[LT] Išradimas priskiriamas vaistams ir jų panaudojimui gydyti sudirginimo būsenas ir nervines disfunkcijas. Vaistai skiriasi tuo, kad į juos, kaip aktyvios medžiagos, įeina gauti atliekant ekstrakciją spiritu corydalis ir eschscholtzia ekstraktai (2,5:10), esant reikalui, greta įprastų priedų. Estrakte eschscholtzia ir corydalis santykis (pagal svorį) sudaro nuo 20:1 iki 1:1.
[EN]
[0001] Išradimas priskiriamas vaistams ir jų panaudojimui sušvelninti sudirginimo būseną ir nervines disfunkci-j as.
[0002] Yra žinoma, kad tarpiniai ir galutiniai medžiagų apykaitos pirokatechinamino produktai turi didelę įtaką žmogaus sudirginimo būsenai. Taip, pavyzdžiui, galutinis produktas adrenalinas veikia kaip adrenerginės nervų sistemos neurosiųstuvas kaip alfa taip ir beta - receptoriams. Kaip simpatikomimetinis preparatas adrenalinas padidina širdies susitraukimo jėgą. Be to, kadangi adrenalinas padidina oksidacinę medžiagų apykaitą ląstelėse, to pasėkoje padidėja mobilizacinis organizmo pasirengimas. Dėl to streso situacijose stebi adrenalino išmetino padidėjimą. Ypač aukštos adrenalino ir taip pat jo priešstadijose noradrenalino koncentracijos gali sukelti kraštutini, sudirginimą, nervingumą ir tuo pačiu nepakankamą funkcini, organizmo sugebėjimą tuo metu, kai tik truputi, pakilę šių aminų dydžiai veikia visai teigiamai: pulsas ir kraujo spaudimas vos pakilę, muskulatūra ir galvos smegenys sužadintos, jautrumas padidintas.
[0003] Be to, žinoma, kad sekančios adrenalino priešstadijos - dopamino koncentracijos pažeidimai, gali sukelti sudirginimo būseną ir nervines disfunkcijas. Iš dalies, esant nepakankamam dopamino kiekiui, gali atsirasti depresija. Specialus nepakankamo dopamino kiekio sindromas yra Parkinsono liga, kurios daliniai simpto-mai yra akinezė, sustingimas ir virpėjimas ramybės būsenoje. Naujausi klinikiniai rezultatai parodo terapini, dopa efektyvumą gydant parkinsonizmą. Šis veikimas paaiškėja stebint dopamino sumažėjimą pagrindiniame nervų mazge.
[0004] Yra žinomi vaistai, kurių pagrindą sudaro aktyvios medžiagos ir priedai (žiūr. CS A.L. Nr. 262751, A 61 K 35/78) .
[0005] Tačiau dėl savo sudėties jie neturi galimybių padidinti paciento dopamino koncentracijos, 'vykstant natūraliai medžiagų apykaitai ir tuo pačiu sušvelninti ar panaikinti sudirginimą ir nervines disfunkcijas, kurios pagrįstos amino balanso sutrikimu.
[0006] Taip pat žinomi vaistai, kurių pagrindą sudaro aktyvios medžiagos ir priedai (žiūr. US patentą Nr. 4810498, A 61 K 35/78) .
[0007] Tačiau dėl savo sudėties jie neturi galimybių padidinti paciento dopamino koncentracijos, vykstant natūraliai medžiagų apykaitai ir tuo pačiu sušvelninti ar panaikinti sudirginimą ir nervines disfunkcijas, kurios yra pagrįstos amino balanso sutrikimu.
[0008] Tuo būdu, neužtenkant dopamino, pageidautina natūraliu būdu padidinti šio pirokatechinemino koncentraciją. Tai galima pasiekti, pirma, padidinus dopa/dopamino sintezę, antra, neleidžiant dopaminui suskilti.
[0009] Siūlomo išradimo tikslas yra sukurti vaistus, kurie padidina paciento dopamino koncentraciją, vykstant natūraliai medžiagų apykaitai.
[0010] Nurodytą tikslą išradimu pasiekia dėka vaistų, pagal 1 punktą besiskiriančių tuo, kad i, juos kaip aktyvios medžiagos įeina gauti ekstrahuojant spiritu (2,5:10) corydalis eschscholtzia ekstraktai, o esant reikalui, ir įprasti priedai, kuriuose ekstraktų corydalis ir eschscholtzia santykis (pagal svorį) yra nuo 20:1 iki 1:1.
[0011] Tinkami išradimo įgyvendinimo variantai pateikiami formulės 2-9 punktuose. Be to, d, šį išradimą įeina vaistų pritaikymas pagal 10 punktą 'sušvelninti ar panaikinti sudirginimą ir nervų disfunkcijas, kylančius, pažeidus amino balansą, ypač sumažėjusios dopa/dopamino koncentracijos. Toliau, i, išradimą įeina gauto atliekant ekstrakciją spiritu (2,5:10) ekstrakto panaudojimas gydyti sudirginimą ir nervines disfunkcijas, atsiradusius pažeidus amino balansą pagal 11 ir 12 punktus. Pritaikymo formos pateiktos 13-15 punktuose.
