LT3614B

PEPTIDINIAI JUNGINIAI, JŲ GAVIMO BŪDAS IR PANAUDOJIMAS

PEPTIDE COMPOUNDS, METHOD FOR THE PREPARATION AND USE THEREOF

Referatas

[LT] Atskleisti dipeptidiniai junginiai, kuriuose dvi peptidinės grandinės yra prijungtos kartu prie negalinės aminorūgšties C alfa-atomo dvivalente jungiančia tilteliu grupe -A-. C alfa-atomai, prijungtiprie grupės -A-, yra išdėstyti ekvivalentiškose vietose kiekvienoje minėtoje peptidinėje grandinėje ir kiekvienas neturi natyvios alfa-šoninės grandinės.@Atskleisti tilteliniai dipeptidiniai junginiaituri stimuliacinį poveikį ląstelės dalijimuisi, ypač mielopoezės ir kaulų čiulpų ląstelėms.

[EN]

Aprašymas

[0001] Šis išradimas yra apie ląstelių proliferaciją skati-nančių peptidų panaudojimą ir naujus peptidus, pasi-žyminčius specifiniu ir/ar bendru ląsteles stimuliuo-jančiu poveikiu.

[0002] Žinduolių kūnas sudarytas iš ląstelių, itin stipriai besiskiriančių struktūra ir funkcijomis, todėl ląstelių diferencijacijos ir vystymosi mechanizmai buvo daugelio tyrinėjimų objektu. Žinoma, kad nuolat atsinaujinančių ląstelių sistemoje paprastai būna rezervuaras daugia-vaisių (pliuripotentinių) kamieninių ląstelių, kurios dalijasi ir pastoviai tiekia sistemai naujas ląsteles. Nors patiektos iš "rezervuaro" kamieninės ląstelės pra-džioje yra vienodos, tačiau netrukus jos patiria vie-nokį ar kitoki, morfologini, pakitimą ir vėliau išsivysto ląsteles, atliekančias reikiamą funkciją.

[0003] Minėtų kamieninių ląstelių sistemų pavyzdžiais yra kraujodaros sistema kaulų čiulpuose bei epitelio ir epidermio sistemos.

[0004] Kamieninių ląstelių dalijimosi valdymas ar reguliavimas yra labai perspektyvi terapijos sritis, todėl daugelio tyrimų tikslas tebėra mechanizmų išaiškinimas ir spe-cifinių cheminių mediatorių suradimas. Iki šiol buvo nustatytos kelios tikrai dalyvaujančios ląstelių gamyboje ir diferencijacijoje molekulės, kurios skatina arba slopina tam tirkrą proceso grandį. Tuo požiūriu itin gerai ištirta mielopoezė, nustatytos joje daly-vaujančios molekulės: kolonijas stimuliuojantys faktoriai (KSF), kaip antai, granulocitų kolonijas stimuliuojantis faktorius (G-KSF)makrofagų kolonijas stimuliuojantis faktorius (M-KSF), granulocitų-makrofagų kolonijas stimuliuojantis faktorius (GM-KSF), įvairia-kilmes kolonijas stimuliuojantis faktorius (multi-KSF;

[0005] [žiūr. Metcalf, Science 22_9: 16 (1985)], interleukinas 11 (IL-11) [žiūr. Paul et al, Proc. Nat.l. Acad Sci., USA, ET/: 7 521 (1990)], Laktoferinas [ žiūr. Broxmeyer et al, Blood Cells, 1_1: 429 (1989)] , prostaglandinai [ žiūr. Pelus et al, J. Immunol. 14 0: 479 (1988)], rūgš-tinis (H-subvienetas) feritinas [ žiūr. Broxmeyer et al, Blood 68: 1257 (1986)] , interferonai (a, (3 ir y) [ žiūr. Pelus et al aukščiau, ir Broxmeyer et al, J. Immunol., 131: 1300 (1983)], auglio nekrozės faktoriai (a ir P)

[0006] [ žiūr. Broxmeyer et al, J. Immunol. 136: 4487 (1986)], transformuojantis augimą faktorius - 3 [ žiūr. Ottrnan et al, J. Immunol., 140: 2661 (1988)], ir aktivinas bei inhibinas [ žiūr. Broxmeyer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86: 779 (1989)] .

[0007] Taip pat buvo rasta, kad hemoreguliacinis pentapeptidas (pEEDCK) selektyviai inhibuoja mielopoezės ląstelių proliferaciją [žiūr. Paukovits et al, Z. Naturforsch 37: 1297 (1982)] , ir buvo atskleisti kiti peptidai, atitinkantys siaurą bendrą formulę, duodantys panašų inhibic.ini, poveiki, hemopoezėje [ žiūr. EP-A-112656 ir W090/02753] . Peptido monomerų oksidacija davė dimerines molekules, sujungtas cisteino tilteliu, ir buvo rasta, kad tos dimerinės molekulės stimuliuoja mielopoezę

[0008] [ žiūr. Laerum et. al, Exp. Heinatol., 1_6: 274 (1988)] .

[0009] (pEEDCK)₂ dimeras ir kiti panašūs junginiai yra atskleisti WO-A-88/03535. Kiti dimeriniai peptidų junginiai yra atskleisti EP-A--408371, kuriame disulfidinė jungtis buvo pakeista anglimi arba anglies/sieros tilteliu, jungiančiu parinktas peptidines grandines. Til-telis tuo būdu yra santykinai atsparus hidrolizei, bet .pats yra inertinis ir negali dalyvauti receptoriaus - dimero sąveikose.

