[LT] Aprašyti analizės būdas, kompozicija, skirta kiekybiniam gliukozės nustatymui gryname neatskiestame kraujyje, ir jos panaudojimo būdas. Gryno neatskiesto kraujo pavyzdį sukeičia su sauso pavidalo kompozicija, kurią sudaro šie komponentai: gliukozės dehidrogenazė (GDH), viena arba keletas medžiagų, priklausančių grupei , kurios sudėtis tokia:diaforazė, fenazinmetosulfatas, fenazinetosulfatas, fenazinfenosulfatas, Mendolo mėlis; viena arba keletas medžiagų, paimtų iš grupės, kurios sudėtis tokia:NAD (nikotinamidinis dinukleotidas), NADF, tipo-NAD, tio-NADF, nikotinamidpurino dinukleotidas, nikotinamidmetilpurino dinukleotidas, nikotinamid-2-chlormetilpurino dinukleotidas; viena arba keletas hemolizinių medžiagų, priklausančių grupei, kurios sudietis tokia:fosfolipazė, hemoliziniaisaponiniaiir hidrofiliniai mono-, di- arba trisacharidai bei alifatiniai angliavandeniliai iš 10-16 anglies atomų; oksidacinis-redukcinis indikatorius-dažas; galima papildyti mutarotaze. gryno neatskiesto kraujo su nurodytu reagentu reakcijos metu keičiasi spalva, kuri yra registruojama spektrometru (pralaidumo rėžime).
[EN]
[0001] ,. Šis išradimas skirtas gliukozės nustatymui, o konkrečiau -.kiekybiniam gliukozės nustatymui gryname neatskiestame kraujyje. Šis išradimas taipogi numato analizės kompoziciją bei jos panaudojimą.
[0002] Gliukozės nustatymas kraujyje yra reikalingas klinikinės chemijos kasdieniniuose, tyrimuose. Šie tyrimai panaudojami diagnostikai ir terapijai; sergantiems diabetu bei medžiagų apykaitos susirgimais..
[0003] Yra žinomi keli kiekybinio gliukozės nustatymo būdai, gryname neatskiestame kraujyje..
[0004] Vienas iš jau žinomų čia nurodytų būdų pagrįstas: fermentiniu gliukozės nustatymu, panaudojant gliukozės dehidrogenazę; kompozicija, atitinkanti šj, būdą,;., aprašyta JAV, patente 4120755, Nurodyta kompozicija:;
[0005] sudaryta -iš buferio piridoninio koenzimo ir gliukozės dehidroger.azės. Čia buferio sąvoka reiškia pH kitimą:, nuo 7,9 iki 9,.©. JAV patente .3 964 974 žinoma kita
[0006] kompozicija, .skirta gliukozes nustatymui. Nurodytos kompozicijos pagrindiniai elementai yra šie: gliukozės dehidrogenazė, kuriai keliami tam tikri reikalavimai švaros ir tipo atžvilgiu, ' piridoninis' koenzimas,;
[0007] pavyzdžiui, NAD..(nikotinamid.inis dinukleotidas) , buferinė sistema skirta palaikyti tam tikrai pH reikšmei junginio vandeniniame tirpale (tarp 6,5 ir 8,5) ir . mutarotazė. Nei viename iš nurodytų dviejų, patentų nenumatytas nei būdas., nei kompozicija, tinkantys tiesioginiam kiekybiniam gliukozės nustatymui gryname neatskiestame kraujyje, tai yra nei atskiedus, nei nusodinus. Vienintelė informaciją, skirta gliukozės nustatymui gryname kraujyje, aprašyta JAV patento ,
[0008] 3964974 7-ajame pavyzdyje, kur nurodyta "drėgnos" gliukozės cheminė analizė, naudojant gryno kraujo pavyzdį.Prieš atliekant šią analizę, iš gryno kraujo pavyzdžia pašalinami proteinai. Pašalinus proteinus, gali nebelikti raudonųjų kraujo kūnelių. Todėl
