LT4736B

FARMACINĖS KOMPOZICIJOS, TURINČIOS PLAZMOS PROTEINO

PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING PLASMA PROTEIN

Referatas

[LT] Išradimas priklauso vandenyje tirpiems produktams bei kietos ir skystos formos farmacinėms kompozicijoms, skirtoms parenteraliam naudojimui. Farmacinės kompozicijos susideda ar turi terapiškai aktyvią medžiagą, pasižyminčią mažu tirpumu vandenyje ir žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinui, ir plazmos proteino frakciją reguliuojamoje agregatinėje būsenoje, kurioje minėta aktyvi medžiaga ir minėta proteino frakcija tarpusavyje surištos nekovalentiniais ryšiais. Išradimas apima produkto gamybos būdą ir farmacines kompozicijas.

[EN] The invention is related to water-soluble products and pharmaceutical formulations in solid or liquid form mainly for parenteral use. They consist of or comprise a therapeutically active substance (having low aqueous solubility and substantial binding affinity to plasma proteins) and a plasma protein fraction in controlled aggregation state, whereby the said active substance and the said proteinfraction are bound to each other by way of noncovalent bonds. It also covers processes for the preparation of the product and pharmaceutical formulation.

Aprašymas

[0001] Išradimas aprašo naują būdą, produktus ir kompozicijas, skirtus patiekti terapiškai aktyvius junginius, pasižyminčius mažu tirpumu vandenyje bei žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinams, ir tokių produktų bei kompozicijų, skirtų terapiniam vartojimui, paruošimo procesus.

[0002] Labiau konkretizuojant, svarbiausi išradimo objektai yra kieti arba skysti produktai ir farmacinės kompozicijos, skirti daugiausia parenteraliniam vartojimui ir savo sudėtyje turintys: a) terapiškai aktyviąją medžiagą, pasižyminčią mažu tirpumu vandenyje ir žymiu rišamuoju giminingumu plazmos

[0003] b) plazmos proteinų frakciją reguliuojamoje agregatinėje būsenoje,

[0004] kur minėta aktyvioji medžiaga ir minėta proteinų

[0005] c) turi, nebūtinai, papildomą farmaciškai priimtiną

[0006] ir parenteraliai tinkamą kompozicijos priedą(us) - pvz.,

[0007] vandenį, stabilizatorių(s), proteino agregacijos reguliatorių(s).

[0008] Išradimo homogeniniai kieti produktai, turintys minėtą proteiną ir minėtą medžiagą, yra tirpūs vandenyje ir jų vandeniniai tirpalai gali būti vartojami parenteraliai arba iš jų gali būti ruošiami parenteraliniai farmaciniai preparatai.

[0009] Specialistams yra žinoma, jog kai kurie biologiškai aktyvūs junginiai pasižymi stipriu terapiniu aktyvumu, bet dėl jų mažo tirpumo vandeninėje terpėje niekuomet nebuvo galima parodyti jų naudingumo. Kai kurie iš jų niekuomet nebuvo įtraukti į receptūras, keletas tepasiekė klinikinių tyrimų I fazę. Kai kurie pasirodė esą "sunkiai biosuderinami" kompozicijose dėl santykinai aukšto toksiškumo, kurį sąlygojo kompozicijoje naudojamos L tJiTt jį.V" y Z c] j- S yi. (.] oGi i l-į Q X" l_I jpCJ. c* atstovai, konkrečiai, paklitakselis, stiprus citostatikas, kurio pritaikymas buvo nepakankamas dėl toksiškumo žinomos Klucel kompozicijos su tvinu 80 arba Klucel ir skiediklis 12, mišinys Cremaphor EL:etanolis 1:1 [ Cancer Chemotherapy and Pharmacology ( 1994) 34:465-471; Journal of the National Cancer Institute ( 1990) 1247- 1259]. Cremaphor EL ( polioksietilintas ricinos aliejus) pasižymi būdingu toksiškumu, sukeliančiu vazodilataciją ( kraujagyslių plėtimą), letargiją, hipotenziją ( sumažėjusį kraujospūdį) ir t. t. Siekiant sumažinti tirpiklio ir adjuvanto toksišką pašalinį poveikį, buvo siūlomi tam tikri metodai: ilgalaikis vartojimas labai mažų dozių, paruošiamasis gydymas prieš vartojimą ir t. t. ( JAV patentas 5665761; JAV patentas 5621001; JAV patentas 5670537 ir t. t.). Kito pasiūlymo esmę sudarė aktyviosios medžiagos derinimas su dispergatoriumi, turinčiu proteinu dengtą sluoksnį ( JAV patentas 5560933), suformuotą reaguojant proteinui su aliejumi, pvz., sojos pupelių aliejumi - tokios kompozicijos buvo siūlomos paklitakseliui ir amfotericinui. Tačiau net naujausia literatūra įspėja dėl pritaikymo, pvz., dėl paklitakselio ( žr., pvz., " Guidance for Industry", išl. U. S. Department of Health and Human Service CDER September 1997, OGD-L- 8), kur, dėl hipersensibilumo reakcijų, visi pacientai prieš gydymą paklitakseliu turi gauti kortikosteroidų, difenhidramino ir H₂ antagonistų kursą.

[0010] Vėliau buvo pasiūlyta ruošiant tam tikrų vandenyje netirpių dihidropiridinų parenteralines kompozicijas, dihidropiridinus tirpinti organiniame tirpiklyje arba organinio tirpiklio ir vandens mišinyje bei pridėti HSP ( žmogaus serumo proteinai) tirpalo į minėtą skystį, tam, kad iki minimumo būtų sumažintas netirpios aktyviosios medžiagos kristalizavimasis ( Vengrijos patentas 198381, Vokietijos patentinė paraiška 3702105). Tačiau gautas skystis vis ūėi to iitibuvo tikai Gi. a s ii tuiėjo organinio tirpiklio.

[0011] Pagal Japonijos patento 58216126 publikaciją (žr. EPO

[0012] Patent Abstracts of Japan) kai kurie karboksirūgšties dariniai, turintys stipriai stabdančią funkcinę aromatinę grupę ir pasižymintys apie 0,1 mg/ml tirpumu vandenyje, buvo soliubilizuojami, sudedant juos 4 praskiestą vandeninį žmogaus serumo albumino tirpalą.

[0013] Taip pat yra žinoma, jog peroralinės farmacinės kompozicijos yra gaunamos dideliu greičiu (nuo 5000 iki 40000 aps./min.) sumaišant aktyvųjį ingredientą su kiaušinio albuminu vandeniniame tirpiklyje, po to tirpiklį nudistiliuojant (Europos patentinė paraiška 326618). Gaunama peroraliniam vartojimui skirta vandeninė suspensija, pasižyminti kai kuriais sumažintais aktyvaus ingrediento pašaliniais poveikiais.

[0014] Be to, žinoma, jog kai kurios vandenyje netirpios aktyviosios medžiagos turi žymų giminingumą proteinui arba serumo proteinui. Kai kurie šaltiniai mini paklitakselį [Cancer Chem. and Pharm. (1994) 34: 465-471]; mikonazolį, flukonazolį, amfotericiną B [Infection, 23(5): 292-297 (1995) Sept.]; karbamazepiną

[0015] [J.Chromatogr. B. Biomed. Appl. 669(2): 281-288 (1995 July 21)]; azatiopriną [Ann. N. Y. Acad. Sci, 685 (1993): 175-192], propofolį [J. Chromatogr. Sci (1992): 164-166]. Remiantis naujausia literatūra [The Lancet vol. 352

[0016] (1998): 540-542], vaistinis preparatas Taxol^® sukelia raudonųjų ląstelių agregaciją ir taip veikia polioksietilinto ricinos aliejus, kuris yra minėto vaistinio preparato tirpiklis. Kai kurie vandenyje netirpūs vaistiniai preparatai yra ruošiami, naudojant toksišką Cremaphor (ciklosporinas, teniposidas, paklitakselis, amfotericinas B) . Kiek mums yra žinoma, ankšto aktyvumo, bet vandenyje netirpių vaistinių preparatų serijos iki šiol iš viso nepasirodė prekyboje parenteralinėje ir interveninėje skyrimo formose, pvz. , ritonavitas, karbamazepinas, kamptoteeinąs, azatioprinas, mikonazolis, flukonazolis ir t. t.

[0017] Todėl būtina problemą išspręsti taip, kad terapiškai vertingos vandenyje netirpios medžiagos galėtų būti skiriamos vandenyje tirpios formos pavidale, geriau parenteraliniu būdu, pacientams, kuriems reikalingas gydymas minėtais aktyviaisiais ingredientais.

[0018] Šio išradimo tikslas yra patenkinti šį reikalavimą, liečiantį praktiškai vandenyje netirpius aktyviuosius ingredientus, pasižyminčius žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinams.

[0019] Šis išradimas remiasi suvokimu, kad aktyviųjų medžiagų susirišimas nekovalentiniais ryšiais su atitinkamais proteinais prieš jų vartojimą pateikia naują ir labai potencialią aktyviųjų ingredientų su mažu tirpumu vandenyje pristatymo sistemą. Sutinkamai su išradimu yra paruošiami homogeniniai kieti produktai, kurie po to ištirpinami vandenyje ir tokiu būdu gaunami biosuderinami, skaidrūs vandeniniai tirpalai, tinkami parenteraliniam skyrimui. Tokiu būdu išradimas pateikia reikalingų, vandenyje netirpių aktyviųjų ingredientų skyrimo priemones, neįvedant toksiškų elementų, ir kai kuriais atvejais - žymiai efektyvesnėmis dozėmis negu anksčiau.