[0010] Nors mes nenorime būti surišti teorinių svarstymų, bet dabar manoma, kad tokie peptidiniai junginiai są-veikauja su stromos ląstelėmis i n vivo ir kad stromos ląstelės atsakingos už ląstelinio dalijimosi stimu-liaciją arba inhibiciją per kitus išaiškinamus faktorius. Tuo būdu manoma, kad dimerai indukuoja arba pa-greitina stimuliuojančių ląstelinių reguliuojančių fak-torių stromos gamybą, tuo tarpu kai monomeriniai peptidai gali arba inhibuoti ši procesą, arba sukelti fakto-rių, kurie užkerta kelią ar trukdo ląstelės dalijimuisi, gamybą. Tuo būdu pagal tokią galvoseną stromos ląstelės gali sustiprinti dimerų ir monomerinių peptidų atitinkamai stimuliacini arba inhibicinį poveikį.

[0011] Yra nuolatinis dimerinių peptidinių junginių, galinčių stimuliuoti ląstelės proliferaciją iki įprasto lygio in vivo, poreikis. Šiuo atžvilgiu reikėtų pastebėti, kad skirtingi stimuliavimo laipsniai gali būti labiau tinkami tam tikroms klinikinėms situacijoms negu kitoms, ir ypač yra svarbus individualių ląstelių tipų se-lektyvus stimuliavimas.

[0012] Šis išradimas pateikia peptidini, jungini,, sudarytą iš dviejų vienos grandinės hemoreguliacinių, ypač inhi-buojančių hemopoezę, peptidų, prijungtų kartu prie ne-galinių amino rūgščių Ca atomų ekvivalentiškose vietose kiekviename iš minėtų peptidų per jungti, anglis-anglis arba per terminaliai prijungtą dvivalentę jungiančią tilteliu grupę -A-, natyvios a-šoninės grandinės nėra prie minėtų Ca atomų, kur A yra anglies grandinė, kuri yra 1) a) mono- arba poli-pakeista grupe -RA, -0RA, -_SR^A, -NRR^A arba -COOR^A arba hąlogeno atomu, tokiu kaip fluoras, chloras, bromas arba jodas (kur kiekvienas RA nepriklausomai reiškia vandenilio atomą ar -alkilo, -alkanoilo arba -alkoksialkilo grupę, kuri gali būti mono- arba poli-hidroksilinta) ir/arba

[0013] i

[0014] b) į kurią įterpta viena ar daugiau dvigubų arba tri-gubų jungčių anglis-anglis ir/arba

[0015] kiekviena -Z- yra nepriklausomai -0-, -C0-,

[0016]

[0017] arba -NR^E- (kur kiekvienas RB yra nepriklausomai vande-ilio atomas arba C_i_₆ alkilo arba C₆_₁₀ arilo grupė) , arba kur vienas ar daugiau pakaitalų ar neprisotintų jungčių anglis-anglis yra grupėje -A-, -Z- gali taip pat būti -S- arba

[0018] Geriau, kai jungiančioje tilteliu grupėje -A- bendras atomų skaičius yra ne didesnis už 6.

[0019] Kur grupė RA reiškia alkilo, alkoksi arba alkanoilo grupę, kiekviena iš jų gali būti linijinė arba šakota grandinė. Tinkamos alkilo grupės apima metilą, etilą, 2-hidroksietilą, propi-lą, butilą, 1,3-dihidroksibutilą, 2-meti1-3-hidroksibutilą ir pentilą. Metoksi, etoksi, propoksi ir 2-hidroksipropoksi visos yra tinkamos alkoksi grupės grupei RA, tuo tarpu alkanoilo grupė, pvz., gali būti formilas, acetilas, propionilas.

[0020] Grupei R , kaip alkilo grupei, alkilo anglies grandinė gali būti linijinė arba šakota, ir grupės, paminėtos aukščiau grupei R'¹, čia yra tinkamos taip pat.

[0021] Tuo būdu tinkamos grupės A skeleto struktūros (kurios gali būti toliau pakeistos, kaip išdėstyta aukščiau) apima:

[0022] -CH₂-

[0023]

[0024] Bet kuris vienos grandinės peptidas, kuris parodo hemo-reguliacini, poveiki,, yra tinkamas kaip peptidas, kuris yra tiltelinis pagal ši, išradimą.

[0025] u

[0026] Alternatyviai išreikštas, šis išradimas pateikia junginius pagal šį išradrma, kuriuose minėtos heruore-auliacinės peptido grandinės apima šias formules:

[0027] n ir m nepriklausomai reiškia 0 arba 1;

[0028] p, q ir r nepriklausomai reiškia 1 arba 2;

[0029] s reiškia 3 arba 4;

[0030] R 1 ir R 2 abu yra vandenilio atomai arba kartu reiškia okso grupę;

[0031] R 3 ir R 4 abu yra vandenilio atomai arba kartu reiškia jungti, anglis- anglis;

[0032] R⁵ yra vandenilis arba acilo grupė;

[0033] kiekvienas R⁶ ir R⁷ nepriklausomai reiškia hidroksilo grupę arba amino grupę, bet tinkamesnės yra hidroksilo grupės;

[0034] R⁸ reiškia van_denili,, C2...6 alkilo grupę, C-.20 aralkilo grupę, kuri gali turėti vieną arba daugiau hidroksilo, amino arba metoksi pakaitalų, arba metaboliškai labilią S-apsauginę grupę;

[0035] R'"° reiškia hidroksilo arba amino grupę, aminorūgšties glutamino liekaną arba peptidą, turinti, N-galini, glutamino fragmentą).

[0036] Visos minėtos amino rūgšties liekanos gali būti arba D, arba L formos. Tačiau aminorūgščių L forma yra tin-kamesnė.

[0037] Kur yra N-galinė apsauginė grupė R°, tai gali būti, kaip pažymėta aukščiau, acilo grupė, turinti 1-20 anglies at omu., pvz., žemesniojo alkanoilo grupė, turinti 1-5 anglies atomų, tokia kaip acetiio grupė, arba aroilo ar aralkanoilo grupė, turinti nuo 7 iki 20 anglies atomų, tekia kaip benzoilo arba fen.iLacet.ilo grupė.