[0009] gliukozės nustatymas atliekamas ne gryname kraujyje. Būtina atkreipti dėmesį i nurodyto JAV patento aprašymo 9 psl. 19-24 eilutes, kur nurodoma, kad negalima išsaugoti raudonųjų kraujo kūnelių, nustatant gliukozės kieki, gryname kraujyje. Deproteinizavus neatskiestą kraują ir prieš praleidžiant, jis sumaišomas . su fermento iš buferio tirpalu. Reakcija pradedama, įvedant koenzimo (NAD) tirpalą, o po to nustatomas gliukozės kiekis; Taip pat nurodoma, kad gliukozė gali būti nustatyta, panaudojant dažą arba spalvotą reakciją kaip indikatorių, parodanti NADN buvimą, pavyzdžiui, tetrazolio druską hidrogenezuoj a i atitinkamą formazoną, veikiant diaforazės fermentu. Bet nurodytame šaltinyje nenumatomas šios metodikos taikymas, panaudojant NADN indikavimą, ' Skirtą gliukozės nustatymui tik kraujo plazmoje. JAV patente 3 964 074, pavyzdžiui, 6-jame pavyzdyje gliukozė kraujyje nustatoma tiriant' atskiestą kraują, priešingai, nei šiame išradime, kuriame gliukozė nustatoma tiesiogiai neatskiestame kraujyje.
[0010] Aišku, kad paprasto ir greito testo sukūrimas kiekybiniam gliukozės nustatymui gryname neatskiestame kraujyje yra darbui klinikinėje laboratorijoje vertingas patobulinimas.
[0011] Vienas šio išradimo tikslų yra -kiekybinis gliukozės nustatymo gryname neatskiestame kraujyje patobulinimas, panaudojant spektrofotometriją pralaidumo režime..
[0012] Kitas šio išradimo tikslas yra tinkamiausias sausos kompozicijos parinkimas, naudojamas kiekybiniam nustatymui. Šis išradimas gali būti . taikomas kiekybiniam gliukozės nustatymui mažuose gryno neatskiesto kraujo kiekiuose. Išsireiškimas "mažas tūris" suprantamas kaip tūris, esantis ^arp 0,1 .ir 0,001 ml, o geriau, jei tarp 0,02 ir.0,001 ml.
[0013] Remiantis šiuo išradimu, kraujo geriau ne tik kad neskiesti, bet dar ir nemėginti kaip nors apdoroti.
[0014] Pirmiausia,, šiame. išradime numatytas kiekybinis gliukozės gryname neatskiestame kraujyje nustatymo būdas pasižymi tuo, kad gryno neatskiesto kraujo pavyzdys, kurio tūris, geriau jei būtų mažesnis nei 20 ml, kontaktuoja su sauso .pavidalo- reagentu, į kurio sudėtį įeina: - gliukozės- dehidrogerjazė (GDH); , - vienas arba keletas junginių, priklausančių grupei, sudarytai ' iš diaforazės, fenazinmetosulfato, • fenazinetosūlfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlio; - vienas arba keletas junginių, priklausančių grupei, kurios, sudėtis tokia: NAL (nikotinamidinis dinukleotidas) , NADF, tio-NAD., tio-NADF, nikotinamidpurino dinukle tidas, nikot'inamidmetilpurinp dinukleotidas, nikotinamid-.2-chlormetilpurino dinukleotidas; - viena arba keletas hemolizinių medžiagų, priklausančių grupei, sudarytai iš -fosfolipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba trisacharidų ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10 - 16 anglies atomų; - oksidacinis-redukcinis indikatorius-dažas; - galima papildyti mutarotaze; ir nurodyto reagento su gliukoze gryname neatskiestame kraujyje reakcijos metu besikeičiančios spalvos registracija spektrofotomeįrijos metodu pralaidumo režime.