[0012] Vaistai, pateikti išradime, gali turėti ekstrahuojant spiritu ekstraktus liofilizuotus iki miltelių pavidalo arba vandeninio ir/arba spiritinio tirpalo pavidalu. Liofilizuotus miltelius gauna, kaip taisyklė, atliekant gauto ekstrahuojant spiritu ekstrakto (išraukos iš augalinės žaliavos) liofilinį džiovinimą, įprastais liofiliniam džiovinimui būdais.
[0013] Išdžiovintus liofilinimu ekstraktus corydalis ir eschscholtzia galima laikyti atskirai arba sumaišytus, o prireikus pagaminti vaistus, galima sumaišyti su tinkamais farmacijoje nešėjais/skiedikliais. Tinktūrų gavimui tinka vanduo ir/arba spiritas. Į vaistus, svarbiausia, įeina aktyvių ingredientų ištraukos, gautos ekstrahuojant spiritu (2,5:10) iš augalinės žaliavos, ir į juos įeina tokia ištrauka iš augalinės žaliavos.
[0014] Eschscholtzia ir corydalis santykis (perskaičiavus pagal sauso ekstrakto svorį) yra tinkamiausias nuo 10:1 iki 2:1, ir ypatingai 4:1.
[0015] Kaip aktyvūs ingredientai išradime ypač tinka corydalidis cavae rhizoma ir eschscholtzia californicae herbą ekstraktai.
[0016] Vaistai išradime gali būti paruošti įprasta oraliniam skyrimui forma, ypač tiktų tabletės, dražė, kapsulės ir ypatingai tiktų tinktūros. Šias įvedimo formas, esant reikalui, paruošia, naudodami įprastas ar a skiras įvedimo formas ir tinkamus farmacinius skif liklius ir/arba nešiklius, įprastai naudojamus skiriant individualiai, inkapsuliuoj ant liofilizuotą ekstraktą arba jo spiritinį ir/arba vandeninį tirpalą. Norint gauti skystas įvedimo formas, tokias kaip tinktūros, naudoja gautas ekstrahuojant spiritu spiritines ištraukas iš augalinės žaliavos. Greta šių liofilizuotų spiritinių ištraukų iš augalinės žaliavos taip pat galima gauti sausas liekanas sausai išgarinant pačias spiritines ištraukas iš augalinės žaliavos, geriausia vakuuume ir/arba inertinių dujų atmosferoje iki sausos liekanos ir gautam tokiu būdu likučiui galima suteikti norimą įvedimo formą.
[0017] Aktyvių medžiagų koncentraciją vaistuose pagal išradimą galima keisti plačiose ribose. Kaip taisyklė, koncentracija sudaro nuo 0,5 iki 20 svorio %, perskaičiuoto į galutinę vaistų sudėtį, ypač tinka nuo 1 iki 10 svorio %, ir labiausiai - nuo 1 iki 4 svorio %. Jei naudoja gautą ekstrahuojant spiritu (2,5:10) spiritinę ištrauką iš augalinės žaliavos, tai ją tinkamiausia naudoti tiesiog gautos po ekstrakcijos koncentracijos; augalinės žaliavos ištrauka iš corydalidis ir eschscholtzia dažniausiai naudojama tokiu santykiu, kad santykis corydalis ir eschscholtzia atitiktų paminėtiems aukščiau kaip tinkamiausiems.
[0018] Norint gauti atskirus ekstraktus corydalis ir eschscholtzia, ypač corydalis savae rhizoma ir eschscholtziae californicae herbą, vaistai turi atitikti DAB 9 (vokiška farmakopėja) aprašymą. Tai pasiekiama kontroliuojant kokybę vaisto gamybos procese.
[0019] Atskirus ekstraktus gauna įprastais ir standartiniais ekstrakcijos būdais, kaip, pavyzdžiui, maceracija arba perkoliaci j a, naudojant etanoli, arba mišinį etanolis/ vanduo. Išsaugomas vaistinės žaliavos gydomųjų augalų - ekstrakto 2,5:10 santykis, t.y. iš 2,5 g gydomųjų augalų gauna 10 ml vaistinės žaliavos gydomųjų augalų ekstrakto. Kaip ekstrahuojanti, agentą dažniausiai naudoja 30% etanoli,. Gavimą galima reguliuoti, kontroliuojant procesą.
[0020] Kad būtų įvertinta ir garantuota pastovi ekstrakcijos kokybė, naudoja įprastus kokybės kriterijus. Iš dalies tam tarnauja pilni ekstrahuotų medžiagų spektrai, ir, iš kitos pusės, žinomų iš literatūros abiejų gydomųjų augalų (pvz., cf.) pagrindinių alkaloidų analizės.
[0021] Po kokybės kontrolės ekstraktus, priklausomai nuo norimos įvedimo formos ir priklausomai nuo norimos koncentracijos, toliau apdoroja kaip skystą ekstraktą arba liofilizuotą ekstraktą.