[0020] Žymėjimai, naudojami šioje paraiškoje, kurie toliau nebus kartojami: R¹ žymi tret-butiloksikarboksirūgšties amidą arba benzoilamidą;

[0021] R² žymi vandenilį arba bet kokią acilo grupę, optimalu acetilą.

[0022] Mažas tirpumas vandenyje reiškia, jog tirpumas vandenyje kambario temperatūroje, yra <1-10'4 M/l;

[0023] Žymus rišamasis giminingumas plazmos proteinams reiškia, kad > 90% medžiagos yra susirišusi su proteinais vandeninėje terpėje ir yra spontaninėje pusiausvyroje kanbario temperatūroje;

[0024] Vienas išradimo objektų yra vandenyje tirpi žmonėms skirta farmacinė kompozicija, daugiausia parenteraliniam vartojimui, turinti terapiškai aktyvųjį junginį, pasižymintį mažu tirpumu vandenyje ir žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinams arba žmogaus plazmos baltymų frakcijai reguliuojamoje agregatinėje būsenoje.

[0025] Kiti išradimo objektai yra vandenyje tirpios veterinarinės farmacinės kompozicijos, daugiausia skirtos parenteraliniam vartojimui, turinčios terapiškai aktyvųjį junginį, pasižymintį mažu tirpumu vandenyje ir žymiu rišamuoju giminingumu gyvulių plazmos proteinams reguliuojamoje agregatinėje būsenoje.

[0026] Žmogaus arba gyvulių plazmos, kurios pagal išradimą gali būti produktuose ir farmacinėse kompozicijose ir, atitinkamai, panaudotos produktų ir kompozicijų gavimo būduose, gali būti bet kokie natūralios kilmės proteinai arba plazmos frakcijos, pvz., serumo albuminas, imunoglobulinas, glikoproteinas, interferonas ir/arba interleukinas, taip pat jų rekombinantiniai analogai. Gali būti naudojami žmogaus ir gyvulių proteinai. Žmonių gydymui skirtuose junginiuose ir kompozicijose pageidautina naudoti natūralius žmogaus serumo ir rekombinantinius žmogaus serumo proteinus.

[0027] Pagal išradimą praktiškai vandenyje netirpūs aktyvieji ingredientai apima platų junginių diapazoną, esant vienai išlygai - jie turi pasižymėti žymiu giminingumu pasirinktiems plazmos proteinams. Aktyviųjų ingredientų pavyzdžiai apima tokias terapinių agentų grupes: citostatiką, pvz., taksonoidą, antibiotiką, vitaminą, priešuždegiminį agentą, analgetiką, antispazminį agentą, imunosupresantą, antiepilepsinį agentą, raminamąjį agentą, hipnotiką, priešgrybinį agentą, antikoaguliantą, lipidinės peroksidazės inhibitorių, koronarinį vazodilatatorių, antiaritmijos agentą, kardiotoniką, urikacidurinį agentą, antitronJbotiką, steroidinį hormoną

[0028] (progesteroną, androgeną, testosteroną) ir/arba fotosensibilizatorių. Kai kurie aktyvieji ingredientai gali būti naudojami tuo pačiu metu, kruopščiai apsvarsčius ir adaptavus terapines dozes ir patikrinus rišamuosius giminingumus pasirinktiems proteinams, kurie turi būti tinkami, esant tokiems pakitusiems reikalavimams.

[0029] Išradimo realizavimas numato produktus ir farmacines kompozicijas (atsižvelgiant į ankstesnes pastabas) , turinčias bent vieną iš sekančių aktyviųjų medžiagų: amfotericiną B, adriamicino analogą, apazoną, azatiopriną, bromazepamą, kamptoteciną, karbamazepiną, klonazepamą, ciklosporiną A, diazepamą, dikumarolį, digitoksiną, dipiridamolį, dizopiramidą, flunitrazepamą, gemfibrozilą, ketochloriną, ketokonazolį, mikonazolį, nifluminę rūgštį, oksazepamą, fenobarbitalį, fenitoiną, progesteroną, propofolį, ritonavirą, sulfinpirazoną, suprofeną, takrolimus, tamoksifeną, taksonoidą, testosteroną, tirilazadą, trioksaleną, valproinę rūgštį ir/arba varfariną.

[0030] Optimalus išradimo variantas apima aukščiau aprašytą produktą arba kompoziciją, _Luiii atvaizduotą bendra formule I.

[0031] Kitas optimalus išradimo variantas apima arba susideda iš paklitakselio ir žmogaus serumo albumino, imunoglobulino, glikoproteino, interferono ir/arba interleukino arba kai kurių kitų žmogaus plazmos proteinų frakcijų.

[0032] Ypatingai svarbūs išradimo objektai yra homogeniniai, vandenyje tirpūs produktai kietoje formoje, savo sudėtyje turintys bent vieną aktyviąją medžiagą iš grupės: amfotericiną B, adriamicino analogą, apazoną, azatiopriną, bromazepamą, kamptoteciną, karbamazepiną, klonazepamą, ciklosporiną A, diazepamą, dikumarolį, digitoksiną, dipiridamolį, dizopiramidą, flunitrazepamą, gemfibrozilą, ketochloriną, ketokonazolį, mikonazolį, nifluminę rūgštį, oksazepamą, fenobarbitalį, fenitoiną, progesteroną, propofolį, ritonavirą, sulfinpirazoną, suprofeną, takrolimus, tamoksifeną, taksonoidą, testosteroną, tirilazadą, trioksaleną, valproinę rūgštį ir/arba varfariną ir taip pat turintys bent vieną proteiną iš žmogaus serumo albumino, imunoglobulino, glikoproteino, interferono ir/arba interleukino grupės arba bet kurį kitą natūralaus arba rekombinantinio žmogaus plazmos proteino frakciją, kur minėta aktyvioji medžiaga ir minėta proteinų frakcija tarpusavyje susirišę nekovalentiniais ryšiais ir molinis santykis tarp aktyviosios medžiagos ir proteinų frakcijos yra diapazone nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50. Optimalūs aukščiau pateiktų objektų pavyzdžiai yra homogeniniai, kietos formos, vandenyje tirpūs produktai, savo sudėtyje turintys sekančias aktyviųjų medžiagų ir proteinų poras: bendros formulės I taksonoidą, kurioje: _R¹ žymi tret-butiloksikarboksirūgšties amidą arba benzoilamidą,

[0033] R² žymi vandenilį arba bet kokią acilo grupę, optimalu acetilą -

[0034] ir plazmos proteino frakciją;

[0035] paklitakselį ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/ arba y- globuliną; amfotericiną B ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/ arba y- globuliną; kamptoteciną ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/ arba y- globuliną; karbamazepiną ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/ arba y- globuliną; ciklosporiną A ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/ arba y- globuliną;

[0036] propofolį ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/ arba y- globuliną;

[0037] Iš aukščiau pateiktų paaiškinimų matosi, jog išradimas apima anksčiau minėtas kompozicijas abiejose - tiek kietoje, tiek vandeninių tirpalų - formose.

[0038] Kas liečia jų gamtinę struktūrą - konkrečiau, jų cheminę sudėtį - tai proteino molekulės linkusios agreguotis savo specifinėmis susirišimo sritimis. Agregaviraosi laipsnis priklauso nuo tirpalo, kuriame proteinas randasi, parametrų ( temperatūros, sudėties, santykinės ir absoliutinės komponentų koncentracijos, pH, joninės jėgos).

[0039] Pageidautina, kad sutinkamai su išradimu naudojami plazmos proteinai būtų stabilizuotame arba reguliuojamame būvyje. Tikslas yra išvengti tokios proteinų agregacijos, kuri galėtų inhibuoti optimalų aktyviojo ingrediento susirišimą. Nepageidaujama proteinų agregacija gali būti reguliuojama, esant kitoms molekulėms, galinčioms užimti keletą arba visas susirišimo sritis dalyvaujančiose agregacijoje makromolekulėse ir taip išvengti daugkartinės proteinas - proteinas asociacijos. Kai kurie komerciškai gaunami proteinai iš anksto jau būna reguliuojamoje agregatinėje būsenoje: turi stabilizatorius agregacijai išvengti. Tačiau ši būsena ne visada yra optimali būsena ryšiui su aktyviąja medžiaga, numatyta naudoti išradime.

[0040] Sutinkamai su išradimu terminas " kontroliuojama agregatinė būsena" reiškia geriausią būseną prisirišimui, t. y. , kada proteinas sugeba pririšti aktyviąją medžiagą tiksliai taip, kaip tai yra reikalinga. Tai nebūtinai yra būsena, kada su proteinu susirišęs maksimalus aktyviosios medžiagos molekulių kiekis, bet būna atvejų, kada aukščiausias surišimo laipsnis yra pageidautinas.

[0041] Tai reiškia, kad mes kai kuriais atvejais turime pašalinti kitus užpildus iš, pvz., komerciškai gaunamos serumo albumino frakcijos, pvz., stabilizatorius, joninius komponentus ir pan. Tai galėtų būti būtina pradinė proceso stadija, kada yra naudojamas būdas pagal išradimą. Sąlygos, reikalingos tinkamos agregacinės būsenos nustatymui, griežtai priklauso nuo esamos aktyviosios medžiagos ir tinkamos proteinų frakcijos.

