3GlcP~l-O-(C6bissulfonas)
[0111] kur
[0112] C6bissulfidas = 3-heksiltio-2-(heksiltio)metilprop-1-il-C10bissulfidas = 3-deciltio-2-(deciltio)metilprop-l-il-Cębissulfonas = 3-heksilsulfonil-2-(heksilsulfonil)metilprop-l-il-Cį obissu1fonas = 3-decilsulfonil-2-(decilsulfonil)metilprop-l-il-Toliau įdomūs šie junginiai:
[0113] Fucal-4GlcNAcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fucal-4GlcNAcPl-O tetradecilas
[0114] Fucal-6Gal(3l-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-tarpiklis 1-BSA
[0115] Fucal-2Gaipi-tarpiklis 5-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-O tetradecilas
[0116] Fucal-2Galpl-3GlcNAcPl-tarpiklis 5-poliakrilamidas Fucal-2Galpi-3GlcNAcPl-tarpiklis 4-BSA Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-tarpiklis 4-HSA Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-3GlcNAcpl-tarpiklis 1-HSA Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-tarpi klis 1-BSA Fucal-2Galpl-3GlcNAcp1-0-tetradecilas
[0117] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiklis 1-HSA
[0118] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiklis 1-BSA
[0119] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiklis 4-HSA
[0120] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiki is 4-BSA
[0121] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiklis-5-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcPl-tarpiklis 1-HSA Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)Glcpi-tarpikiis 1-BSA Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcPl-tarpiklis 4-HSA Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcPl-tarpiklis 4-BSA Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcPl-tarpiklis 2-oliakrilamidas Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcPl-tarpiklis 5-poliakrilamidas Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-tarpiklis 3-BSA Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fuaal-2Gaipi-3 (Fuaal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-tarpiklis 5-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-O-tetradecilas Fucal-2Gaipi-4GlcPl-tarpiklis 1-BSA
[0122] Fucal-2Gaipi-3GlcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas Fucal-2Gaipi-4GIcP1-0-tetradecilas
[0123] Galpl-4(Fucal-3)GlcNAcpl-tarpiklis 1-BSA Gaipi-4(Fucal-3)GlcNAcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas Gaipi-4(Fucal-3)GlcNAcPl-O-tetradecilas Fucal- 2GalPl - 3GlcNAcPl- 3Gaipi- tarpiklis 3- BSA Fucal- 2Gaipi- 3GlcNAc( 3l- 3Galpl- tarpiklis 3- HSA Fucal- 2Galpl- 3GlcNAcpi- 3Gaipi- tarpiklis 5- poliakrilamidas Fucal- 2Gaipi- 3GlcNAcPl- 3Gaipi- tarpiklis 1- HSA Fucal- 2Gaipi- 3GlcNAcPl- 3Gaipi- tarpiklis 5- BSA Fucal- 2Galpl- 3GlcNAcPl- 3Galpl- tarpiklis 4- HSA Fucotl- 2Gaipi- 3GlcNAcpi- 3Gaipi- tarpiklis 4- BSA Fucal- 2Gaipi- 3GlcNAcPl- 3Gaipi- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2Gaipi- 3GlcNAcPl- 3Gaipi- 0- tetradecilas GalNAaal- 3 ( Fuoal- 2) 3Gaipi- 3 ( E\ ical- 4) GlcNAcPl- 3Gaipi- tarpiklis 3- BSA GalNAcal- 3( Fucal- 2) 3Galpl- 3( Fucal- 4) GlcNAcpl- 3Galpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas GalNAoal- 3 ( Fucal- 2) 3Galpl- 3 ( Fucxxl- 4) GlcNAcPl- 3Galpl- 0- tetradecilas Fucal- 2Gaipi- 4( Fucal- 3) GlcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2Gaipi- 4( Fucal- 3) GlcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2Gaipi- 4( Fucal- 3) GlcPl- O- tetradecilas Fucal- 2( 3- O- metil) Gaipi- O- tetradecilas Fucal- 2( 3- O- metil) Gaipi- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- O- metil) Galpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- O- alil) Gaipi- tarpiklis 1- BSA
[0124] Fucal- 2 ( 3- O- alil) Galpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2 ( 3- O- alil) Gaipi- O- tetradecilas
[0125] Fucal- 2( 3- O- propil) Gaipi- tarpiklis 1- HSA Fucal- 2( 3- O- propil) Gaipi- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- O- propil) Gaipi- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- O- propil) Gaipi- tarpiklis 4- HSA Fucal- 2( 3- O- propil) Gaipi- tarpiklis 4- BSA Fucal- 2( 3- O- propil) Gaipi- tarpiklis 5- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- O- butil) Gaipi- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- O- butil) Gaipi- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- O- butil) Gaipi- O- tetradecilas Fucal- 2( 3- O- metil) Gaipi- 3GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- O- metil) Galpl- 3GlcNAcpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- O- metil) Gaipi- 3GlcNAcPl- 0- tetrdecilas Fucal- 2( 3- O- alil) Gaipi- 3GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- O- alil) Gaipi- 3GlcNAcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- O- alil) Gaipi- 3GlcNAcPl- 0- tetradecilas Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Galpl- 3GlcNAcPl- tarpiklis 1- HSA Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Gaipi- 3GlcNAcpi- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Gaipi- 3GlcNAcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- propil) Galpl- 3GlcNAcPl- tarpiklis 4- HSA Fucal- 2( 3- 0- propil) Gaipi- 3GlcNAcpl- tarpiklis 4- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Gaipi- 3GlcNAcpl- tarpiklis 5- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 3GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- butil) Gaipi- 3GlcNAcpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 3GleNAcPl- 0- tetradecilas Fucal- 2( 3- 0- propil) Gaipi- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- tarpiklis 1- HSA Fucal- 2 ( 3- O- propil) Gaipi- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- prcpil) Gaipi- 3 ( E\ ical- 4) GlcNAcpi- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Gaipi- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- tarpiklis 4- HSA Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Gaipi- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- tarpiklis 4- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- propil) Gaipi- 3 ( Fucal- 4) GlcNAcPl- tarpiklis 5- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- metil) Gaipi- 4GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- metil) Gaipi- 4GlcNAcpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- metil) Gaipi- 4GlcNAcpl- 0- tetradecilas Fucal- 2 ( 3- 0- alil) Gaipi- 4GlcNAcpl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- 0- alil) Gaipi- 4GlcNAcpl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- alil) Gaipi- 4GlcNAcPl- 0- tetradecilas Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 4GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- butil) Galpl- 4GlcNAcpi- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 4GlcNAcPl- 0- tetradecilas Fucal- 2 ( 3- 0- metil) Gaipi- 3GlcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- metil) Gaipi- 3GlcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- metil) Gaipi- 3Glcpi- 0- tetradecilas Fucal- 2 ( 3- 0- alil) Gaipi- 3GlcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2 ( 3- 0- alil) Gaipi- 3GlcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2 ( 3- 0- alil) Gaipi- 3Glc3l- 0- tetradecilas Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 3GlcPl- tarpiklis 1- BSA Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 3GlcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2( 3- 0- butil) Gaipi- 3GlcPl- 0- tetradecilas Fucal- 2Galpi- 4GlcNAcPl- tarpiklis 1- BSA
[0126] Fucal- 2Gaipi- 4GlcNAcPl- tarpiklis 2- poliakrilamidas Fucal- 2Gaipi- 4GlcNAcPl- 0- tetradecilas
[0127] Galal- 3( Fucal- 2) Gaipi- tarpiklis 1- BSA
[0128] Galal-3(Fucal-2)Gaipi-tarpiklis 2-poliakrilamidas Galal-3(Fucal-2)Galpl-O-tetradecilas
[0129] GalNAcal-3 (Fucal-2) Gaipi-4GlcPl-tarpiklis 1-BSA GalNAcal-3 (Fucal-2)Gaipi-4GlcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas GalNAcal-3(Fucal-2)Gaipi-4GlcPl-0-tetradecilas Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-4GlcPl-tarpiklis 1-BSA Gaipi-3 (Fucal-4 )GlcNAcpi-3Gaipi-4Glcpi-tarpiklis 2-poliakrilamidas Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Gaipi-4GlcPl-0-tetradecilas Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-tarpiklis 1-BSA Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-tarpiklis 2-poliakrilamidas Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-O-tetradecilas
[0130] Šioje paraiškoje sąraše, pateiktame aukščiau, konkretūs junginiai ar jų dalys gali būti pavadinti ar pateikti glaustoje formoje, pagal glikoproteinų, glikopeptidų ir peptidoglikanų nomenklatūros rekomendacijas, pasiūlytas Tarptautinės grynosios ir taikomosios chemijos bei Tarptautinės biochemijos sąjungos Jungtinės komisijos dėl biocheminės nomenklatūros (palygink Pure & Applied Chem., Vol. 60, Nr. 9, pp 1389-1988).
[0131] Kitu aspektu išradimas susijęs su farmacine kompozicija, turinčia jungini,, pagal formules Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If kaip apibrėžta aukščiau, ar jų mišinį su bent vienu antiopiniu medikamentu arba bent vienu antibakteriniu junginiu ar jų mišiniu, o taip pat su farmaciškai priimtinu nešikliu.
[0132] Terminas "antiopinis medikamentas" reiškia medžiagą ar kompoziciją, kuri gali sumažinti arba dalyvauti suma-žinant opų susidarymą virškinimo trakte, ypač opų susi-darymą skrandyje ir dvylikapirštėje žarnoje. Farmacinė kompozicija pagal šį išradimą, turinti tokias medžiagas ar kompozicijas, yra potencialiai pranašesnė, kadangi gali duoti dvigubą efektą: iš vienos pusės mažina opų susidarymą, o iš kitos pusės kartu mažina skrandžio užkrėtimo H. pylori laipsnį, neleisdama bakterijoms prilipti ar mažindama jų lipnumą prie skrandžio ir dvylikapirštės žarnos gleivinės, kas toliau gerina opaligės gydymą. Tinkamais antiopiniais medikamentais yra skrandžio sekreciją slopinantys junginiai (pirmiau-sia rūgšties sekreciją slopinantys junginiai) ir antacidai.
[0133] Pagal labiau priimtiną šio išradimo panaudojimo aspektą paruošta farmacinė kompozicija pritaikoma įvesti kartu su preparatu, paprastai naudojamu gydant gastritą ar opaligę, tokiu kaip preparatai, turintys antiopinius ar antigastritinius medikamentus, pvz., iš skrandžio se-kreciją slopinančių junginių tarpo, kaip antai: ome-prazolis, cimetidinas, ranitidinas, lansoprazolis, pan-toprazolis, sukralfatas, famotidinas ar nizatidinas, arba antacidai, kaip antai: magnio hidroksidas, aliuminio hidroksidas, kalcio karbonatas, natrio karbonatas, natrio hidrokarbonatas, simetikonas arba aliuminio magnio hidroksidas ar jo hidratas (toks kaip monohidratas, žinomas kaip magaldratas) .
[0134] Pagal kitą labiau priimtiną šio išradimo panaudojimo aspektą paruošta farmacinė kompozicija pritaikoma i,vesti kartu su preparatu, naudojamu gydymo kursuose su antikabteriniu preparartu, tokiu kaip antibakteriniai preparatai, pateikti aukščiau, konkrečiai preparatai, turintys (3 laktaminių antibiotikų, tokių kaip amoksi-cilinas, ampicilinas, cefalotinas, cefakloras ar cefik-simas; arba makrolidų, kaip antai: eritromicinas ar klaritromicinas; arba tetraciklinų, kaip antai: tetra-ciklinas ar doksiciklinas; arba aminoglikozidų, kaip antai: gentamicinas, kanamicinas ar amikacinas; arba chinolonų, kaip antai: norfloksacinas, ciprofloksacinas ar enoksacinas; arba kitų medžiagų, kaip antai: metro-nidazolis, nitrofurantoinas ar chloramfenikolis; arba preparatų, turinčių bismuto druskų, tokių kaip bismuto subcitratas, bismuto subsalicilatas, bismuto subkar-bonatas, bismuto subnitratas ar bismuto subgalatas.
[0135] Dar kitu aspektu išradimas susijęs su visais naujais junginiais, kurie aprašomi aukščiau apibrėžtomis Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If formulėmis.
[0136] Junginiai, aprašomi Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If formulėmis, gali būti pagaminti pagal kelis bendrus būdus, panaudojant monosacharidus ar oligosacharidus kaip pradines medžiagas. Funkcinių grupių trans-formacijos gali būti atliktos prieš arba po gliko-zidinių jungčių suformavimo. Kad būtų transformuojamos funkcinės grupės tam tikrose vietose, pasirinktinai gali tekti vykdyti reakcijas, kurios specifinės tam tikroms vietoms, arba panaudoti blokavimą su blokuo-jančiomis grupėmis. Blokuojančios grupės gali būti pašalintos arba gali sudaryti dali, aptariamo junginio.
[0137] Šio išradimo junginiai gali būti gauti, pavyzdžiui, pagal schemą pateiktą žemiau. Nors šioje schemoje gali būti parodyti konkretūs pakaitai ar konfigūracija, reikia ją suvokti su atitinkamu bendrumo laipsniu, įvairios grupės gali įgyti reikšmes iš pilno diapazono, kaip apibrėžta bendrose Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If formulėse.
[0138]
[0139] Pirmoje stadijoje monosacharidas, pvz., L-fukozė, D-ga-laktozė, D-gliukozė, 2-dezoksi-2-ftalimid-D-gliukozė, 2-dezoksi-2-ftalimid-D-galaktozė, D-manozė, paverčiamas glikozidu, su aglikonais (Ra) pvz., SEt, SPh, OTMSEt, O-alilas ar OBn (žinomi aglikonai šioje srityje), kad gautų Ra-glikozidini, darini, taip, kad ši, Ra-glikozidą būtų galima transformuoti i, glikozido donorą aktyvuojant anomerini centrą. Ši, Ra-glikozidą galima pa-ruošti taip: aukščiau aprašytas monosacharidas per-O-acilinamas su acetanhidridu piridine arba su acetanhidridu-natrio acetatu arba su benzoilo chloridu piridine. Per-O-acilintas monosacharidas veikiamas su, pvz., vandenilio bromidu ar vandenilio chloridu tin-kamame tirpiklyje, pavyzdžiui, acto rūgštyje ar dichlormetane, kad susidarytų per-O-acilinto glikozido bromidas ar chloridas (pvz., apie O-acilinimą ir glikozidų halogenidų sintezę žr. M. L. Wolfrom ir A. Thompson, Methods in Carbohydrate Chemistry, Vol. 2, 211-215, red. R.I.Whistler ir M.L. Wolfrom, Academic Press, New York, 1963, G. Hewit ir G. Fletcher Jr., ten pat, 226-228, ir R.U.Lemieux, ten pat, 223-224). Aglikonas (Ra) prijungiamas prie monosacharido rea-guojant tinkamam tioalkoholiui ar alkoholiui, pvz., HSEt, HSPh, HSPh, HOTMSEt, HO-alilas ar HOBn, su per-O-acilintu monosacharidu, panaudojant Liuiso rūgšti,, kaip antai boro trifluorido eteris (žr. pvz., R.J. Ferrier ir R.H. Furneaux, Carbohydr. Res. 52(1976), 63-68, J. Dahmen, T. Frejd, G. Gronberg, T. Lave, G. Magnusson, ir G. Noori, Carbohydr. Res. 116(1983), 303-307), ar trimetilsililo trifluormetansulfonatas (žr. T. Oga-wa, K. Beppu, S. Nakabayshi, Carbohydr. Res. 93 (1981), C6-C9), kaip promotorius. Reakcija vykdoma tinkamuose tirpikliuose, tokiuose kaip chloroformas, dichlor-metanas ir/arba toluolas. Kai aptariamas monosacharido darinys yra per-O-acilintas glikozido bromidas ar chloridas, gali būti panaudoti tokie promotoriai, kaip sidabro trifluormetansulfonatas ar gyvsidabrio(II) druskos (žr. pvz. , H. Paulsen, Angew, Chem. Int. Ed. Engi. 21 (1982), 155-173), ir reakcijos vykdomos tinkamuose tirpikliuose, kaip antai dichlormetane ir/arba toluole.
[0140] Monosacharido Ra-glikozidai gaunami po dez-O-acilinimo, panaudojant natrio metoksidą (žr. pvz., Thompson, M.L. Wolfrom, ir E. Pascu, Methods in Carbohydrate Chemistry, Vol . 2, 215-220, red. R.L. Whistler ir M.L. Wolfrom, Academic Press, New York, 1963) metanolyje arba metanolyje, turinčiame papildomų tirpiklių, kaip antai dichlormetano ar tetrahidrofurano.
[0141] Antroje stadijoje monosacharido Ra-glikozidas toliau modifikuojamas. Įvedamos naujos funkcinės grupės (Rb) , kurios sudarys dali, galutinio produkto arba veiks kaip blokuotės tolesniuose glikozilinimo žingsniuose. Funk-cinių grupių transformacijų pavyzdžiai yra: OH-grupes i, eterius ar esterius (žr. pvz., Protective Groups in Organic Synthesis red. T.W. Greene ir P.G.M. Wuts, John Wiley & Sons INC., New York, 1991), OH-grupes i, karbo-natus (žr. pvz., J.March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms, ir Structure, 347, 3-čias leidimas, John Wiley & Sons, New York, 1985, ir ten esančias nuorodas), redukcinis OH-grupių pašalinimas per haloge-nidus, sulfonatus ar kitais keliais (žr. pvz., J.March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms and Structure, 389-392, 394, 3-čias leidimas, John Wiley & Sons, New York, 1985, ir ten esančias nuorodas ir H.H. Baer, Pure Appl. Chem. 61( 7) (1989), 1217-1234, ir ten esančias nuorodas), OH-grupes i, halogenus (žr. pvz., J. March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms, and Structure, 381-286, 3-čias leidimas, John Wiley & Sons, New York, 1985, ir ten esančias nuorodas), OH-grupes i azidogrupes (žr. pvz., J. March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms, and Structure, 380, 3-čias leidimas, John Wiley & Sons, New York, 1985, ir ten esančias nuorodas, ir H.H. Baer, Pure Appl. Chem. 61( 7) (1989), 1217-1234, ir ten esan-čias nuorodas) , OH-grupes i, aminogrupes per azidus ar kitais keliais (žr. pvz., J. March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms, and Structure, 798-800, 1106, 3-čias leidimas., John Wiley & Sons, New York, 1985 ir ten esančias nuorodas, ir H.H. Baer, Pure Appl. Chem. 61( 7) (1989), 1217-1234, ir ten esančias nuorodas) OH-grupes i, ketogrupes (oksogrupes) (žr. pvz., J. March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms, and Structure, 1048-1120, 3-čias leidimas, John Wiley & Sons, New York, 1985, ir ten esančias nuorodas). OH-grupes į eksometileno darinius per ketogrupes ar kitais keliais (žr. pvz. J. March, Advanced Organic Chemistry - Reaction Mechanisms, and Structure, 400-404, 407, 845-854, 3-čias leidimas, John Wiley & Sons, New York, 1985, ir ten esančias nuorodas), OH-grupes i, alkilų grupes per eksometileno darinius ir vėlesnį hidrinimą arba per kitus kelius (žr. pvz., H. O. House, Modern Synthetic Reactions, 1-130, 2-as leidimas, W.A. Benjamin, Inc., Menlo Park. C.A., 1972, ir ten esančias nuorodas, arba J. Yoshimu-ra, Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 42 (1984), 69-134), ir OH grupių pakeitimas heterociklinėmis grupėmis per skirtingus kelius (žr. pvz., A. R. Katrizky, Handbook of Heterocyclic Chemistry, Pergamon Press, Oxford, 1985) .