[0022] Paskirtų vaistų tipas ir kiekis priklauso iš dalies nuo susirgimo sunkumo, nuo bendros savijautos ir nuo paciento amžiaus. Kaip taisyklė, paskiria vaisto kiekį tinktūros forma, kuri išradimu laikoma tinkamiausia, ir sudaro nuo 2 lašų/kūno svorio kg, vieną arba kelis kartus dienoje. Kai naudojamos kitos peroralinio įvedimo formos, paskiria, kaip taisyklė, atitinkamą kiekį, tinkamiausią nuo 2 iki 5 mg bendro sauso ekstrakto/kūno svorio kg, vieną ar kelis kartus kasdien.
[0023] Fig. 1 parodo pirokatechinamino sintezės medžiagų
[0024] Fig. 2 parodo tirozino reakcijos per dopa, dopachinoną
[0025] iki dopachromo arba melanino apžvalgos schemą.
[0026] Fig. 3 parodo nustatyto prie 303 nm ultravioletinio spektro tirozino hidroksilinimą, esant cory - dalis ekstrakto 1:10. 000, eschscholtzia ekstrakto 1:10. 000 ar 20 vienetų fenoliazės. Fig. 4 parodo grafiką Lineweaver- Burk fenoliazės reakcijos su corydalis ekstraktu ( fig. 4a ir 4b), ir palyginimui be corydalis ektrakto ( fig. 4c- 4f). Fig. 5 parodo fenoliazės reakciją, esant 3, 4-dihidroksibenzeno. Fig. 6 parodo D, L- dopa i, taką fenoliazės reakcijai prie
[0027] Fig. 7 parodo dopamin- JJ- hidroksilazės sustabdymą
[0028] eschscholtzia ekstraktu ( kreivė A) ir taip pat vandeniniu 1% tirpalu ekstraktų corydalis ir eschscholtzia , kuriems atliktas sublimacinis džiovinimas ( kreivė B). Fig. 8 parodo fotometro pagalba prie 241 nm, katalizuoto amino oksidaze, benzilamino virtimo reakcijos i, benzaldehidą sustabdymą corydalis ekstraktu. Fig. 9 parodo katalizuoto MAO ( monoaminoksidaze)
[0029] benzaldehido susidarymo sustabdymą prie 241 nm, priklausomai nuo eschscholtzia ekstrakto koncentracij os.
[0030] Fig. 10 parodo katalizuoto MAO benzaldehido susidarymo sustabdymą prie 241 nm ekstraktais eschscholtzia (A) , corydalis (B) ir ekstraktų corydalis ir eschscholtzia mišiniu santykiu 20:80.
[0031] Iš fig. 1 matosi pirokatechinamino medžiagų apykaitos schema. Atsirandantys tuo metu dopa ir dopamino junginiai pagal jų koncentraciją, visų pirma, priklauso nuo to, kaip greitai vyksta tirozino virtimas d, dopa ir, antra, kokiu greičiu dopaminas reaguoja toliau iki noradrenalino ir adrenalino. Be to, dopaminas taip pat yra skaldomas monoaminoksidazių (MAO), taip, kad ir tai gali žymiai paveikti jo koncentraciją medžiagų apykaitoje. Kaip matosi iš fig. 1, padidintą dopamino koncentraciją gauna, jei padidina fenoloksidazės reakciją (fenoliazė, tirozinazė) , ir dopamin-f}-hidroksilazės ir monoaminoksidazės įtaką galima sumažinti. Buvo atlikti eksperimentai, parodantys, kokiu laipsniu aktyvūs vaistų komponentai išradime veikia tris fermentacines reakcijas.
[0032] Sekantys tyrimai, kadangi nebuvo nieko kito, buvo atlikti su parduodamais fermentais ir su corydalidis cavae rhizoma ir eschscholtziae californicae herbą.
[0033] Vykstant medžiagų apykaitai, tirozinas yra hidroksili-namas naudojančioje deguonį reakcijoje iki L-dopa. Šią pirmą pirokatechinamino sintezės stadiją katalizuoja tirozinazė ar fenoliazė, arba fenoloksidazė, d, kurią įeina varis, mažai specifinis fermentas. Žinoma, kad fenoliazės plačiai paplitę gamtoje, sutinkamos augaluose, grybuose ir įvairiuose gyvulių audiniuose. Jos visur vaidina svarbų vaidmenį ten, kur oksiduoja mono- ar difenolius, be to, daugeliu atveju prasideda oksidacijos polimerizacijos reakcijos, kaip, pavyzdžiui, lignino ar melanino susidarymas.
[0034] Fenoliazės katalizuoja dvi viena po kitos sekančias oksidacijos stadijas, kurias galima aprašyti taip: 1.Fermento "krezolazės aktyvumas" iššaukia monofenoliohidroksilinimą orto - padėtyje su difenolio susidarymu.
[0035] 2Pirokatechinolazės aktyvumas" katalizuoja tolesnę
[0036] sudaryto o-diolio oksidaciją iki atitinkamo chinono.
[0037] Abi reakcijos tiesiogiai priklauso viena nuo kitos. Tamprus krezolazės reakcijos ir pirokatechinolazės reakcijos ryšys remiasi vario atomo oksidacijos būviu aktyviame centre, kuris nustatytas pagal D. Kertesz ir R. Zito, Hayaishi (leidėjas) "Oxygenases", Academic Press, Londonas (1962) 8 skyrius: Fenoliazė, parodyta sekančiai: (Cu++) 2-fermentas + o-dihidroksifenolis -»
[0038] (Cu+) 2-fermentas + 0,5 02 + 2H+ —> (Cu**) 2_fermentas + H^.