[0038] R⁵ gali taip pat būti acilo grupė, išvesta iš amino-rūgšties arba peptido grandinės. Konkrečiai, R⁵ gali būti acilo grupė, išvesta iš serino, arba iš bet kurio iš peptidų, išvestų iš tokios aminorūgšties sekos, pa-šalinant einančias iš eiles N-galines amino rūgštis:

[0039] Yra geriau, kai bendros (I) formulės peptido galinė amino grupė yra apsaugota, pvz., acilinant alkanoilo, aralkanoilo arba aroilo grupe.

[0040] Kur R 8 yra C₂_₆ alkilo grupė, tai gali bu-ti, pvz., etilo, butilo arba hek.f o grupė. Kai R yra aralkilo grupė, tai gali patogia; būti arilmetilo grupė, tokia kaip benzilas, difenilmetilas arba trifenilmetilas. Kur _R⁸ yra metaboliškai labili grupė, tai gali, pvz., būti ariltio grupė, turinti nuo 5 iki 10 anglies atomų, pvz., piridiltio arba acilo grupė, kaip apibrėžta aukščiau.

[0041] Tinkamesni šio išradimo junginiai yra pentapeptidai, t.y. n yra geriau 0.

[0042] Geriau, kai ciklinės grupės Ra liekanoje yra penkių narių, t.y. m yra geriau 0.

[0043] Nors bet kuris iš peptidų, apibrėžtų (I) formule aukš-čiau, yra žemo arba nereikšmingo hemoreguliacinio aktyvumo, nepaisant to, jie pagal ši išradimą, gali būti efektyvūs tiltelio formos, stimuliuojant ląstelių pro-liferaciją.

[0044] Dimeriniuose peptiduose, sudarytuose iš peptidinių grandinių, kaip pavaizduota (I) formulėje, jungiantis grandinės taškas yra pageidaujamas ties Rd.

[0045] Ypač tinkami peptidiniai junginiai pagal ši, išradimą yra tie (II) formulės junginiai

[0046]

[0047] kurioje grupė -A- yra dvivalentė jungianti tilteliu grupė, kaip svarstyta aukščiau.

[0048] Šis išradimas ypatingai tinkamas stimuliuoti mielopoezę pacientams, kurie kenčia nuo sumažinto mieiopoetinio aktyvumo, įskaitant kaulų čiulpų pažeidimą, agranulio-citozę ir aplastinę anemiją. Į tai įeina gydymas pa-cientų, turinčių sumažintą kaulų čiulpų funkciją dėl imunosupres j nio gydymo slopinti audinių reakciją,- t. y. kaulų čiulpų transplantavimo chirurgijoje.

[0049] Junginiai taip pat gali būti panaudoti pagreitinti kaulų čiulpų regeneraciją po citostatinės chemote-rapijos ir radiacinės terapijos neoplastinėms ir viru-sinėms ligoms.

[0050] Be to, nauji junginiai gali būti labai vertingi, kur pacientai turi rimtas infekcijas dėl imunoreakcijos trūkumo po kaulų čiulpų pažeidimo.

[0051] Kitas klinikinis taikymas bus kartu su atitinkamais monomerais arba susijusiais mielopoezės inhibitoriais, kaip atskleista EP-A-112656. arba W0-A-90/02753, indu-kuoti kintamus aukšto ir žemo aktyvumo pikus kaulų čiulpų ląstelėse, tuo būdu sustiprinant natūralų cir-kadini, hemopoezės ritmą. Taip citostatinė terapija gali būti panaudota žemo kaulų čiulpų aktyvumo periodais, tuo būdu sumažinant kaulų čiulpų pažeidimo riziką, tuo tarpu kai regeneracija bus pagreitinta iš eilės einan-čiais aktyvumo pikais.

[0052] Apskritai, kad būtų pasiektas stimuliacinis poveikis, šio išradimo peptidai gali būti paskirti pacientui ora-liai arba injekcijomis 0.001-100 mg, pvz., 1-5 mg 70 kg kūno svoriui, dienos doze. Jei paskyrimas intraveninis arba paodinis, dozė gali būti 1-10 mg ribose 70 kg kūno svoriui per dieną, pvz., apie 6 mg, iki 10 dienų. Na-zalinis, vietinis (transdermalinis) arba rektalinis paskyrimas taip pat yra, žinoma, lankstus. Iš esmės reikia pagaminti peptido koncentracijas apie 10 13M - 10 5M neląsteliniame paciento skystyje.

[0053] Pagal tolimesnius šio išradimo požymius, pateikiamos farmacinės kompozicijos, turinčios savyje kaip aktyvią komponentę vieną arba daugiau (I) formulės junginių, kaip čia apibūdinta anksčiau, arba fiziologiškai sude-rinamų jų druskų, kartu su farmaciniu nešikliu arba užpildu. Kompozicijos pagal ši, išradimą gali būti pa-teiktos, pvz., tokio pavidalo, kad tiktų oraliniam, na-zaliniam, parenteraliam arba rektaliniam paskyrimui. - -

[0054] Čia naudojamas terminas "farmacinis" apima ir veteri-narinius šio išradimo taikymus.

[0055] Junginiai pagal ši išradimą gali būti įprastų vaistų formų, tokių kaip tabletės, apvilktos tabletės, aerozoliai nosiai, tirpalai, emulsijos, milteliai, kapsulės arba ilgalaikio atpalaidavimo formos. Įprasti farmaci-niai užpildai, kaip ir įprasti gamybos būdai, gali būti panaudoti šių formų paruošimui. Tabletės gali būti pagamintos, pvz., sumaišant aktyvią -komponentę arba komponentes su žinomais užpildais, kaip, pvz., skie-dikliais, tokiais kaip kalcio karbonatas, kalcio fos-fatas arba laktozė, skaldytojais, tokiais kaip grūdų krakmolas arba algininė rūgštis, rišikliais, tokiais kaip krakmolas arba želatinas, tepalais, tokiais kaip rn agni o s t e a r a L a s ar b a t a i o mi 11, e i a. a , i r / a r b a ilgalaikio atpalaidavimo agentais, tokiais Kaip karbok-si pc 1 i meti ienas , k a rbo ks in:.51 i 1 ce 1 iu 1 i o z ė, celiuliozės acetato ft&latas arba polivinilacetatas.

