[LT] Išradimas liečia kompoziciją, skirtą kraujo plazmos, visos ar neturinčios krioproteinų, stabilizavimui pasterizavimo metu. Kompozicija sutinkamai su išradimu įgalina atlikti labai didelių plazmos tūrių (iki kelių šimtų litrų) pasterizavimą.@Išradimas taip pat liečia plazmos pasterizavimo būdą, naudojant stabilizavimo kompoziciją.@Gauta pasterizuota plazma skirta terapiniam naudojimui.
[EN]
[0001] Išradimas liečia kompoziciją, įgalinančią stabilizuoti kraujo plazmą pasterizavimo metu, patį būdą, naudojant minėtą kompoziciją, ir gautus tokiu būdu plazmos tirpalus, skirtus ypač plazmos ir kraujo krešėjimo V, XI ir XIII faktorių pakaitalų terapijai.
[0002] Visa žmogaus plazma ar plazma, atskirta nuo krioproteinų, panaudojama pakaitalų terapijoje, esant sunkiems nudegimams, pacientams, patyrusiems dideles traumas arba rimtas chirurgines operacijas, t. y. visais atvejais, kad netenkama didelio skysčio kiekio.
[0003] Paprastai šio tipo terapijoje naudojama plazma, gauta iš individualių donorų, sveikų ir iš anksto patikrintų asmenų, išvengiant rizikos, pernešant virusinius susirgimus. Vienok ši procedūra neužtikrina virusinio užkrėtimo negalimumo priešserologiniame periode, ypač įvairiais hepatito virusais ir AIDS virusu.
[0004] Todėl reikalinga sukurti virusinės inaktyvacijos metodą, kuris neturėtų poveikio įvairioms plazmos biologinėms funkcijoms.
[0005] Buvo įrodyta, jog hepatito B virusas yra pilnai inaktyvuoj amas kaitinant prie 60cC 10 vai., esant 0.5 M natrio citrato (Tabor ir kt. Trombosis Res., 22, 1981, 233-238). Vienok šis apdorojimas iššaukia kai kurių plazmos proteinų biologinio aktyvumo praradimą (Tabor ir kt., ir Barrowcliffe ir kt., Fr. J. Haematology, 55, 1983, 37-47) .
[0006] Yra įrodyta, jog įvairūs proteinai, reikšmingi terapijai, išskirti ir išvalyti iš kraujo plazmos, atlaiko klasikinį pasterizavimą prie 60°C 10 vai. laikotarpyje, esant įvairiems stabilizatoriams. Be to, parodyta, jog molekulės, stabilizuojančios vieną biologini, aktyvumą, gali būti visiškai neefektyvios kitų aktyvumų atžvilgiu.
[0007] Taigi, albuminas gali būti stabilizuojamas acetil-triptofanu ir kaprilatu (Gellis ir kt., J. Clin. Invest., 27, 1948, 238-244), tuo tarpu šie stabilizatoriai nerodo poveikio plazminogeno atžvilgiu. Trombinas gali būti stabilizuojamas aukštomis gliukozidų koncentracijomis (Seegers. Arch. Biochem., 3, 1944, 363-367), bet jos neapsaugo protrombino. Amino rūgščių ir karbohidratų priedas duoda gerus rezultatus VIII faktoriaus ir III antitrombino atžvilgiu (žiūr. VFR patentą Nr. 29 16 711) .
[0008] Europos patentas Nr. 0 035 204 aprašo a-antitripsino, III antitrombino, prekalikreino, fibronektino ir VIII faktoriaus stabilizavimą polialkoholių pagalba, kaip vieną iš paskutinių pavyzdžių nurodydamas sacharozę; vienok parodyta, kad tokiomis pačiomis sąlygomis IX faktorius ir prekalikreinas praranda savo visą terapini, aktyvumą.
[0009] Šie skirtingi eksperimentiniai duomenys patvirtina tą nuomonę, jog virusinė visos plazmos (šviežios plazmos, užšaldytos šviežios plazmos ar krionusodinto supernatanto) inaktyvacija negali būti pasiekta pasterizavimo būdu.
[0010] Kadangi medicinoje jaučiamas visos plazmos trūkumas, pareiškėjas turėjo tikslą pasiūlyti kompoziciją, užtikrinančią vienalaikę visų faktorių, svarbių terapijai, biologinio aktyvumo apsaugą prieš denatūraciją pasterizavimo metu.