[0042] Žemiau pateikti pavyzdžiai demonstruoja ( pvz., paklitakselis ir ciklosporinas A) , kad surišimas su plazmos proteinų frakcija aukštesniu laipsniu pasireiškia tuomet, kada nėra kitų užpildų ( pvz., stabilizatorių, joninių komponentų, druskų ir t. t.). Tačiau yra kitos aktyviosios medžiagos ( pvz., amfotericinas B ir propofolis), kurios nerodo jokios interferencijos susirišant, pvz., proteinų stabilizatorius.

[0043] Tokiu būdu, naudojamų proteinų tinkama agregatinė būsena turi būti nustatoma atskirai kiekvienai naudojamai aktyviosios medžiagos/ proteino porai.

[0044] Naudojant paklitakselio ir HSA porą, svarbu pašalinti visus komerciškąjį HSA lydinčius stabilizatorius, pvz. , N-acetil-D,L-triptotaną, šarminius okLanoaLus, kuiie buvo naudojami proteino stabilizavimui pasterizavimo 60°C temperatūroje metu. Amfotericinas B arba propofolis gali būti surišti su HSA taip pat ir esant šiems stabilizatoriams. Atskirais atvejais, kuomet norima agregatinė būsena gali būti pasiekiama vandens pagalba, kiti komponentai turi būti pašalinami, pvz., atliekant procedūrą, aprašytą viename iš pavyzdžių.

[0045] Siekiant optimalaus specifinių medžiagų ir specifinių plazmos proteinų frakcijų susirišimo turi būti atsižvelgiama į tokius aspektus: a) medžiagos užimtos surišimo srities ant proteino charakteristikas; b) tirpale esančius kitus komponentus, galinčius užimti tą pačią sritį arba net konkuruoti dėl jos; c) fiziko-chemines sąlygas, lemiančias esamos surišimo srities konformaciją ir pririšimo rezultatą;

[0046] i) paklitakselį ant HSA, turintį unikalias

[0047] transportines charakteristikas;

[0048] ii) paklitakselį ant interleukinų su išbandytu terapiniu nešiklio aktyvumu;

[0049] iii) ciklosporiną A ant gamaimunoglobulino su išbandytu terapiniu nešiklio aktyvumu;

[0050] iv) ritonavirą ant gamaimunoglobulino su išbandytu terapiniu nešiklio aktyvumu;

[0051] Vienas iš paprasčiausių agregaciją reguliuojančių agentų yra vanduo. Naudojant tinkamą vandens kiekį, nepageidaujama agregacija gali būti inhibuojama, ir proteinas esti paruoštas naudojimui pagal išradimą - jis yra "reguliuojamoje agregatinėje formoje".

[0052] Sutinkamai su išradimu, junginiai ir kompozicijos savo sudėtyje kaip priedą gali turėti agregacijos reguliatorių arba stabilizatorių ir/arba pagalbinį tirpalą stabilizuojantį priedą. Tokių priedų pavyzdžiai yra: vanduo, natrio chloridas, bulei, is, pol glicerolis_/ vandenyje tirpus cukraus darinys, pageidautina, mani tolis, sorbitolis ir/ arba dulcitolis ir kiti.

[0053] Kitas išradimo objektas - naujų produktų ir farmacinių kompozicijų gavimo būdas. Būdą sudaro sekančios stadijos: a) terapiškai aktyvų junginį, pasižymintį mažu tirpumu vandenyje ir žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinams (" aktyvioji medžiaga") ištirpina farmaciniu požiūriu priimtiname, su vandeniu besimaišančiame organiniame tirpiklyje,

[0054] b) minėtą tirpalą sumaišo su plazmos proteinų frakcijos reguliuojamoje agregatinėje būsenoje vandeniniu

[0055] c) su papildomu farmaciniu požiūriu priimtinu pagalbiniu priedu, pvz., proteino agregacijos : reguliatoriumi ir/ arba stabilizatoriumi, dėka ko gaunamas tikrasis tirpalas, turintis minėtą aktyviąją medžiagą ir minėtą proteinų frakciją, tarpusavyje susirišusius nekovalentiniais ryšiais; d) organinį tirpiklį pašalina, pageidautina, ultrafiltruojant, dializuojant, diafiltruojant ir/ arba liofilinant tirpalą arba jo koncentratą arba derinant šiuos procesus, dėka ko gaunamas homogeninis, vandenyje tirpus skystis arba kietas produktas, arba farmacinė kompozicija, turinti aktyviąją medžiagą ir plazmos proteinų frakciją; e) nebūtinai, kietą medžiagą arba skystį ištirpina arba praskiedžia vandeniu, gaunant skaidrią, skystą

[0056] f) nebūtinai, įveda šį produktą į parenteralinę kompoziciją ( dozavimo formą), skirtą tiesioginiam

[0057] Ruošiant naujus homogeninius kietus produktus, savo sudėtyje turinčius aktyviąsias medžiagas ir proteinus, tarpusavyje susirišusius nekovalentiniais ryšiais, yra tikslinga naudotis būdu, kurį sudaro sekančios stadijos: a) terapiškai aktyvų junginį ištirpina su vandeniu besimaišančiame, farmaciniu požiūriu priimtiname

[0058] b) minėtą tirpalą sumaišo su atrinktos plazmos proteinų frakcijos vandeniniu tirpalu reguliuojamoje

[0059] agregatinėje būsenoje, dėka ko gaunamas tikrasis tirpalas, savo sudėtyje turintis minėtą aktyviąją medžiagą ir minėtą proteinų frakciją, tarpusavyje susirišusius nekovalentiniais ryšiais; c) pašalina organinį tirpiklį ir liofilina tirpalą arba jo koncentratą.

[0060] Tinkamiausias būdas pašalinti organinį tirpiklį priklauso nuo aktyviosios medžiagos ir proteino. Iš aktyviojo produkto (aktyviosios medžiagos ir proteino poros) prigimties seka, jog taikomi metodai turi užtikrinti švelnias sąlygas. Liofilinant gaunami homogeniniai, kieti, vandenyje tirpūs produktai, kuriuos, iš naujo ištirpinus vandenyje, galima skirti intraperitoniškai (į pilvaplėvės ertmės vidų). Galima naudingai apjungti anksčiau minėtas stadijas, pvz., procesą padaryti ekonomiškesniu, iš pradžių paruošiant aktyviosios medžiagos/proteino poros koncentratą, o po to minėtą koncentratą išliofilinant. Kai kurios aktyviosios medžiagos/proteino poros (pvz., amfotericino B/serumo albumino pora) gali būti sėkmingai koncentruojamos, naudojant ultrafiltravimą arba dializę. Kai kurios kitos poros (pvz., paklitakselis/HSA), pageidautina, liofilinamos. Kitos poros pirmiausia turi būti ultrafiltruojamos ir gautas koncentratas po to liofilinamas.

[0061] Specialistams aišku, jog ruošiant parenteralinius farmacinius preparatus, skiedimas vandeniu atliekamas naudojant tokius vandeninius tirpalus, kurie turi papildomus, parenteraliai priimtinus priedus, pvz., natrio chloridą.

[0062] Pagal išradimą tinkamas tirpiklis, skirtas aktyviojo ingrediento ištirpinimui anksčiau minėtoje stadijoje a) , turi pasižymėti tokiomis savybėmis: ^* jis turi pilnai ištirpinti aktyvųjį ingredientą jo mišinyje su vandeniu ir ^* jo mišinys su >50% vandens neturi denatūruoti naudojamo proteino.

[0063] Prieš pradedant vykdyti procesą, naudojant aktyvųjį ingredientą ir atrinktą proteiną, remiantis anksčiau išdėstytais reikalavimais turi būti parinktas atitinkamas tirpiklis. Naudojimui yra tinkami tirpikliai, kurie, mišiniuose turėdami >50% vandens, dar sugeba ištirpinti aktyvųjį ingredientą.

[0064] Optimalūs tirpikliai, kurie gali būti naudojami anksčiau aprašyto proceso stadijoje a), yra, pvz., bet kokie tirpikliai iš grupės, susidedančios iš alifatinio C (2 - 4) monoalkoliol i o arba polialkoholio, 70-100% etanolio, dimetilformamido, metilformamido.

[0065] Kada ruošiamas proteino turintis tirpalas, jame gali būti agregacijos reguliatorius ir/arba stabilizatorius. Tokie priedai yra papildomas arba optimalus kiekis vandens. Jie taip pat gali apimti agentus, galinčius dalinai užimti kai kurias proteino surišimo sritis, kad būtų išvengta agregacijos; tai, pvz., natrio chloridas, buferis, polialkoholis, pvz., glicerolis, ir/arba vandenyje tirpus cukraus darinys, pageidautina, manitolis, sorbitolis, dulcitolis.

[0066] Parenkant optimalias sąlygas bet kokiam aktyviajam ingredientui, išankstiniais bandymais turi būti nustatomi optimalūs surišantys giminingumai ir atitinkamos agregatinės savybės. Žemiau pateikiamuose pavyzdžiuose atskleidžiami išsamūs tokių nustatymų metodai.