[0015] Priemonės, skirtos tam, kad vyktų nurodytas būdas, yr. a aprašytos JAV patente 4 088 448.
[0016] Antra šiame išradime numatyta kompozicija, skirta gliukozės kiekio nustatymui gryname neatskiestame kraujyje, pasižymi tuo, kad ji sausame pavidale yra ir ją sudaro: - gliukozės dehidrogenazė ( GDH) ; - vienas arba keletas junginių, priklausančių grupei, sudarytai iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetosulfato, fenažinfenosulfato ir Meldolo mėlio; - vienas arba keletas junginiu, priklausančių grupei, kurios sudėtis tokia: { nikotinamidinis dinukleotidas), flADF, tio- NAD, tio- NADF, nikotinamidpurino dinukleotidas, nikotinamid- 2-chlormetilpurino dinukleotidas; - viena arba keletas hemolizinių medžiagų, priklausančių grupei, sudarytai iš fosfolipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba tr. isacharidų ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10- 16 anglies atomų;oksidacinis- redukcinis indikatorius- dažas; - galima papildyti mutarotaze.
[0017] Trečia, šiame išradime numatomas nurodytos kompozicijos panaudojimas, pasižymintis tuo, kad- į^ još sudėtį i, eina:
[0018] - vienas arba keletas junginių, priklausančių grupei, sudarytai iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetcsulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlio; - vienas arba ' keletas junginių, priklausančių grupei, kurios sudėtis . tokia: NAD "( nikotinamidinis dinukleotidas) , NADF, tio- NAD, tio- NADF, nikotinarricpurino dinukleotidas, nikotinamid- 2-ch" ormet i lpuri. no dinukleotidas; - vienas arba• keletas hemolizinių medžiagų, priklausančių, grupei, sudarytai iš f osf olipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-,. di-airba trisacharidų ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10 - 16 anglies atomų; - ' oksidacinis- redukcinis indikatorius- dažas; -. galima papildyti mutarotaze; be to, imama nurodyta sauso pavidalo kompozicija, skirta- kiekybiniam gliukozės nustatymui gryname neatskiestame kraujyje, panaudojant spektrofotometrijos metodo pralaidume.Šiame išradime aprašytos kompozicijos komponentų sudėtis nėra kritinis fčktorius, bet geriau, kai ji yra nurodytose ribose, skirtose vienam gryno neatskiestokraujo ml:
[0019] diapazono praplėtimas. Trūkumrs toks, kad tirnalai, skirti kalibravimui ir kontrolei, turi pasiekti nurodytą .temperatūrą, o tai trunka mažiausiai vieną valandą.
[0020] reagentą galima pridėti medžiagų, stabilizuojančių pH nurodytame diapazone, tam, kad galėtų vykti reakcija pH diapazone, atitinkančiame fermento-aktyvumą.
[0021] Į reaktyvą taipogi galima įterpti medžiagas, veikiančias junginio tirpumą bei stabilumą. Tai svarbu tam tikrais atvejais. *"
[0022] v
[0023] Iš skirtingų medžiagų su skirtingomis molekulinėmis masėmis bei pH optimaliais variantais galima gauti gliukozės dehidrogenazę. Šiame aprašyme gliukozės dehidrogenaze suprantama tik kaip fermentai, sudaryti iš ' NAD ( nikotinamidinio dinukleotido)' - arba NAD analogų - panašių tipų; i, jų skaičių neįeina tokie tipai, kurie priklauso nuo - deguonies ir funkcionuoja sū kinininiais koenzimais, kurie taip pat vadinami gliukozės dehidrogenazėmis
[0024] Diaforazė taip pat gali būti gauta iš skirtingų medžiagų, tačiau ją gali pakeisti kitos žinomos . medžiagos, pavyzdžiui, fenazinmetosulfatas, / Meldolo mėlis ir t. t. Taipogi žinomi ir' kiti NAD ( nikotinamid- inis dinukleoti. das) analogai, iš jų populiariausias yra NADF, kuris gali būti atnaujintas gliukozės/ gliukozės dehidrogenazės reakcija ir gali atnaujinti dažą arba spalvinę sistemą.