[0011] Įskaitant tai, jog sorbitas duoda tam tikrą apsaugą prieš terminę denatūraciją, bet rezultatai varijuoja tarp plazmos pavyzdžių ir išeigos yra nedidelės,
[0012] pareiškėjas pateikė naujus priedus, kurių mišiniai su sorbitu padidina jų stabilizuojančią galią.
[0013] Taigi, pagal ši, išradimą siūlomą kompoziciją sudaro sorbitas, kalcio chloridas, heparinas ir lizinas. Įvairių komponentų koncentracijos reguliuojamos tokiu būdu, kad plazmoje, skirtoje pasterizavimui, būtų sekančios galutinės koncentracijos:
[0014] - 0.1-1% vienetų/ml heparino, tinkamiausia 0.5 vienetų/ml,
[0015] Sutinkamai su išradimu, kompozicija yra dedama i, šviežią plazmą, j, užšaldytą-atšildytą šviežią plazmą arba d, plazmą, iš kurios pašalinti krionuosėdų pavidalu proteinai prieš tai, kai pastaroji pasterizuojama prie 60°C ± 1°C 10 vai.
[0016] Pasibaigus pasterizavimui, temperatūra palaipsniui sumažinama iki 20°C, ir tirpalas yra dializuojamas, kad pašalintų sorbitą ir hepariną. Dializės buferio tirpalo pH yra 7, jis turi 4-10 mM natrio citrato, 4 mM kalcio chlorido, 0.13 M natrio chlorido ir 4 g/l lizino. Priklausomai nuo poreikio, dializės buferiai gali turėti įvairias sudėtis. Po to tirpalas yra koncentruojamas, kad atstatyti plazmos proteinų fiziologinę normą. Gautas tirpalas steriliai filtruojamas, kondicionuojamas, po to užšaldomas ar liofilinamas.
[0017] Išradimas taip pat apima plazmos pasterizavimo būdą, kuri, sudaro kompozicijos, sutinkamai su išradimu, pridėjimas i, plazmą, prieš ją kaitinant, ir po to pasterizuotos plazmos dializė prieš anksčiau nustatytą buferio tirpalą.
[0018] Šis būdas vertingas ypač tuo, kad ji, galima taikyti didelėms plazmos partijoms, gaunamoms iš keleto individualių donorų. Dar daugiau, partijų nuo 100 iki 200 1 ar daugiau pasterizavimas įgalina po atitinkamų testų garantuoti partijų kokybės pastovumą.
[0019] Iš kitos pusės plazmos partijos, pasterizuotos kaip pateikta išradime, gali būti naudojamos kaip pakaitalai pacientams, turintiems krešėjimo faktorių, tokių kaip V faktoriaus, XI faktoriaus ir XIII faktoriaus, kuriems nėra valytų koncentratų, nepakankamumą.
[0020] Tokiu būdu, išradimas apima taip pat pasterizuotus plazmos tirpalus, gautus sutinkamai su išradimu, ir ypač skirtus, iš vienos pusės, V, XI ir XIII faktorių nepakankamumui gydyti, iš kitos pusės - pakaitalų terapijai, reikalaujančiai visos plazmos arba krionusodinto supernatanto.
[0021] Sekantis pavyzdys aprašo išradimo įgyvendinimo variantą, neapribojant jo apimties.
[0022] Į du litrus atšildytos plazmos pridedama heparino (1000 vienetų), lizino (8 g) ir kalcio chlorido (220 mg). Šie du produktai pridedami druskų miltelių pavidale, plazma atsargiai maišoma. Po to palaipsniui dedama 120 g neištirpinto sorbito.
[0023] Pasterizavimas atliekamas 5 1 tūrio inde kaitinant 60°C temperatūroje 10 vai. vandens vonioje arba termostatuojamame rezervuare. Po pasterizavimo sorbitas ir heparinas pašalinami dializuojant dirbtiniu inkstu arba ultrafiltracijos sistema, kaip PellikonM sistema su kasetėmis, naudojant citratini, buferini, tirpalą, turinti, 4 g/l lizino, 4 mM CaCl2 ir 0,13 M NaCl. Dializę gali lydėti koncentravimas tokia pat sistema, kad pasiektų krešėjimo faktorių kieki, apytiksliai iki 1 vieneto/ml, kas rodo gerą terapinę plazmos kokybę. Plazma dializuojama prie 370 mosmol/ltr osmosinio slėgio ir pH 7. Produktas tada steriliai filtruojamas, pav., naudojant Millipack" 40 filtrą (Millipore), turinti, 0.22 jim dydžio poras. Produktas yra paskirstomas i, plastikinius maišelius užšaldymui arba i, medicininius flakonus liofilinimui.