[0067] Optimaliam stadijos a) variante naudojami junginiai yra paklitakselis ir natūralios plazmos komponentas, pvz., serumo albuminas, imunoglobulinas, glikoproteinas, interferonas ir/arba interleukinas arba naudojami jų rekombinantai. Kituose išradimo variantuose kaip aktyvioji medžiaga yra naudojamas vandenyje netirpus citostatikas, pvz., taksonoidas, antibiotikas, vitaminas, priešuždegiminis agentas, analgetikas, antispazminis agentas, imunosupresantas, antiepilepsinis agentas, raminantis agentas, hipnotikas, priešgrybinis agentas, antikoaguliantas, lipidinės peroksidazės inhibitorius, koronarinis vazodilatatorius, antiaritmijos agentas, kardiotonikas, urikacidurinis agentas, antitrombotikas, steroidinis hormonas (progesteronas, androgenas, testosteronas) ir/arba f otosensibilizatorius. Tinkamos išradimo procesui aktyviosios medžiagos apima: amfotericiną B, adriamicino analogą, apazoną, azatiopriną, bromazepamą, kaiap to teeiną, karbamazepiną, klonazepamą, ciklosporiną A, diazepamą, dikumarolį, digitoksiną, dipiridamolį, dizopiramidą, flunitrazepamą, gemfibrozilą, ketochloriną, ketokonazolį, mikonazolį, nifluminę rūgštį, oksazepamą, fenobarbitalį, fenitoiną, progesteroną, propofolį, ritonavirą, sulfinpirazoną, suprofeną, takrolimus, tamoksifeną, taksonoidą, testosteroną, tirilazadą, trioksaleną, valproinę rūgštį ir/arba varfariną.

[0068] Optimalus išradimo variantas apima homogeninio, kieto, vandenyje tirpaus produkto, turinčio paklitakselio ir žmogaus serumo albumino, gavimą, kur aktyvusis ingredientas ir plazmos proteinų frakcija gali būti susirišę nekovalentiškai. Kitas optimalus variantas apima homogeninio, kieto, vandenyje tirpaus produkto, turinčio bendros formulės I taksonoidą ir plazmos proteinų frakciją, gavimą, kur aktyvusis ingredientas ir plazmos proteinų frakcija yra susirišę nekovčilenLiskai.

[0069] Iš ankstesnių paaiškinimų matosi, jog šis išradimas nėra ribojamas nei jokiomis aktyviosiomis medžiagomis, nei jokiais proteinais, išvardytais anksčiau.

[0070] Kitą išradimo objektą sudaro žmonių arba veterinarinių pacientų gydymui skirtų produktų ir kompozicijų naudojimas. Jis apima kompozicijos, paruoštos sutinkamai su išradimu, efektyvios dozės skyrimą pacientui, kuriam reikalingas gydymas aktyviuoju ingredientu. Naudojamos dozės priklauso nuo aktyviojo ingrediento, taip pat ir nuo naudojamo proteino. Gali būti skiriamos tokio dydžio dozės, kad jos užtikrintų bent tuos pačius lygius, kraujuje, kai būna naudojamos konkrečios žinomos aktyviosios medžiagos kitais skyrimo būdais.

[0071] Čia pateikiami produktai arba farmacinės kompozicijos, skirtos žmonių ir veterinarinių pacientų parenteraliniam gydymui, naudojant vandenyje netirpią terapiškai aktyviąją medžiagą, pasižyminčią žymiu rišamuoju - giminingumu plazmos proteinui, skiriant parenteraliniu būdu pacientui, kuriam reikalingas gydymas minėta : aktyviąja medžiaga, efektyvią dozę sekančių produktų, naudojant atitinkamas dozes (skaičiuojant aktyviajai medžiagai): paklitakselis/albuminas 70-280 mg/gydymui; propofolis/albuminas 6-10 mg/kg/val.; kamptoteci-nas/albuminas, gemf ibrozilas/albuminas, ciklosporinas A/albuminas 3-5 mg/kg/dienai; amfotericinas B/albuminas iki 1,5 mg/kg/dienai; tos pačios dozės naudojamos junginiams, savo sudėtyje turintiems atitinkamus rekombinantinius proteinus.

[0072] Išradimo junginiai, kompozicijos ir būdai turi tokius pranašumus: ^* galimybė išvengti biologiškai nesuderinamų nešiklių, sumažinti arba visiškai pašalinti dozę ribojančius pašalinius poveikius, susijusius su tokiais komponentais, kaip toksiški tirpikliai, paviršinio aktyvumo agentai, emulsikliai ir pan. ^* plazmos proteinų frakcijų naudojimas vaistinių preparatų nešikliais neiššaukia papildomų toksiškų efektų - priešingai, jie gali pagerinti pacientams toleraciją, pvz., chemoterapijai. ^* atskirais atvejais taikoma dozė gali būti padidinama, lyginant su dabar parduodamais vaistais, ir tokiu būdu yra galimybė pagerinti bendrą terapijos rezultatą.

[0073] Išradimas detaliau iliustruojamoms sekančiuose pavyzdžiuose, neapribojant jais.

[0074] Atyviojo ingrediento (medžiagos) susirišimui su proteinu nustatyti buvo taikomi metodai:

[0075] 1 ml skaidraus tirpalo, gauto sumaišius reguliuojamoje

[0076] agregatinėje būsenoje esančio proteino vandeninį tirpalą su aktyviojo ingrediento atitinkamame tirpiklyje tirpalu, bandinys filtruojamas per ultrafiltravimo membraną

[0077] (skiriamoji riba >30000 Da) ir ultrafiltrato frakcijoje yra nustatomas aktyvusis ingredientas. Kada aktyviojo ingrediento koncentracija matuojama nefiltruotame tirpale, visas kiekis (>90%) yra regeneruojamas nepakitusioj e formoje.

[0078] Liofilinimas 1 ml anksčiau minėto tipalo. Po liofilinimo

[0079] kietos nuosėdos ištirpinamos 1 ml distiliuoto vandens, gaunant skaidrų tirpalą. Matuojant šiame tirpale aktyviojo ingrediento koncentraciją, vandeninėje fazėje aktyviojo ingrediento nerasta, bet jo 100% regeneruojama iš proteino frakcijos. c) Aktyviojo ingrediento analizė

[0080] Aktyviojo ingrediento tyrimai atliekami naudojant aukšto

[0081] slėgio skystą ciiroiuaLoy rui i ją (iii-iiC) , luaLaviiuutj utiiekcu.L UV spektroskopijos pagalba.

[0082] HPLC analizė gali būti atliekama, pvz., naudojantis Waters Millenium (Waters, MA, JAV) HPLC sistema. Jos komponentai: Waters 616 siurbliukas; Waters 600 S reguliatorius; Waters 717 plus automatinis bandinių injektorius su termostatu, nustatytu +5°C; Waters 996 diodinis UV/VIS (ultravioletinės/matomos šviesos bangų) diapazono detektorius. Sistema paleidžiama, ir Waters Millennium v. 2.02.0 gauti duomenys patenka į Digital P486/166 (Digital Eąuipments, Irvin, UK) personalinį kompiuterį. Kiekvienam junginiui sąlygos turi būti optimizuojamos individualiai, kaip žemiau parodyta kai kuriems produktams.

[0083] LC/MS (skystos chromatografijos/masių spektroskopijos)

[0084] metodas buvo naudojamos medžiagos, regeneruotos iš likusios nepakitusios frakcijos, cheminės struktūros patikrinimui. LC/MS analizė buvo atliekama Finnigan Navigator (Finnigan, Manchester, UK) vieno kvadrupolio LC/MS masių spektrofotometru, naudojant ES arba APCI+ jonizacijos metodą, MassLab v.2,0 duomenų priėmimo sistemai duomenis perduodant į Digital Venturis FX/166 (Digital Eąuipments, Irvin, UK) personalinį kompiuterį. Bandymo sąlygos turi būti optimizuotos individualiai kiekvienai konkrečiai medžiagai, remiantis nurodymais - kaip pateikta keletoje sekančių pavyzdžių.

[0085] Čia pateikiamas tipiškas bandinio paruošimo metodas,

[0086] naudojamas nustatant bendrą medžiagos koncentraciją/kiekį bandinyje HPLC ir/arba LC/MS analizės pagalba.

[0087] Kietas liofilinimo indelio turinys ištirpinamas vandenyje, tirpalas sumaišomas su absoliučiuoju etanoliu santykiu 1:1 pagal tūrį, išsodinant plazmos proteinus, tuo tarpu tiriama medžiaga būna ištirpusi. Nedelsiant greitai nucentrifugavus, tirpalas yra paruoštas HPLC arba LC/MS analizei. Naudojant LC/MS, bandinys analizei įvedamas tiesiogiai, o atiieKant HPLC, koiupaiitJULctx atskiriami vienas nuo kito. Abu metodai duoda vertingą informaciją apie pagrindinio junginio cheminę struktūrą ir/arba apie galimus skilimo produktus, toliau kai kuriems produktams tai yra parodyta detaliau. Chromatografijos ir masių spektroskopijos duomenys, gauti HPLC ir LC/MS tyrimais, gali patvirtinti cheminį ekvivalentiškumą tarp žinomos biologiškai aktyviosios medžiagos, naudotos kaip pradinė medžiaga, ir regeneruoto junginio, gauto po jo surišimo su proteinų frakcija,

[0088] Visos naudojamos aktyviosios medžiagos buvo USP XXIII

[0089] Eksperimentuose buvo naudojamos plazmos proteinų frakcijos : (^*=Eur. Farm. kvalifikacija)

[0090]

[0091] Sekančiuose pavyzdžiuose susirišimo santykiai plazmos proteinas:substratas yra diapazone 1:0,1-100. Susirišimo santykiai medžiaga:HSA apskaičiuojami remiantis prielaida, jog HSA molekulinė masė=66500, o žmogaus gamaglobulino molekulinė masė=150000 [žr. 11 Science, vol. 244. p. 1195-1198, 1989; Vox Sang, 70: p. 203-209, 1996].