[0056] Tabletės, jeigu reikia, gal j susidėti is Kelių sluoks-nių. Apvilktos tabletės gali būti pagamintos, apvelkant vidurį, gautą panašiai kaip tabletės, su agentais, paprastai naudojamais tablečių apvilkimai, pvz., po-livinilo pirolidonu arba šelaku, gumiarabiku, talko milteliai s, titano dioksidu arba cukrumi. Tam, kad būtų gautas ilgalaikis atpalaidavimas arba išvengta nesu-derinamumu, vidurys gali susidėti iš kelių sluoksnių taip pat. Tablečių apvalkalas taip pat gali susidėti iš kelių sluoksnių, kad būtų gautas ilgalaikis atpalaidavimas, ir tuo atveju gali būti panaudoti anksčiau paminėti užpildai tabletėms.

[0057] Organinės specifinės nešiklių sistemos taip pat gali būti panaudotos.

[0058] Injekcijų tirpalai gali būti, pvz., pagaminti įprastu būdu, tokiu kaip konservavimo agentų, tokių kaip p-hidroksibanzoatai, arba stabilizatorių, tekių kaip EDTA, pridėjimas. Tirpalais paskui užpildomi injekcijų buteliukai arba ampulės.

[0059] Neazaliniai aerozoliai gali būti sudaryti panašiai vandens tirpale ir supakuoti į purškimo konteinerius arba su aerozoliniu išstūmė j u,, arba su priemonėmis ran-kiniam spaudimui. Kapsulės, turinčios vieną arba kelias aktyvias komponentes, gali būti pagamintos, pvz., su-maišant aktyvias komponentes su inertiniais nešikliais, tokiais kaip laktozė arba sorbi.tolis, ir užpildant mi-šinį į želatino kapsules.

[0060] Tinkamos žvakutės gali, pvz., būti pagamintos, su-maišant aktyvią komponentę arba aktyvių komponenčių kombinacijas su įprastais nešikliais, numatytais šiam

[0061] tikslui, tokiais kaip natūralūs riebalai arba poli-5 etileno glikolis ar jo dariniai.

[0062] Tinkami dozavimo vienetai, turintys savyje šio išradimo junginius, turi 0.1-10 mg, pvz., 1-5 mg (I) formulės

[0063] 0

[0064] Taigi šis išradimas pateikia peptidinius junginius ir mišinius aprašytus aukščiau, skirtus naudoti ląstelės dalijimosi stimuliavimui. Peptidinių junginių pagal ši,

[0065] išradimą panaudojimas medikamentų, skirtų ląstelės da-5 lijimosi stimuliavimui, gamyboje yra tolesnis šio išradimo aspektas. Mielopoezės ir kaulų čiulpų regeneracija turi ypatingą reikšme.

[0066] Tačiau kitas svarbesnis naujų peptidų panaudojimas yra 0 medžiagų, skirtų imunologinių tyrimų technikos gamybo-.

[0067] je. Tada peptidas gali būti kovalentiškai prijungtas prie tinkamo didelio molekulinio nešiklio, tokio kaip albuminas, polilizinas arba poliprolinas tam, kad būtų

[0068] įvestas antikūnus gaminantiems gyvuliams (pvz., triu-5 šiams, jūros kiaulytėms arba ožkoms). In vitro imu-nizacijos metodai taip pat gali būti panaudoti. Aukšto specifiškumo antiserumai yra gaunami, naudojant gerai žinomus absorbcijos metodus, panaudojant dideli, mole-kulini, nešikli,. Įvedant radioaktyvumą (³H, ¹²⁵I, ¹⁴C, _35S) 0 i, peptido molekulę, radioimuninis tyrimas gali būti su-projektuotas ir panaudotas peptido nustatymui įvai-riuose biologiniuose skysčiuose, tokiuose kaip serumas (plazma), šlapimas ir cerebrospinalinis skystis.

[0069] 5 Šio išradimo peptidai gali būti sintezuoti bet kuriuo patogiu būdu. Tinkami metodai aminorūgšties vienetų sudarymui yra aprašyti, pvz., "Synthesis of Optically

[0070] Active a.-Amino Acids" ("Optiškai aktyvių a-Amino rūgš-čių sintezė"), Robert M. Williams (Pergamon Press, 1989). Apskritai, esančios reaktyvios šoninių grandinių grupės (amino, tiolo ir/arba karboksilo) bus apsaugotos per visos sintezės prijungimo reakcijas, bet galima palikti kai kurias šoninių grandinių grupes neap-saugotas (hidroksilo grupes, imidazolo grupes, pirmines amido grupes, amido grupes ciklinėse aminorūgštyse kaip piroGlu) per visą sintetinę procedūrą.

[0071] Tuo būdu galutinė stadija bus visiškai apsaugoto arba iš dalies apsaugoto I bendros formulės peptido darinio blokavimas, ir šie procesai sudaro tolimesni, šio iš-radimo aspektą.

[0072] Schollkopf ir kt. aprašė įvairių aminorūgščių gavimą bis-laktimo eterių metalinimu ir po to alkilinimu (žiūr., pv_?., Tetrahedron 39: 2085 (1983) ir Topics Curr. CHEM., 109: 65 (1983)). Šio metodo pritaikymas pasirodė ypač naudingas tiltelinių amino rūgščių, kurios sudaro šio išradimo pagrindą, gavimui. Konkre-čiai, bis-laktimo eteris, išvestas iš valinoglicino dipeptido, sudaro naudingą pradini, jungini, jungimo tilteliu reakcijoje, kuri gali būti reziumuota taip:

[0073] (kurioje X yra nueinanti grupė, tokia kaip halogeno atomas, pvz., bromas).