[0025] Tam, kad palengvinti paviršių sudrėkinimą ar patenkinti kitus . poreikius, gali prireikti paviršinės- aktyvios medžiagos. Medžiagos, žeminančios paviršinę įtampą, gali. būti įterpiamos, kad palengvintų hidrofilinių plastiko paviršių padengimą..
[0026] Tam, kad palengvinti suspensijos adaptaciją prie įvairių; rūšių paviršių, keičiamas jų klampumas, pridedant tinkamų stambiamolekulinių polimerų. Nurodytų stambiamolekulinių polimerų parinkimas nėra kriterijus, tačiau jis veikia sauso reaktyvo, ištirpimo - greitį. Tarp naudojamų polimerų paminėtini: polietilenglikolis, polivinilpirolidonas, dekstranas ir įvairūs celiuliozės dariniai:. Be to, polimerai gali būti parinkti ir tam, kad stabilizuotų suspensiją. Remiantis žinomais' junginio' gavimo būdais, taikomais, pavyzdžiui, maisto arba kosmetinėje pramonėje, praktišk* ai galima išspręsti bet kurias problemas, iškylančias reagentui adaptuojantis prie įvairių paviršių.
[0027] Medžiagos, žeminančios paviršinę įtampą, gali pasižymėti hemoliziniu efektu. Taip yra su denoil- N-metilgliukamidu. šis faktas leidžia panaudoti įvairias tokių medžiagų kombinacijas. Taip pat yra hemolizinės medžiagos, kurios • pasižymi ypatingu paviršiniu aktyvumu,, pavyzdžiui, melitinas ir fosf olipazes.
[0028] Yra žinomi kai kurie medžiagų tipai, keičiantys spalvą, ir kurie gali keisti spalvą, veikiant NADF ir diaforazei. Tinkamiausiais yra laikomi tetrazolo dariniai, nes dažas formazanas negrįžtamai
[0029] .susiformuoja, esant normalioms ireakcijos sąlygoms. Geri rezultatai gaunami, kai kompozicijoje naudojami 3- (4, 5-dimetiltiarol-2)-2,5-difenil-2H-tetrazolijbromidas
[0030] (MMT), bet galima naudoti kitus tetrazolo darinius. Tenka pažymėti, ka:d hemolizinių junginių grupę sudaro tik tokios medžiagos, kurioms sąveikaujant su tetrazolo dariniais nesusidaro nepageidaująmos nuosėdos.
[0031] Išradimą iliustruoja pavyzdžiai ir juos atitinkantys brėžiniai Fig.1 schematiškai atvaizduota reakcija ir junginių formulės. Fig.2 duota diagrama, kurios duomenys pateikti I-ojoje lentelėje ir kuri iliustruoja pasiskirstymą ir su lyginamuoju metodu bei statistiniu apdorojimu susietą koreliaciją, kurie reikalingi naudojantis "galinio taško" metodu.
[0032] Flg.3 duoti grafikai, skirti baigtinio taško nustatymui. Fig.4 duoti hemoglobino, MTT-formazano palyginimo bei bangų ilgio spektrais Fig^5 duota diagrama, iliustruojanti koreliaciją su lyginamuoju metodu kinetiniuose tyrimuose.