[0092] 20% (3,08xl0"³M) koncentracijos žmogaus serumo albumino reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 1 mg/ml (1,17x10"³M) koncentracijos paklitakselio tirpalas absoliučioj j ame etanolyje c uit..i i čottp panf-ykin A : 1 ir maišomi tol, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0093] Tirpalas yra liofilinamas; kieta liekana vėl tirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gauti skaidrų tirpalą, turintį 20% žmogaus serumo albumino koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 99% paklitakselio susirišę su žmogaus serumo albuminu. Tai reiškia, jog santykis žmogaus serumo albuminas:paklitakselis yra 1:0, 1.

[0094] 4,44% (6,67x10'⁴M) koncentracijos žmogaus serumo albumino reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 2,0 mg/ml (2,34xlO'3M) koncentracijos paklitakselio (molekulinė masė=853,92) tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi tol, kol gaunamas skaidrus tirpalas. Toliau tirpalas apdorojamas kaip aprašyta II.1 pavyzdyje.

[0095] Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 99% paklitakselio susirišę su žmogaus serumo albuminu. Tai reiškia, jog santykis žmogaus serumo albuminasrpaklitakselis yra 1:0,39. ^::

[0096] 4,44% (6,67x10'⁴M) koncentracijos rekombinantinio žmogaus serumo albumino reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 2,0 mg/ml (1,40x10'3M) koncentracijos paklitakselio tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi tol, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0097] Tirpalas yra liofilinamas; kieta liekana vėl tirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis 20% rekombinantinio žmogaus serumo albumino.

[0098] Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, joy 9 y'-i pakii_Luk_btliu susirišę su rekombinantiniu žmogaus serumo albuminu. Tai reiškia, jog santykis rekombinantinis žmogaus serumo albuminas:'paklitakselis yra 1:0,24.

[0099] 2,25% (1,5x10 ~4M) koncentracijos žmogaus gamaglobulino reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 0,1 mg/ml (1,171xlO'^*M) koncentracijos paklitakselio tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi tol, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0100] Tirpalas yra liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis 16% žmogaus gamaglobulino. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 98% paklitakselio susirišę su žmogaus gamaglobulinu. Tai reiškia, jog santykis žmogaus gamaglobulinas:paklitakselis yra 1:0,71.

[0101] II.1-II.3 pavyzdžiuose paklitakselio kiekis buvo matuojamas HPLC metodu:

[0102] Naudojant LC/MC [žr. Rapid Communications in Mass Spektrometry VOL. 11: p. 1025-1032, 1997 ir Rapid Communications in Mass Spectrometry, VOL. 9, p. 495-502, 1995], buvo nustatyta, kad medžiaga yra nepakitusi. Palyginamieji duomenys pateikti 6 Fig: 6A Fig. parodytas standarto masių spektras, 6B Fig. - pakartotinai ištirpinto bandinio kreivė. 6C Fig. rodo paklitakselio fragmentaciją.

[0103] LC/MS parametrai: jonizacija: APCI + tarpfazinė riba; o dujų r-ro"pR nrp i t i r : 300 l/vai., tirpiklis: acetonitrilas:buferis=60:40, kur buferis yra 10 mM amonio formiatas pH 5,0, koreguotas 10% skruzdžių rūgštimi; tekėjimo greitis: 0,300 ml/min.

[0104] Paklitakselio kiekybiniam nustatymui iš II.1-II.27 pavyzdžių skirtingų tirpalų buvo taikomas HPLC C-18 atvirkštinių fazių metodas. Bandiniai į HPLC sistemą buvo įvedami >50% etanolio tirpale, kad būtų išvengta medžiagos precipitacijos.

[0105] Medžiagos susirišimas su plazmos proteinais buvo nustatomas praėjus 15 min. po pusiausvyros nusistovėjimo 8±2°C temperatūroje.

[0106] Medžiagos pasiskirstymą galima matuoti po ultrafiltravimo per atitinkamą membraną (skiriamoji riba turi būti didesnė negu proteino molekulinė masė), nustatant medžiagos koncentraciją ultrafiltrato frakcijoje (atspindint nesurištą medžiagą) ir tirpale prieš filtravimą, atmetant surištą dalį dėl proteino denatūravimo (atspindint bendrą kiekį). Proteino denatūravimui ir surištos frakcijos atskyrimui naudojamas : atšaldytas (8±2°C) absoliutusis etanolis santykiu 1:1. Tikslūs koncentracijos dydžiai ir kiekiai yra išskaičiuojami, atsižvelgiant į praskiedimo faktorių.

[0107] 20% (3,08xl0°M)- 0,02% (3,08xl0~^*M) koncentracijų diapazono žmogaus serumo albumino tirpalas sumaišomas su 20 mg/ml (2,34x10 2M)-0,01 mg/ml (l,17xlO"⁵M) koncentracijų diapazono paklitakselio tirpalu absoliučiaj ame etanolyje, gaunant kiekvienu atveju skaidrius tirpalus. Detalės pateiktos I lentelėje. Visi matavimai atlikti tris kartus ir išskaičiuoti rezultatų vidurkiai.

[0108]

[0109] Paklitakselio koncentracijos (su 0,08% HSA, 10% etanolio, 0,002 mg/ml paklitakselio) kitimai parodyti 7 Fig, albumino koncentracijos (su 0,004-16,0% HSA, 20% etanolio, 0,2 mg/ml paklitakselio) kitimai pateikti 8 Pi q ; cmici r i <= n HSA paVĮ i takspl i n (su D , R% HSA, 10% etanolio, 0,1-2,0 mg/ml paklitakselio) kitimai, kaip pH (4,0-8,5) funkcija, atvaizduoti 9 Fig. Grafiniai žymėjimai atitinka sekančius pavyzdžius:

[0110] Su gyvulių serumo albuminu, imunoglobulinu, glikoproteinais, interferonais ir interleukinais buvo naudojami panašūs į II.2 - 11,21 pavyzdžiuose aprašyti metodai.

[0111] Norint gauti reguliuojamą agregatinę būseną su molekulei geriausiomis susirišimui sąlygomis, komerciškai gaunamas žmogaus serumo albuminas arba rekombinantinis žmogaus • serumo albuminas (toliau "albuminas") yra apdorojamas, pašalinant stabilizatorius, pvz., natrio oktaonatą, N-acetil-D,L-triptofaną ir kitus joninius komponentus bei druskas.

[0112] Vandenilio chlorido pagalba nustato tirpalo, turinčio 10% albumino, pH lygų 3,0 ir bidistiliuotu vandeniu tirpalą praskiedžia iki 5% proteino koncentracijos. Naudojant ultrafiltravimą (membranos skiriamoji riba 30000 kD), tirpalą koncentruoja iki 10% proteino koncentracijos. Tirpalą 1,0 mM vandenilio chloridu vėl praskiedžia iki 5% proteino koncentracijos. Tirpalą sukoncentruoja iki 10% proteino koncentracijos, naudojant ultrafiltravimą

[0113] Procedūrą kartoja 12 kartų, po to 2,0 M vandeniniu natrio hidroksido tirpalu nustato pH lygų 6,9 ir bidistiliuotu vandeniu tirpalą praskiedzi Č1 X iv X U -o koncentracijos. Vėl koncentruoja tirpalą iki 10% proteino koncentracijos, pakartotinai naudojant ultrafiltravimą

[0114] Tirpalą bidistiliuotu vandeniu vėl praskiedžia iki 5% proteino koncentracijos. Naudojant ultrafiltravimą

[0115] (membranos skiriamoji riba 30000 kD) , tirpalą koncentruoja iki 10% proteino koncentracijos. Procedūrą pakartoja 10 kartų, gaunant gryną proteino frakciją, pakankamai laisvą nuo kitų priemaišų. Tam momentui ultrafiltrato laidumas elektrai artimas skiedimui naudojamo bidistiliuoto vandens. Šis proteinas yra tinkamas paklitakselio arba ciklosporino surišimui.

[0116] b.)

[0117] Vietoj ultrafiltravimo naudojant dializę, gaunami panašūs rezultatai. Apdorojimas trunka 48 vai.

[0118] 0,8% (1, 203x10 4M) koncentracijos HSA tirpalas ir 4,0 mg/ml (4,33xlO"³M) koncentracijos amfotericino B (molekulinė masė=924,09) tirpalas DMF sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi tol, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0119] Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% HSA koncentraciją. Susirišimas nustatomas iš UF fitrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 99,7% amfotericino B susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis HSA: amfotericinas B yra 1:4.

[0120] 0,8% (1,203x10 4M) koncentracijos rekombinantinio žmogaus serumo albumino tirpalas ir 40,0 mg/ml (4,33x10 2M) amfotericino B tirpalas DMF + HCL terpėje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi tol, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0121] Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kieKyje vandens, kau yauLųsi skuidiu_^ tirpalas, turintis galutinę 20% rekombinantinio H_SA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 99,5% amfotericino B susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis HSA:amfotericinas B yra 1:40.

[0122]

[0123] Naudojant LC/MC, buvo nustatoma medžiaga ir randama esanti nepakitusi. Palyginamieji duomenys parodyti 2

[0124] Fig.: 2A Fig. pateiktas standarto masių spektras, 2b Fig. vėl ištirpinto bandinio kreivė. 2C Fig. rodo amfotericino B fragmentaciją.

[0125] LC/MS parametrai: jonizacija: ESI + tarpfazinė riba;

[0126] azoto dujų srovės greitis: 300 1/val.; tirpiklis: 20 mM amonio formiatas pH 4,0, koreguotas 10% skruzdžių rūgštimi, tekėjimo greitis: 0,300 ml/min.