[0142] Trečioje stadijoje atliekama Ra-glikozidų, kurie turi aprašytų aukščiau funkcinių grupių (Rb) (blokuojančios grupės, žinomos šioje srityje) pakaitus, kondensacij a. O-glikozidinio ryšio atveju: vienas Ra-glikozido darinys transformuojamas i, glikozilo donorą, aktyvuijant jo anomerini, centrą, ir veikiamas kitu Ra-glikozidu, kuris buvo transformuotas i, glikozilo akceptorių, pašalinant vieną ar kelias blokuotes (žr. pvz., H. Paulsen, Angew. Chem. Int. Ed. Engi. 21 (1982), 155-173, R.R. Schmidt,
[0143] Angew, Chem. Int. Ed. Engi. 25 (1986), 212-235, P. Fū-gedi, P. J. Garegg, H. Lonn, ir T. Norberg, Glycoconj. J. 4
[0144] (1987),97-108, Protective Groups in Organic Synthesis, red., T. W. Greene ir P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991). Apie C-glikozidinius ryšius žr., R. R. Smidth, ir G. Effenberger, Liebigs Ann. Chem.
[0145] (1987), 825-831, S. Czernecki, ir G. Ville, kompozit medžiag (1989), 610-612, R. Preuss, ir R. R. Schmidt Carbohydr. Chem. 10( 5) (1992), 887-900, O. Martin, ir W. Lai, J. Org. Chem 58 (1993), 176-185, arba C. R. Ber-tozzi, P. D. Hoeprich, Jr., ir M.D. Bednarski, J. Org. Chem 57 (1992), 6092-6094. Apie S-glikozidinius ryšius žr., pvz., L-X Wang, N. Sakairi, ir H. Kuzuhars, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 (1990), 1677-1982, arba M. Blanc-Meusser, L. Vigne, H. Driguez, J. Lehman, J. Streck, ir K. Urbahns, Carbohydr. Res. 224 (1982), 59-71. Tolimesni glikozidiniai ryšiai gali būti įvesti pakartojant trečią žingsni,.
[0146] Ketvirtojoje stadijoje įvedami pakaitai (Rc) redukuo-jančiame gale. Rc apibrėžiamas kaip (Z!-Z16)-R, kur R ir Zt-Z16 apibrėžimai duoti junginiuose Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If. Terminas "(Z^Z^-R" turi būti interpretuojamas kaip Zį- R, Z2-R, Z3-R, ... Z16-R. Aktyvuojant oligosacharido Ra-glikozido darinį, gautą 3 žingsnyje, redukuo-jančio galo anomeriniame centre ir veikiant su tinkamu nukleofilu gaunami 0-, C-, S- ar N- glikozidiniai dariniai, atitinkamai. Jei reikia, galutinis produktas gaunamas pašalinus blokuojančias grupes. Kai išradimo junginys yra junginyje su tam tikra matrica, tai Rc-glikozido darinys toliau transformuojamas įvairiais keliais į galutinį produktą (žr. pvz., Y. G. Lee, ir R. T. Lee, Glycoconjugates, 121-164, redaguota H. J. Allen, ir E. C. Kisailus, Dekker, New York, 1992, R. Roy, F. D. Tropper, ir A. Romanowska, J. Soc. Chem. Commun.
[0147] (1992), 1611-1613, arba C. P. Sotwell ir Y. C. Lee, Adv. Carbohydr. Chem. Biochem., Vol. 37 (1980), 225-281). Kopolimerizacijos reakcijos ruošiant kopolimerus iš akrilamido ir mono-, di-, tri- ar oligosacharidų gliko-zidų su ar be tarpiklio pagal žinomus būdus, pa-vyzdžiui, aprašytus E. Kallin, H. Lonn, T. Norberg ir M. Elofsson, J. Carbohydr. Chemistry S (4), 597-611
[0148] (1989) arba M. Andersso ir S. Oscarsson, Bioconjugate Chemistry, vol. 4 (3), 246-247 (1993) . Pagal bendrą strategiją ruošiant šiuos junginius prie angliavan-denilio buvo prijungiama olefininė grupė ir tada šis darinys buvo kopolimerizuoj amas su akrilamidu. Olefinė grupė buvo įstatoma i, angliavandeni, arba kaip alilgli-kozidas ankstyvoje stadijoje akriloilinant mono-, di-, tri- ar oligosacharidų darinių amino funkcines grupes arba kitais žinomais būdais.
[0149] Kaip pažymėta aukščiau farmaciniai preparatai, turintys junginius, aprašomus bendromis Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If formulėmis, sudaro kitą išradimo aspektą.
[0150] Šio išradimo junginiai gali būti skirti bendram ar vietiniam organizmo poveikiui ir labiau priimtini jų įvedimo būdai yra oralinis, injekcijų, rektalinis, per odą, infuzinis ar inhaliacinis, vartojami kaip farmaciniai preparatai, turintys veikliuosius ingre-dientus pradinių junginių ar jų farmaciškai priimtinų druskų pavidale kartu su farmaciškai priimtinu nešik-liu, kuris gali būti kieto, pusiaukieto ar skysto būvio arba praryjama kapsulė, ir tokie preparatai sudaro kitą išradimo aspektą. Farmaciškai priimtini nešikliai, žinoma, turi būti pakankamai didelio grynumo ir pakankamai mažo toksiškumo, kad tiktų įvesti žmonėms ir gyvūnams, kuriuos reikia gydyti. Junginiai taip pat gali būti vartojami be nešiklių. Kaip pavyzdžiai farmacinių preparatų gali būti paminėtos tabletės, kapsulės, dražetės, tirpalai, lašeliai, kaip lašeliai į nosį, aerozoliai inhaliacijoms, purkštuvas į nosį, liposomos ir kt. Paprastai veiklioji medžiaga turi
[0151] preparato tarp 0,01 ir 99% pagal svori,, pvz. , tarp 0,05 ir 20% pagal svori, preparatuose, skirtuose injekcijoms ir tarp 0,1 ir 50% pagal svori, preparatuose, skirtuose oraliniuam vartojimui.
[0152] Geriau, kai preparatai yra dozuoti, ar tai būtų vienos dozės preparatai ar kelių dozių preparatai.
[0153] Gaminant dozuotus farmacinius preparatus, skirtus oraliniam vartojimui ir turinčius išradimo jungini,, veiklusis ingredientas gali būti sumaišomas su įprastai naudojamais kietais dulkių pavidalo nešikliais, pvz., laktoze, sacharoze, sorbitu, manitu, krakmolu, kaip antai: bulvių krakmolas, grūdinis krakmolas, amilopektinas, laminarijos milteliai ar citrusinės masės milteliai, celiuliozės dariniu arba želatina ir taip pat gali turėti tepalų, kaip magnio ar kalcio stearatas arba Carbowax® ar kitų polietilenglikolio vaškų, ir suslėgtas, kad suformuotų tabletes ar dražečių šerdi,. Jei reikalingos dražetės turinys gali būti padengtas, pvz., koncentruotais cukrų tirpalais, kurie gali turėti gumiarabiką, talką, ir/arba titano dioksidą, ar, kitu atveju, plėvelę formuojančiu reagentu, ištirpintu lakiuose organiniuose tirpikliuose ar organinių tirpik-lių mišiniuose. Į šiuos apvalkalus gali būti pridėti dažai, pvz., kad būtų galima atskirti skirtingos veikliosios medžiagos turinius. Ruošiant minkštas želatinines kapsules, sudarytas iš želatinos ir, pvz., glicerino bei plastifikato, arba panašiai padengtas kapsules, veiklioji medžiaga gali būti sumaišoma su Carbowax'~ arba tinkamais aliejais, pvz., sezamo, alyvų arba arachiso aliejus. Kietos želatinines kapsulės gali turėti veikliosios medžiagos granules su kietais dulkių pavidalo nešikliais, pvz., laktoze, sacharoze, sorbitu, manitu, krakmolais, kaip antai: bulvių krakmolas ar grūdinis krakmolas, ar amilopektinas, celiuliozės dariniais arba želatina ir taip pat gali turėti tepalų, kaip magnio stearatas arba stearino rūgštis.
[0154] Šio išradimo preparatai gali būti ruošiami taip, kad atpalaiduotų veikliąją medžiagą greitai, ištęstai ar po tam tikro laiko įvedus pacientui preparatą, pagal gerai žinomas procedūras.
[0155] Panaudojant kelis veikliųjų vaistų sluoksnius, atskir-tus lėtai tirpstančiais apvalkalais, gaunamos tabletės su ištęstu atpalaidavimu. Kitas tablečių, su ištęstu atpalaidavimu, gamybos būdas - tai sudalinti veikliosios medžiagos dozę i, granules su skirtingo storumo apvalkalais ir suslėgti granules i, tabletes kartu su nešikliu.
[0156] Veiklioji medžiaga taip pat gali būti įjungiama i, lėtai tirpstančias tabletes, padarytas, pvz., iš riebalinių ir vaškinių medžiagų ar tolygiai paskirstytos tabletės iš netirpios medžiagos, kaip antai fiziologiškai inertiškos plastikinės medžiagos.
[0157] Skysti preparatai, skirti vartoti orališkai, gali būti eliksyro, syrupo ar suspensijos pavidale, pvz., tir-palų, turinčių apytiksliai nuo 0,1% iki 20% pagal svori, veikliosios medžiagos, cukraus, o taip pat etanolio, vandens, glicerino, propilglikolio mišinio bei pasirinktinai kvepiančiųjų medžiagų, sacharino ir/arba kar-boksimetilceliuliozės, kaip disperguojančio agento. Preparatai papildomai gali turėti drėkinančių medžiagų, emulgatorių ir suspenduojančių junginių, konservantų ir saldinančių medžiagų.
[0158] Preparatai, skirti parenterialiniam įvedimui įšvirš-čiant, gali turėti aktyviosios medžiagos vandenini, tirpalą ar jo fiziologiškai priimtiną druską, pagei-dautina 0,5-20% koncentracijos ir taip pat pasirinktinai stabilizuojanti, agentą ir/arba buferinę medžiagą vandeniniame tirpale. Geriausia, kai dozuoti tirpalo vienetai uždaryti ampulėse.
[0159] Turimos ribotos žinios, apie junginius, kurie slopina Helicobacter pylori lipnumą prie gleivinės paviršiaus, ir kurie yra naudingi apsaugant ar gydant virškinimo trakto sutrikimus ir ligas, sukeltus ar skatintus Helicobacter pylori. Dėl šių ribotų žinių įvedamos veikliosios medžiagos dozės gali kisti plačiu mastu ir priklausyti nuo įvairių faktorių, pvz., infekcijos stiprumo, paciento amžiaus ir 1.1., ir gali tekti jas pritaikyti individualiai.
[0160] Labiau priimtina, kai farmacinės kompozicijos pagal išradimą turi nuo 1 mg iki apytiksliai 50 g, geriau nuo apytiksliai 10 mg iki apytiksliai 5 g veikliosios medžiagos per dieną ir gali būti sudalintos i, daug dozių.
[0161] Toliau išradimas iliustruojamas žemiau einančiais neapribojančiais pavyzdžiais.
[0162]
[0163] lH ir 13C BMR spektrai 1-6 pavyzdžiuose buvo užregistruoti su Varian Gemini 300 spektrometru ir su Varian Unity 400 MHz spektrometru. 1-6 pavyzdžiuose buvo panaudoti šie atraminiai signalai: CHC13, 5 7,25 (XH iš CDC13) ; CHC13, 5 77,9 (13C iš CDC13) ; (CH3)2CO, 5 2,24 ar CHD2OH 5 3,31 (XH iš D20) ; (CH3)2CO, 5 33,19 ar CHD2OH 5 51, 89 (13C iš D20) ; CHD2OH 6 3,31 (:H iš CD3OD) . L H ir 13C BMR spektrai visuose kituose pavyzdžiuose buvo registruojami prie 25°C CDC13 terpėje (naudojant tetrametilsilaną kaip H vidini, standartą, o CDC13 5 77,9 dėl 13C) . Visiems junginiams užregistruoti BMR spektrai atitiko postuluotas struktūras ir pateikti tik atrinkti duomenys. Masės spektrai, skirti nustatyti angliavandenių komponentų pakeitimo laipsni, prieš proteinus, buvo gauti su VG TOFSPEC tiesinės skriejimo trukmės masės spektrometru. FAB-MS buvo atliekamas su Nergman 1010L, su Iontech FAB patranka ir tioglicerolio matrica. Poliarizacijos plokštumos sukimas buvo matuo-jamas panaudojant Perkin Elmer 241 poliarimetrą. Plonasluoksnė chromatografija (TLC) buvo atliekama su Merk DC-Fertigplatten (Kiselgel 60 F254 0,25 mm) ir dėmės buvo vizualizuojamos UV arba apipurškiant 10% sieros rūgštimi ir po to pašildant arba apipurškiant fosfomolibdeno rūgštimi ar ninhidrinu n.butanolyje (0,5%). Kolonėlių chromatografijoje buvo naudojami silikagelis 60 (40-63 tan) ir Amicon Matrex® Silicia Si 0,35-0,70 m.
[0164] Atskyrimas buvo taip pat atliekamas su Chromatotron® sukamuoju TLC, panaudojant 1-2 mm silikagelio 60 PF254 sluoksnį su gipsu. Visos Biogel® P-2 kolonos buvo išplaunamos su 1% n.butanoliu dejonizuotame vandenyje, jei nepasakyta kitaip.
[0165] Metilo 2- acetamid- 2- dezoksi- 3- 0-a- L- fukopiranozil- p- D-gliukopiranozidas ( 4)
[0166] (i) Metilo 4, 6-0-benziliden-3-0-(tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil) -2-dezoksi-2-ftalimid-(3-D-gliukopiranozidas (2)
[0167] Trifluormetansulfoninė rūgštis (2 Įil 0,023 mmol) pridedama prie sumaišyto etilo 3-0-(tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi-2-ftalimid-l-tio-P-D-gliukopiranozido (1) (100 mg, 0,117 mmol), (paruoš-to pagal H. Lonn, Carbohydr. Res. 139 (1985), 105-113), metanolio (7 jjl, 0,175 mmol), N-jodsukcinimido (40 mg, 0,175 mmol) ir sutrintų molekulinių sietų (100 mg, 3 A) mišinio dichlormetano-dietilo eteryje (3 ml, 2:1) prie -30°C. Po 45 min, reakcijos mišinys nufiltruojamas per Celito sluoksni, i, vandenini, natrio hidrokarbonato ir natrio bisulfito tirpalą. Organinis sluoksnis atskirtas, praplautas vandeniniu natrio chloridu ir koncentruojamas. Kolonėlių chromatografijos (toluolas-eti lacetatas, 20:1) liekana davė amorfini, (2) (93 mg, 97%) , [ a] „-16,2° (c 1, 0, CHC13) .
[0168] H BMR duomenys (CDC1-,, 5): 7,80 iki 7, 0 (24H, benzilas ir ftaloilas), 5,29 (d, 1H, J 8,6 Hz, H-l), 4,84 iki 4,25 (5H, CH2Ph), 4,84 pls, 1H, H-l), 4,66 (dd, 1H, J 8,5 ir 10,3 Hz, H-3) , 4,48 iki 4,43 (m, 1H, H-3' ) , 4,35 (dd, 1H, J 8,6 ir 10,3 Hz, H-2), 4,08 (pldd, 1H, J 6,4 ir 13,0 Hz, H-5' ) , 3,91 iki 3,81 (2H) , 3,78 iki 3,66 (4H) , 3,51 iki 3,47 (1H), 3,48 (s, 3H, OCH3) , 0,90 (d, 3H,
[0169] C BMR duomenys (CDC1,, 5):168,0 (CO), 138,8 iki 123,0 (benzilas), 101,1 (CHPh), 99,7 (C-l ' ), 99,4 (C-l), 82,1, 79, 5, 78, 0, 75, 7, 75,5, 74, 6, 73,0, 72,5, 68, 6, 67,2 (C-51 ) , 66,1, 56,9 (OCH3) , 55,5(C-2), 16,3(CH3).
[0170] (ii) Metilo 2-acetamid-3-0-(2,3,4-tri-0-benzil-a-fukopiranozil) -4, 6-0-benziliden-2-dezoksi-(3-D-gliukopiranozidas (3)
[0171] Tirpalas, sudarytas iš (2) (1,13 g, 1,36 mmol) ir hidrazino hidrato (3,3 ml, 68 miriol) vandeniniame 59% etanolyje, virinamas su grįžtamuoju šaldymu 20 h, at-šaldomas ir koncentruojamas. Likutis acetilinamas acetanhidridu-piridinu (50 ml, 1:1) per naktį. Tirpalas sukoncentruojamas ir kolonėlių chromatografijos (heptanas-etilacetatas, 1:1 likutis davė neapdorotą (3), kuris buvo naudojamas tiesiog kitoje stadijoje.
[0172] XH BMR duomenys (CGC13, 5) : 7,50 iki 7, 23 (20H, benzilas), 5,71 (d, 1H, J 7,4,NH), 5,52 (s, 1H, CH2Ph) , 5,09 (d, 1H, H-1 1 ) , 4,85 iki 4,58 (6h, CH2Ph) , 4,82 (d, 1H, H-l), 4,37 (dd, 1H, J 4,6 ir 10,4 Hz, H-6), 4,28 (bt, 1H, H-3), 4,12 iki 4,05 (2H, H-2' ir H-5' ) , 3,95 (dd, 1H, J 2,6 ir 10,2 Hz, H-3'), 3,78 (bt, 1H, H-6), 3,63 (bs, 1H, H-4 ' ) , 3,60 (bt, 1H, H-4) , 3,53 (m, 1H, H-5), 3,48 (s, 3H, OCH3), 3,42 (ddd, 1H, J 7,2, 8,2 ir 9,5 Hz., H-2), 1,67 (s, 3H, NHAc) , 0,84 (d, 3H, CH3) .