[0033] Siekiant gauti skirtingus gliukozės lygius,
[0034] matavimai atliekami su gryno kraujo pavyzdžiais, paruoštais su gliukoze. Lyginamąjį, metodą sudaro
[0035] firmos "Merk" ' testinė sistema'. Svarbiausia yra gliukozės•dehidrogenazė (Gliuk- 0 metodas - DH( R) ,
[0036] 13 886 tipas, 13 887). Nurodytam lyginamajam
[0037] metodui spektroskopinis nustatymas atliekamas UF
[0038] spektro srityje, esant 340 nm, pagal pridedamą testavimo instrukciją. Lyginamasis būdas yra cheminis analitinis "drėgno" tipo būdas.
[0039] 1 pavyzdys
[0040] 100 aktyvumo vienetų .gliukozės dehid-rogenazė
[0041] • 20 aktyvumo vienetų diaforazė (firmos "Merk"...produktas).
[0042] 30 mol MTT (firmos "Merk" produktas)
[0043] m Gaunamas tirpalas, tinkantis džiovinimui užšaldant mikrokiuvetėse, gautose inžekciniu formavimu/ kuris aprašytas JAV patente Nr. 4088448 ir yra ( Hemoęue - AB) firmos pramoninis produktas. Matavimai atliekami, naudojant " galinio taško" metodą* esant 660 nm, o palyginimui naudojamas 880 nm bangos ilgis.
[0044] Gliukozės dehidrogenazė 1000 aktyvumo vienetų (firmos "Merk" produktas)
[0045] 200 aktyvumo vienetų diaforazė (firmos "Merk" produktas).
[0046] 250 mg balto saponino (R) ( firmos "BDN" produktas)
[0047] 50 mg Pliuronik P 85 (R) ( firmos "Servą" produktas)
[0048] 250 mmol vandens (apdorotas jonų mainais)
[0049] Junginio komponentai susmulkinami taip,. kad gauta suspensija būtų tinkama paviršių padengimui, tinkamų spausdinimo būdams, pavyzdžiui,, spausdinimui aot šilko arba pasinaudojant spausdinimo cilindrais ir t. t. Ši suspensijos rūšis yra tinkama mikrbkiuvetėms su skiriamaisiais paviršiais, aprašytais JAV patente Nr. 4088448.
[0050] \ Mikrokiuvetes, atitinkančias JAV patentą Nr. 4 088 *448, pagamintas iš celiuliozės acetato-celiuliozės butirato maždaug 0,15 mm gylio padengia reagento kompozicija, aprašyta 2 pavyzdyje, spausdinimo įrenginiu. (4 spausdinimo ciklai). Išdžiovinus ir surinkus, buvo
[0051] tiriamas kiuvečių funkcionavimas, skirtas viso kraujo įvairių pavyzdžių analizei, Hemolizę nustatydavo, esant 660 nm bangos ilgiui; matavimo trukmė tęsėsi nuo 20 iki 40 sekundžių, _ priklausomai nuo eritrocitų kiekio, Nusidažymas buvo tiriamas esant tam pačiam bangos ilgiui; viso kraujo pavyzdžiai, kurių gliukozės koncentracija sudaro 12 rnmol/1,' pasiekia baigtini, tašką, atitinkantį matavimų metodikas., maždaug po 1,5 min. (žiūrėti fig. 3). Fig.4 duoti hemoglobino ir dažo spektrai gryno kraujo pavyzdžiui, kuriame gliukozės koncentracija yra . apie 12 mmol/1 kiuvetėje, pagal 3 pavyzdį.. Akivaizdu, kad šiuo atveju turime geras galimybes įvertinti .susidariusį formazaninį nusidažymą, išvengiant nepageidaujamo'persidengimo su hemoglobinu; taip pat susidaro galimybė pakeisti bendrą fono, drumstumą nenurodytuose spektruose. Keičiant 'padengto sluoksnio storį, savaime suprantama., keičiasi reakcijos laikas bei maksimaliai nustatomos koncentracijos.