[0074] Tiltelinės (S,S)- a, a'-diaminorūgštys gali būti gautos šiuo metodu, jei D-valinas yra iš pradžių naudojamas sudaryti bis-laktimo eteri,. Lygiai taip pat ( R, R)- a, a'-diaminorūgštys gali būti sudarytos, panaudojant L-valiną.

[0075] Alternatyvi metodika, naudinga tiltelinių a,a'-diamino rūgščių, kurios sudaro šio išradimo tiltelinių dipeptidinių junginių pagrindą, gamybai yra metodo, išvystyto Vederas ir kt., pritaikymas (J. Am. Chem. Soc. 1_0_7: 7105 (1985) ir J. Am. Chem. Soc. 110: 2237

[0076] (1988)). Ši alternatyvi metodika paremta p-laktonų, išvestų iš serino, žiedo atidarymo reakcijomis. (3-lak-tonai gali būti paveikti visa eile "švelnių" nu-kleofilų, kurie sukelia laktoninės alkilo-deguonies jungties skilimą. Aza-pakeistos tiltelinės amino-rūgštys, apimančios oksa- ir tia-analogus, gali būti susintetintos pagal metodiką, kuri iliustruota tokia schema:

[0077] Tiitei iniaras dipeptidiniams _'junginiams pagal s j, išra-tli_"mą,, kur ~A— yra -CH₂-, galima nuoroda i, Belokon et ai-.,, -Xzv. Akad. Nauk. SSSR. Ser Khim, (1987), 852 i(Chernlr;a'l :Abstract,s 108: 132255v) .

[0078] Tuo ."būdu šis išradimas taip pat pateikia peptidinio junginio gavimo būdą, susidedanti, iš dalinai arba vi-siškai apsaugoto jo darinio blokavimo.

[0079] 3Cit:ū aspektu, šis išradimas pateikia peptidinio .jun-?i??o gavimo būdą, kuris apima: a) ijis—Iaktimo eterio metalinimą ir nuoseklų alki-linimą-, kad būtų sudarytas bis-laktimo dipeptidinis

[0080] e'te^is-;

[0081] i)) £>is_~laktinio eterio iš žingsnio a) hidrolizę, kad

[0082] tūtų gauta tiltelinė a, a'--riiani.no rūgštis;

[0083] C')' pasiliekančių amino rūgščių įvedimą j, pep_'tldines

[0084] ū) bet kurios apsauginės grupės deblokavimą.

[0085] Bis-laktimo dipeptidiniai eteriai ir tiltelinė rūgštis - ©vot',-diarninorūgštis, pagaminta pagal ši, metodą, sudaro tolesni, šio išradimo aspektą.

[0086] Kai tilteiiniai dipeptidai yra sudaryti,, pasiliekančios amiriorūgštys peptidinėje grandinėje gali būti įvestos įprastais metodais.

[0087] Sudarant peptidines grandines, galima pradėti arba nuo C-galo, arba nuo N-galo, nors tik nuo C-galo pra-sidedanti procedūra yra visuotinai naudojama.

[0088] Tuo budu, galima pradėti nuo tinkamai apsaugoto C- galo, pvz., lizino, darinio reakcija su tinkamai apsaugotu cisteino dariniu. Lizino darinys turės laisvą a- amino grupę, tuo tarpu kitas reagentas turės arba laisvą, arba aktyvuotą karboksilo grupę ir apsaugotą amino grupę. Po prijungimo, tarpiniai produktai gali būti išgryninti, pvz., chromatografija, ir tada selektyviai N- apsaugoti, kad galima būtų pridėti laisvą arba akty-vuotą aminorūgšties liekaną. Ši procedūra yra tęsiama, kol sudaroma reikalinga amino rūgščių seka.

[0089] Karboksilinę rūgšti aktyvuojantys pakaitalai, kurie gali, pvz., būti naudojami, apima simetrinius arba miš-rius anhidridus arba aktyvuotus esterius, tokius kaip, pvz., p- nitrofenilo esteris, 2, 4, 5- trichlorofenil- esteris, N- hidroksibenzotriazolo esteris ( OBt), N- hidroksi-sukcinimidilesteris ( OSu) arba pentafluoro- fenilesteris

[0090] Laisvų amino ir karboksilo grupių prijungimas gali, pvz., būti atliktas, panaudojant dicikloheksilkar-bodiimidą ( DCC). Kitas prijungimo agentas, kuris gali, pvz., būti naudojamas, yra N- etoksikarbonil- 2- etoksi-1, 2- dihidrochinolinas ( EEDQ).

[0091] Apskritai yra patogu atlikti prijungimo reakcijas že-mose temperatūrose, pvz., nuo - 20°C iki kambario tem-peratūros, patogiai tinkamoje tirpiklio sistemoje, pvz., tetrahidrofurane, dioksane, dimetilformamide, metileno chloride arba šių tirpilių mišinyje.

[0092] Gali būti patogiau vykdyti sintezę ant kietos fazės dervos nešiklio. Chlorometilintas polistirenas ( su-siūtas su 1 % divinilo benzenu) yra vienas naudingas nešiklio tipas; tuo atveju sintezė prasidės nuo C- galo, pvz., prijungiant N- apsaugotą liziną prie nešiklio. Eilė tinkamų kietos fazės metcdų yra aprašyta Eric Atherton, Christopher J. Logan, and Robert C. Sheppard, J. Chem. Soc. Perkin I, 533-46 (1981); James P. Tam, Foe S. Tjoeng, and R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 102, 6117-27 (1980); James P. Tam, Richard D. Dimarchi and R.B. Merrifield, Int. J. Peptide Prctein Res 16, 412-25 .. (1980); . Manfred Mutter and Dieter Bellof, Helvetica Chimica Actą, 6_7, 2009-16 (1 984).