[0173] 13C BMR duomenys (CDC13) , 8): 170,6 (CO) , 138,6 iki 126,2 (benzilas), 101,8 (C-l), 101,6 (CHPh), 98,4 (C-l'), 80,8 (C-4), 79,8 (C-3 ' ) , 77,6 (C-4 ' ) , 77,0 (C-2 ' ar C-5 ' ) , 75.1 (C-3), 74,9 (CH2Ph) , 72,5 (CH2Ph) , 68,8 (C-6), 66,9 (C-2' ar C-5'), 66,2 (C-5), 58,1 (C-2), 57,0 (OCH3) , 23.2 (NHAc), 16,3 (CH3) .
[0174] (iii) Metilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-a-L-fukopiranozil-p-D-gliukopiranozidas (4)
[0175] Tirpalas, sudarytas iš neapdoroto (3) (1,05 g) acto rūgštyje-etilo acetate-vandenyj e (9:5:1, 120 ml) hidro-genolizuo j amas prie 200 kPa 10% Pd/C (1 g) per naktį. Mišinys nufiltruojamas per Celio sluoksnį ir sukoncentruojamas. Kolonėlių chromatografijos (chloroformas-metanol is-vanduo, 65:35:6) likutis davė amorfini, (4)
[0176] (469 mg, 90% skaičiuojant nuo (2), [ a] D - 116, CT (c 1,0, vanduo).
[0177] H BMR duomenys (D^O, acetonas atramin. 8, ) : 4,99 (d, 1H, J 4,0 Hz, H-l'), 4,46 (d, 1H, J 8,7 Hz, H-l), 4,33 (bdd, 1H, H-51 ) , 3,98 iki 3,45 (9H), 3,51 (s, 3H, OCH,), 2,03 (s, 3H, NHAc) , 1,17 (d, 3H, CH,) .
[0178] 'c BMR duomenys (D20, acetonas atramin., 5)177,6 (CO) , 104,7 (C-l), 102,9 (C-l'), 83,5, 78,8, 74,7, 72,5, 71,6, 70,9, 69,9, 63,7, 60,0, 59,1 (C-2) , 25,2 (NHAc), 18, 1 (CH-5) .
[0179] 3, 3- Dimetilbutilo 2- acetamid- 2- dezoksi- 3- 0- a- L- fukopiranozil- p- D- gliukopiranozidas ( 7)
[0180] (i) 3,3-Dimetilbutilo 3-0-(2, 3, 4-tri-O-benzil-oc-fukopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi-2-ftalimid~P-D-gliukopiranozidas (5)
[0181] Trif luormetansulfoninė rūgštis (30 f.il 0,35 mmol) pridedama prie sumaišyto (1), 3,3-dimet i 1-bu tan-1-olio (317 Į.il, 2,62 mmol), N-jodsukcinimido (602 mg, 2,62 mmol) ir sutrintų molekulinių sietu (1,5 mg, 3 A) mišinio dichlormetano -dietilo eteryje (2:1, 45 ml) prie -30°C. Po 45 min, reakcijos mišinys buvo filtruojamas per Celito sluoksnį i, vandenini, natrio hidrokarbonato ir natrio bisulfido tirpalą. Organinis sluoksnis atskirtas, praplautas vandeniniu natrio chroridu ir koncentruojamas. Kolonėlių chromatografija (heptanasetilacetatas, 6:1) likutis davė amorfini (5) (1,42 g, 90%) , [ a] -22, 2 (c, 1, 0, CHC1,) .
[0182] LH BMR duomenys ( CDC13, 8) : 7, 80 iki 7, 0 ( 24H, benzilas ir ftaloilas) , 5, 57 ( s, 1H, CHPh) , 5, 35 ( d, 1H, J 8, 5 Hz, H- l), 4, 84 ( bs, 1H, H- l1), 4, 83 iki 4, 24 ( 5H, CH2Ph), 4, 65 ( dd, 1H, J 8, 3 ir 10, 3 Hz, H- 3) , 4, 34 ( dd, 1H, J 8, 5 ir 10, 4 Hz, H- 2), 4, 07 ( dd, 1H, J 5, 5 ir 10, 4 Hz, H- 5'), 3, 96 iki 3, 66 ( 7H, persiklojantis OCH2) , 3, 53 iki 3, 45 ( 2H, persiklojantis OCH2) , 1, 46 iki 1, 29 ( m, 2H, CH2C( CH3) 3), 0, 88 ( d, 3H, J 6, 4 Hz., CH3) , 0, 73 ( s, 9H, CH2C( CH3) 3).
[0183] UC BMR duomenys ( CDC13, 5) : 168, 0 ( CO), 138, 8 iki 123, 0 ( benzilas ir ftaloilas), 101, 1 ( CHPh), 99, 4 ( C- l'), 98, 9 ( C- l), 82, 1, 79, 5 76, 0 75, 7 ( C- 3) , 75, 6, 74, 6, 73, 0, 72, 6, 68, 7, 67, 3 ( OCH2) , 6, 72 ( C- 5), 66, 2, 55, 8 ( C- 2), 42, 4 ( CH2C( CH3) 3) , 30, 8 ( CH2C ( CH3) 3) , 29, 4 ( CH2C ( CH3) 3, 16, 3 ( CH3) .
[0184] ( ii) 3, 3- Dimetilbutilo 3- 0-( 2, 3, 4- tri- O- benzil- a- L-fukopiranozil) - 2- acetamid- 4, 6- 0- benziliden- 2- dezoksi-) 3-D- gliukopiranozidas ( 6)
[0185] Tirpalas, sudarytas iš ( 5) ( 1, 42 g, 1, 58 mmol) ir hidrazino hidrato ( 3, 9 ml, 79 mmol) vandeniniame 90% etanolyje ( 100 ml), virinamas su grįžtamuoju šaldytuvu 20 h, atšaldomas ir koncentruojamas. Likutis acetilinamas acetanhidridu- piridinu ( 50ml, 1:1) per naktį. Tirpalas sukoncentruojamas. Kolonėlių chromatografija
[0186] likutis davė amorfini, ( 6) ( 1, 16 g, 90%), [ a] D- 74, 7° ( c, 1, 0, CH3CI3) .
[0187] :H BMR duomenys ( CDC13, 8) : 7, 50 iki 7, 20 ( 20H, benzilas), 5, 63 ( d, 1H, J 7, 3 Hz, NH) , 5, 51 ( s, 1H, CH2Ph) , 5, 07 ( d, 1H, J 3, 1 Hz, H- l'), 4, 93 iki 4, 57 ( 6H, CH2Ph) , 4, 92 ( d, 1H, H- l), 4, 39 iki 4, 29 ( 2H, H- 6 ir H- 3), 4, 11 iki 4, 04 ( 2H, H- 2' ir H- 5'), 3, 98 iki 3, 85 ( 2H, H- 3' ir OCH2) , 3, 77 ( bt, 1H, H- 6), 3, 61 ( pls,
[0188] 1H, H-4'), 3,55 (bt, 1H, H-4), 3,59 iki 3,44 (2H, H-5 ir OCH2), 3,33 (pldd, 1H, H-2), 1,63 (s, 3H, OAc) , 1,56 iki 1,40 (rn, 2H, CH?C(CH3)3), 0,89 (s, 9H, CH2C (CH3), 0, 82 (d, 3H, CH3) .
[0189] 13C BMR duomenys (CDC13, 8): 170,4 (CO) , 138,6 iki 126,0 (benzilas), 101,6 (CHPh), 100,7 (C-l), 98,1 (C-l 1 ) , 80,9 (C-4), 79,8 (C-3'), 77,6 (C-4'), 77,0 (C-2' ar C-5'), 74,9 (C-3), 74,8 (CH2Ph) , 74,0 (CH2Ph) , 72,5 (CH2Ph) , 68,9 (OCH2 arba H-6) , 67,5 (OCH2 arba H-6) , 66.8 (C-51 ar C-2'), 66,2 (C-5'), 58,6 (C-2), 42,7 (CH2C(CH3)3) , 29,7 (CH2C(CH3)3) , 29,6 (C(CH3)3), 23,2 (NHAc) , 16,2 (CH3) .
[0190] (iii) 3,3-Dimetilbutilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-a-L-fukopiranozil-[3 -D-gliukopiranozidas (7)
[0191] Tirpalas, sudarytas iš junginio (6) (1,08 g, 1,33 mmol) acto rūgštyje:etilo acetate:vandenyj e, 9:5:1 (120ml), buvo hidrogenolizuojamas prie 200 kPa 10% Paladžiu ant medžio anglies (Pd/C) (1 g) per nakti,. Mišinys nufiltruojamas per Celito sluoksnį ir sukoncentruojamas. Kolonėlių chromatografijos (chloroformas-metanolis-vanduo, 100:30:3) likutis davė amorfini, (7)
[0192] (566 mg, 94%0, [ a]D-109, 7° (c, 1,0, vanduo).
[0193] *H BMR duomenys (D20, acetonas atramin., 8):4,99 (d, 1H, H-l ' )4,84 (s, 1H, CHPh), 4,34 (bdd, 1H, H-5'), 4,02 iki 3,43 (11H), 2,01 (s, 3H, NHAc), 1,57 iki 1,41 (m, 2H, CH2C(CH3)3), 1,17 (d, 3H, CH3) , 0,90 (s, 9H, C(CH3)3).
[0194] 13C BMR duomenys (D20, acetonas atramin., 5) :177,3 (CO), 103,6 (C-l), 102,8 (C-l'), 83,6, 78,8, 74,8, 72,5, 71, 6, 70, 9, 69, 8, 63, 7, 58, 1 (C-2), 44,9 (CHC(CH3)3), 31.9 (C (CH3) 3) , 31, 9 (C(CH3)3) , 25,2 (NHAc), 18,1 (CH3) .
[0195] (i) S-Azid-3,6-dioksaoktilo 3-O-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil) -4, 6-0-benziliden-2-dezoksi-2-ftalimid-f3-D-gliukopiranozidas (8)
[0196] Trifluormetansulfoninė rūgštis (24 |il, 0,27 mmol) pridedama prie sumaišyto (1) (1,15 g, 1,34 mmol), 8-azid-3, 6-dioksaoktan-l-olio (352 (J.1, 2,01 mmol) (paruoštas pagal P.H. Amvam-Zollo ir P. Sinai, Carbohydr. Res. 150
[0197] (1986), 199-212), N-jodsukcinimido (461 mg, 2,01 mmol) ir sutrintų molekulinių sietų (1,15 g, 3 A) mišinio dichlormetane-dietilo eteryje (30 ml, 2:1) prie -30°C. Po 1 h, reakcijos mišinys filtruojamas per Celito sluoksnį i, vandeninį natrio hidrokarbonato ir natrio bisulfito tirpalą. Organinis sluoksnis atskirtas, praplautas vandeniniu natrio chloridu ir sukoncentruojamas. Kolonėlių chromatografijos (heptanasetilacetatas, 2:1) likutis davė amorfini, (8) (1,03 g, 79%), [ a] d-2 1, 7° (c, 1,0, CHC13) .
[0198] :H BMR duomenys (CDC13, 5):7,80 iki 7,05 (24H, bzl, Phth), 5,59 (S, 1H, CHPh) , 5,44 (d, 1H, J 8,6 Hz, H-l), 4,83 (bs, 1H, H-l'), 4,83 iki 4,24 (5H CH2Ph) , 4,65 (dd, 1H, J 8,5 ir 10,3 Hz, H-3) , 4,45 iki 4,41 (1H, H-3' ) , 4,39 (dd, 1H, J 8,6 ir 10,3 Hz, H-2) , 4,09 (dd, 1H, J 6,4 ir 12,6 Hz, H-5' ) , 3,99 iki 3,83 (3H, persiklojantis OCH2) , 3,81 iki 3,68 (5H, persiklojantis OCH2) , 3,61 iki 3,30 (11H, persiklojantis OCH2 ir CH2N3) , 0,90 (d, 3H, J 6,4 Hz, CH3) .
[0199] 13C BMR duomenys (CDC13, 5): 169,0 (CO) , 138,9 iki 123,1 (Bzl, Phth), 101,1 (CH2Ph) , 99,4 (C-l'), 98,9 (C-l), 82, 1, 79, 6, 78, 0, 75, 6, 75, 5, 74, 7, 73, 1, 72, 6, 70,5
[0200] 70,4, 70,1, 69, 9 69, 1 68,7 67,2, 66,2, 55, 7 (C-2) , 50, 6 (CH2N3) , 16, 4 (CH3) .
[0201] (ii) 8-Azid-3, 6-dioksaoktilo 2-acetamid-3-0-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi-P-D-gliukopiranozidas (9)
[0202] Tirpalas, sudarytas iš (8) (633 mg, 0, 65 rnmol) ir hidrazino hidrato (1,6 ml, 33 mmol) vandeniniame 90% etanolyje (45 ml) , virinamas su grįžtamuoju šaldytuvu 24 h, atšaldomas ir koncentruojamas. Likutis acetilinamas acetanhidridu-piridinu (50ml, 1:1) per nakti,. Tirpalas sukoncentruojamas. Kolonėlių chromatografija (chloroformas-acetonas, 9:1) ir pakartotina chromatografija (etilacetatas-heptanas, 3:1) davė amorfini, (9), (440 mg, 77%), [ a]0-72, 6° (s, 1,0, CHC13) .
[0203] *H BMR duomenys (CDC13, 5) :7,50 iki 7,25 (20H, benzilas), 7,92 (d, 1H, J 5,9 Hz, NH), 5,51 (s, 1H, CHPh), 5,16 (d, 1H, J 3,5 Hz, H-l'), 4,93 (d, 1H, J 7,7, H-l), 4,95 iki 4,56 (6H, CH2Ph) , 4,34 (dd, 1H, J 4,9 ir 10,4 Hz, H-6) , 4,26 (bt, 1H, H-3), 4,12(pldd, 1H, H-5'), 4,06 (dd, 1H, J 3,6 ir 10,1 Hz, H-2 ' ) , 3,95 (dd, 1H, J 2,7 ir 10,1 Hz, H-3'), 3,90 (bt, 1H, H-6), 3,81 iki 3,45 (14H, persiklojantis OCH2) , 3,40 (m, 2H, CH2N3) , 1,74 (s, 3H, NHAc) , 0,84 (d, 3H, J 6, 4 Hz, CH3) .
[0204] 13C BMR duomenys (CDC13, 6): 170, 4 (CO) , 138,7 iki 126,1 (benzilas), 101,5 (CHPh), 101,2 (C-l), 97,8 (C-l*), 80,6 (C-4), 79,6 (C-3'), 77,7 (C-4'), 76,7 (C-2' ar C-5' ) , 74,9 (C-3), 74,6 (CH2Ph) , 73,7 (CH2Ph) , 72,2 (CH2Ph) , 70,6 (CH20), 70, 6 (CH20), 70,4 (CH20), 69,9 (CH20), 68, 8 (CH20), 68, 8 (H-6), 66,7 (C-2' ar C-5'), 66,2 (C-5), 57,8 (C-2), 50,6(CH2N3), 23, 2 (NHAc), 16,2 (CH3) .
[0205] (iii) 8-Amin-3,6-dioksaoktilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-a-L-fukopiranozil-3-D-gliukopiranozido acto rūgšties druska (10)
[0206] Tirpalas, sudarytas iš (9) (57 mg, 0,065 mmol), ištir-pinto rūgštyje-vandenyje (9:1, 30 ml) buvo hidrogenolizuojamas prie 200 kPa su 10% Pd/C (100 mg) per nakti,. Mišinys filtruojamas per Celito sluoksni, ir koncentruojamas. Kolonėlių chromatografija ant silikagelio (chloroformas-metanolis-vanduo, 4:4:1), ir po to ant Al203 (Merck, bazinis, 0, 063-0,200 mm, chloroformas-metanolis-vanduo, 4:4:1) davė amorfinį (10)
[0207] ?H BMR duomenys (D20, acetonas atramin., S):4,98 (d, 1H, J 4,0 Hz, H-l;) , 4,53 (d, 1H, J 8,6 Hz, H-l) , 4,32 (pldd, 1H, H-51 ) , 4,05 iki 3,42 (19H), 3,19 (m, 2H, CH2NH2), 2,01 (s, 3H, NHAc) , 1,88 (CH3COOH) , 1,14 (d, 3H, J 6, 6 Hz, CH3) .
[0208] 13C BMR duomenys (D20, acetonas atramin., 5): 184,2 (CH3COOH) , 103,8 (C-l), 102,8 (C-l'), 83, 3, 78,8, 74, 8, 72,6, 72,5, 72,4, 72, 0, 71,5, 70, 9, 69,8, 69, 4, 63,7, 58,1 (C-2), 42, (CH2NH2) , 2 6,3 (CH3COOH) , 25,2(NHAc), 25,2 (NHAc), 18,1 (CH3) .
[0209] (iv) Fucal-3GlcNAcPl-0-tarpiklis 1-BSA-junginys (11)
[0210] Tiofosgenas (67 Į.il, 0,0856 mmol) acetone (6 ml) sula-šinamas i, šaldomą ledu tirpalą, sudarytą iš (10) (120 mg, 0.214 mmol) ištirpintą vandenyje-etanolyje-0,1M fosfato buferyje pH 7 (1:1:1, 30 ml). Reakcijos metu pH palaikomas netoli 6-7 vandeniniu natrio hidroksidu (1 M) . Po 20 min mišinys ekstrahuojamas dietilo eteriu (30 ml), koncentruojamas iki 10 ml tūrio, ir sudedamas 1, tirpalą, sudarytą iš jaučio serumo albumino (695 mg, 10,7 mmol) vandeniniame natrio hidrokarbonate (15 ml, 0,1 M, pH 9,3) . Sudedant pH palaikomas apie 9 vandeniniu natrio šarmu (1M). Po 24 h iš reakcijos mišinio pašalinamos druskos ultrafiltruoj ant (Filtron, omegacell 150, 10 K) ir išdžiovinus šaldant, gautas (11) (672 mg). Substitucijos laipsnis buvo nustatytas analizuojant cukrus (žr. M.A. Jermyn, Anai, Chem. 68
[0211] (1975), 332-335) iki 15-18 mol disachridų/mol proteinų.