[0039] Anksčiau pateiktame vario elektronų balanse krezolazės reakcija nėra priimta domėn. Faktinai, lieka neaišku, ar katalizuoja monofenolio hidroksilinimą tiesioginė fermentacinė reakcija, ar ši reakcija vyksta cheminiu būdu lygiagrečiai pirokatechinamino oksidacijai pagal sekančią schemą: o-chinonas + monofenolis +H20 —> 20-difenolis.
[0040] Nefermentacinės reakcijos faktą visų pirma patvirtina tai, kad reaguojant monofenoliams su fenoliazėmis galima stebėti indukcinę fazę, kuri prie tirozinazių iš gyvulių audinių gali tęstis iki vienos valandos. Nepertraukiama fermentacinė reakcija gali prasidėti tik tada, jei dioliai ar chinonai yra kaip priemaišos arba yra sudaryti autooksidacijos rezultate.
[0041] Tirozinazės reakcijos su augaliniais ekstraktais iš corydalis ir eschscholtzia tyrimas.
[0042] Fig. 2 schematiškai parodo reakcijos apžvalgą nuo tirozino iki dopachromo ir jo virtimo i, chinoniminą arba melaniną.
[0043] Eksperimentiniai stebėjimai buvo atliekami po tirozino oksidacijos iki dopachromo (Fig. 2), pirmo dihidroksi-lenilalanino produkto (dopa). Pats dopachromas yra dopachromo tatumerazės substratas ir yra melanino susidarymo priešstadij a.
[0044] Kaip dopachromo susidarymas, taip ir melanino sintezė priveda prie dopa suskilimo ir tuo pačiu prie dopamino sintezės sumažėjimo.
[0045] Dopachromo koncentraciją galima sekti ultravioletiniame spektre, esant bangos ilgiui 303-318 nm. Jo susidarymas iš tirozino prilyginamas tyrinėjamos fenoliazės aktyvumui, kurią galima laikyti nustatančia reakcijos greiti,.
[0046] 2 mM tirozino; 100 mM fosfatinio buferinio tirpalo, pH 6,5; 20 vienetų tirozinazės ar spiritinių ištraukų
[0047] eschscholtzia ar corydalis, atskiestų santykiu 1:10000 (pagamintų iš pagrindinio ekstrakto pagal sekanti, pavyzdi,) .
[0048] Fig. 3 parodo tirozino hidroksilininą nustatytą prie 303 nm ultravioletinio spektro, dalyvaujant fenoloksi-dazei arba corydalis ir eschscholtzia ekstraktams. Be to, esant vienai fenoliazei, stebi maždaug 15 minučių "ramybės" fazę.
[0049] Corydalis ekstraktų skiedimas 1:10000 sutrumpina šią "ramybės" fazę arba pradinę fazę, taip kaip matyti iš fig. 3. Esant aukštesnėms corydalis koncentracijoms, stebi greitą maksimalios normos virtimą be "ramybės" fazės.
[0050] Ekstraktas iš eschscholtzia taip pat privedė prie sutrumpintos pradinės fazės, bet ekstrakto eschscholtzia efektyvumas žymiai žemesnis už corydalis efektyvumą.
[0051] Kontroliniai bandymai parodė, kad atitinkamo etanolio kiekio dalyvavimas jokios įtakos reakcijai neturi. Be to, bandymai su pirolchinolinchinonu (PQQ) parodė, kad pridėjimas šio fiziologiškai labai įdomaus chinono neturi jokios įtakos pradinei fenoliazės reakcijos fazei. Ir hipericinas, kuris, kaip ir parachinonas galėtų daryti įtaką ramybės fazei, taip pat neturi įtakos reakcijai.
[0052] Šioje bandymų serijoje įdomus tas faktas, kad ekstraktas iš corydalis nors ir perstumia į priekį maksimalios tirozino virtimo normos momentą, bet neturi įtakos maksimaliai virtimo normai. Bandymai su skirtingos koncentracijos substratu grafike Lineweaver-Burk nerodo jokio persistūmimo Km-fenoliazės reakcijos dydžio (žiūr. Fig. 4a-4f).
[0053] Kad būtų galima toliau paaiškinti tirozinazės reakcijos mechanizmą, dalinai įvertinant ramybės fazės sutrumpė j imą, j, bandomą pradini, mišinį prideda kitų medžiagų: a)Vario druskų priedas neturėjo jokios įtakos fermentacinei reakcijai; b)Askorbininė rūgštis kaip reduktorius - kaip tai žinoma iš literatūros gali paveikti ramybės stadiją, esant įvairiems reakcijų tipams. Visgi to negalima stebėti šios bandymų serijos ribose: askorbininė rūgštis nors ir negali pradėti tirozino pavirtimo i, L-dopą, bet tuo pačiu trukdo jo tolimesnei oksidacijai iki dopachromo. Fenoliazės reakcijos nebuvo galima stebėti dalyvaujant askorbininei rūgščiai prie 303 nm laiko tarp 30 min., ramybės stadija dargi pailgėjo; c)Kombinacij a PQQ su askorbininė rūgštimi, be to, susidaro atstatyta forma PQQH2, kuri galėjo veikti reakciją kaip diolis, taip pat pailgindama ramybės stadiją; d)Priedas iš tikrų diolių kaip 3,4-dihidroksibenzolas ir D,L-dopa (dopa; 3,4-dioksifenilalanino), sutrumpina reakcijos ramybės stadiją (kai priedas 3,4-dioksifenilalaninas) , dėl didesnio substrato kiekio taip pat padidėja dopachromo susidarymo greitis.