[0093] Prijungimo reakcijos taip) pat gali būti atliktos tirpale .

[0094] Yra žinomas platus apsauginiu grupių amino rūgštims pa-sirinkimas ir pateikta pavyzdžių Schroder, E. and Lubke, K., The Peptides, Vols. 1 and 2, Academic Press, New York and London, 1965 and 1966; Pettit, G. R., Synthetic Peptides, Vols. 1-4, Van Nostrand, Reinhold, Nev; York 1970 1971, 1 975 and 1976; Houben_~Weyl, Methoden der organischen Chemie, Synthese von Peptiden, Band 15, Georg Thieme Verlag Stuttgart, NY, 1983; The Peptides, Analysis, synthesis, biology 1-7, Ed: Erhard Gross, Johannes Meienhofer, Academic Press, NY, San Fransisco, London; Solid phase peptide synthesis 2nd ed., John M. Stewart, Janis D. Young, Pierce Chemical Company.

[0095] Tuo būdu, pvz., amino apsauginės grupės, kurios gali būti panaudotos, apima apsaugines grupes, tokias kaip karbobenzoksi (Z-) , t-butoksikarbonilas (Boc-), 4-metoksi-2,3,6-trimetilbenzolo sulfonilas (Mtr_~) ir 9-fluo-renilmetoksikarbonilas (Fmoc-).

[0096] Bus suprantama, kad kai peptidas sudarytas nuo C-galo, amino apsauginė grupė bus kiekvienos naujos pridedamos liekanos a-amino grupėje ir ją reikės pašalinti selektyviai prieš kitą jungimo stadiją. Kietos fazės sistemoms viena ypač naudinga grupė tokiai laikinai amino apsaugai yra Fmoc grupė, kuri gali būti pašalinta selektyviai, paveikiant piperidinu organiniame tir-piklyje. Sintezei tirpale Boc- yra tinkamesnė apsauginė grupė, kuri gali būti įvesta ir pašalinta įprastu būdu.

[0097] Aminorūgštys arba peptidai dažnai reikalauja sililinimo prieš apsaugojimą, pvz., pridedant Fmoc, kad būtų pa-gerintas jų tirpumas organiniuose tirpikliuose. Sili-linimas ir Fmoc apsaugos reakcijos yra reziumuotos žemiau:

[0098] Karboksilo apsauginės grupės, kurios gali, pvz., būti panaudotos, apima suskaldytas esterio grupes, tokias kaip benzilas (-OBZI), p-nitrobenzilas (-ONB) arba t-butilas (-tOBu), kaip ir jungimus ant kieto nešiklio, pvz., metilo grupes, prijungtas prie polistireno.

[0099] Tiolo apsauginės grupės apima p-metoksibenzilą (Mob), tritilą (Trt) ir acetamidometilą (Acm).

[0100] Bus suprantama, kad egzistuoja daug kitų tokių grupių, kaip, pvz., detaliai aprašyta aukščiau nurodytoje li-teratūroje, ir visų tokių grupių panaudojimas čia ankščiau aprašytuose procesuose įeina i, šio išradimo s riti,.

[0101] Egzistuoja daug procedūrų amino- ir karboksil-apsau-ginių grupių pašalinimui. Tačiau jos turi būti sude-rintos su naudojama sintezės strategija. Šoninės gran-dinės apsauginės grupės turi būti atsparios sąlygoms, naudojamoms pašalinti laikinas c.-amino apsaugines grupes prieš kitą jungimo stadiją.

[0102] Amino apsauginės grupės, tokios kaip Boc, ir karboksilo apsauginės grupės, tokios kaip toBu, gali būti pa-šalintos vienu metu, paveikiant rūgštimi, pvz., trifluoracto rūgštimi. Tiolc apsauginės grupės, tokios kaip Trt, gali būti pašalintos selektyviai, panaudojant oksidavimo agentą, toki, kaip jodas.

[0103] Cisteino turintys peptidai gali būti sintezuoti metodais, aprašytais tekste, su visų apsauginių grupių pa&alinimu, įskaitant tiolo apsaugines grupes kaip paskutinę sintezės stadiją.

[0104] Toliau einantys pavyzdžiai pateikiami tik kaip iliust-racijos .

[0105] 1 PAVYZDYS

[0106] ( S, S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)-( E)-okt- 4- eno- l, 8- dikarboksirūgštis

[0107] a) 1, 4- Bis(( 2R, 5S)- 2, 5- dihidro- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 5- pirazinil)- ( E)- but~ 2- enas

[0108] į maišomą (2R) -2, 5-dihidro-3, 6-dimetoksi.izopropilpira-zino (5.53 g, 30 mmol) tirpalą THF (100 ml) , esant

[0109] -78"C, su švirkštu pridėta 1.55 M butilličio (19.62 ml, 31 mmol) tirpalo heksane, ir maišymas buvo tęsiamas 1 valandą, esant -78°C. Tada pridėta (E)-1,4-dibromo-but-2-eno (3.21 g; 15 mraol) tirpalo THF (20 ml) , ir maišymas buvo tęsiamas per naktį. Tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje, o likutis buvo ištirpintas dietilo eteryje bei ekstrahuotas vandeniu. Organinis sluoksnis išdžiovintas magnio sulfatu, eteris išgarintas ir likutis išgrynintas impulsine chromatografija (etilo acetatas/heksanas 1/4; silikagelis).

[0110] 0.67 (d, 6H), 1.04 (d, 6H) , 2.1-2.4 (m, 2H) , 2.48 (dd, 4H) , 3.67 (s, 6H) , 3.68 (s, 6H) , 3.93 (dd, 2H) , 4.03 (dd, 2H), 5.35 (dd, 2H).