[0212] 2- Trimetilsililetilo 2- acetamid- 2- dezoksi- 4- 0- a- L- fukopiranozil- p- D- gliukopiranozidas ( 16)
[0213] (i) Trimetilsililetilo 3,6-di-0-benzoil-2-dezoksi-2-f talimid-|3-d-D-gliukopiranozidas (13)
[0214] 2-Trimetilsililetil-2-dezoksi-2-ftalimid- p- D-gliukopiranozidas (12) (1,64 g, 4,0 mmol) susintetintas pagal K. Jansson, S. Ahlfors, T. Frejd, J. Kilhberg, G. Magnusson, J. Dahmen, G. Noori ir K. Stenvall, J. Org. Chem. 53 (1988), 5629-5647) ištirpintas piridine-dichlormetane (3:1, 24 ml) ir atšaldytas iki -45°C. Per 30 minučių pridedamas benzoilchlorido (1060 ml, 9,1 mmol) ir piridino (900 ml) mišinys. Reakcija užbaigta po 3 va-landų ir pridėta metanolio (40 ml). Tirpikliai nu-garinti ir likutis garinamas kartu su toluolu 3 kartus. Likučio chromatografija (Si02, heptanas/etilacetatas 2:1—>1:1) davė gryną (13) (2,38 g, 96%). [ a] D20 + 69, 4°
[0215] LH BMR duomenys (CDC13, 5): d 7,3-8,2 (m, 14H, 2 O-benzilas, N-ftalamoilas) , 5,88 (dd, 1H, J 7,1, 8,3 Hz, H-3) , 5,46 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l), 4,79 (dABq, 1H, J 4,2, 12,4 Hz, H-6), 4,67 (dABq, 1H, J 1,9 11,7, Hz, H-6) , 4,45 (dd, 1H, J 8,4, 10,8 Hz, H-2), 3,8-4,1 (m, 3H, H-4, H-5, OCH2CH2), 3,57 (dt, 1H, J 7,2, 9,7 Hz, OCH2CH2) , 0,7-1,0 (m, 2H, CH2Si) , -0,15 (s, 6H, SiMe3) .
[0216] (ii) 2-Trimetilsililetilo 3, 6-di-0-benzoil-4-0-(2,3,4-tri-O-benzil-ot-L-fukopiranozil) -2-dezoksi-2-f talimid-p-D-gliukopiranozidas (15)
[0217] Junginys (13) ištirpintas dichlormetan-N,N-dimetilformamide (8 ml, 5:3) ir pridėti tetrabutilamonio bromidas (664 mg, 2,06 mmol) ir molekuliniai sietai (3 A, 4 g, aktyvuoti). Prie tioetilo 2, 3, 4-tri-0-benzil-l-tio-{3-L-fukopiranozido (14) (986 mg, 2,06 mmol) susintetinto pagal H. Lonn, Carbohydr. Res. 139 (1985), 105-113) dichlormetane (8 ml) tirpalo pridedamas bromas (122 ml, 2,37 mmol) dichlormetane (2 ml) . Po 15 min maišymo sulašintas cikloheksanas (distiliuotas) kol dingo bromo spalva. Šis tirpalas po to sudedamas i, aukščiau apra-šytą mišinį, turinti, (13) jungini,, ir maišomas 48 h. Mišinys filtruojamas pro Celitą, tirpikliai išgarinami ir likutis garinamas kartu su toluolu 3 kartus. Likučio kolonėlių chromatografija (heptanas/etilacetatas, 5:1—>1 :1) davė (15) (896 g, 85%), [ a] ™ + 14,6° (c 1,2, CH3CI3) .
[0218] ?H BMR duomenys (CDC13, 5):5,44 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l), 4,80 (d, 1H, J 3,6 Hz, H-l').
[0219] (iii) 2-Trimetilsililetilo 2-acetamid-2-dezoksi-4-0-( a-L-fukopiranozil) -(3-D-gliuokopiranozidas (16)
[0220] Junginys (15) (760 mg, 0,74 mmol) ištirpintas metanolyje (7 ml) ir pridėta natrio metoksido (220 ml, 2M metanolyje) . Tirpalas maišomas per nakti, kambario temperatūroje ir neutralizuotas Amberlitu IR-120 (H) . Nufiltravus ir išgarinus tirpiklius, gautas sirupas. Šis sirupas ištirpints acto rūgštyje (15 ml) ir pridėta 10% Pd/C (860 mg). Po 1,5 h hidrinimo (100 kPa), mišinys filtruojamas ir išgarinami tirpikliai. Gautas sirupas ištirpintas etanolyje (18 ml) ir pridėtas hidrazino hidratas. Tirpalas kaitinamas su grįžtamuoju šaldytuvu 3 h. Išgarinus tirpiklius ir 5 kartus išga-rinus kartu su etanoliu, gautas sirupas, kuris ištir-pintas metanolio-vandens mišinyje (5:1, 60 ml) . Pridedama acto anhidrido (5 ml) ir tirpalas maišomas 1,5 h. Tirpikliai išgarinami. Kolonėlių chromatografija (Si02, dichlormetanas/metanolis, 5:1) davė (16) (100 mg, 29%), [ a] d^-113,50 (c 0,7, H20) .
[0221] XH BMR duomenys (D20, 8): d 4,93 (d, 1H, J 3,66 Hz, H-l'), 4,52 (d, 1H, J 8,06 Hz, H-l).
[0222] Metilo 2- acetamid- 2- dezoksi- 6- 0-a- L- fukopiranozil-P- D-gliukopiranozidas ( 22)
[0223] (i) Etilo 2-dezoksi-2-f talimid-l-tio-fi-D-gliukopiranozidas (18)
[0224] Etilo 3,4,6-tri-0-acetil-2-dezoksi-2-ftalimid-l-tio-p-D-gliukopiranozidas (17) (5,79 g, 12 mmol) (gautas pagal H. Lonn, Carbohydr. Res. (1985) 139, 105-112) ištirpintas metanolyje (250 ml) ir pridėta metanolio natrio metoksido (0,2 M, 2,5 ml) . Tirpalas maišomas 15 h. Po neutralizacijos rūgštine katijonine derva (Bio-Rad AG® 50W-X8), filtravimo, garinimo ir iškristalinimo iš vandens, gautas (18) (3,83 g, 89%), lyd. t. 96°C; lyd. t. po pakartotinos kristalizacijos 159-161°C; [ a] p22 + 9,8° (c 0,9, metanolis) .
[0225] LH BMR duomenys (CD3OD, CHD2OD stand., 8) d: 7,91-7,79 (5H), 5,32 (d, 1H, J 10,5, Hz, H-l), 4,28 (dd, 1H, J 10 ir 8 Hz, H-3), 4,05 (t, 1H, J 10,5 Hz, H-2), 3,93 (dd, 1H, J 12 ir 2 Hz, H-6), 3,73 (dd, 1H, J 12 ir 5,5 Hz, H-6) , 3,46 (ddd, 1H, J 10, 5,5 ir 2 Hz, H-5), 3,40 (dd, 1H, J 10 ir 8 Hz, H-4) , 2,74 (dkv, 1H, J 12,5 ir 7,5 Hz, SCH), 2,63 (dkv, 1H, J 12,5 ir 7,5 Hz, SCH) , ir 1,17 (t, 3H, J 7, 5 Hz, CH3CH2) .
[0226] (ii) Etilo 3,4-di-0-acetil-6-0-(2,3,4-tri-O-benzil- a-L-fukopiranozil)-2-dezoksi)-2-ftalimid-l-tio- p-D-gliukopiranozidas (19)
[0227] Prie 0°C i, etilo 2, 3, 4-tri-O-benzil-l-tio- a-L-fukopi-ranozido (14) (4,5 g, 9,4 mmol) dichlormetane (70 ml) tirpalą pridėtas bromas (0,485 ml, 9,4 mmol). Mišinys maišomas 35 min ir po to du kartus garinamas su benzolu. Pridėtas cikloheksanas (0,5 ml) ir mišinys vėl garinamas su benzolu. Likutis ištirpdomas dichlormetane (25 ml) ir po to per 1 h sudedamas i, maišomą mišinį, sudarytą iš junginio (18) (3,32 g, 9,4 mmol), susmul-kintų molekulinių sietų (20 g. 4 A) ir tetraetilamonio bromido (3,5 g) dimetilformamide (75 ml) . Reakcijos mišinys maišomas 2 h prie 0°C, po to 2 h prie kambario temperatūros, ir vėliau filtruojamas per Celitą. Filtratas paskirstomas tarp dichlormetano ir sotaus natrio hidrokarbonato vandeninio tirpalo. Vandeninė fazė ekstrahuojama dichlormetanu ir apjungtos organinės fazės praplaunamos vandeniu bei sukoncentruojamos. Likutis buvo chromatografuoj amas (etilacetatas/heptanas; 1:1—>3:1), kad gautųsi neapdorotas produktas, kuris buvo O-acetilinamas maišant acetananhidride (50 ml) ir piridine (75 ml) 17 h prie kambario temperatūros. Išgarinus su toluolu ir chromatograf avus (etilacetatas-heptanas; 1:2-»1:3) buvo gautas (19) (3,3 g, 40%), [a] 4,6° (c 1,4, chloroformas).
[0228] ?H BMR duomenys (CHC13, 5): 7, 90-7, 83 (2H) , 7,79-7,71 (2H), 7,45-7,24 (15H), 5,83 (dd, 1H, J 10 ir 9,5 Hz, H-3), 5,43 (d, 1H, J 10,5 Hz, H-l), 5,09 (dd, 1H, J 10 ir 9,5 Hz, H-4), 4,99 ir 4,67 (2H, AB-sistema, J 11,5 Hz, benzilo H), 4,97 (d, 1H, J 3,5 Hz, H-l'), 4,89 ir 4,77 (2H, AB-sistema, J, 12 Hz, benzilo H), 4,79 ir 4,73
[0229] (2H, AB-sistema, J, 12 Hz, benzilo H), 4,39 (t, 1H, J 10,5 Hz), 4,06 (dd, 1H, J 10 ir 3,5 Hz), 3,97-3,87 (3H) , 3,76 (dd, 1H, J 12 ir 6 Hz), 3, 70-3, 62 (2H) , 2,67 (dkv, 1H, J 12 ir 7,5 Hz, SCH), 2,56 (dkv, 1H, J 12 ir 7,5 Hz, SCH), 1,98 (s, 3H) , CH3CO) , 1,87 (s, 3H, CH3CO), 1,15 (1, 3H, J 7,5 Hz, CH3CH2), 1,13 (d, 3H, J 7,5 Hz, F uc-CH3) .
[0230] Apskaičiuota, %: C47H51N012S junginiai: C 66,1; H 6,02; N 1,64; S 3,75. Rasta; %: C 66,4; H 6,1; N 1,55; S 3,25.
[0231] (iii) Metilo 3,4-di-0-acetil-6-0-(2,3,4-tri-O-benzil- a-L-fukopiranozil)-2-dezoksi-2-ftalimid-P-D-gliukopiranozidas (20)
[0232] Trifluormetansulfoninė rūgštis (0,030 ml, 0,3 mmol) pridedama prie mišinio, sudaryto iš (19) (853 mg, 1 mmol) metanolio (0,102 ml, 2,5 mmol), N-jodsukcinimido (344 mg, 1,52 mmol) ir sutrintų molekulinių sietų (0,9 g, 4 A) dichlormetane-dietilo eteryje (2:1, 25 ml) prie -30°C. Po 2,5 h, reakcijos mišinys filtruojamas pro Celitą i, vandenini, natrio hidrokarbonato ir natrio bisulfito tirpalą. Organinė fazė atskirta, praplauta įsotintu vandeniniu natrio chloridu ir sukoncentruojama. Likučio chromatografija (etilacetatas-heptanas, 2:3) davė (20) (778 mg, 94%), [a] ^-2,8°
[0233] XH BMR duomenys (CHC13, 8): 7, 90-7, 82 (2H) , 7,78-7,70 (2H) , 7, 45-7, 24 (15H), 5,79 (dd, 1H, J 11 ir 9 Hz, H-3) , 5,26 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l), 5,08 (dd, 1H, J 10 ir 9 Hz, H-4), 4,99 ir 4,67 (AB-sistema, 2H, J 11,5 Hz, benzilo H), 4,96 (d, 1H, J 3,5 Hz, H-l'), 4,88 ir 4,77 (AB-sistema, 2H, J 12 Hz, benzilo H), 4,81 ir 4,69 (AB-sistema, 2H, J 12 Hz, benzilo H), 4,28 (dd 1H, J 11 ir 8,5 Hz, H-2), 4,07 (dd, 1H, J 10 ir 3,5 Hz), 3,99-3,85 (3H) , 3,77 (dd, 1H, J 12 ir 6 Hz), 3,71-3,64 (2H) , 3,34
[0234] (s, 3H, CH3CO), 2,00 (s, 3H, CH3CO), 1,86 (s, 3H, CH3CO), 1,14 (d, 3H, J 6,5 Hz, Fuc-CH3) .
[0235] Apskaičiuota, %: C46H49N013 junginiui: C 67, 06; H 5,99; N 1,70. Rasta, %: C 67,0; H 6,1; N 1,65.
[0236] (iv) Metilo 2-acetamid-6-0-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-2-dezoksi~P-D-gliukopiranozidas (21)
[0237] Junginys (20) deacetilinamas 1,5 h ntrio metoksido (9,5 mM, 31,5 ml) metanolio tirpale. Po neutralizacijos rūgštine katijonine derva (Bio-Rad AG® 50W-X8) , filtravimo ir koncentravimo, gautas likutis, kuris ištirpintas metanolyje (20 ml) . Pridėta hidrazino monohidrato (0,8 ml) ir mišinys kaitinamas su grįžtamuoju šaldytuvu 4 h ir po to atšaldomas iki 10°C. Pridėjus vandens (15 ml) ir acetanhidrido (5 ml), reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje. Po 20 min gautos baltos nuosėdos. Metanolio (10 ml) pridėjimas pagerino mai-šymą. Po papildomų 2,5 h, pridėta piridino (2 ml) , kuris praskaidrino tirpalą. Tada tirpalas maišomas dar 30 min. Metanolis išgarintas ir vandeninis likutis ekstrahuojamas dichlormetanu. Organinė fazė perplauta su 1 M HC1 ir įsotintu vandeniniu natrio hidrikarbonatu ir koncentruojamas. Likučio chromatografija (etilacetatas-metanolis, 10:1) davė (21) (435 mg, 77%) . Pavyzdžiai analizei buvo iškristalinti iš etanolio, lyd. t. 224-226°C (d), [a] ^-75,4° (c, 0,9, CHC13) .
[0238] 'H BMR duomenys (CDC13-CD30D, 3:1, CHD2OD stand. 5) d: 7,41-7,20 (15H) , 4,91 ir 4,61 (AB-sistema, 2H, J 11,5 Hz, benzilo H), 4,80 ir 4,70 (AB-sistema, 2H, J 11,5 Hz, benzilo H), 4,78 (d, 1H, J 3 Hz, H-l ' ) , 4,75 (s, 2H, benzilo H), 4,24 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l), 4,09-3,97 (2H), 3,92 (dd, 1H, J 10 ir 2,5 Hz), 3,86 (dd, 1H, J 11 ir 2 Hz), 3,77-3,56 (3H) , 3,42 (dd, 1H, J 9,5 ir 8,5 Hz),
[0239] 3,36 (s, 3H, CH:)CO) , 1,97 (s, 3H, CH3CO), 1,07 (d, 3H, J 6,5 Hz, Fuc-CH3) .
[0240] (v) Metilo 2-acetamid-2-dezoksi-6-0-a-L-fukopiranozil-(3-D-gliukopiranozidas (22)
[0241] Junginio (21) (362 mg, 0,56 mmol) acto rūgštyje (50 ml) tirpalas hidrinamas prie 230 kPa su 10% Pd/C (160 mg) per naktį. Mišinys filtruojamas pro Celito sluoksnį ir koncentruojamas. Likučio kolonėlių chromatografija (chloroformas-metanolis-vanduo, 65:40 :10) davė amorfini, (22) (192 mg, 90%), [ aJ^-1060 (c, 1,1,H20).
[0242] *H BMR duomenys (D20, CH3OH stand. 5): 4,95 (d, 1H, J 4 Hz, H-11) , 4,46 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l), 4,15 (kv, 1H, J 6,5 Hz), 4, 02 (dd, 1H, J 12 ir 1,5 Hz), 3, 92 (dd, 1H, J 10,5 ir 3,5 Hz), 3,84-3, 67 (4H), 3,62-3, 49 (6H), 3,51 (s, CH30), 1 , 24 (d, 3H, J 6,5 Hz, Fuc-CH3) .
[0243] 13C BMR duomenys (D20, CH3OH stand., 5): 177,7, 105,0, 102, 4, 78, 0, 76, 9, 74, 8, 72, 9, 72,5, 71, 2, 70, 3, 69, 7, 60,0, 58,5, 25,2, 18,3.
[0244] 3, 3- Dimetilbutilo 2- acetamid- 2- dezoksi- 6- 0- a- L- fukopiranozil- p- D- gliukopiranozidas ( 24)
[0245] (i) 3,3-Dimetilbutilo 3,4-di-0-acetil-6-0-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-2-dezoksi-2-ftalimid-p-D-gliukopiranozidas (23)
[0246] Trifluormetansulfoninė rūgštis (0,017 ml, 0,19 mmol) buvo pridedama prie mišinio, sudaryto iš (19) (853 mg, 1 mmol), 3, 3-dimetilbutan-l-olio (0,182 ml, 1,5 mmol), N-jodsukcinimido (344 mg, 1,52 mmol) ir sutrintų molekulinių sietų (0,9 g, 4 A) dichlormetane-dietilo eteryje (2:1, 25 ml) prie -30°C. Po 1 h papildomai pridedama 3,3-dimetilbutan-l-olio (0,100 ml, 0,82 mmol) ir trifluormetansulfoninės rūgšties (0,015 ml, 0,17 mmol) ir maišymas tęsiamas 2,5 h. Reakcijos mišinys filtruojamas pro Celitą i, vandenini, natrio hidrokarbonato ir natrio bisulfito tirpalą. Organinė fazė praplauta vandeniniu natrio chloridu ir koncentruojama. Likučio chromatografija (etilacetatas-heptanas, 2:1) davė (23)
[0247] (740 mg, 83%), [a]D22-8,5° (c, 1,3, CHC13) .