[0054] Fig. 5 parodyta fenoliazės reakcija dalyvaujant 3,4-dihidroksibezolui. Fig. 6 parodo D,L-dopa įtaką fenoli-azės reakcijai priklausomai nuo dopa koncentracijos. Kaip iš fig. 5, taip ir iš fig. 6 galima aiškiai matyti pavadintų dioliais įtaką ramybės stadijai.
[0055] 3,4-dioksifenilalanino autooksidacijos, kuri vyksta prie šarminių pH dydžių, galima nepastebėti, arba tik truputį - prie pH 6,5.
[0056] Aukščiau nurodyti bandymai parodo, kad fenoliazės reakcijos pradinės fazės sutrumpėjimą gali sukelti tik pridėdami diolių. Chinolinas ir askorbininė rūgštis neturi jokios įtakos. Dėl to reikia laikyti, kad i, ekstraktus corydalis ir eschscholtzia įeina orto-dioliai, kurie iššaukia greitą tirozino virtimą i, 3,4-dioksifelalaniną. Toliau, tenka matyti, kad ekstraktai corydalis ir eschscholtzia ir gyvame organizme sukelia greitesni, tirozino virtimą ir tuo pačiu labiau padidintą dopa (3,4-dioksifenilalanino) koncentraciją.
[0057] Fermentas dopamin-p-hidroksilazė katalizuoja dopamino virtimą iki noradrenalino. Dopamin-p-hidroksilazė taip pat yra turintis vario fermentas. Hidroksilinimas vyksta deguoniui skylant ir kaip atstatančių agentų reikia askorbininės rūgšties ir fumarato, kad būtų regeneruotas vario atomo oksidavimo statusas.
[0058] Fermento aktyvumą nustato potenciometru molekulinės deguonies išeigos pagrindu. Atitinkamas bandymo priedas talpina sekančius komponentus: po 100 Įil tiramino, fumarato, askorbato (kiekvie-nas 5 mmol); 1 ml fosfatinio buferinio tirpalo, pH 5 (100 mmol); 1 ml vandens;
[0059] 100 Įil fermento ( atitinkamai 0,1 vieneto).
[0060] Deguonies išeigos normas skaičiavo 02 turinčio tirpalo pagrindu, kurio temperatūra 37°C, esant atitinkamam tūriui.
[0061] Kai pridedama eschscholtzia ekstrakto, vyksta pastebimas, nuo koncentracijos priklausomas fermentacinės reakcijos stabdymas, t. y. žymiai nuslopinamas šoninės grandinės hidroksilinimas. Buvo pastebėta, kad fermentinis aktyvumas sustabdomas taip pat etanoliu. Vis tik stabdymas ekstraktu yra žymiai didesnis, taip kad galima įžiūrėti aiškų skirtumą. Fig. 7 parodyta stabdymas dopamin-p-hidroksilazės eschscholtzia ekstraktu (kreivė A) ir vandeniniu 1% tirpalu eschscholtzia ir corydalis ekstraktų, kuriems atliktas sublimacinis džiovinimas, santykiu 20:1 (kreivė B) pagal išradimą. Fig. 7 abi kreivės rodo ryškų fermentinio aktyvumo stabdymą. Šių kreivių skirtumai priklauso nuo etanolio ir corydalis ekstrakto (kreivė B) buvimo ar nebuvimo. Sumažėjusi, fermentinio stabdymo poveikį, esant eschscholtzia ekstraktui, iš dalies galima paaiškinti skirtingų ekstrakto substratų deguonies išeiga. Nors ekstraktų corydalis ir eschscholtzia, kuriems atliktas sublimacinis džiovinimas, vandeninis tirpalas taip pat parodo deguonies išeigą su tiraminu, askorbatu ir fumaratu; vis tik stabdantis poveikis fermentui nesumažėja, dėl to čia labai apsunkinta efekto interpretacija.
[0062] Aukščiau pateikti bandymai aiškiai parodo, kad dopamin-p-hidroksilazės fermentą stabdo spiritiniu eschscholtzia ekstraktu (kreivė A) , o taip pat ekstraktų corydalis ir eschschlotzia, kuriems atliktas sublimacinis džiovinimas, vandeniniu tirpalu (kreivė B), kas, esant pirokatechinamino apykaitai, priveda prie noradrenalino ir adrenalino susidarymo sumažėjimo. Šis stabdantis veikimas paaiškina vaistų pagal išradimą raminanti, veikimą. Stabdymu palaikoma aukšta dopamino koncentracija sukelia ir teigiamą įtaką prie parkinsonizmo sindromo, kur suardytos dopaminerginės nervų ląstelės ir dideli, dopamino kieki, galvos smegenyse tenka palaikyti dirbtinėmis priemonėmis.