[0111] 16.52, 19.07, 31.65, 37.09, 52.16, 52.23, 55.62, 60.60, 127.50

[0112] C₂₂H₃₅N₄O₄ (420)

[0113] Pask.%: C: 62.86; H: 8.57 N: 13.33

[0114] Rasta %: C: 62.65; H: 8.62 N: 12.91

[0115] b) ( S, S)- 2, 7- Diamino-( E)- okt- 4- eno- l, 8- dikarboksirūgš-ties dimetilo esteris

[0116] Į 1,4-bis((2R,5 S)-2,5-dihidroksi-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil) - (E)-but-2-eno (4.02 g, 9.9 irimo 1) ir 0.5 N HC1 (40 ml, 20 mmol) mišinį pridėta 40 ml dioksano, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Jis ekstrahuotas dietilo eteriu, i, vande-ninį tirpalą buvo pridėta vandeninio amonio, kol buvo

[0117] pasiektas pH 9. Tada vandens fazė ekstrahuota chloroformu ir organinis sluoksnis išdžiovintas magnio sulfatu. Pašalinus tirpikli,, perdistiliuota 30-40°C (0.04 mbar) , atskiriant valino metilo esteri,. Nedistiliuotas pavadinimo junginys buvo naudojamas be tolesnio gryninimo.

[0118] 1.70 (s, 4H) , 2.20-2.60 (m, 4H) , 3.51 (dd, 2H) , 3.69 (s, 6H), 5.46 (dd, 2H).

[0119] 37.99, 52.00, 54.11, 128.84, 175.32

[0120] c) ( S, S) - 2, 7- Diaminc- ( E) .- okt- 4- eno- l, 8- dikarboksirūgš-ties dihidrochloridas

[0121] (S, S)-2,7-Diamino-(E)-okt-4-eno-l,8-karboksirūgšties dimetilo esteris (1.65 g, 7.17 mmol) virinamas su grįžtamu šaldytuvu su 6 N HC1 (10 ml, 60 mmol) , dvi valandas. Tada tirpiklis išgarintas, likutis ištirpin-tas vandenyje (10 ml) , ir pridėta etanolio (100 ml) . Balti kristalai nufiltruoti ir išdžiovinti vakuume, esant 40°C.

[0122] 2.53 (dd, 4H), 3.93 (dd, 2H), 5.49 (dd, 2H).

[0123] 33.57, 53.07, 128.49, 171.49

[0124] C₈H₁₆N₂0₄C1₂ (275)

[0125] Pask. %: C: 34.91; H: 5.81; N: 10.18;

[0126] Cl: 25.78

[0127] Rasta %: C: 36.58; H: 5.80; N: 9.70;

[0128] Cl: 26.01

[0129] 405.3(11), 203.2(100), 157.1(19), 130.1(7), 93.0 (18), 73.9(13) .

[0130] d) ( S, S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)- E)-okt- 4- eno- l, 8- dikarboksirūgštis

[0131] Rūgšties hidrochloridas - (S,S)-2,7-diamino-E-okt-4-eno-1,8-dikarboksirūgšties dihidrochloridas (1.59 g, 5.8 mraol) suspenduotas heksametildisilazane (20 ml), ir buvo pridėta 1 ml trimetilsililo chlorido. Tada suspensija virinama su grįžtamu šaldytuvu per nakti,. Tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje ir likutis ištirpintas bevandeniame metileno chloride. Šis tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėtas 9-fluorenilmetilo chloroformiato (3.10 g, 12 mmol) tirpalas metileno chloride. Prieš pašalinant šaldymo vonią, tirpalas buvo maišomas 1 valandą. Kitą rytą tirpiklis išgarintas ir likutis ištirpintas THF. Tada mišinys užgesintas 1 N vandeniniu HC1, ir tirpalas buvo maišomas 2 valandas. Organinis tirpiklis pašalintas ir vandens fazė ekstrahuota chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas magnio sulfatu ir išgarintas. Likutis ištirpintas metileno chloride ir nusodintas eteriu.

[0132] 2.2-2.4 (s, 4H), 3.6 (s, 2H), 3.9-4.5 (m, 8H), 5.55 (s, 211), 7.2-8.1 (m, 16H) .

[0133] 33.98, 46.56, 53.93, 65.49, 119.66, 124.81, 126.61, 127.17, 127.98, 140.19, 143.28, 155.43, 172.59

[0134] (64 6)

[0135] Pask. %: C: 70.59; K: 5.26; N: 4.33

[0136] Rasta %: C: 70.17; H: 5.58; N: 4.08

[0137] FAB-MS signalas prie m/z

[0138] 661.3(3), 647.4(3), 191.2(17), 179,2(100), 165.1(18), 78.9 (31) .

[0139] 2 PAVYZDYS

[0140] ( S , S) - 2 , 7- Bis ( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino) - ( Z) - okt- 4- eno- l, 8- dikarbcksirūgštis

[0141] a) 1, 4- Bis ( ( 2R, 5S) - 2, 5- dihiciro- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 5- pirazinil)-( Z)- but- 2- enas

[0142] (2R)-(-)-2,5-Dihidrc-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (1.3 ml, 6.4 mmol) ištirpintas sausame THF (2 0 ml) ir atšaldytas iki -78°C. Lašinant pridėta BuLi (1.6 M heksane, 3.9 ml, 6.4 mmol), ir tirpalas maišomas 30 mi-nučių. Cis-1,4-dichlor-2-butenas (0.32 ml, 3 mmol) iš-tirpintas sausame THF (10 ml) ir sudėtas visas iš karto, esant -78°C. Reakcijos mismvs maišomas per nakti, N₂ atmosferoje. Reakcija užgesinta amonio chlo_-. ridu (3 ml), mišinys išgarintas. Likutis ekstrahuotas

[0143] dietilo eteriu, ir organinė fazė dukart išplauta vandeniu. Tada išdžiovinta MgS0₄ ir išgarinta. Gryninimas atliekamas silikageliu ( heptanas: EtOAc/ 2:l).