[0052] 25 aktyvumo vienetų gliukozės dehidrogenazė su maksimaliu polietilenglikolaldehido metileteriu (750) 5 aktyvumo vienetų diaforazė (firmos "Merk" produktas)
[0053] 1 ml vandens (apdorotas jonų mainais) Šiuo būdu gaunamas tirpalas, tinkantis džiovinimui užšaldant analogiškai pavyzdžiui. • Reagentas paruošiamas kinetiniams tyrimams, priešingai buvusiems pavyzdžiams, kur nustatoma, remiantis galiniu tašku. Santykinai didelis gliukozės dehidrogenazės kiekis surištas su redukcijos aktyvumu, vykstančios susiuvant polimero molekulę. Yra žinoma, kad polimero molekulių susiuvimas su fermentu padidina stabilumą, o tai yra pageidautina sąlyga, vykdant kinetinius tyrimus. Tinkamiausių polimerų parinkimas nebuvo atliekamas; šis pavyzdys tik parodo --panašių polimerų panaudojimo galimybę. Polietilenglikolio monometilo eteri paverčia i aldehidą, veikiant dimetilsulfosidu ir acto rūgšties anhidridu susirišus su gliukozės dehidrogenazė esant natro chloride karbonatiniam buferiui prie pH=10 ir esant polimero pertekliui, mišinys yra dializuojamas ir koncentruojamas. Kompleksas fermentas-polimeras yra žymiai stabilesnis, nei grynas fermentas. Gauti rezultatai, atlikus kinetinius matavimus su duoto pavyzdžio reagentu, pateikiami fig. 5. Matuojama esant 660 nm, 3-3,75 min. laikotarpyje o po palyginimo bangos ilgis - 880 nm.
1, Bendro gliukozės kiekio gryname neatskiestame kraujyje nustatymo būdas, be s i s -k i r i a n t i s tuo, kad neatskiesto kraujo pavyzdys/ geriau mažesnio tūrio nei 20 1, kontaktuoja' su sausu reagentu, susidedančiu iš:- gliukozės dehidrogenazės (DHG);- vieno • junginio arba keleto junginių grupės, sudarytos iš diaforazės, ' fenazinmetosulfato, fenazinetosulfato, fenazinfenosulfato ir Meldoio ir.ėlio;- -vieno junginio arba keleto junginių grupės, sudarytos iš NAD(nikotinamidinio dinukleotido), KAOF, tio-NAD, tio-NADF, nikotinamidpurino dinuk-. leotido, nikotinamidmetilpurino' dinuKleotido, nikotinamid-2-chlormetilpurlno dinukleotido;- vienos arba keleto hemolizinių medžiagų, /priklausančių grupei, sudarytai iš fosfolipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba trįsačharidų. ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10-16 anglies atomų;1- okšidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo?galima papildyti mutarotaze; ir nurodyto reagento • su gliukoze gryname neatskiestame kraujyje reakcijos metu besikeičiančios spalvos registracijąspektrofotometrijos metodu pralaidumo režime.