[0063] Kaip matyti iš fig. 1 dopa (3,4-dioksifenilalanino) arba dopamino koncentraciją taip pat reguliuoja jų suskaldymu monoaminooksidazėmis. Monoaminooksidazės paverčia pirminius aminus deguonies pagalba vandens aplinkoje i, atitinkamą aldehidą, amoniaką ir vandenilio peroksidą stechiometriniu santykiu. Naudojama čia aminooksidazė buvo nupirkta firmoje Sigma Chemicals. Ši aminooksidazė labai panaši i, substrato pavidalo benzilaminą. Todėl buvo atlikti žemiau pateikiami substrato pavidalo benzilamino tyrimai ir patikrinta corydalis ir eschscholtzia įtaka šios monoamino-oksidazės aktyvumui.
[0064] Benzilamino virtimą i, benzilaldehidą monoaminooksidazės dėka nustatė fotometrų ir potenciometru: a)Fotometro pagalba suranda sudaromąjį benzaldehidą, kuris prie 241 nm turi aukštą molekulini, sugėrimo rodikli, (l,2xl04). Toks didelis jautrumas leidžia naudoti labai mažus fermento kiekius, kurie gali būti 0,01 ir 0,02 monoaminooksidazės vienetuose 2 ml reakciniame tūryje.
[0065] Atitinkamas bandymo priedas su bendru tūriu 2.000 Įil apima: 50 Įil 100 m mol vandenilio benzilamino -HC1 tirpalo (atitinkamai 2,5 m mol);
[0066] 100 m mol fosfatinio buferinio tirpalo , pH 7,4;
[0067] 0,01 arba 0,02 vienetų (U) MAO, pridėto dalimis po 100 |il i, atitinkamą pagrindini, tirpalą;
[0068] etaloninė kiuvetė su buferiniu tirpalu, vandeniu ir benzilaminu.
[0069] Bandymuose su aukščiau aprašytu bandymo priedu po 10 minučių reakcijos laiko i, matavimo kiuvetę ir etalo-ninę kiuvetę pylė atskiestus eschscholtzia ir corydalis ir nustatė pasikeitusi, aktyvumą. Fig. 8 parodo benzaldehido 'susidarymo stabdymą priklausomai nuo corydalis koncentracijos (20 ar 40 nl 1:10 pagrindinio ekstrakto atskiesto tirpalo). Fig. 9 parodyta MAO aktyvumo stabdymas ekstraktu iš eshscholtzia prie skirtingų ekstrakto kiekių. Pastebimas ryškus MAO aktyvumo stabdymas. Fig. 10 parodo MAO aktyvumo stabdanti, veikimą, pridedant įvairias eschscholtzia ekstrakto (kreivė A), corydalis ekstrakto (kreivė B), ir ekstraktų corydalis ir eschscholtzia mišinio santykiu 20:80 (kreivė C). Geresniam bandymo rezultatų sulyginimui fig. 10 duota stabdymo veiksmų schema %.
[0070] MAO aktyvumas kiekviename buvo priimtas 100 % (klampaus amonio sulfato - fermento pagrindu buvo sunku išreikšti pastovius siūlomo prekyboje fermento kiekius).
[0071] Bandymų įvertinimas rodo, kad corydalis ekstraktu sukelia saikingą MAO - aktyvumo stabdymą. Didesnę įtaką galima stebėti esant eschscholtzia ekstraktui. Žymus MAO stabdymas būna esant abiejų ekstraktų mišiniui, sudarytam iš 80 % eschscholtzia ekstrakto ir 20 % corydalis ekstrakto.
[0072] b)Potenciometru galima nustatyti reakciją benzilaminas + 02 + H20 —> benzaldehidas + NH3 + H202 dėl deguonies
[0073] tūrio sumažėjimo reakciniame mišinyje platinos-deguonies elektrodo pagalba. Deguonies virtimo įrodymui reikia didesnio substrato ir fermento kiekio. Atitinkamas bandymo priedas talpino:
[0074] 200 (J.1 100 m mol benzilamino tirpalo (atitinkamai 10 m mol); 1 .000 jil 20 m mol fosfatinio buferinio tirpalo, pH 7,5 (atitinkamai 100 m mol);
[0075] Pridėjus 100 (il corydalis ir eschscholtzia ekstraktų po 3 minučių reakcijos laiko galima apskaičiuoti įvairias deguonies virtimo normas.
[0076] Deguonies elektrodo rezultatai parodo monoaminooksi-dazės aktyvumo sumažėjimą atskirų ekstraktų iš corydalis ir eschscholtzia dėka. Buvo patvirtintas stiprus eschscholtzia ekstrakto veikimas i, MAO aktyvumą.