[0248] *H BMR duomenys (CHC13, 6): 7, 89-7, 82 (2H) , 7,78-7,70 (2H), 7,44-7,24 (15H), 5,79 (dd, 1H J 11 ir 9 Hz, H-3), 5,32 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l) , 5,08 (dd, 1H, J 10 ir 9 Hz, H-4), 4,99 ir 4,66 (AB-sistema, 2H, J 11,5 Hz, benzilo H), 4,91 (d, 1H, J 3,5 Hz, H-l'), 4,88 ir 4,77 (AB-sistema, 2H, J 12 Hz, benzilo H), 4,80 ir 4,69 (AB-sistema, 2H, J 12 Hz, benzilo H), 4,29 (dd 1H, J 11 ir 8,5 Hz, H-2), 4,05 (dd, 1H, J 10 ir 3,5 Hz), 3,99-3,73 (6H), 3, 70-3, 63 (2H), 3,38 (m, 1H) , 1,98 (s, 3H, CH3CO) , 1,87 (s, 3H, CH3CO) , 1,30 (m, 2H, OCH2CH2) , 1,13 (d, 3H, J 6,5 Hz, Fuc-CH3) , 0,69 (s, 9H) .
[0249] Apskaičiuota, %:C51H49N013 junginiai: C 69,3; H 5,59; N 1,59. Rasta; %; C 68,4; H 6,65; N 1,75.
[0250] (ii) 3,3-Dimetilbutilo 2-acetamid-2-dezoksi-6-0-a-L-fukopiranozil-p-D-gliukopiranozidas (24)
[0251] Junginys (23) (680 mg, 76 mmol) ištirpintas metanolyje (25 ml). Buvo pridėtas metanolinis natrio metoksidas (0,2 M 1 ml) ir tirpalas maišomas 3,5 h. Po neutralizacijos rūgštine katijonine derva (Bio-Rad AG® 50W-X8), filtravimo ir garinimo, gautas likutis, kuris ištirpintas metanolyje (20 ml) . Buvo pridėtas hidrazino monohidratas (0,5 ml, 10,3 mmol) ir mišinys virinamas su grįžtamuoju šaldytuvu 3,5 h ir po to atšaldomas iki 10°C. Pridedami: vanduo (10 ml) , metanolis (2 ml) ir acto rūgšties anhidridas (2,5 ml) ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 2,5 h, kurių metu pridedamos papildomos porcijos acto rūgšties anhidrido (2,0 ir 0,5 ml) . Metanolis išgarinamas ir vandeninis likutis paskirstomas tarp dichlormetano ir vandens. Vandeninė fazė ekstrahuojama dichlormetanu ir organinė fazė sukoncentruojama. Likučio chromatografija (etilacetatas/metanolis; 20:1) davė produktą, kuris ištirpintas acto rūgštyje (50 ml) . Buvo pridėta 10% Pd/C (160 mg) ir mišinys hidrinamas 4 h prie 230 kPa kambario temperatūroje. Mišinys filtruojamas pro Celito sluoksni, ir sukoncentruojamas. Likučio kolonėlių chromatografija (chloroformas-metanolis-vanduo, 150 : 40:3—>65 : 40:10) da-vė amorfinį (24) (275 mg, 80%), [ a]D22-87,2° (c 0,95, H20) .
[0252] *H BMR duomenys (D20, CH3OH stand., 8): 4,94 (d, 1H, J 4 Hz, H-l'), 4,54 (d, 1H, J 8,5 Hz, H-l), 4,15 (kv, 1H, J 6,5 Hz), 4, 03-3, 88 (8H) , 2,03 (s, 3H, CH3CON) , 1,58-1,40 (2H, OCH2CH2) , 1,24 (d, 3H, J Hz, Fuc-CH3) , 0,90 (s, 9H) .
[0253] 13C BMR duomenys (D20, CH3OH stand., 5): 177,5, 104,0, 102, 4, 77,9, 76, 9, 74, 9, 73, 0, 72, 6, 71, 0, 69,7, 58,6, 45, 0, 31,9, 25,2, 18,4.
[0254] Apskaičiuota, %: C20H37NO10 junginiai: C 53,2; H 8,26; N 3,10. Rasta; %: C 51,2; H 8,25; N 3,2.
[0255] (i) Etilo 2-0-acetil-3,4,6-tri-O-benzil-l-tio-p-D-ga-laktopiranozidas (25) (25) Junginys gaminamas iš acetbromgalaktozės (70,73 g, 0,172 mmol), pagal metodiką, aprašytą S. Nilsson, H.
[0256] Lonn ir T. Norberg, Glycoconjugate J., 1989, 6, 21-34.
[0257] 13C BMR (CDC13, 5): 170,2 (CO), 139,2, 138, 6 138,4, (aromatinis C), 84,2, 82,1, 78,1, 75,0, 74,1, 73,6, 72,6, 70,3, 69,2, (C-l,2,3,4,5,6, 3xCH2Ph) , 24,1 (SCH2CH3), 21,6 (OCOCH3), 15,4 (SCH2CH3) .
[0258] lti BMR (CDCI3) 5: 5,43 (plt, 1H, J2,3 9,7 Hz, H-2), (d, 1H, Jli2 11,9 Hz, H-l), 4,01 (pld, 1H, J3,4 2,9 Hz, H-4), 3,55 (dd 1H, H-3).
[0259] (ii) Etilo 2-O-benzoil-3,4,6-tri-O-benzil-l-tio-p-D-ga-laktopiranozidas (26)
[0260] Etilo 2-0-acetil-3,4,6-tri-O-benzil-l-tio-p-D-galakto-piranozidas (25) buvo deacetilinamas natrio metoksidu metanolyje (50 ml, pH 12) ir po to benzoilinamas benzoilchloridu (1,96 g, 14 mmol) piridine (20 ml) pagal standartines metodikas.
[0261] Kristalinis (26) gaunamas beveik kiekybine išeiga (3,44 g, 97%) .
[0262] BMR (CDCI3) *H: 5 5, 70 (1H, t, 9,8 Hz, H-2), 2,60-2,80 (2H, m, CH2CH3) .
[0263] 13C: 5 14,8 23, 6 (SEt) , 68, 6, 70,2, 71, 7, 72, 8, 73, 6, 74,4, 76,6, 127,5-138,6 (aromatinis C), 165,4 (C=0).
[0264] (iii) 2-Azidetilo-3,4,6-tri-0-benzil-3-D-galaktopira-nozidas (28)
[0265] Trifluormetansulfoninė rūgštis (TfOH); 35 mg, 0,23 mmol; pagal būdą aprašytą G.H. Veeneman, S.H.Van
[0266] Leeuwen, J.H. Boom, Tetraherdron Lett., 1990, 31, 1331) pridedama prie suspensijos, sudarytos iš tioglikozido (26) (700 mg, 1,17 mmol), 2-aziaetanolio (204 mg, 2,34 mmol; paruoštas pagal A. Ya. Chernyak ir kt. ir A. V. Rama Rao, Carbohydr. Res., 1992, 223, 303-309), N-jod-sukcidinimido (395 mg, 1,75 mmol) ir sutrintų molekulinių sietų (3 A, 400 mg) dichlormetane (25 ml) prie °C. Kai TLC (toluenas:etilo acetatas, 6:1) parodė pilną konversiją (< 15 min), reakcija sustabdoma pridedant trietilamino prie 0 °C. Tirpalas filtruojamas pro Celito sluoksnį atskiedžiamas dichlormetanu ir praplaunamas du kartus vandeniniu Na2S203 (10%) ir galiausiai vandeniu. Organinė fazė džiovinama magnio sulfatu, filtruojama ir koncentruojama, o liekanai tuojau pat buvo atliekama TLC (toluolas:acetilacetatas, 15:1). Pašalinus tirpikli,, gauti 672 mg 2-azidetilo 2-O-benzoil-3, 4, 6-tri-0-benzil-f5-D-galaktopiranozido (27), bespalvio aliejaus (92%) pavidale, kuris veikiamas natrio metoksidu metanolyje (pH 11) kambario tem-peratūroje 6 valandas. Tirpalas neutralizuotas Dowex 50 H+ derva, nufiltruotas ir sukoncentruotas. Kris-talinis produktas (28) (540 mg, 89% iš 2) naudojamas be tolesnio valymo gaminant disacharidą (29).
[0267] Junginys (27) : (CDC13) 1H: 5 5, 66(1H, dd, 10,0, 7,9 Hz, H-2), 4:57 (1H, d, 7,8 Hz H-l).
[0268] 13C : 8 50, 7 (CH2N3), 67, 3, 68,7, 71, 9, 72,5, 73, 6, 73, 9, 74.5, 101,4 (C-l), 127,6-137,8 (aromatinis C), 165,3 (C=0).
[0269] Junginys (28):13C: 5 50, 7 (CH2N3) , 68, 4, 68, 7, 71, 4, 72.6, 73, 0, 73, 6, 73,9, 74, 5, 81, 7, 103, 4 (C-l), 125,3-138,4 (aromatinis C) .
[0270] (iv) 2-Azidetilo 3,4,6-tri-0-benzil-2-0-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-p-D-galaktopiranozidas (29)
[0271] Prie tioetilglikozido (14) 400 mg, 0, 836 mmol) dichlormetano (10 ml) tirpalo pridėtas bromas (134 mg, 0,836 mmol) prie 0°C. Po apytiksliai 5 min prie 0 °C tirpalui leista pasiekti kambario temperatūrą ir tirpiklis išgarintas. Po išgarinimo su toluenu likutis buvo ištirpintas dichlormetane (2 ml) ir sudėtas prie kambario temperatūros d, suspensiją, sudarytą iš tetraetilamonio bromido (176 mg, 0,836 mmol; paruošto pagal R.U. Lemieux, K.B. Hendriks, R.V. Stiek, K. Ja-mes, J. Am. Chem. Soc. 1975, 97:14, 4056), (28) junginio (290 mg, 0,558 mmol) ir sutrupintų molekulinių sietų (3 A, 300 mg), esančių CH2C12:DMF (4:1,7 ml). TLC (toluenas:etilo acetatas, 6:1) parodė pilną konversiją po 20 h maišymo. Mišinys filtruojamas, atskiestas dichlormetanu ir praplautas vandeniu. Organinė fazė išdžiovinta magnio sulfatu, filtruojama ir koncentruojama vakuume. Preparatyvinė TLC davė jungini, (29), tiršto aliejaus pavidale (407 mg, 78%).
[0272] BMR (CDC13) L3C: 5 16,5, 33,6, 50, 9, 66,4, 66, 9, 68,8, 71, 4, 72, 0, 72, 8, 72, 9, 73,5, 73, 6, 74,4, 74, 8, 75,7, 78,1, 79,6, 84,3, 97,3, 102,0, 125,3,-129,0 (aromatinis C), 138, 0, 138, 3, 139, 0.
[0273] (v) 2-Aminetil-2-0-a-L-fukopiranozil-p-D-galaktopirano-zidas (30)
[0274] Užblokuotas disacharido darinys (29) (80 mg, 85 Įimol) ištirpintas etanolyje (abs., 10 ml) ir pridėta vandens (1 ml) bei Pd/C (10%, 100 mg). Mišinys hidrinamas ir greitai maišomas kambario temperatūroje prie 50 PSI. Kai reakcija nepasibaigė po 60 h, tirpalas buvo nufiltruotas ir produktas išskirtas (TLC, etilo acetatas:metanolis:acto rūgštis:vanduo, 5:3:3:1, Rf=0,15). Po koncentravimo vakuume, likutis ištirpintas vandeniniame piridino/acto rūgšties (2,5%/l%, pH5,4) buferyje ir išplautas pro Bio Gel P-2 kolonėlę. Po išgarinimo ir džiovinimo šaldant, gauta 14 mg (44%)
[0275] BMR (CDC13) 13C: 5 16, 8, 39, 8, 61,1, 66, 4, 67, 1, 68, 7, 69, 6, 71, 9, 73,0, 75, 0, 78, 4, 100, 0, 101, 7.
[0276] Prie išmaišyto šaldomo ledu tiofosgeno (10 eq.) tetrahidrofurane (2 ml) tirpalo pridėtas (30) junginio amino darinys (30 Į^mol) natrio borato buferyje (0,85 M, pH 8,5). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 10 min ir po to ekstrahuojamas dietilo eteriu (3 x 2 ml) . Vandeninė fazė, turinti izotiocianato darini,, sudėta i, žmogaus serumo albumino (HSA) (1/30 ekv.) tirpalą toje pačioje buferinėje sistemoje (0,5 ml) . pH sukoreguotas iki 8,5 vandeniniu natrio šarmu (0,25 M) ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 48 valandas. Po reakcijos mišinio džiovinimo šaldant, atliekamas gryninimas ultracentrifuguojant Centriprep mėgintuvėliuose (IOKO). Išgrynintą tirpalą išdžiovinus šaldant, gautas HSA-junginys (31) su puikia išeiga (18 mg). Substitucijos laipsnis buvo nustatomas naudojant skriejimo trukmės masės spektroskopiją iki 8 mol disacharidų/mol proteinų.
[0277] (i) 8-Azid-3,6-dioksaoktilo 3, 4,6-tri-O-benzil-p-D-ga-laktopiranozidas (33)
[0278] (33) junginio azidodarinys gaminamas iš tioglikozido (26) (1004 mg, 1,68 mmol) ir 1-azid-8-hidroksi-3,6-dioksaoktano (686 mg, 3,35 mmol; gauto pagal C.R. Ber-tozzi, M.D. Bednarski, J. Org. Chem., 1991, 56, 4326-4329), pagal metodiką, kuri panaši i, naudotą (28) junginio darinio sintezėje. TLC (toluenas:EtOAc 6:1), parodė visišką koncersiją per 40 min. Panašus 8-azid-3,6-dioksaoktilo 2-0-benzoil-3,4,6-tri-0-benzil-3-D-galaktopiranozido (32) apdorojimas ir dezacilinimas davė 933 mg (78% iš 26) (33) junginio, tiršto aliejaus pavidale.
[0279] Junginys (32) :BMR (CDC13) :1H: 5 5,64 (1H, dd, 10,0, 7,9, Hz, H-2) .
[0280] 13C: 5 50, 6 (CH2N3), 68,7, 68, 9, 69,8, 70,3, 70,5, 70, 7, 71, 8, 71, 9, 72, 6, 73, 6, 73, 8, 74, 6, 80, 0, 101, 6(0-1).
[0281] Junginys (33):13C: 5 50, 6 (CH2N3) , 68,7, 68, 8, 70, 0, 70,2, 70,5, 71,4, 72,6, 73,3, 73,5, 73,8, 74,5, 81,9, 103,8 (C-l).
[0282] (ii) 8-Azid-3,6-dioksaoktilo 3,4,6-tri-0-benzil-2-0-(2, 3, 4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil) -J3-D-galaktopira-nozidas (34)
[0283] Disacharidas (34) buvo sintetinamas iš (33) junginio (500 mg, 82 mmol) ir tioetilglikozido (14) (512 mg, 1,07 mmol), pagal metodiką, aprašytą atitinkamam (29) dariniui. Preparatyvinė TLC davė 683 mg (81%) (34) junginio, aliejaus.
[0284] BMR (CDC13) 13C : 5 18, 3, 50, 2, 66,2, 68,2, 68, 8, 70, 0, 70, 2, 70,3, 70,6, 71,2, 72, 0, 72, 3, 72, 5, 73, 0, 73,3, 73,6, 74,4, 74,6, 75,8, 78,0, 79,7, 84,2, 98,6 102,0.
[0285] (iii) 8-Amin-3, 6-dioksaoktilo 2-0-a-L-fukopiranozil-(3-D-galaktopiranozidas (35)
[0286] 8-Azid-3,6-dioksaoktilo 3,4,6-tri-0-benzil-2-0-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-p-D-galaktopiranozidas (34) (35 mg, 34 Įimol) ištirpintas etilo acetato:etanolio:vandens mišinyje santykiu 1:2:2 (tūris, 12 ml) ir parūgštintas 20 |^1 HOAc ) pagal būdą, apršytą S. Nilsson, daktarinė disertacija, Lundo universitetas, 1992, balandis). Tirpalas hidrinamas prie 50 PSI ant 10% Pd/C (140 mg) prie kambario temperatūros per n akt i, ir kai TLC (etilo acetatas:metanolis:acto rūgštis:vanduo, 5:3:3:1) parodė visišką deblokavimą, mišinys filtruojamas ir garinamas. Valymas Bio-Gel® P-2 kolonėlėje (vanduo:piridinas:acto rūgštis, 25:1 pagal tūrį, pH 5,4), koncentravimas ir džiovinimas šaldant davė
[0287] BMR (CDC13) 13C: 5 15,2, (CH3) , 38, 9, 60,7, 66, 1, 66, 5, 68, 1, 68, 5, 68, 7, 69, 2, 69,3, 69, 4, 69, 6, 71, 7, 73, 4, 74, 8, 76, 6, 99,2 (C-l ' ) , 101,4(C-1).
[0288] Prie maišomo šaldomo ledu tiofosgeno (10 ekv.) tetrahidrofurane (2 ml) tirpalo pridėtas (35) junginio amino darinys (30 (.įmol) natrio borato buferyje (0,85 M, 2 ml, pH 8,5). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 10 min ir po to ekstrahuojamas dietilo ateriu (3x2 ml) . Vandeninė fazė, turinti izotiocianato darini,, sudėta i, žmogaus seumo albumino (HSA) (1/30 ekv.) tirpalą toje pačioje buferinėje sistemoje (0,5 ml) pH sukoreguotas iki 8,5 vandeniniu natrio šarmu (0,25 M) ir gautas mišinys maišomas kambario temperatūroje 48 valandas. Po reakcijos mišinio džiovinimo šaldant, atliekamas gryninimas ultracentrifūguoj ant Centriprep mėgintuvė-liuose (ĮOKO). Išgrynintą tirpalą išdžiovinus gautas HSA-junginys (36) su puikia išeiga (33 mg).
[0289] Substitucijos laipsnis buvo nustatomas naudojant skriejimo trukmės masės spektroskopiją iki 5 mol disacha-ridų/mol proteinų.
[0290] (i) 8-N-akrilamid-3,6-dioksaoktilo 2-0-a-L-fukopiranozil- p-D-galaktopiranozidas (37)
[0291] 0,8 ml deaeruoto 0,5 M natrio borato vandeninio buferio (pH 8,5) ir 2,4 ml deaeruoto metanolio sudėta 15mg (35) junginio. Reakcijos mišinys prapučiamas azotu ir atšaldomas iki 0°C. Buvo pridedama 3,3 Į_il akriloilchlorido ir maišoma 10 min. Reakcijos mišinys koncentruojamas kambario temperatūroje iki apytiksliai trečdalio jo pradinio tūrio. Valymas Bio-Gel® P-2 kolo-nėlėje ir liofilizacija davė (37) jungini, (14 mg, 83%) .