- gliukozės dehidrogenazės (DHG);- vieno • junginio arba keleto junginių grupės, sudarytos iš diaforazės, ' fenazinmetosulfato, fenazinetosulfato, fenazinfenosulfato ir Meldoio ir.ėlio;- -vieno junginio arba keleto junginių grupės, sudarytos iš NAD(nikotinamidinio dinukleotido), KAOF, tio-NAD, tio-NADF, nikotinamidpurino dinuk-. leotido, nikotinamidmetilpurino' dinuKleotido, nikotinamid-2-chlormetilpurlno dinukleotido;- vienos arba keleto hemolizinių medžiagų, /priklausančių grupei, sudarytai iš fosfolipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba trįsačharidų. ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10-16 anglies atomų;1- okšidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo?galima papildyti mutarotaze; ir nurodyto reagento • su gliukoze gryname neatskiestame kraujyje reakcijos metu besikeičiančios spalvos registracijąspektrofotometrijos metodu pralaidumo režime.1- okšidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo?galima papildyti mutarotaze; ir nurodyto reagento • su gliukoze gryname neatskiestame kraujyje reakcijos metu besikeičiančios spalvos registraciją- okšidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo?galima papildyti mutarotaze; ir nurodyto reagento • su gliukoze gryname neatskiestame kraujyje reakcijos metu besikeičiančios spalvos registraciją2. Būdas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad gryno kraujo pavyzdžio kieki, ima mažesni, nei 20 1.3.' Kompozicija, skirta gliukozės kiekio nustatymui gryname neatskiestame kraujyje, bęsiskirian-t i tuo, kad j i yra sausame pavidale ir susideda iš r- gliukozės dehidrogenazės (DHG);- vieno junginio arba keleto junginių grupės, susidedančios iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetošulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlio; • •- vieno junginio arba keleto junginių grupės, susidedančios iš NAD(nikotinamidinio dinukleotido) , NADF, tio-NAD, tio-NADF, nikotinamid-^ purino dinukleotido, nikotinamidmetilpurino -din.uk-leotido, nikotinamid-2-chlormetilpurino dinukleotido; •- vienos afba keleto hemolizinių medžiagų, priklausančių grupei, sudarytai iš fos folipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba trisacharidų ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10-16 anglies atomų;- oksidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo;- galima papildyti mutarotaze.4. Kompozicija pagal 3 punktą, besiskirianti tuo, kad nurodytas oksiaacinis-redukcinis indikatoriųs-dažas yra tetrazolino druska.•"* • 5. Kompozi'cija pagal 3 arba 4 punktą, bes i k i - r i a n t i tuo, kad i, jos sudėti, i,eina:-'gliukozės dehidrogenazė;- diaforazė, NAD(nikotinamidinis dinukleotidas);- vienas arba keletas.saponinų; ir ..- galima papildyti mutarotaze.6. Kompozicijos, i, kurios sudėti, įeina:gliukozės dehidrogenazė (DHG);vienas junginys arba keleto junginių grupė,sudaryta iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetosulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlis;vienas junginys arba keleto junginių* grupė, sudaryta iš NAD (nikotinamidinio dinukleotido), NADF. tio-NAD, tio-NADF, nikotinamidpurinodinukleotidio, nikotinamidraėtilpurino dinukleotido, nikotinamid-2-chiormetilpurino dinukleotido;viena 'arba keletas hemolizinių medžia'gų, priklausančių grupei, sudarytai iš fosfolipazės,hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, ■; di-arba tri'sacharidų ir alifatinių angliavandenilių,turinčių 10-16 anglies atomų;- oksidacinis-reaukcinis indikatorius-dažas;- galima papildyti mutarotaze, ....,fipanaudojimas/ sausame pavidale bendro gliukozės kiekionustatymui gryname neatskiestame kraujyje spėktrofccometrijos metodu pralaidumo režime.