[0077] Anksčiau pateikti pavyzdžiai rodo, kad galima pasiekti žymų MAO stabdymą ekstraktais iš corydalis ir eschscholtzia ir šių dviejų ekstraktų mišiniu. Iš čia galima padaryti išvadą, kad stabdant aminooksidazių aktyvumą plazmoje, aminams kaip ir dopaminui būdingas ilgesnis buvimo kraujyje laikas ir tuo pačiu jie ilgiau išlieka aktyvūs. Iš čia išplaukia vaistų teigiamas efektas pagal išradimą sušvelnėjus sudirginimui ir nervų disfunkcijoms ir jų pasėkoje gautoms depresijoms ypač prie dopamino deficito sindromo, tokio kaip parkinsonizmas.
[0078] Buvo gauti atskiri ekstraktai corydalis cavae rhizoma ir eschscholtzia colifornicae herbą. Atskirus ekstraktus gavo ekstrakcijos būdu, naudojant perkoliaciją, 50°C temperatūroje 16 valandų. Buvo prisilaikoma santykio vaistiniai augalai - ekstraktas 2,5:10, t.y. iš 2,5 g atitinkamo vaistinio augalo gavo 10 ml vaistinio augalo ekstrakto. Ekstrahuojantis agentas: 30 % etanolis.
[0079] Gautus tokiu būdu ekstraktus galima tiesiogiai naudoti gaunant vaistų sudėti, arba liof ilizaci j os būdu galima juos pakeisti i, sausą ekstraktą.
[0080] D, L-dihidroksifenilalanino i,taka fenoliazės reakcijai
[0081] Reakcijos sąlygos: fosfatinis buferinis tirpalas,
[0082] pH=6,5 100 m M, tirozinas 2 m M, fenoliazė 20 V, D, L-dihidroksi-fenilalaninas, kintamas kiekis
[0083]
[0084] Kaip rodo fig. 6, DL-dopa gali žymiai sutrumpinti fenoliazės ramybės stadiją, be to, 5 įaM dopa iššaukia greitą dopachromo susidarymą. Su 50 dopa, reakcijos pradžia, iššaukta fermento, jau vyksta su maksimalia virtimo norma.
[0085] Dopa autooksidacij a, t.y. dopachromo susidarymas be fermento dalyvavimo, esant pH=6,5 stebimam laiko intervale nepastebėta.
[0086] Vienok DL-dopa yra ne bet koks diolis, o feniliazės substratas, kurio produktas vėl duoda dopachromą. Todėl žemiau (3 pavyzdyje) buvo atlikti palyginamieji tyrimai su 3,4-dihidroksibenzenu.
[0087] 3, 4- dihidroksibenzeno ( kaip starterio) veikimas \ fenoliazės reakciją.
[0088] Reakcijos sąlygos: fosfatinis buferinis tirpalas,
[0089] pH=6, 5, 100 m M, tirozinas 2 m M, fenoliazė 20 VU, 3, 4- dihidroksi-benzolo, kintamas kiekis
[0090]
[0091] Tai parodo, kad orto- dihidroksibenzolas prie koncentracijų 5 ir 50 ( i mol gali sutrumpinti arba panaikinti fenoliazės reakcijos ramybės stadiją ( fig. 5) .
[0092] a) Michaelio konstantos nustatymas vykstant tirozino virtimui dėka fenoloksidazės. Reakcijos sąlygos: fosfatinis buferinis tirpalas, pH=6,5, 100 m M, tirozinas 20 Įi M iki 2 m M, fenoliazė 20 U/prad. mišini.
[0093] b) Michaelio konstanta reakcijoje, esant corydalis ekstraktui
[0094] Virtimo normos tyrinėjimai su corydalis ekstraktu atliekami praskiedžiant ekstraktą 1:200. Šis ekstrakto kiekis ankstesniuose bandymuose tuoj pat sukeldavo pilną fermentacini, aktyvumą, pradinė fazė sudaro 0 minučių.
[0095] Dydžio Km nustatymas parodo, esant corydalis ekstraktui, šiek tiek padidėjusį išsibarstymą, bet yra vienodoje koncentracijų sferoje.
[0096] Michaelio konstantos, esant corydalis ekstraktui.
[0097] Reakcijos sąlygos: fosfatinis buferinis tirpalas,
[0098] pH=6,5, 100 m M, tirozinas 20 |i M iki 2 m M, fenoliazė 20 U/prad. mišinį, corydalis ekstraktas 1:2000
[0099]
[0100] Kaip matyti iš žemiau pateiktos lentelės ir fig. 8,
[0101] ekstraktas iš corydalis cava stabdo MAO aktyvumą. Naudoja 20 ar 40 Įil 1:10 praskiesto ekstrakto tirpalo (2 ar 4 Įil pradinės medžiagos) . Šie kiekiai atitinka, perskaičiavus i, bendrą reakcijos tūri, 2 ml, atskiedimo 1:1000 ar 1:500. Paties ekstrakto absorbcija prie 241 nm dėka daugelio aromatinių junginių trukdo tyrinėti didesnius ekstrakto kiekius, nes šiuo atveju neįmanoma ilgiau subalansuoti reakciją etaloninėje kiuvetėj e.
[0102] Reakcijos sąlygos: fosfatinis buferinis tirpalas, pH=7,4,
[0103] 100 m M, benzilaminas 2,5 m M, monoaminooksidazė 0,01, 0,02 vienetų/ pradini, mišinį, corydalis ekstraktas, 1:10, besikeičiantis kiekis
[0104]
[0105] b) Eschscholtzia ekstrakto įtaka.