[0292] BMR duomenys: 13C (D20) : 5 15,0, (CH3) , 38, 54 (CH2N) , 60, 51, 66, 31, 67, 87, 68, 19, 68, 30, 68, 50, 68, 98, 69, 10, 69,12, 69,43, 71,50, 73,25, 74,55 76,08 (C-2, 3,4,5,6; C-2,3,4,5; 5CH20) , 98,88, (C-l'), 101,16(C-1), 126,92 ir 129, 43 (CH2=CH2) .
[0293] Į tirpalą, sudarytą iš (37) junginio (14 mg, 0,027 mmol) ir akrilamido (9,7 mg, 0,14 mmol) deaeruotame vandenyje (1 ml) pridėta pirma N,N,N'N'-tetrametilendiamino (6 (.il) ir po to amonio persulfato (3,5 mg). Mišinys maišomas kambario temperatūroje visą naktį. (38) polimeras gaunamas valant gelio chromatografijos būdu Bio-Gel P-2 kolonėlėje. Išvalyto tirpalo džiovinimas šaldant davė PPA jungini, su puikia išeiga (17,9 mg) . ^-BMR parodė, kad vidutiniškai prijungiamas 1 oligosacharidas 7 akrilamido vienetams.
[0294] 10 PAVYZDYS
[0295] Fucal- 2Galpl- 3( Fucal- 4) GlcNAcp- 3Gaipi- 4GlcPl- NII- PAA ( 42)
[0296] Į Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcpi-3Gaipi-4Glcp-l-OH tir-palą (Liuiso B heksacharidas (39), pirktas iš įso Sep AB, 25 mg vandenyje (1,25 ml) dedamas kietas amonio bikarbonatas iki įsisotinimo. Mišinys maišomas ati-darytame inde 6 dienas. Amonio bikarbonatas dedamas intervalais, įsisotinimas stebimas pastoviai laikant mišinyje tam tikrą dalį kietos druskos. Kai TLC parodė, kad konversija daugiau nebevyksta, mišinys pra-skiedžiamas vandeniu ( 5 ml) ir koncentruojamas iki pusės pradinio tūrio. Likutis skiedžiamas vandeniu iki 20 ml ir koncentruojamas iki 5 ml. Šis procesas buvo pakartotas dar 1 kartą, ir tada likutis praskiedžiamas iki 10 ml ir liofilizuotas. Naepdorotas produktas su-dėtas i, Bio-gel P2 kolonėlę ir surinkta frakcija, turinti Liuiso B glikozilaminą (40) (20 mg, 80%).
[0297] BMR duomenys: 13C(D20): 8 84, 66 (C-NH2) , 97,54, 99, 33, 100,39, 100,72, 102,98, (C-l) anglies atomai iš nere-dukuojančių cukrų vienetų), 15,08, 15,13 (2xCH3-fuko-zė), 21,95 (CH3-CON-G1cNAc).
[0298] (ii) Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Galpl-4Glcpl-NH-C0-CH=CH2 (41)
[0299] Natrio karbonatas (50 mg) ir deaeruotas metanolis (0,5 ml) sudėti i, glikozilamino (40) (20 mg, 0,02 mmol) vandenini, (0,5 ml) tirpalą. Mišinys maišomas prie 0°C, kol buvo sudėtas per 5 min akriloilchloridas (60 (.ii, 0,74 mmol) tetrahidrofurane (0,5 ml) . Po 10 min tirpalas atskiestas vandeniu (3 ml) ir koncentruotas iki 2 ml. Tirpalas buvo vėl praskiestas vandeniu (2 ml), buvo pridėta 200 |il tetrahidrofurano (tirpalo inhibi-toriaus) ir gautas tirpalas koncentruojamas iki 1-2 ml. Šis tirpalas gryninamas gelfiltracijos būdu Bio-Gel® P2 kolonėlėje. Atitinkamos frakcijos buvo apjungtos ir liofilizavus gautas (41) junginys (14 mg, 67%).
[0300] BMR guomenys: I3C (D20) : 8 81, 28 (C-NHCOCHCH2) , 97, 42, 99,18, 100,25, 102,59, 102,85, (C-l anglies atomai iš neredukuojančių cukrų vienetų), 14,99, 15,06, (2xCH3-fukozė), 21,92 (CH3-CON-GlcNAc), 125,93, 130,32, (CH2=CH2) .
[0301] Fab ms: pseudomolekulinis jonas m/z; 1053 (M+H) ir 1075 (M+Na)*.
[0302] (iii) Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcp-3Galpl-4Glcpl-NH-PAA (42)
[0303] N-akriloilglikozilamino kopolimerizacija su akrilamidu. N-akriloilglikozilamino (41) (13 j^mol) ir akrilamido (53 |4mol, 3,7 mg) tirpalas distiliuotame vandenyje (200 (0.1) deaeruojamas prapučiant azotu 20 min. Po to tirpalas maišomas prie 0 °C ir pridedama N,N,N1,N'-tetrame-tilendiamino (2 (ii) ir amonio persulfato (1 mg) . Mišinys lėtai maišomas prie 0°C 2 valandas, o po to kambario temperatūroje visą naktį. Tirštas tirpalas praskiestas vandeniu (1 ml) ir gryninamas gelfiltracijos būdu Bio-Gel® P2 kolonėlėje, išplaunant su vandeniniu n.butanoliu (1%). Frakcijos, turinčios polimero buvo apjungtos ir liofilizuotos. Išeiga: 3 mg.
[0304] 1H-BMR parodė, kad apytiksliai 1 Liuiso-B vienetas atitinka 5 CHCH2 vienetams.
[0305] (i) 2-Azidetilo 4,6-0-benziliden-2-dezoksi-2-ftalimid-P-D-gliukopiranozidas (43)
[0306] Etilo 4,6-0-benziliden-2-dezoksi-2-ftalimid-l-tio-p-D-gliukopiranozidas susintetintas pagal H. Lonn, Carbohydr. Res. 139 (1985), 105-113) (0,5 g, 1,1 mmol) ištirpintas 20 ml dichlormetano ir pridėta 2-azi-detanolio (gauto pagal A. Ya. Chernyak ir kt. Carbohydr. Res., 1992, 223, 303-309) (0, 148 g, 1,7 mmol) sutrumpintų 4 A molekulinių sietų ir mišinys maišomas 30 min. Buvo pridėta dimetil(metiltio)sulfonio triflato (DMTST) (0,439 g, 1,7 mmol); gauto pagal P. Fūgedi and P.J. Gregg, Carbohydr. Res., 149 (1989), 9-12) kambario temperatūroje ir maišymas buvo tęsiamas 4 valandas. TLC analizė (toluenas-etilo acetatas) parodė, kad nebėra pradinės medžiagos ir i, reakcijos mišinį pridėta 1 ml trietilamino ir maišoma dar 30 min. Reakcijos mišinys perkeltas i, silikagelio kolonėlę ir išplaunamas su toluenu:etilo acetatu 6:1, kad gautųsi (372 mg, 72%).
[0307] BMR duomenys: l3C (CDC13) : 8 50, 38, (CH2-N) ; 56, 42 (CH-N) ; 66,2 (CH-O) ; 68,44, (CH20) ; 68, 50 (CH-O) ; 68, 53 (CH2-0); 82,05 (CH-O); 98,89 (C-l); 101,83 (PhCH).
[0308] (ii) 2-Azidetilo 3-0-(2-O-acetil — 3,4,6-tri-O-benzil-p-D-galaktopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi-2-ftali-mid-p-D-gliukopiranozidas (44)
[0309] Etilo 2-O-acetil—3,4,6-tri-O-benzil-l-tio-p-D-galak-topiranozidas (25) (818 mg, 1,5 mmol) ir (43) junginys (395 mg, 0,85 mmol) ištirpinti 30 ml dichlormetano ir pridėta sutrupintų 4 A molekulinių sietų ir gautas mišinys maišomas 20 min. Reakcijos mišinys prapūstas su azotu ir prie reakcijos mišinio sulašinta DMTST (787 mg, 3,05 mmol, ištirpdyto 5 ml dichlormetano) ir per piltuvėli, praskalautas 6 ml dichlormetano. Po 2 valandų pridėtas 1 ml trietilamino ir maišoma 30 min., filtruojama, koncentruojama ir kolonėlių chromatografija (toluenas:etilo acetatas, 10:1) davė tris frakcijas. Frakcija 1 a-produktas (97,32, 98, 89; (C—1 ir C-l')• Frakcija 2 beveik grynas (44) (306 mg, 39%).
[0310] BMR duomenys: 13C(CDC13) atramin. tetrametilsilano 0 ppm) : 8 20,32 (CH3CO) , 50, 47 (CH2N) ; 55,13, (CH-N); 66,57, 68,15, 68,20, 68,65, 71,58, 71,71, 72,17, 72,94, 73, 46, 74, 38, 75, 15, 80, 47, 81, 08 (C-3,4,5,6; C-2,3,4,5,6; 3xCH2Ph; CH2-0) , 98, 86 (C-l), 100,75, 101,23 (C-l ir CHPh), 168,84 (C=0).
[0311] (iii) 2-azidetilo 2-acetamid-3-0-(3,4,6-tri-O-benzil-p-D-galaktopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi-p-D-gliukopiranozidas (45)
[0312] Prie (44) junginio (525 mg, 0,56 mmol) pridėta 50 ml etanolio ir virinama su grįžtamuoju šaldytuvu su 1,1 ml hidrazinhidrato per nakti, ir TLC (toluenas:etilacetatas 1:2) parodė naujo produkto susidarymą. Po koncentracijos ir išgarinimo kartu su toluenu, ištirpinta 45 ml dichlormetano ir praplaunama vienodu kiekiu vandens, vėl garinant kartu su toluenu gautas neapdorotas monohidroksiaminas. Šis neapdorotas produktas ištirp-dytas dichlormetane:metanolyje (1:1, 15 ml), ir pridėta 1,5 ml acto anhidrido. Po 3 valandų nebuvo aptikta pradinių medžiagų (TLC). Koncentravimas ir chromatografija (toluolas:etilo acetatas, 1:2) davė (204 mg, 45%) (45) jungini,.
[0313] BMR duimenys: 13C (CDC13) : 5 23,59 (NHCOCH3) , 50, 59 (C-N) , 56,89 (C-N); 66,40, 68,28, 68,56, 70,55, 72,44, 73,21, 73, 40, 73,53, 74,60, 76,08, 79, 75, 81, 71, (C-3, 4, 5, 6; C-2', 3', 4', 5', 6'; 3xCH2Ph; CH20) , 100,97, 101, 25, 103,48 (C-l, C-l1 ir CHPh), 171,67 (C=0).
[0314] (iv) 2-azidetilo 2-acetamid-3-0-(3,4,6,-tri-O-benzil-2 - O-(2, 3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-p-D-galaktopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi- P -D-gliukopiranozidas (46) (45) junginys (137 mg, 0,17 mmol), (14) junginys (162 mg, 0,34 mmol) ištirpinti dichlormetane (75 ml) ir pridėta molekulinių sietų (4 A) ir mišinys maišomas 20 min. Buvo pridėtas DMTST (96 mg, 0,37 mmol) ir maišoma 1,5 valandos. Buvo pridėtas 1 ml trietilamino ir maišoma dar 20 min. Nufiltravus pro Celitą, atlikus koncentravimą ir kolonėlių chromatografiją (toluolas:etilo acetatas. 1:1), gautas (46) junginys (101 mg, 49%).
[0315] BMR duomenys: 13C (CDC13) : 6 16,83, (CH3 fukozė) , 23,30 (NHCOCH3), 50,66 (CH2-N), 57, 40 (C-2); 66, 55, 67, 17, 67,96, 68,60, 72,31, 72, 91, 72, 99, 73, 04, 73, 10, 73, 51, 74, 48, 74, 65, 76, 05, 76, 29, 76, 62, 77, 60, 79, 43, 79, 53, 83,21 (C-3, 4, 5, 6; C-2 ' , 3 ' , 4 ' , 5 ' , 6 ' ; C-2 ' ' , 3 ' ' , 4 ' ' , 5 1 ' ; 6xCH2Ph), 97,67 (C-l''), 100,94, 101,07, 102,13, (C-l, C-l ' , CHPh), 170, 92 (C=0) .
[0316] (v) 2-trifluoracetamidetilo 2-acetamid-3-0-(3,4,6-tri-O-benzil-2-O-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-0-D-galaktopiranozil)-4,6-0-benziliden-2-dezoksi-p-D-gliukopiranozidas (47)
[0317] (46) junginys (135 mg, 0,11 mmol) ištirpintas 11 mol etanolio ir pridėta 10% Pd/C (140 mg). Reakcijos mišinys hidrinamas atmosferiniame slėgyje 15 min. TLC analizė (etilo acetatas:metanolis:acto rūgštis:vanduo, 12:3:3:1) parodė, kad nebėra pradinės medžiagos, išskyrus vieną ninhidrinimui teigiamą produktą. Mišinys filtruojamas per Celitą, koncentruojamas ir ištir-pinamas dichlormetane (7 ml) bei piridine (3,5 ml) , prapučiamas azotu ir atšaldomas iki 0°C. Buvo pridėta trifluoracto anhidrido (31 ml, 0,22 mmol). Po vienos valandos mišinys sukoncentruojamas ir išgarinamas du kartus kartu su 2 ml tolueno. Kolonėlių chromatografija (toluenas :etilo acetatas, 1:3) davė (47) jungini, (73 mg, 52%) .
[0318] BMR duomenys: 13C (CDC13) : 5 17,06 (CH3 fukozė) , 22,66 (NHCOCH3) , 39, 59 (CH2-N) , 54, 83 (C-2) ; 65,56, 66,77, 67,78, 68,44, 68,69, 72,80, 73,05, 73,24, 2x73,46, 74, 46, 74, 66, 76, 38, 77, 08, 77, 80, 78, 91, 79, 96, 80, 01, 82, 07 (C-3,4,5,6; C-2',3',4', 5', 6'; C-2' ',3' ',4''5 ' ' ; 6xCH2Ph) , 98,61 (C-l" ) , 101,22, 101, 99 102, 35, (C-l, C-l', CHPh), 171,64(NHCOCH3) .
[0319] (vi) 2-trifluoracetamidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-(2-0-(a-L-fukopiranozil)-p-D-galaktopiranozil)-p-D-gliukopiranozidas (48) (47) trisacharidas (73 mg, 56,2 |j.mol) ištirpintas abso-liučiame etanolyje (7 ml) su vandeniu (0,25 ml) ir ledine acto rūgštimi (2 j.il) . Tirpalas hidrinamas 10% Pd/C (152 mg) prie 50 PSI kambario temnperatūroje vieną valandą. Kai TLC (etilo acetatas:acto rūgštis:metanolis : vanduo, 12:3:3:1; Rf=0,14 junginiui (48) parodė konversijos pabaigą, reakcijos mišinys perfiltruojamas per Celito sluoksnį ir sukoncentruojamas. Neapdorotas, kietas likutis (46 mg) buvo naudojamas tolesnėje reakcijoje be papildomo valymo.
[0320] BMR duomenys: 13C (D20) : 6 16, 59 (CH3 fukozė), 21,85 (NHCOCH3) , 39,44 (CH2-N), 54,56 (C-2); 60, 45-76, 95 (C3,4,5,6; C2',4',5, ' 6 ' ; 2 " ,3 " ,4 ' ' , 5 ' ' ) , 99,29, 99,92, 101,28 (C-l, C-l', C-l''), 173,48 (NHC0CH3) .
[0321] (vii) 2-akrilamidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-2-0-a-L-fukopiranozil-P-D-galaktopiranozil-p-D-gliukopiranozidas (49)
[0322] Neapdorotas (48) junginys (46 mg) ištirpintas vandeniniame amoniake (25%, 4 rnl) ir maišomas kambario temperatūroje. Reakcija užbaigta po valandos ir davė tik laisvą amino darini,. (TLC etilo acetatas:acto rūgštisrmetanolis:vanduo, 5:3:3:1). Po koncentravimo ir garinimo kartu su toluenu, gryninama Bond-Elut® (SCX, H+-forma) katijoninės dervos 0,5 g užtaisu. Pavyzdžiai ištirpinti 3 ml vandens ir pH sukoreguotas iki pH 6 vandenine acto rūgštimi. Pavyzdžiai buvo sudėti i, kolonėlę ir išplauti 2 M amoniako metanolyje:vandeniu 1:1 (5 ml) . Frakcijos, turinčios laisvą aminą (teigiamos ninhidrinimui), buvo apjungtos, sukoncentruotos, liofilizuotos ir davė (30 mg, 0,05 mmol) neapdoroto amino.
[0323] Į neapdorotą aminą pridėta 1 ml deaeruoto 0,5 M natrio borato vand. buferis (pH 8,5) ir deaeruoto metanolio (3 ml). Reakcijos mišinys prapūstas azotu ir atšaldytas iki 0°C, pridėti 6,4 |al (0,078 mmol) akriloilchlorido ir maišymas tęsėsi 10 minučių. Reakcijos mišinys koncentruojamas kambario temperatūroje iki trečdalio savo pradinio tūrio, Išgryninus Bio-Gel® P-2 kolonėlėje ir liof ilizavus, gautas (49) junginys (30 mg, 86% iš
[0324] BMR duomenys; 13C (D20) : 5 14, 99 (-CH3, fukozė) , 21,99 (NHCOCH3) , 39,10 (CH2N) , 54,58 (C-2); 99,25, 99,93, 101,39 (C-l, C-l', C'-l), 127,27, 129,65 (CH2=CH2) .
[0325] (vii) Fucal-2Gal(3l-3GlcNAcPl-0-tarpiklis 5-PAA (50)
[0326] 2-akrilamidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-2-0-a-L-fukopiranozil- p-D-galaktopiranozil-( 3-D-gliukopiranozido (49) kopolimerizacija su akrilamidu.