3.' Kompozicija, skirta gliukozės kiekio nustatymui gryname neatskiestame kraujyje, bęsiskirian-t i tuo, kad j i yra sausame pavidale ir susideda iš r- gliukozės dehidrogenazės (DHG);- vieno junginio arba keleto junginių grupės, susidedančios iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetošulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlio; • •- vieno junginio arba keleto junginių grupės, susidedančios iš NAD(nikotinamidinio dinukleotido) , NADF, tio-NAD, tio-NADF, nikotinamid-^ purino dinukleotido, nikotinamidmetilpurino -din.uk-leotido, nikotinamid-2-chlormetilpurino dinukleotido; •- vienos afba keleto hemolizinių medžiagų, priklausančių grupei, sudarytai iš fos folipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba trisacharidų ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10-16 anglies atomų;- oksidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo;- galima papildyti mutarotaze.- gliukozės dehidrogenazės (DHG);- vieno junginio arba keleto junginių grupės, susidedančios iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetošulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlio; • •- vieno junginio arba keleto junginių grupės, susidedančios iš NAD(nikotinamidinio dinukleotido) , NADF, tio-NAD, tio-NADF, nikotinamid-^ purino dinukleotido, nikotinamidmetilpurino -din.uk-leotido, nikotinamid-2-chlormetilpurino dinukleotido; •- vienos afba keleto hemolizinių medžiagų, priklausančių grupei, sudarytai iš fos folipazės, hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, di-arba trisacharidų ir alifatinių angliavandenilių, turinčių 10-16 anglies atomų;- oksidacinio-redukcinio indikatoriaus-dažo;- galima papildyti mutarotaze.4. Kompozicija pagal 3 punktą, besiskirianti tuo, kad nurodytas oksiaacinis-redukcinis indikatoriųs-dažas yra tetrazolino druska.•"* • 5. Kompozi'cija pagal 3 arba 4 punktą, bes i k i - r i a n t i tuo, kad i, jos sudėti, i,eina:-'gliukozės dehidrogenazė;- diaforazė, NAD(nikotinamidinis dinukleotidas);- vienas arba keletas.saponinų; ir ..- galima papildyti mutarotaze.•"* • 5. Kompozi'cija pagal 3 arba 4 punktą, bes i k i - r i a n t i tuo, kad i, jos sudėti, i,eina:-'gliukozės dehidrogenazė;- diaforazė, NAD(nikotinamidinis dinukleotidas);- vienas arba keletas.saponinų; ir ..- galima papildyti mutarotaze.-'gliukozės dehidrogenazė;- diaforazė, NAD(nikotinamidinis dinukleotidas);- vienas arba keletas.saponinų; ir ..- galima papildyti mutarotaze.6. Kompozicijos, i, kurios sudėti, įeina:gliukozės dehidrogenazė (DHG);vienas junginys arba keleto junginių grupė,sudaryta iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetosulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlis;vienas junginys arba keleto junginių* grupė, sudaryta iš NAD (nikotinamidinio dinukleotido), NADF. tio-NAD, tio-NADF, nikotinamidpurinodinukleotidio, nikotinamidraėtilpurino dinukleotido, nikotinamid-2-chiormetilpurino dinukleotido;viena 'arba keletas hemolizinių medžia'gų, priklausančių grupei, sudarytai iš fosfolipazės,hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, ■; di-arba tri'sacharidų ir alifatinių angliavandenilių,turinčių 10-16 anglies atomų;- oksidacinis-reaukcinis indikatorius-dažas;- galima papildyti mutarotaze, ....,fipanaudojimas/ sausame pavidale bendro gliukozės kiekionustatymui gryname neatskiestame kraujyje spėktrofccometrijos metodu pralaidumo režime.gliukozės dehidrogenazė (DHG);vienas junginys arba keleto junginių grupė,sudaryta iš diaforazės, fenazinmetosulfato, fenazinetosulfato, fenazinfenosulfato ir Meldolo mėlis;vienas junginys arba keleto junginių* grupė, sudaryta iš NAD (nikotinamidinio dinukleotido), NADF. tio-NAD, tio-NADF, nikotinamidpurinodinukleotidio, nikotinamidraėtilpurino dinukleotido, nikotinamid-2-chiormetilpurino dinukleotido;viena 'arba keletas hemolizinių medžia'gų, priklausančių grupei, sudarytai iš fosfolipazės,hemolizinių saponinų ir hidrofilinių mono-, ■; di-arba tri'sacharidų ir alifatinių angliavandenilių,turinčių 10-16 anglies atomų;- oksidacinis-reaukcinis indikatorius-dažas;- galima papildyti mutarotaze, ....,fi- oksidacinis-reaukcinis indikatorius-dažas;- galima papildyti mutarotaze, ....,fipanaudojimas/ sausame pavidale bendro gliukozės kiekionustatymui gryname neatskiestame kraujyje spėktrofccometrijos metodu pralaidumo režime.