[0024] Plazmos stabilizavimas pasterizuojant ir ultrafiltruojant, pridėjus kalcio chlorido, heparino ir lizino, įgalina gauti sekančias išeigas, lyginant su kontroliniu pavyzdžiu, turinčiu tik liziną ir sorbitą.
[0025] Nebuvo pastebėta krešėjimo faktorių aktyvacijos požymių, naudojant ši, kalcio chlorido kieki,. Tokiu būdu, santykis jaučio FVII/koagulianto FVII yra 0.95 prieš 1.09 kontroliniame pavyzdyje. Stabilumas, tirtas FVIII aktyvumo atžvilgiu, 24 vai. konservavus produktą skystame būvyje prie kambario temperatūros, nepa-blogėjo, palyginus su kontroliniu pavyzdžiu (atsistatė
[0026] 100% aktyvumo). Tai patvirtina procentinis kiekis PKA < 2% pasterizuotiems produktams ir kontroliniams pavyzdžiams.
[0027] Be to, bandymai su žiurkėmis, gavusiomis intraveniniu būdu tokiu metodu pasterizuotą plazmą, rodo, jog nestebima hipotenzinio efekto ir nesukeliama jokių pokyčių širdies ritme.
1. Kompozicija kraujo plazmai stabilizuoti pasterizavimo metu, besiskirianti tuo, kad ją sudaro sorbito, heparino, kalcio chlorido ir lizino mišinys.
2. Kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad sorbito koncentracija yra tarp 500 ir 800 g/l.
3. Kompozicija pagal 2 punktą, besiskirianti tuo, kad sorbito koncentracija yra 600 g/l.
4. Kompozicija pagal vieną iš 1-3 punktų, besiskirianti tuo, kad heparino koncentracija yra tarp 100 ir 1000 vienetų/l.
5. Kompozicija pagal 4 punktą, besiskirianti tuo, kad heparino koncentracija yra 500 vienetų/l.
6. Kompozicija pagal vieną iš 1-5 punktų, besiskirianti tuo, kad kalcio chlorido koncentracija yra tarp 3 ir 5 mM.
7. Kompozicija pagal 6 punktą, besiskirianti tuo, kad kalcio chlorido koncentracija yra 4 mM.
8. Kompozicija pagal vieną iš 1-7 punktų, besiskirianti tuo, kad lizino koncentracija yra tarp 1 ir 10 g/l.
9. Kompozicija pagal 8 punktą, besiskirianti tuo, kad lizino koncentracija yra 4 g/l.
10. Būdas kraujo plazmai pasterizuoti, besiskiriantis tuo, kad prieš terminį apdorojimą plazmą deda kompoziciją pagal vieną iš 1-9 punktų ir po to ją pašalina dializuojant.
11. Būdas pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad dializę atlieka prie pH 7 buferio tirpalu, turinčiu 4-10 mM natrio citrato, 4 mM kalcio chlorido,
0.13 M natrio chlorido ir 4 g/l lizino.
12. Būdas pagal 10 arba 11 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis tinka plazmos tūriams nuo 1 iki keleto šimtų litrų.
13. Plazmos tirpalas terapiniam naudojimui, skirtas kraujo krešėjimo V, XI ir XIII faktorių nepakankamumui kompensuoti, besiskiriantis tuo, kad jis yra gautas, naudojant būdą pagal vieną iš 10-12 punktų.
14. Visa plazma terapiniam naudojimui, besiskirianti tuo, kad ją pasterizuoja naudojant būdą pagal vieną iš 10-12 punktų.
15. Krionusodintos ir atskirtos nuo krioproteinų plazmos supernatantas terapiniam naudojimui, besiskiriantis tuo, kad ji, pasterizuoja naudojant būdą pagal vieną iš 10-12 punktų.