[0327] Į akrilamidą (10 mg, 144 (įmol) kambario temperatūroje sudėtas trisachrido (49) (18 mg, 29 Į.imol) tirpalas deaeruotame vandenyje (1 ml). Prie šio lėtai maišomo tirpalo (laikomo tamsoje ir azoto atmosferoje) prie 0°C pridėti N, N, N ' , N '-tetrametilendiaminas (6 jj.1 ) ir amonio persulfatas (3,5 mg) . Mišinys maišomas kambario tem-peratūroje visą nakti,. TLC (etilo acetatas; acto rūgštis:metanolis:vanduo, 5:3:3:2) parodė, kad beveik visas (49) junginys buvo sunaudotas ir kad susiformavo sukepęs pagrindinis produktas. Polimeras gryninamas gelio chromatografijos būdu Bio-Gel® P-2 kolonėlėje, išplaunant vandeniniu n.butanoliu (1%). Išplauta tuščiame tūryje polimerinė frakcija džiovinama šaldant ir gauta 13,1 mg (50) polimero, kurio XH BMR analizė parodė,kad vidutiniškai 1 trisacharidas atitinka 7,6 akrilamido vienetus, ir 11,9 mg (50) polimero, kurio H BMR analizė parodė, kad vidutiniškai 1 trisacharidas atitinka 10,3 akrilamido vienetus.
[0328] 12 PAVYZDYS
[0329] Fucal- 2Gaipi- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- O- tarpiklis 5- PAA ( 55)
[0330] (i) 2-azidetilo 2-acetamid-6-0-benzil-3-0-(3,4,6-tri-O-benzil-P~D-galaktopiranozil)-2-dezoksi-P-D-gliukopiranozidas (51)
[0331] Dietilo eteris, įsotintas vandenilio chloridu, kambario temperatūroje pridedamas prie maišomo 2-azidetilo-2-acetamid-3-O- (3,4,6-tri-O-benzil-P~D-galaktopiranozi 1)-4,6-O-benzi1iden-2-dezoksi-p-D-gliukopiranozido (45)
[0332] (420 mg, 0,52 mmol), natrio cianborhidrido (200 mg, 3,2 mmol) ir 3 A molekulinių sietų mišinio tetra-
[0333] hidrofurane (20 ml), kol mišinys buvo rūgštinis (kaip parodė popierinis indikatorius; būdas pagal M. Nilsson ir T. Norberg Carbohydr. Res. 76 183 (1988) 71-82) . Mišinys maišomas 20 min kambario temperatūroje ir po to buvo pridedamas trietilaminas (0,30 ml). Mišinys filtruojamas pro Celitą, plaunamas vandeniu, džiovinamas ir garinamas. Neapdorotas produktas gryninamas kolonėlių chromatografija (toluolas:etilo acetatas, 6:1) ir gautas grynas (51) junginys (266 mg, 0,32 mmol, 65%).
[0334] BMR duomenys: l3C(CDCl3): 5 23,41, (NHCOCH3) , 50,30 (CH2N), 56,81 ( C- N) ; 66,3-81,9 (C-3, 4,5, 6; C-2 ', 3 ', 4 ', 5', 6' ; 4xCH2Ph; CH20), 100, 90, 103,21 (C-l, C-l'), 173,4 (CO) .
[0335] (ii) 2-azidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-4-O-(2,3, 4-tri- O-benzil-a-L-fukopiranozil)-3-0-[ 3,4,6,-tri-O-benzil-2-O-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-p-D-galaktopiranozil] ~ P-D-gliukopiranozidas (52) (51) junginys (157 mg, 0,19 mmol) ir (14) junginys (362 mg, 0,76 mmol) buvo ištirpinti dichlormetane (100 ml) ir pri-dėti 3 g molekulinių sietų (MS) 4 A, bei maišoma 20 min, po to pridėtas dimetil(metiltio)sulfonio tri-flatas (DMTST) (207 mg, 0,80 mmol) ir maišoma 1,5 valandos. Po to pridėti 2 ml trietilamino ir maišoma dar 20 min. Nufiltravus per Celitą, atlikus koncentravimą ir kolonėlių chromatografiją (toluenas:etilo acetatas, 1:1) gautas (52) junginys (142 mg, 0,086 mmol, 45%).
[0336] BMR duomenys: 13C(CDC13): 5 17,01, 16,81 (2xCH3 fukozė), 23,20 (NHCOCH3) , 50 , 35 (CH2-N) , 57,21 (C-2); 98,31, 99,70, 101,14, 102,30 (Cl, Cl', 2xCl-fukozė), 170,30 (C=0).
[0337] (iii) 2-trifluoracetamido 2-acetilamid-2-dezoksi-4-0-(2,3,4, -tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil) -3-0-[ 3,4,6,-tri-O-benzil-2-O-(2,3,4-tri-O-benzil-a-L-fukopiranozil)-(3-D- galaktopiranozil] -P-D-gliukopiranozidas (53) (52) junginys (140 mg, 0,084 mmol) ištirpintas 11 ml etanolio ir pridėta 10% Pd/C (150 mg). Reakcijos mišinys hidrinamas atmosferiniame slėgyje 15 minučių. TLC (etilo acetatas:metanolis:acto rūgštis vanduo, 12:3:3:1) parodė, kad nebėra pradinės medžiagos, išskyrus vieną teigiamą ninhidrinui produktą. Mišinys filtruojamas per Celitą, koncentruojamas ir ištirpdomas dichlormetane (10 ml) ir piridine (3,5 ml), prapučiamas azotu ir atšaldomas iki 0°C .
[0338] Buvo pridėtas trifluoracto rūgšties anhidridas (31 Įil, 0,22 mmol). Po vienos valandos mišinys koncentruojamas ir išgarinamas kartu su 2 ml tolueno du kartus. Kolo-nėlių chromatografija (toluolas:etilo acetatas, 1:2) davė (53) jungini, (82,8 mg, 0, 053 mmol, 63%) .
[0339] BMR duomenys: 13C(CDCl3): 8 17, 33, 16, 93 (2xCH3 fukozė), 22,30 (NHCOCHj) , 39,25 (CH 2- N), 54, 48 (C-2); 99, 03, 99,98, 101,63, 102,75 (C-l, C-l', 2xCl-fukozė), 171,73
[0340] (iv) 2-trifluoracetamidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-(2-O-a-L-fukopiranozil-p-D-galaktopiranozil)-4-O-a-L-f ukopiranozil —(3 — D — g 1 iukopiranozidas (54 ) (53) tetrasacharidas (78 mg, 0,05 mmol) ištirpintas absoliučiame etanolyje (8 ml) su vandeniu (0,25 ml) ir ledine acto rūgštimi (2 jai) . Tirpalas buvo greitai maišomas su 10% Pd/C (150 mg) vandenilyje (50 PSI) kambario temperatūroje vieną valandą. Kai TLC (etilo acetatas:acto rūgštis:metanolis:vanduo, 12:3:3:1) parodė konversijos pabaigą, reakcijos mišinys nufiltruojamas pro Celito sluoksnį ir sukoncentruojamas. Neapdorotas (54) junginys (35 mg) buvo naudojamas tolesnėje reakcijoje be papildomo valymo.
[0341] BMR duomenys: 13C(CDC13): 8 16,91, 16,53 (2xCH3 fukozė) , 22,15 (NHCOCH3) , 39,14 (CH2N) , 54,20 (C-2); 99, 33, 100, 03, 101,73, 102, 95 (C-l, C-l' , 2xC-l fukozė), 173, 30 (NHCOCH3) , nebuvo aptiktas joks l3C signalas "aromatinėje srityje".
[0342] (v) 2-akrilamidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-(2-0-(a-L-fukopiranozil-p-D-galaktopiranozil)-4-O-a-L-fukopiranozil~P-D-gliukopiranozidas (55) 35 mg neapdoroto (54) junginio ištirpinta vandeniniame amoniake (25%, 4 ml) ir maišoma kambario temperatūroje. Reakcija buvo užbaigta po valandos ir davė tik laisvą amino darini. Po TLC (etilo acetatas:acto rūgštis:metanolis:vanduo, 5:3:3;2), koncentravimo ir garinimo kartu su toluenu atliekamas gryninimas Bond-Elut® užtaisu (SCX, H+-forma) katijonine derva. Pavyzdžiai ištirpinti 3 ml vandens ir pH sukoreguotas iki pH 6 vandenine acto rūgštimi. Pavyzdžiai sudėti i kolonėlę ir išplauti 2 M amoniako metanolyje:vandeniu, 1:1 (5 ml) . Frakcijos, turinčios laisvą aminą (teigiamos ninhidrinui) buvo apjungtos, sukoncentruotos, liofilizuotos ir davė neapdorotą aminą (20 mg) .
[0343] Į neapdorotą aminą buvo pridėta 1 ml deaeruoto 0,5 M natrio borato vand. buferio (pH 8,5) ir deaeruoto metanolio (3 ml) . Reakcijos mišinys prapūstas azotu ir atšaldytas iki 0 °C. Buvo pridėti 6,0 |.il akriloilchlorido ir maišymas tęsiamas 10 minučių. Reakcijos mišinys sukoncentruojamas kambario temperatūroje iki apytiksliai trečdalio savo pradinio tūrio. Išgryninus Bio-Gel® P2 kolonėlėje ir liofilizavus, buvo gautas grynas (55) junginys (15 mg).
[0344] BMR duomenys: 1JC(D20) : 8 16,90, 16, 45 (2xCH3, fukozė), 21,95 (NHCOCH3), 39,51 (CH2N) , 54,31 (C-2); 99,21, 99,95, 101,56, 102,87, (C-l, C-l', 2xC-l fukozė), 127,21, 129,57 (CH=CH2) , 173, 27 (NHC0CH3) .
[0345] (vi) Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcPl-O-tarpiklis 5-PAA (56)
[0346] 2-akrilamidetilo 2-acetamid-2-dezoksi-3-0-2-0-a-L-fukopiranozil-p-D- galaktopiranozil-4-a-L-fukopiranozil-p-D-gliukopiranozido (55) kopolimerizacij a su akrilamidu.
[0347] Į akrilamidą (8,3 mg, 120 (įmol) kambario temperatūroje sudėtas tetrasachrido (54) (15 mg, 20 (įmol) tirpalas deaeruotame vandenyje (1 ml). Prie šio lėtai maišomo tirpalo (laikomo tamsoje ir azoto atmosferoje) prie 0°C pridėti N,N,N',N'-tetrametilendiaminas (6 |jl) ir po to amonio persulfatas (3,5 mg) . Mišinys maišomas kambario temperatūroje visą naktį. TLC (etilo acetatas:acto rūgštis:metanolis:vanduo, 5:3:3:2) parodė, kad visas (49) junginys buvo sunaudotas ir kad susiformavo sukepęs pagrindinis produktas. Polimeras gryninamas gelio chromatografijos būdu Bio-Gel® P2 kolonėlėje, išplaunant su vandeniniu n.butanoliu (1%). Išplauta tuščiame tūryje polimerinė frakcija buvo džiovinama šaldant ir gauta 20 mg (56) polimero.
[0348] H BMR analizė, parodė kad vidutiniškai 1 trisachridas atitinka 6 akrilamido vienetus.
[0349] (i) 2-akrilamidetilo 2-O-oc-L-fukopiranozil-p-D-galak-topiranozidas (57)
[0350] Į 6,4 mg (30) junginio pridėta 0,3 ml deaeruoto 0,5 M natrio borato vand. buferio (pH 8,5) ir metanolio (0,9 ml). Reakcijos mišinys prapūstas azotu ir atšaldytas iki
[0351] O °C. Buvo pridėti 2 nl akriloilchlorido ir maišymas tęsiamas 10 minučių. Reakcijos mišinys koncentruojamas kambario temperatūroje iki apytiksliai trečdalio savo pradinio tūrio. Išgryninus Bio-Gel® P2 kolonėlėje ir liofilizavus, gautas (57) junginys (4 mg, 57%).
[0352] BMR duomenys: LH (D20) : 5 1,2 (d, CH3 fukozė) , 4,52 (dd, H-l), 5,22 (m, H-l ' ) , 5,80 (dd, CH=CH2) , 6,25 (m, CH=CH2) .
[0353] Į tirpalą, sudarytą iš (57) junginio (4 mg, 9 |imol) ir akrilamido (3,3 mg, 47 p.mol) deaeruotame vandenyje (0,75 ml) pridėta pirma N,N,N',N'-tetrametilendiamino (2 |il) ir po to amonio persulfato (1,5 mg). Mišinys maišomas kambario temperatūroje visą naktį. (58) polimeras buvo valomas Bio-Gel® P-2 kolonėlėje (9,1 mg).
[0354] BMR duomenys: XH (D20) parodė, kad 1 prijungtas oligosacharidas vidutiniškai atitinka 12,3 akrilamido vienetams.
[0355] In situ Helicobacter pylori lipnumo bandymas
[0356] Neužkrėsti mėginiai iš normalių suaugusių žmonių skran-džio audinio (gauti iš Huddinge Sjukhus, Švedija) buvo naudojami tiriant Helicobacter pylori lipnumą. Visi pavyzdžiai buvo fiksuoti 4% formaline ir vėliau pa-merkti i parafiną.
[0357] Pjūviai, 4 |.im storio, padėti ant stiklinių plokštelių ir nudažyti Steinerio sidabravimo būdu (kad būtų galima nustatyti skrandžio ląstelių tipus ir patikrinti, jog nėra patologinių pakitimų audinių mėginiuose) ir/arba vėliau išbandytas lipnumas.
[0358] Buvo naudojami keturi klinikiniai Helicobacter pylori izoliatai, A4, A5, A7 ir A8 (gauti iš Huddinge Sjukhus) . Helicobacter pylori buvo auginama prie 37°C ant Brucella agaro, papildyto 10% jaučio krauju ir 1% įso Vitalex (Becton Dickinson Microbiology System, Cockey-ville, MD) mikroearofilinėse sąlygose (5% 02, 10%C02, 85%N2) ir 98% drėgmės. Praėjus 5 dienoms po užsėjimo, bakterijos iš vienos pilnai sužėlusios lėkštelės buvo at-sargiai suspenduotos pipete 25 ml 0,1 M NaCl/0,1 M natrio karbonato, pH 9,0. Prie bakterijų suspensijos pri-dėta 250 |al šviežiai paruošto 10 mg/ml fluoresceino izotiocianato (FITC, Sigma Chemical Co.) tirpalo dime-tilsulfokside, ir buvo laikoma 1 valandą kambario temperatūroje tamsoje. Bakterijos išgautos centri-fuguojant prie 3000 x g 10 minučių ir vėl suspenduotos, švelniai pipetuojant, fosforu buferizuotame fizio-loginiame tirpale (PBS) + 0,05% polioksietileno sorbito monolaurate (Tween 20) ir vėl išgautos kaip nuosėdos po centrifugavimo, aprašyto aukščiau. Plovimo procedūra buvo pakartota 3 kartus ir suspensija galiausiai pakar-totinai suspenduota, pasiekiant optinį tanki, 0,2. FITC-žymėjimo stiprumas visuose kamienuose buvo vienodas, kaip galima spręsti apžiūrėjus panašų skaičių organizmų fluorescensiniu mikroskopu. Vienodo 1 ml dydžio mėgi-niai paimti iš galutinių suspensijų ir tuojau pat panaudojami arba saugomi prie -20 °C iki panaudojimo. Nebuvo aptikti skirtumui tarp surišimo pobūdžio tarp kamienų pažymėtų ir tuoj pat panaudotų bei kamienų, kurie buvo užšaldyti ir vieną kartą atitirpdyti prieš panaudoj imą.
[0359] Audinių pjūviai, uždėti ant objektinių stiklelių, buvo deparafinuoti■ Bio-Clear (Bio-Optica SpA) ir absoliučiu alkoholiu, 95% alkoholiu, bei po to 70% alkoholiu, pra-skalauti vandeniu po to su PBS ir tada laikomi 45 min, blokuojančiame buferyje (1% želatinos/0,05% Tween 20, esantys PBS) . FITC-žymėtų bakterijų suspensija (optinis tankis apie 0,200-0,250) buvo sumaišoma su tokiu pat junginio koncentruoto tirpalo kiekiu. Mišinys laikomas 2 valandas kambario temperatūroje tamsoje, 200 Įil šio mišinio buvo uždėti ant audinių pjūvių, esančių ant objektinių stiklelių, ir buvo laikoma 1 valandą kambario temperatūroje drėkinamoje kameroje. Po to objek-tiniai stikleliai buvo 6 kartus plaunami su PBS prieš jų peržiūrą su fluorescentiniu mikroskopu.
[0360] Analizė
[0361] In situ lipnumo bamdymai buvo atliekami nustatyti Helicobacter pylori lipnumą prie žmogaus skrandžio audinio ir parodyti Helicobacter pylori slopinimą su junginiais, turinčiais galinę L-fukozę, pvz., LNF1-HSA.
[0362] Kad būtų galima nustatyti galinę L-fukozę turinčių junginių sugebėjimą inhibuoti prisirišimą, FITC-žymėtų bakterijų suspensija (optinis tankis apie 0,200-0,250) sumaišoma su koncentruotu junginio tirpalu. Mišinys buvo iš pradžių laikomas 2 valandas kambario tempe-ratūroje tamsoje. 200 įaI šio mišinio buvo uždėti ant audinio pjūvio, esančio ant objektinio stiklelio, ir buvo laikoka 1 valandą kambario temperatūroje. Po inku-bacijos, paveikti audinio pjūviai buvo 6 kartus plaunami su PBS prieš jų analizę.
[0363] Audinių pjūviai, paveikti su bandomuoju junginiu, bei nepaveikti audinių pjūviai buvo palyginti panaudojant fluorescentinę mikroskopiją ir vaizdų ananlizę (Neotech Image Grabber 24/1.1 buvo naudojamas perduoti regimąjį mikroskopo vaizdą i, kompiuterio ekraną ir Optilab 24/ 2. 1. 1 Grafted - suskaičiuoti prilipusias bakterijas.
[0364] Gautos reikšmės lentelėje yra vidurkiai iš prilipusių bakterijų trijose skirtingose ploteliuose kiekviename pjūvyje, lyginant paveiktus ( su junginiu) ir nepa-veiktus audinių pjūvius.
1. Junginio, aprašomo bendromis formulėmis Ia, Ib, Ic,Id, Ie arba If:
2. Panaudojimas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad Zlr Z2, Z3, Zą, Z5, Z6, Z7, Ze, Z9, Z10, ^įif Z13, Z14, Z15 ir Z16 yra O.
3. Panaudojimas pagal 1 arba 2 punktą, besiski-r i a n t i s tuo, kad jame daugiausia keturi, geriau daugiausia trys, ypač vienas arba du iš R1A, R2A, R3A, R4A r RlB' ^ 2Bf ^ 3B' ^ 4B' ^ 1C' ^ 2C' ^ 3C' ^ 2D' ^ 3D' ^ 4D' R-iEf R2er R3e arba R4E yra grupė pagal formulę VII.
4. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-3 punktų, besiskiriantis tuo, kad R1a yra VII grupė a - konfigūracij oje.
5. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-3 punktų, besiskiriantis tuo, kad A dalies R1A, R2a, R3a ir R4ACH2 turi D-galaktozės konfigūraciją, esant A p - konfigūracij oje.
6. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-3 punktų, besiskiriantis tuo, kad R1A yra VII grupė a - konfigūracijoje ir A dalies R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 turi D-galaktozės konfigūraciją, esant A (3 - konfigū-racijoj e .
7. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-3 punktų, besiskiriantis tuo, kad R2B yra Z3, Z5, Z0 arba Z12 ir B dalies R1B, R2B, R3B ir R4BCH2 turi D-gliukozės konfigūraciją, esant B P - konfigūracijoje.
8. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-3 punktų, besiskiriantis tuo, kad R1B yra acetamido grupė.
9. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-3 punktų, besi-kiriantis tuo, kad R1A yra VII grupė a - kon-figūracijoje; A dalies R1A, R2A, R3A ir R4ACH2 turi D-galaktozės konfigūraciją, esant A P - konfigūracijoje; R21, yra Z-,, Z5, Z8 arba Z12; ir B dalies R1B, R2B, R3B ir R4 hCH2 turi D-gliukozės konfigūraciją, esant B P - kon-figūracijoje, bei R1b yra acetamido grupė.
10. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-9 punktų, besiskiriantis tuo, kad R3B yra grupė pagal VII formulę, a - konfigūracijoje.
11. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-10 punktų, besiskiriantis tuo, kad A dalies R1a, R2a, R3a ir R^aCH2 bei B dalies R1b, R2b, R3b ir R4BCH2 turi D-galaktozės konfigūraciją ir C dalies R1C, R2c, R3c ir R^rCH2 turi D-gliukozės konfigūraciją, esant A a - konfigūracijoje bei esant B ir C P - konfigūracijoje, ir kuriame R1b bei R3C yra grupės, atitinkančios VII formulę a - konfigūracijoje, kuriame R1A bei R1C yra acetamido grupės, ir kuriame R2b yra Zc, Z8 arba Z12, o R,, yra Zr, arba Z13.
12. Panaudojimas pagal 6 punktą, besiskiriantis tuo, kad A yra Fuc al-2Galp.
13. Panaudojimas pagal 9 punktą, besiskiriantis tuo, kad A-Zj-B yra Fucal-2Gaipi-3GlcNAcP arba Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcP.
14. Panaudojimas pagal 9 punktą, besiskiriantis tuo, kad A- Z5- B- Z6- C yra Fucal- 2Gaip l- 3GlcNAca 1-3Galp arba Fucal- 2Galpl- 3( Fucal- 4) GlcNAcpl- 3Galp.
15. Panaudojimas pagal 9 arba 11 punktą, besiskiriantis tuo, kad A- Z8- B- Z9- C- Z10- D yra GalNAcal-3( Fucal- 2) Gaipi- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- 3Gaip arba Fucal-2Galpl- 3( Fucal- 4) GlcNAcpl- 3Galpl- 4Glcp.
16. Panaudojimas pagal 11 punktą, besiskiriantis tuo, kad A- Z12- B- Z13- C- Z14- D- Z15- E yra GalNAcal- 3( Fucal- 2) Galpl- 3( Fucal- 4) GlcNAcPl- 3Gaipi- 4Glcp.
17. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1- 16 punktų, besiskiriantis tuo, kad R yra grupė Q-( tiltelis) r-, kur r yra sveikas skaičius 0 arba 1, o Q yra matrica ( MA).
18. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1- 17 punktų, besiskiriantis tuo, kad tiltelis apibrėžiamas kaip ( W) v- S'- P', kur S1 yra (^.^- alkilo, C2_ 24- alkenilo, C1. 24- alkilarilo, arilC1. 24alkilo, arilC1_ 24alkilarilo, C1. 24al-kilarilC1_ 24alkilo grupė, šios grupės gali būti pertrauktos karbonilo, tiokarbonilo, oksikarbonilo, karboniloksi, karbonilamino, aminokarbonilo, azo, okso arba tio grupėmis; arilo grupė, ariloksi, C1_ 24- alkoksilo, polietilenglikolio grupė, steroidinė grupė, sfingoidinė grupė; visos grupės gali turėti karboksilo, C1. 4alkilkarbonilo, amido, hidroksilo, alkoksi, ariloksi, fenoksi pakaitą;P' yra NH- C( S), NH- C( O), C( 0), NH, C( S), C( 0) 0, ( 0) C0, SO, S02, S03, S04, P03, P0„ ;W yra NH- C( S), NH- C( O), C( 0), C ( S), C ( 0) 0, ( 0) C0, SO, S02, S03, S04, P02, P03, P04, su sąlyga, kad kai ZL, Z2, Z4, Z7, Zn arba Z16 yra CH2, tai W negali būti P02, su sąlyga, kad kai Zlf Z2, Z4, Z7, Zu arba Z16 yra O ar S, tai W negali būti (O)CO, S04 ar P04, ir su sąlyga, kad kai Z,, Z2, Zą, Z,, Zu arba Z16 yra NH, tai W negali būti NH-C(S), NH-C(O), (O)CO, SO,, ar P04, ir v yra sveikas skaičius 0 arba 1.
P' yra NH- C( S), NH- C( O), C( 0), NH, C( S), C( 0) 0, ( 0) C0, SO, S02, S03, S04, P03, P0„ ;W yra NH- C( S), NH- C( O), C( 0), C ( S), C ( 0) 0, ( 0) C0, SO, S02, S03, S04, P02, P03, P04, su sąlyga, kad kai ZL, Z2, Z4, Z7, Zn arba Z16 yra CH2, tai W negali būti P02, su sąlyga, kad kai Zlf Z2, Z4, Z7, Zu arba Z16 yra O ar S, tai W negali būti (O)CO, S04 ar P04, ir su sąlyga, kad kai Z,, Z2, Zą, Z,, Zu arba Z16 yra NH, tai W negali būti NH-C(S), NH-C(O), (O)CO, SO,, ar P04, ir v yra sveikas skaičius 0 arba 1. 19. Panaudojimas, pagal bet kuri, vieną iš 18 punktų, besiskiriantis tuo, kad tiltelis pasirinktas iš
20. Panaudojimas pagal bet kuri, iš 1-17 punktų, besiskiriantis tuo, kad matrica (MA) yra žmogaus serumo albuminas (HSA),jaučio serumo albuminas (BSA) arba poliakrilaminas (PAA).
21. Panaudojimas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad junginys yra pasirinktas iš[ Fucal-2Gaipi-tiltelis] n-MA;( Fucal-2Gaipi-3GlcNAc(3-tiltelis] n-MA; [ Fucal-2Galpl-3 (Fucal-4) GlcNAcP-tiltelis] n-MA;[ Fucal-2Galpl-3GlcNAcPl-3Gaipi-tiltelis] n-MA; [ Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcp-3Galpl-tiltelis] n-MA; [ GalNAcal-3(Fucal-2)Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcpl-3Galpl-tiltelis] n-MA; [ Fucal-2Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcpi-3Gaipi-4Glcpl-NH] n-MA; [ GalNAcal-3(Fucal-2)Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcpl-3Gaipi-4GlcPl-[ tiltelis] n-MA;kur tiltelis yra išrinktas iš grupės, apibrėžtos 19 punkte, n yra sveikas skaičius 1-40, kai MA yra HSA ar BSA, bei n yra sveikas skaičius 10-10000, kai MA yra PAA.
22. Panaudojimas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad junginys yra pasirinktas iš [ Fucal-2Gaipi-tiltelis 1] n-HSA;[ Fucal-2Gaipi-tiltelis 2]n-PAA;[ Fucal-2Gaipi-tiltelis 4] n-HSA;[ Fucal-2Gaipi-tiltelis 5] n-PAA; [ Fucal-2Galpl-3GlcNAcp-tiltelis 5]n-PAA; [ Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcP-tiltelis 5] n-PAA; [ Fucal-2Gaipi-3GlcNAcpi-3Gaipi-tiltelis 3]n-HSA; [ Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcP-3Gaipi-tiltelis 3] n-HSA; [ Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcpl-3Galpl-4Glc 1-NH] n-PAA; [ GalNAcal-3(Fucal-2)Galpl-3(Fucal-4)GlcNAcPl-3Galpl-tiltelis 3] n-HSA;kur tiltelis 1, tiltelis 2, tiltelis 3, tiltelis 4 ir tiltelis 5 yra apibrėžti 19 punkte, n yra sveikas skai-čius 1-40, kai MA yra HSA, bei n yra sveikas skaičius 10-10000, kai MA yra PAA.
23. Panaudojimas, pagal bet kurį iš 1-22 punktų, b e - sikiriantis tuo, kad junginys pagal formules Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If yra pritaikytas įvesti kartu su preparatu, paprastai vartojamu terapiškai gydant gastritus arba opaligės, ypač su preparatais, turinčiais omeprazolio, cimetidino, ranitidino, lan-soprazolio, pantoprazolio, sukralfato, famotidino, nizetidino, magnio hidroksido, aliuminio hidroksido, kalcio karbonato, simetikono arba magaldrato.
24. Panaudo j imasy pagal bet kuri, iš 1-23 punktų, besiskiriantis tuo, kad junginys pagal formules Ia, Ibr Ic, Id, Ie arba If yra pritaikytas i,vesti kartu su preparatu, vartojamu gydymo kursuose su antimikrobiniais vaistais, ypač su preparatais, tu-rinčiais :P laktaminių antibiotikų, kaip antai: amoksicilino, ampicilino, cefalotino, cefakloro ar cefiksimo; arbamakrolidų, kaip antai, eritromicino ar klaritromicino;arba tetraciklinų, kaip antai, tetraciklino ar doksiciklino; arba aminoglikozidų, kaip antai, gentamicino,kanamicino ar amikacino; arba chinolonų, kaip antai:norfloksacino, ciprofloksacino ar enoksacino; arba kitų medžiagų, kaip antai: metronidazolio, nitrofurantoino ar chloramfenikolio;arba preparatų, turinčių bismuto druskų, tokių kaip bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato.
P laktaminių antibiotikų, kaip antai: amoksicilino, ampicilino, cefalotino, cefakloro ar cefiksimo; arbamakrolidų, kaip antai, eritromicino ar klaritromicino;arba tetraciklinų, kaip antai, tetraciklino ar doksiciklino; arba aminoglikozidų, kaip antai, gentamicino,kanamicino ar amikacino; arba chinolonų, kaip antai:norfloksacino, ciprofloksacino ar enoksacino; arba kitų medžiagų, kaip antai: metronidazolio, nitrofurantoino ar chloramfenikolio;arba preparatų, turinčių bismuto druskų, tokių kaip bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato.norfloksacino, ciprofloksacino ar enoksacino; arba kitų medžiagų, kaip antai: metronidazolio, nitrofurantoino ar chloramfenikolio;arba preparatų, turinčių bismuto druskų, tokių kaip bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato.25. Junginys formulės Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If, kaip apibrėžta punktuose 1-22, skirtas gydyti ar vartoti profilaktiškai prieš žmonių ligas, sukeltas žmogaus skrandžio gleivinės užkrėtimo Helicobacter pylori.
26. Junginys formulės Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If, kaip apibrėžta punktuose 1-22 junginyje su bent vienu antiopiniu ar antigastritiniu medikamentu, arba su bent viena antimikrobine medžiaga arba jų mišiniu, skirtas gydyti ar vartoti profilaktiškai prieš žmonių ligas, sukeltas žmogaus skrandžio gleivinės užkrėtimo Helicobacter pylori.
27. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad turi jungini,, pagal formules Ia, Ib, Ic, Id, Ie arba If kaip apibrėžta 1-22 punktuose, arba tokių junginių mišinį,, kartu su bent vienu antiopiniu ar antigastritiniu medikamentu arba su bent viena antimikrobine medžiaga arba jų mišiniu ir su farmaciškai priimtinu nešikliu.
28. Farmacinė kompozicija pagal 27 punktą, besiskirianti tuo, kad antiopinis ar antigastritinis medikamentas pasirinktas iš skrandžio sekreciją slopinančių junginių ir antacidų.
29. Farmacinė kompozicija pagal 28 punktą, besiskirianti tuo, kad skrandžio sekreciją slopinantis junginys pasirinktas iš cimetidino, ranitidino, famotidino, nizatidino, omeprazolio, lansopra-zolio, pantoprazolio ir sukralfato.
30. Farmacinė kompozicija pagal 28 punktą, besiskirianti tuo, kad antacidas pasirinktas iš Al (OH) 3, Mg(OH)2, CaC03, Na2C03, NaHC03, aliuminio magnio hidroksido arba jo hidrato, simetikono.
31. Farmacinė kompozicija pagal 27 punktą, besiskirianti tuo, kadant imi krobme medžiaga pasirinkta iš laktaminių anti-biotikų, kaip antai: amoksicilino, ampicilino, cefalotino, cefakloro ar cefiksimo; makrolidų, kaip antai:eritromicino ar klaritromicino; tetraciklinų, kaip antai: tetraciklino ar doksiciklino; aminoglikozidų,kaip antai: gentamicino, kanamicino ar amikacino; chi-nolonų, kaip antai: norfloksacino, ciprofloksacino ar enoksacino; bismuto druskų, tokių kaip bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato; heterociklinių antibiotikų, kaip antai: metronidozolio, nitrofurantoino, ir benzolo darinių, kaip chloramfenikolio.
eritromicino ar klaritromicino; tetraciklinų, kaip antai: tetraciklino ar doksiciklino; aminoglikozidų,kaip antai: gentamicino, kanamicino ar amikacino; chi-nolonų, kaip antai: norfloksacino, ciprofloksacino ar enoksacino; bismuto druskų, tokių kaip bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato; heterociklinių antibiotikų, kaip antai: metronidozolio, nitrofurantoino, ir benzolo darinių, kaip chloramfenikolio. 32. Naujas junginys [ Fucal-2Gaipi-tiltelis 1]n-HSA, kuriame tiltelis 1 yra
33. Naujas junginys [ Fucal-2Galpl-tiltelis 2] n-PAA, kuriame tiltelis 2 yra
34. Naujas junginys [ Fucal-2Gaipi-tiltelis 4] n-HSA, kuriame tiltelis 4 yra
35. Naujas junginys [ Fucal-2Gaipi-tiltelis 5] n-PAA, kuriame tiltelis 5 yra
36. Naujas junginys [ Fucal-2Gaipi-3GlcNAcPl-tiltelis 5] n-PAA, kuriame tiltelis 5 ir n yra tokie, kaip apibrėžta 35 punkte.
37. Naujas junginys [ Fucal-2Gaipi-3(Fucal-4)GlcNAcPl-tiltelis 5] n-PAA, kuriame tiltelis 5 ir n yra tokie, kaip apibrėžta 35 punkte.
38. Nauji junginiai pagal bet kuri, iš 32-37 punktų, besiskiriantys tuo, kad tas junginys skirtas vartoti gydant gastritą ar opaligę kartu su įprastu preparatu turinčiu omeprazolo, cimetidino, ranitidino, lansoprazolo, pantoprazolo, sukralfato, famotidino, nizetidino, magnio hidroksato, aliuminio hidroksato, kalcio karbonato, simetikono arba magaldrato.
39. Nauji junginiai pagal bet kuri, iš 32-37 punktų, besiskiriantys tuo, kad tas junginys yra pritaikytas vartoti derinyje su preparatu, vartojamu gydymo kurse su antimikrobiniu agentu, ypač su preparatais, turinčiais:P -laktaminių antibiotikų, kaip antai: arnoksicilino, ampicilino, cefalotino, cefakloro ar cefiksimo; arbamakrolidų, kaip antai: eritromicino ar klaritromicino;arba tetraciklinus, kaip antai tetracikliną ar doksi-cikliną; arba aminoglikozidus, kaip antai, gentamiciną,kanamiciną ar amikaciną; arba chinolinus, kaip antai norfloksaciną, ciprofloksaciną ar enoksaciną; arba kitų medžiagų, kaip antai metronidazolą, nitrofurantoiną ar chloramfenikolą; arba su preparatais, turinčiais bismuto druskų, kaip antai, bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato.
P -laktaminių antibiotikų, kaip antai: arnoksicilino, ampicilino, cefalotino, cefakloro ar cefiksimo; arbamakrolidų, kaip antai: eritromicino ar klaritromicino;arba tetraciklinus, kaip antai tetracikliną ar doksi-cikliną; arba aminoglikozidus, kaip antai, gentamiciną,kanamiciną ar amikaciną; arba chinolinus, kaip antai norfloksaciną, ciprofloksaciną ar enoksaciną; arba kitų medžiagų, kaip antai metronidazolą, nitrofurantoiną ar chloramfenikolą; arba su preparatais, turinčiais bismuto druskų, kaip antai, bismuto subcitrato, bismuto subsalicilato, bismuto subkarbonato, bismuto subnitrato ar bismuto subgalato.40. Nauji junginiai pagal bet kuri, iš 32-37 punktų, skirti vartoti terapijoje.
41. Naujų junginių pagal bet kuri, iš 32-37 punktų gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad panaudojami žinomi šioje srityje būdai.
42. Naujų junginių, turinčių Ia, Ib, Ic, Id, Ie ir If formules pagal 1 punktą, gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kadi) paverčia monosacharidą i, glikozidą su aglikonine Ra grupe, kad susidarytų Ra-glikozido darinys, taip, kad tą Ra-glikozidą būtų galima tranformuoti i, glikozilo donorą, aktyvuojant anomerini, centrą,ii) po to įveda naujas funkcines grupes Rb,iii) kondensuoja Rb-pakeistus Ra-glikozidus, jei reikia kelių glikozidinių jungčių, ši iii) stadija pakar-to j ama,iv) po to i,veda pakaitą Rc, apibrėžtą kaip (Z į-Z^J-R, redukuojančiame gale, ir, jei būtina, pašalina blokuo-lančias grupes.
i) paverčia monosacharidą i, glikozidą su aglikonine Ra grupe, kad susidarytų Ra-glikozido darinys, taip, kad tą Ra-glikozidą būtų galima tranformuoti i, glikozilo donorą, aktyvuojant anomerini, centrą,ii) po to įveda naujas funkcines grupes Rb,iii) kondensuoja Rb-pakeistus Ra-glikozidus, jei reikia kelių glikozidinių jungčių, ši iii) stadija pakar-to j ama,iv) po to i,veda pakaitą Rc, apibrėžtą kaip (Z į-Z^J-R, redukuojančiame gale, ir, jei būtina, pašalina blokuo-lančias grupes.