[0106] Esant padidintam eschscholtzia ekstrakto skaidrumui, šiame tyrime galima naudoti 20, 40 ar 60 |il 1:10 atskiesto tirpalo. Šiuo atveju pradiniame reakciniame mišinyje yra 1:1000, 1:500 arba 1:330 atskiesto eschscholtzia ekstrakto tirpalo. Žemiau pateikta lentelė ir fig. 9 paaiškina aukštą šio ekstrakto stabdymo sugebėjimą: jau atskiedus 1:500 monoamino oksidazės aktyvumas laikosi tiksliai žemiau 50%, o atskiedus 1:300 fermento aktyvumas sumažėja iki trečdalio pradinio dydžio.
[0107] Reakcijos sąlygos: fosfatinis buferinis tirpalas, pH=7,4,
[0108] 100 m M, benzilaminas 2,5 m M, monoamino oksidazė 0,01, 0,02 U/prad. mišinį, eschscholtzia ekstraktas, 1:10 keičiasi
[0109]
[0110] Tinktūrai gauti sumaišė pagal 1 pavyzdi, gautus
[0111] vaistinių augalų spiritinius ekstraktus, naudojant 20 ml vaistinių augalų corydalis cavae rhizoma ekstrakto ir 80 ml vaistinių augalų eschscholtzia
[0112] californicae herbą ekstrakto. Gauta 100 ml paruoštos naudojimui tinktūros.
[0113] Gautus pagal 1 pavyzdį ekstraktus iš corydalis cavae
[0114] rhizoma ir eschscholtzia californicae herbą džiovino (pavyzdžiui, liofilizacijos būdu), ir sausus ekstraktus sumaišė svorių santykiu eschscholtzia/ corydalis = 4/1 kartu su susmulkintu i, miltelius krakmolu (kaip farmacinis nešiklis) ir formavo tabletes tablečių prese (0,5 g, diametras 0,6 cm). Aktyvaus ingrediento ekstraktų kiekis tabletėse sudarė 2 svorio %.
1. Vaistai, besiskiriantys tuo, kad jie sudaryti iš aktyvių ingredientų ekstraktų, gautų iš corydalis ir eschscholtzia spiritinio ekstrakto (2,5:10), pasirinktinai drauge su įprastais priedais, kuriuose eschscholtzia ir corydalis ekstraktų svorio santykis yra nuo 20:1 iki 1:1 ribose.
2. Vaistai pagal 1 punktą, besiskiriantys tuo, kad jie turi vandeninio ir/arba spiritinio tirpalo ekstraktų miltelių pavidalą.
3. Vaistai pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantys tuo, kad jie turi vaisto spiritinio ekstrakto pavidalą.
4. Vaistai pagal 3 punktą, besiskiriantys tuo, kad jie pateikiami spiritinio ekstrakto pavidalu.
5. Vaistai pagal bet kuri, iš 1-4 punktų, besiskiriantys tuo, kad eschscholtzia ir corydalis spiritinių ekstraktų santykis sudaro nuo 10:1 iki 2:1.
6. Vaistai pagal bet kuri, iš 1-4 punktų, besiskiriantys tuo, kad eschscholtzia ir corydalis santykis, perskaičiavus i, gydomųjų augalų ekstraktus, sudaro 4:1.
7. Vaistai pagal bet kuri, iš 1-6 punktų, besiskiriantys tuo, kad i, juos kaip aktyvios medžiagos įeina corydalidis cavae rhizoma ir eschscholtzia californicae h«: -ba ekstraktai.
8. Vaistai pagal bet kuri, iš 1-7 punktų, besiskiriantys tuo, kad jie turi peroralinio naudojimo vaistinę formą.
9. Vaistai pagal 8 punktą, besiskiriantys tuo, kad jie turi tablečių, dražė, kapsulių arba tinktūrų pavidalą.
10. Vaistai pagal 1-9 punktą, skirti naudoti sudirginimo būsenoms ir nervinėms disfunkcijoms, kurios pagrįstos amino balanso sutrikimu, sušvelninimui arba pašalinimui.
11. Corydalis ir eschschdltzia ekstraktas, gautas ekstrahuojant alkoholiu (2,5:10) skirtas gydyti sudirginimo būsenas ir nervines disfunkcijas, kurios pagrįstos amino balanso sutrikimu.
12. Panaudojimas ekstrakto gauto ekstrahuojant spiritu corydalis ir eschscholtzia (2,5:10) gaminti vaistus, sušvelninančius arba pašalinančius sudirginimo būsenas ir nervines disfunkcijas, kurios pagrįstos amino balanso sutrikimu.
13. Panaudojimas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad gamina vaistus sudirginimo būsenos ir nervinės disfunkcijos, pagrįstos sumažinta dopa/dopamino koncentracija paciento medžiagų apykaitoje.
14. Panaudojimas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad gamina vaistus sušvelninti arba pašalinti depresijas.
15. Panaudojimas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad gamina vaistus sušvelninti parkinsonizmo negalavimus.