[0127] 0,4%(6,015 x10'5M) koncentracijos HSA reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 0,14 mg/ml (4, 02 x10'4M) koncentracijos kamptotecino (molekulinė masė= 348,36) tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 4:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas. Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame vandens kiekyje, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% HSA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų,

[0128] rodančių, jog 98% kamptotecino susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis HSA:kamptoteeinąs yra 1:5,34.

[0129] 0,4% (6,015x10"⁵M) koncentracijos rekombinantinio HSA reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 0,14 mg/ml (4,02xl0"¹M) koncentraci jos kamptotecino tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 4:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0130] Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% rekombinantinio HSA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 98% kamptotecino susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis rekombinantinis HSA:kamptotecinas yra 1:5,34.

[0131]

[0132] Medžiaga nustatyta ir rasta nepakitusi LC/MS pagalba

[0133] 4,0% (6,015x10 ~4M) koncentracijos HSA reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 8,0 mg/ml (3,39xl0'²M) koncentracijos karbamazepino (molekulinė masė=236,27) tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 19:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas. Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame Viskyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% HSA koncenticici j 4. Subi

[0134] nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 98% karbamazepino susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis HSA: karbamazepinas yra 1:2,8. Karbamazepinas buvo matuojamas HPLC metodu:

[0135] Naudojant LC/MS [Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem, VOL. 35(10): p. 755-759, 1997], buvo nustatoma medžiaga ir randama esanti nepakitusi. Palyginamieji duomenys parodyti 3 Fig.: 3A Fig. atvaizduotas standarto masių spektras, 3B Fig. - vėl ištirpinto bandinio kreivė. 3C

[0136] LC/MS parametrai: jonizacija: ESI + tarpfazinė riba; azoto dujų srovės greitis: 300 1/val; tirpiklis: 2 mM amonio formiatas; tekėjimo greitis: 0,250 ml/min.

[0137] 4,0% (6,015x10 4M) koncentracijos HSA reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 1,0 mg/ml (8,33x10 4M) koncentracijos ciklosporino A (molekulinė masė=1202,63) tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1

[0138] Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% HSA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš CJF filtrato ir užsilaikiusiu frakcijų, rodančių, joa 97% ciklosporino A susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis HSA:ciklosporinas A yra 1:0,14.

[0139] 2,0% (3,008x10 4M) koncentracijos rekombinantinio HSA reguliuojamoje agregatinėje būsenoje tirpalas ir 1,0 mg/ml (8,33xlO"⁴M) koncentracijos ciklosporino A tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0140] Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% rekombinantinio HSA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 98% ciklosporino A susirišę su rekombinantiniu HSA. Tai reiškia, jog santykis rekombinantinis HSA:ciklosporinas A yra 1:0,29.

[0141] 2,25% (1,50x10 "4M) koncentracijos žmogaus gamaglobulino tirpalas ir 1,0 mg/ml (8,33xl0"⁴M) koncentracijos ciklosporino A tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas.

[0142] Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis 16% žmogaus gamaglobulino koncentraciją. Susirišimas nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 98% ciklosporino A susirišę su žmogaus gamaglobulinu. Tai reiškia, jog santykis žmogaus gamaglobulinas:ciklosporinas A yra 1:0,56.

[0143]

[0144] Kaip rodo rezultatai, naudojant LC/MC, buvo nustatoma medžiaga ir randama esanti nepakitusi. Palyginamieji

[0145] masių spektras, 4B Fig. - vėl ištirpinto bandinio kreivė. 4C Fig. rodo ciklosporino A fragmentaciją.

[0146] LC/MS parametrai: jonizacija: ESI + tarpfazinė riba; azoto dujų srovės greitis: 300 1/val.; tirpiklis: acetonitrilas/vanduo=60/40; tirpiklio srovės greitis: 0,350 ml/min.

[0147] 0,4% (6, 015x10"5M) koncentracijos HSA tirpalas ir 2,0 mg/ml (1,12x10'²M) koncentracijos propofolio (molekulinė masė_^lVS,27) tirpalas absoliučiajame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas. Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% HSA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 99% propofolio susirišę su HSA. Tai reiškia, jog santykis HSA: propofolis yra 1:18,3.

[0148] 0,4% (6, 015 x10'5 M) koncentracijos rekombinantinio HSA tirpalas ir 2,0 mg/ml (1,12 x10'2 M) koncentracijos propofolio tirpalas absoliučia jame etanolyje sumaišomi santykiu 9:1 ir maišomi, kol gaunamas skaidrus tirpalas. Tirpalas liofilinamas; kieta liekana vėl ištirpinama pakankamame kiekyje vandens, kad gautųsi skaidrus tirpalas, turintis galutinę 20% rekombinantinio HSA koncentraciją. Susirišimas yra nustatomas iš UF filtrato ir užsilaikiusių frakcijų, rodančių, jog 99% propofolio susirišę su rekombinantiniu HSA. Tai reiškia, jog santykis rekombinantinis HSA:propofolis yra 1:18,3.

[0149]

[0150] Naudojant LC/MS [J. of Chromątography B, 669: p. 358-365, 1995], buvo nustatoma medžiaga ir randama esanti nepakitusi. Palyginamieji duomenys parodyti 5 Fig.: 5A Fig. pateikta standarto masių spektras, 5B Fig. pakartotinai ištirpinto bandinio kreivė. 5C Fig. rodo propofolio fragmentaciją.

[0151] LC/MS parametrai: jonizacija: APCI + tarpfazinė riba; azoto dujų srovės greitis: 300 1/val; tirpiklis: acetonitrilas/vanduo=73/23; srovės greitis: 0,300 ml/min.

[0152] 9,0 ml 0,8% (1,213xlO"4M) koncentracijos HSA tirpalo ir 1,0 ml 4,0 mg/ml (4,33xlO'³M) koncentracijos amfotericino R tirpalo sumaišomi dimeti1 formamide, kad gautųsi

[0153] skaidrus tirpalas. Šis tirpalas 20 vai. 4°C temperatūroje ( tamsoje) dializuojamas prieš 2, 0 1 vandens ( WFI). Naudojant II. 24 pavyzdžio nustatymo metodą, rasta, jog susirišimas yra 99% ir santykis HSA: amfotericinas B lygus 1:3, 5.

[0154] Pakartojus dializę penkis kartus, DMF koncentracija tirpale sumažėja žemiau nustatymo ribos ( 2xlO" 9M).

[0155] Atliekant anksčiau aprašytą liofilinimo procedūrą, gaunama atitinkama farmacinė kompozicija. Vėl ištirpinus kietą medžiagą atitinkamame WFI tūryje, kad gautųsi 20% HSA koncentracija, tirpalas įgauna terapiniam vartojimui tinkamą koncentraciją, kas kai kurioms aktyviosioms medžiagoms apibendrinta žemiau:

[0156] Šios kompozicijos vėliau gali būti supilstytos į buteliukus, skirtus injekcijoms ir infuzijoms.

[0157] Biologinis ekvivalentiškumas nustatomas, lyginant naujas kompozicijas su terapijoje jau naudojamomis kompozicijomis, turinčiomis tą pačią aktyviąją medžiagą, pasižyminčią žemu tirpumu vandenyje. Tokios žinomos kompozicijos yra paruošiamos, naudojant polioksietilintą ricinos aliejų (Cremaphor EL) ir absoliutųjį etanolį. Naudojamos medžiagos: Paklitakselis, ištirpintas mišinyje polioksietilintas ricinos aliejus (Cremaphor EL):absoliutus etanolis=l:1, lyginanamas su išradimo vandeniniu paklitakselio/HSA tirpalu, paruoštu pagal II. 2 pavyzdį.

[0158] Norint nustatyti antiproliferacinį ir citotoksinį aktyvumą žmogaus auglių ląstelių linijoms, buvo atliekami palyginamieji tyrimai in vitro. Paklitakselio Cremophor EL/absoliutaus etanolio kompozicija ir paklitakselio/HSA kompozicija buvo palyginamos, išbandant ant K562 žmogaus mieloidinių leukozinių, MCF-7 ir MDA-231 krūties ir OVCAR-5 kiaušidžių karcinomos ląstelių linijų [Anticancer Research, Vol.16: p. 2469-2478, 1996].

[0159] Kolonijos augimo inhibicijos tyrimas: ląstelių linijų monosluoksnės kultūros apdorojamos vaistų, esančių dviejose anksčiau aprašytose kompozicijose, be to, palyginimui, DMSO/druskos tirpalu, aštuoniomis skirtingomis koncentracijomis. Kultūros inkubuojamos, atitinkamai, 24, 48, 72, 96 ir 120 vai. Kolonijos dažomos kristalo violetiniu, ir apdorotų ląstelių gyvybingumas išskaičiuojamas kaip procentinė dalis kolonijų, kurias sudaro neapdorotos ląstelės. IIA-IVB lentelės pateikia rezultatus, gautus su skirtingomis ląstelių linijomis. Kiekviename tyrime apdorotų ląstelių gyvybingumas pateikiamas kaip procentinė dalis kolonijų, kurias sudaro neapdorotos ląstelės. Visi pateikiami dydžiai yra trijų eksperimentų vidurkiai.

[0160] _AUC reiškia plotą po kreive (plazmos koncentracija priklausomai nuo laiko). Kreivė gaunama, matuojant junginio, skiriamo 4vairiais laiko tarpais, koncentraciją plazmoje.

[0161] Metodika: paklitakselio 2,5 mg/kg dozė buvo skiriama, 1,0 ml tūrio įve<3us i. v., boliusą CR.(Wi)BR žiurkėms (kūno svoris 380-420 gramų) ir, kaip nurodyta žemiau, kiekvienu laiko momentu 4 heparinizuotą mėgintuvėlį buvo imama po 1,0 ml trijų gyvuliukų kraujo bandinio:

[0162] Plazmos frakcija atskiriama nedelsiant nucentrifuguojant + 5°C temperatūroje ir laikoma -70°C temperatūroje iki analitinių tyrimų atlikimo.

[0163] Bandinio paruošimas: užšaldyti plazmos pavyzdžiai ~:t 1 dom.i j Y i 4 R mi n rpnti fuąuoiami 5000 ans . /mi n . greičiu. Paimama 0,300-0,500 ml skaidraus plazmos tirpalo ir patalpinama ant Oasis HLB 1 cc SPE (kieta fazė) ekstrakcijos kasetės. Prieš patalpinant plazmą, kasetė kondicionuojama, ją praplaunant 1 ml metanolio, po to 1

[0164] ml vandens. Paklitakselis absorbuojamas ant SPE kasetės, tuo tarpu bandinio komponentų likutis nuplaunamas 1 ml vandens ir 1 ml 30% acetonitrilo/vandens tirpalu. Kasetė ore sausai išdžiovinama. Paklitakselis nuo kasetės eliujuojamas 1 ml absoliučiojo etanolio. Bandinys azoto pagalba sausai išgarinamas ir iki analizavimo laikomas (-20°C) temperatūroje. Likutis ištirpinamas 0,200 ml absoliučiojo etanolio ir injekuojamas HPLC analizei.

[0165] HPLC sąlygos identiškos toms, kuriomis buvo identifikuojama medžiaga.

[0166] Gauti taškai yra trijų individualių gyvuliukų trijų bandinių vidurkiai. Matosi, jog skirtumas tarp dviejų kreivių, gautų atliekant dviejų skirtingų kompozicijų vienodų dozių farmakokinetinius tyrimus, pasilieka individualių bandinių nukrypimų ribose. Ta pati kreivė apibrėžia visus individualius duomenis, nužymėdama, jog tarp dviejų kompozicijų nėra farmakokinetinių charakteristikų skirtumo arba jis minimalus.

[0167] Tyrimai in vivo, vertinant antiproliferacinį ir citotoksinį aktyvumą, rodo, jog naujos kompozicijos turi teigiamą efektą kovojant prieš žmogaus auglių ksenograftus CH1 ir CHl_tax, atliekant bandymus su plikomis pelėmis.

[0168] Apytikriai 45% pacientų, gydytų paklitakseliu, pasireiškė hipersensibilumo reakcijos. Įrodyta, jog šie pašaliniai eteKcaj. susi jtį. su vienu kumpozioi jot, užįjj. iuu, Cx EL, kas pastebėta ir su kitais farmaciniais produktais, turinčiais tą patį komponentą. Ši hipersensibilumo reakcija nustatyta kaip anafilaksinis toksiškumas, pasireiškiantis per histamino indukciją, sužadinamą Cremorhor EL.

[0169] Tyrimai buvo atliekami su CRL (WI) BR žiurkių patinais, sveriančiais 130-150 g. Skiriama paklitakselio dozė buvo apie 7,0 mg/kg, suleidžiant i. v. bendrą 1,0 ml tūrį. Kiekvienam laiko taškui ir kiekvienai dozei buvo skirtos grupės po 5 gyvuliukus. Kraujo pavyzdžiai buvo surenkami į heparino turinčius mėgintuvėlius, praėjus 2,5 ir 10 min. po dozės įvedimo. Plazma buvo nedelsiant atskiriama greitai centrifuguojant. Bandiniai buvo laikomi - 70°C temperatūroje.

[0170] Bandinyje esantis histaminas buvo C-^14-metilintas, naudojant specifinį fermentą histamin-N-metil-transferazę. Histamino lygis plazmos bandiniuose buvo nustatomas, matuojant C-¹⁴ radioaktyvumą.

[0171] Gauti duomenys rodo, jog Cremophor EL ir jį turinti kompozicija iššaukia žymią histamino indukciją, tuo tarpu HSA ir HSA turinti kompozicija bei pats paklitakselis nerodo tokio efekto.

[0172] Tas pats fenomenas kaip ir IV. 4 pavyzdyje aptinkamas, atliekant in vitro eksperimentus su žmonių kraujo bandiniais, remiantis kraujo limfocitų chromatino aktyvacijos kiekybiniais tyrimais [Metodas: Analytical and Quantitative Cytology and Histology, VOL. 8: p.l, 1986].

Apibrėžtis

1. Vandenyje tirpus produktas arba farmacinė kompozicija kietoje arba skystoje formoje, ir jų tikrieji vandeniniai tirpalai, neturintys organinio tirpiklio, daugiausia skirti parenteraliniam vartojimui, b e s i s kiriantys tuo, kad turi:a) terapiškai aktyvųjį junginį, pasižymintį žemu tirpumu vandenyje (<1-10 4 M/l, <1-10"⁵ M/l, <1-10 ⁰ M/l) ir žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinams (toliau "aktyvioji medžiaga"), tarpusavyje surištoje būsenojeb) plazmos proteinų frakciją reguliuojamoje agregatinėje būsenoje,kur minėta aktyvioji medžiaga ir minėta proteinų frakcija tarpusavyje susirišę nekovalentiniais ryšiais ir, nebūtinai, papildomai turintysc) farmaciniu požiūriu priimtiną ir daugiausia parenteraliai tinkamą tokį(us) vandenyje tirpios kompozicijos priedą(us) kaip vandenį, stabilizatorių(s), proteinų agregacijos reguliatorių(s).

2. Vandenyje tirpus produktas arba farmacinė kompozicija kietoje arba skystoje formoje ir jų vandeniniai tirpalai, neturintys organinio tirpiklio, pagal 1 punktą, besiskiriantys tuo, kad molinis santykis aktyvus ingredientas .-proteinas yra nuo 1:0,05 iki 1:100 diapazone, optimalu nuo 1:0,1 iki 1:50.

3. Vandenyje tirpus produktas arba žmogui skirta farmacinė kompozicija pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje turi žmogaus plazmos proteinų frakciją reguliuojamoje agregatinėje būsenoj e.A . H miT n r o rink t-a r arba veterinarinė farmacinė kompozicija pagal 1 arba 2 punktą, b e s i s k i r i a n t y s tuo, kad savo sudėtyje turi gyvulinės plazmos proteinų frakciją reguliuojamoje agregatinėje būsenoj e.5. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-4 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje kaip plazmos proteinų frakciją turi natūralios plazmos komponentą, pvz., serumo albuminą arba rekombinantinį serumo albuminą.6. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-5 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje kaip plazmos proteinų frakciją turi natūralų imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną ir/arba interleukiną arba rekombinantinį minėtą plazmos komponentą.7. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-6 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje kaip vandenyje netirpią aktyviąją medžiagą turi citostatiką, pvz., taksonoidą, antibiotiką, vitaminą, priešuždegiminį agentą, analgetiką, antivirusinį agentą, antispazminį agentą, imunosupresantą, antiepilepsinį agentą, raminamąjį agentą, hipnotiką, priešgrybinį agentą, antikoaguliantą, lipidinės peroksidazės inhibitorių, koronarinį vazodilatatorių, antiaritmijos agentą, kardiotoniką, urikacidurinį agentą, antitrombotiką, steroidinį hormoną (progesteroną, androgeną, testosteroną) ir/arba fotosensibilizatorių.8. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-6 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje turi bent vieną iš aktyviųjų medžiagų:amfotericiną B, adriamicino analogą, apazoną, azatiopriną, bromazepamą, kamptoteciną, karbamazepiną,Y. Icr. ? , cik"1 oepori ns A d i arenama . d j kurna rol.i , digitoksiną, dipiridamolį, dizopiramidą, flunitrazepamą, gemfibrozilą, ketochloriną, ketokonazolį, mikonazolį, nifluminę rūgštį, oksazepamą, fenobarbitalį, fenitoiną, progesteroną, propofolį, ritonavirą, sulfinpirazoną, suprofeną, takrolimus, tamoksifeną, taksonoidą, testosteroną, tirilazadą, trioksaleną, valproinę rūgštį, varfariną.9. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-7 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje turi taksonoidą, kurio bendra formulė I:

16. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-8 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje turi tamoksifeną ir žmogaus serumo albuminą, imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną ir/arba interleukiną arba kitą natūralią arba rekombinantinę žmogaus plazmos proteinų frakciją moliniu santykiu nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50.

17. Produktas arba farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-8 punktų, besiskiriantys tuo, kad savo sudėtyje turi ritonavirą ir žmogaus serumo albuminą, imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną ir/arba interleukiną arba kitą natūralią arba rekombinantinę žmogaus plazmos proteinų frakciją moliniu santykiu nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50.

18. Farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-8 punktų, besiskirianti tuo, kad savo sudėtyje turi takrolimus ir žmogaus serumo albuminą, imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną ir/arba interleukiną arba kitą natūralią arba rekombinantinę žmogaus plazmos proteinų frakciją moliniu santykiu nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50.

19. Farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-8 punktų, besiskirianti tuo, kad savo sudėtyje turi tirilazadą ir žmogaus serumo albuminą, imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną ir/arba interleukiną arba kitą natūralią arba rekombinantinę žmogaus plazmos proteinų frakciją moliniu santykiu nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50.

20. Farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-8 punktų, besiskirianti tuo, kad savo sudėtyje turi trioksaleną ir žmogaus serumo albuminą, imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną ir/arba interleukiną arba kitą natūralią arba rekombinantinę žmogaus plazmos proteinų frakciją moliniu santykiu nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50.

21. Farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-20 punktų, besiskirianti tuo, kad yra kietoje formoje arba vandeninio tirpalo formoje.

22. Farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 1-20 punktų, besiskirianti tuo, kad savo sudėtyje kaip priedą turi tirpalą ir/arba proteiną stabilizuojantį agentą.

23. Farmacinė kompozicija pagal 22 punktą, besiskirianti tuo, kad savo sudėtyje kaip tirpalą ir/arba proteiną stabilizuojantį agentą turi bet kokią iš medžiagų: natrio chloridą, buferį, alkoholį, pvz. , glicerolį, ir/arba vandenyje tirpų cukraus darinį, pageidautina, manitolį, sorbitolį, dulcitolį.

24. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas, b e siskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi bent vieną aktyviąją medžiagą, pasižyminčią mažu tirpumu vandenyje (<1-10"⁴ M/l, <1-10'⁵ M/l, <l-10's M/l), iš grupės susidedančios iš: amfotericino B, adriamicino analogo, apazono, azatioprino, bromazepamo, kamptotecino, karbamazepino, klonazepamo, ciklosporino A, diazepamo, dikumarolio, digitoksino, dipiridamolio, dizopiramido, flunitrazepamo, gemfibrozilo, ketochlorino, ketokonazolio, mikonazolio, nifluminės rūgšties, oksazepamo, fenobarbitalio, fenitoino, progesterono, mmkjkmo! i o , ]. i Luiia ' v jj , s u 1 [_ a i i pi j . cV z c _, ii c , z u p ! rc f cr . r , takrolimus, tamoksifeno, taksonoido, testosterono, tirilazado, trioksaleno, valproinės rūgšties, ir/arba varfarinoir taip pat turintis bent vieną proteiną iš grupės susidedančios iš: žmogaus serumo albumino, imunoglobulino, glikoproteino, interferono ir/arba interleukino arba kitų natūralių arba rekombinantinių žmogaus plazmos proteinų frakcijų, kur minėta aktyvioji medžiaga ir minėta proteinų frakcija tarpusavyje susirišę nekovalentiniais ryšiais ir kur molinis santykis tarp aktyviosios medžiagos ir proteinų frakcijos yra diapazone nuo 1:0,05 iki 1:100, optimalu - nuo 1:0,1 iki 1:50.

25. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal 24 punktą, besiskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi taksonoidą, kurio bendra formulė I:

26. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal punkt-ą. b p s i s k .i r i antis tuo, kad savo sudėtyje turi paklitakselį ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/arba y-globuliną.

27. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal 24 punktą, besiskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi amfotericiną B ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/arba y-globuliną.

28. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal 24 punktą, besiskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi kamptoteciną ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/arba y-globuliną.

29. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal 24 punktą, besiskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi karbamazepiną ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/arba y-globuliną.

30. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal 24 punktą, besiskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi ciklosporiną A ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/arba y-globuliną.

31. Homogeninis, kietas, vandenyje tirpus produktas pagal 24 punktą, besiskiriantis tuo, kad savo sudėtyje turi propofolį ir žmogaus serumo albuminą, rekombinantinį žmogaus plazmos albuminą ir/arba y-globuliną.

32. Vandenyje tirpaus produkto arba farmacinės kompozicijos kietoje arba skystoje formoje, pagal bet i ■ ■ - ■: ; r. ^ ^ '1 /" *" ^ ■71 1 24-31 punktų ir jų tikrųjų vandeninių tirpalų gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad tikriesiems vandeniniams tirpalams gauti:a) ištirpina terapiškai aktyvųjį junginį, pasižymintį mažu tirpumu vandenyje (<1-10 4 M/l, <1-10"5 M/l, <1-10'6 M/l) ir žymiu rišamuoju giminingumu plazmos proteinams ("aktyvioji medžiaga") su vandeniu besimaišančiame farmaciniu požiūriu priimtiname organiniame tirpiklyje;b) sumaišo minėtą tirpalą su plazmos proteinų frakcijos reguliuojamoje agregatinėje būsenoje vandeniniu tirpalu;c) ir, nebūtinai, su papildomu farmaciniu požiūriu priimtinu vandenyje tirpiu pagalbiniu priedu - pvz. , proteino agregacijos reguliatoriumi ir/arba stabilizatoriumi -tuo būdu gauna tikrąjį tirpalą, turintį minėtą aktyviąją medžiagą ir minėtą proteinų frakciją, tarpusavyje susirišusius nekovalentiniais ryšiais;d) pašalina organinį tirpiklį ir, nebūtinai, vandenį, pageidautina, ultrafiltruojant, dializuojant, diafiltruojant ir/arba liofilinant tirpalą arba jo koncentratą arba derinant šias procedūras,tuo būdu gauna homogeninį, vandenyje tirpų skystą arba kietą farmacinį produktą, turintį aktyviąją medžiagą, susirišusią su plazmos proteinų frakcija;e) nebūtinai ištirpina kietą produktą vandenyje arba praskiedžia skystą produktą vandeniu, tuo būdu gauna skaidrų, tikrąjį vandeninį tirpalą, neturintį organinio tirpiklio, kuris yra tinkamas terapiniam skyrimui ir,f) nebūtinai, įveda šį produktą į parenteralinę kompoziciją (dozavimo formą) tiesioginiam vartojimui.

33. Vandenyje tirpaus produkto arba farmacinės kompozicijos kietoje arba skystoje formoje, pagal bet kurį iš 1-23 punktų arba naujo produkto pagal bet kurį iš^ u ^ j. L. H ii j ų L...-: '4 j 4 ai:'.: v:::: j. ų organinio tirpiklio, gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kada) terapiškai aktyvųjį junginį ištirpina su vandeniu besimaišančiame farmaciniu požiūriu priimtiname organiniame tirpiklyje,b) minėtą tirpalą sumaišo su atrinktos plazmos proteinų frakcijos reguliuojamoje agregatinėje būsenoje vandeniniu tirpalu,c) minėtas tirpalas, nebūtinai, turi . papildomą farmaciniu požiūriu priimtiną tokį pagalbinį priedą kaip proteinų agregacijos reguliatorių ir/arba stabiliza-torių -tuo būdu gauna tikrąjį tirpalą, turintį minėtą aktyvią medžiagą ir minėtą proteinų frakciją, tarpusavyje susirišusią nekovalentiniais ryšiais;d) pašalina organinį tirpiklį ir tirpalą arba jo koncentratą liofilina.

34. Būdas pagal a) stadiją bet kurio iš 32 - 33 punktų, besiskiriantis tuo, kad aktyviosios medžiagos ištirpinimui naudoja tirpiklį, pasižymintį tokiomis savybėmis:a) mišinyje su vandeniu jis sugeba pilnai ištirpinti aktyviąją medžiagą irb) jo mišinys su <50 % vandens nedenatūruoja naudojamo proteino.

35. Būdas pagal 34 punktą, besiskiriantis tuo, kad tirpikliu naudoja bet kokį junginį iš grupės, susidedančios iš alifatinio C(2 4)monoalkoholio arba polialkoholio, 70-100 % etanolio, dimetilformamido, metilformamido.

36. Būdas pagal a) stadiją bet kurio iš 32-35 punktų, b e siskiriantis tuo, kad proteino agregacijos-v- -v- <—■ I- Ti V", T ~! r> v _"■^*_>-/ V-, n$-7 V~ _T^- 1 stabilizuojančiu pagalbiniu priedu naudoja bet kokį iš agentų: vanduo, natrio chloridas, buferis, polialkoholis, pvz. , glicerolis, ir/arba vandenyje tirpus cukraus darinys, pageidautina, mani tolis, sorbitolis ir/arba dulcitolis.

37. Būdas pagal a) stadiją bet kurio iš 32-36 punktų, b e siskiriantis tuo, kad naudoja paklitakseli ir natūralios plazmos tokį komponentą kaip serumo albuminą, imunoglobuliną, glikoproteiną, interferoną- ir/arba interleukiną arba jų rekombinantus.

38. Produktas arba farmacinė kompozicija, besiskiriantys tuo, kad turi aktyvios medžiagos pagal arba gautos pagal bet kurį iš 1-37 punktų efektyvią dozę, skirti žmonių arba veterinarinių pacientų gydymui vandenyje netirpia terapiškai aktyvia medžiaga, pasižyminčia žymiu giminingumu plazmos proteinams.

39. Produktas arba farmacinė kompozicija, besiskiriantys tuo, kad turi tokius produktus, vartotinus, pageidautina, atitinkamų dozių intervale, (skaičiuojant aktyviosios medžiagos efektyviajai dozei):paklitakselis/albuminas 70-280 mg/kursui,propofolis/albuminas 6-10 mg/kg/val., kamptotecinas/albuminas,gemfibrozilas/albuminas,ciklosporinas A/albuminas 3-5 mg/kg/dienai,amfotericinas B/albuminas iki 1,5 mg/kg/dienai,vartojant junginius, turinčius atitinkamus rekombinantinius proteinus tomis pačiomis dozėmis,skirti žmonių arba veterinarinių pacientų gydymui vandenyje netirpia terapiškai aktyviąja medžiaga,pasižyminčia žymiu giminingumu plazmos proteinams,susirišant su jais.

Brėžiniai