[0144] PŠG ( plonasluoksnė chromatografija) ( heptanas: EtOAc/ 2/ 1) : Rf= 0. 39

[0145] HPLC ( aukšto slėgio skystinė chromatografija) ( 50- 100 % MeOH, 10 minučių) : Rt = 6. 75 minučių.

[0146] 0. 66 ( d, 6H), 1. 02 ( d, 6H), 2. 55 ( m, 2H), 2. 66 ( m, 4H) , 3. 66 ( s, 6H), 3. 70 ( s, 6H), 3. 90 ( t, 2H), 4. 01 ( m, 2H),

[0147] 5. 39 ( t, 2H)

[0148] b) ( S, S)- 2, 7- Diamino-( Z)- okt- 4- eno- l, 8- dikarboksirūgš-ties dimetilesteris

[0149] 1, 4- Bis(( 2R, 5S)- 2, 5- dihidro- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil-5- pirazinil)-( Z)- but- 2- enas ( 0. 58 g, 1. 23 irano1) iš-tirpintas dioksane ( 8 ml), ir pridėta 0. 25 M HC1 ( 8 ml, 2. 5 mrriol) bei maišoma per nakti, kambario temperatūroje. PSG ( plonasluoksnė chromatografija) ( MeCN:Me0H:H20/ 4 :1:1) . Tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu, ir vandens fazė išgarinta. Likutis ištirpintas mažame kiekyje vandens, vandeninis amoniako tirpalas dedamas, kol buvo pasiektas pH 9. Vandens fazė dukart ekstrahuota dietilo eteriu, ir organinė fazė išdžiovinta MgS0₄ bei iš-garinta .

[0150] c) ( S, S)- 2, 7- Diamino-( Z)- okt- 4- e. no- l, 8- karboksirūgšties dihidrochloridas

[0151] t (S, S) -2, 7-Diamino- (Z) -okt-4-eno-l, 8 -karboksirūgšties dimetilo esterio mišinį (0.6 g, 1.3 mmol) pridėta kone. HC1 (1 ml) ir dioksano (10 inl) , ir tirpalas buvo deflegmuojamas 2 valandas, tada išgarintas.

[0152] 0.88 (2d, 6H) , 2.15 (m, 1H) , 2.57 (2d, 4H) , 3.68 (m, 1H), 3.36 (m, 2H), 5.51 (m, 2 H) .

[0153] d) ( S , S) - 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)-( Z) - okt- 4- eno- l, 8- dikarboks. irūgštis

[0154] Rūgšties hidrochloridas, gautas c) stadijoje (0.6 g, 2 mmol), suspenduotai heksametildisilazane (HMDS) (12 ml) ir trimetilsiiilo chloride. (TMS-C1) suspensija deflegmuojama per naktį, azoto atmosferoje. HMDS ir TMS-Cl perteklius nudistiliuotas vakuume. Likutis buvo ištirpintas sausame metilchloride ir atšaldytas iki 0°C. Buvo pridėtas fluorenilmetilo chloroformiato (712 mg, 2.8 mmol) tirpalas sausame metilchloride, mišinys maišomas 2 valandas, tada išgarintas. Likutis ištir-pintas THF, užgesintas 1 M HC1, ir maišomas 2 valandas. Organinis tirpiklis pašalintas, ir vandens fazė ekstrahuota chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas MgS0₄ ir išgarintas. Gryninimas atliktas silicio dioksidu (heptanas: EtOAc:AcOH/3:6:1) .

[0155] HPLC (40-70 % MeCN 0.1 % TFA, 10 minučių): Rt = 4.75 min.

[0156] 2.4-2.7 (s, 4H) , 3.7 (s, 2H), 4.0-4.5 (m, 8H), 5.5 (s, 2H), 7.1-7.8 (m, 16H) .

[0157] 3 PAVYZDYS

[0158] ( S , S) - 2 , 7- Bis ( 9- f luorenilmetiloksikarbonilami. no) - okt- 4-ino- 1, 8- dikarboksirūgštis

[0159] a) 1, 4- Bis(( 2Rf 5S)- 2, 5- dihidro- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 5- pirazinil)- but- 2- inas

[0160] (2R)-(-)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (2.76 g, 15 mmol) ištirpintas 100-e ml sauso THF ir atšaldytas iki -78°C, tada lašinant ir maišant pridėta 9.5 ml 1.6 M BuLi (15 mmol) tirpalo. Po valandos lėtai įvesta 0.92 g (7.5 mmol) 1,4-dichlor-2,3-butino. Reakcijos mišinio PSC (plonasluoksnė chromatografija) ir DC (dujinė chromatografija) po valandos parodė esminius nesureagavusio 2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpi-razino ir monoalkilinto produkto kiekius. Reakcijai buvo leista tęstis per naktį ir palaipsniui pasiekti kambario temperatūrą. THF išgarintas, esant sumažintam slėgiui, ir likutis padalintas tarp eterio ir vandens. Vandens fazė dukart ekstrahuota eteriu, išdžiovinta (MgS0₄) ir išgarinta. Reakcijos mišinio Kugelrohr'o distiliacija davė 2.3 g (77 %) gryno produkto.

[0161] 4.03 (m, 4H, žiedas H's), 3.68 (m, 12H, 4 x OCH3) , 2.63 (pl.AB q, 4H, 2 x CH2) , 2.27 (m, 2H, 2 x CH(CH₃)₂), 1.05 (d, J= 6.8 H z, 6H, 2 x CH3) , 0.64 (d, J=6.8Hz, 6H, 2 x CH3) .

[0162] 163.9, 161.0, 77.4, 60.6, (60.68), 54.6 (54.2), 52.3, 52.2, 31.6 (31.20), 25.5 (25.6), 19.3 (19.5), 16.7 (6.9) .

[0163] MS (Cl) 419 (M⁺+, 55), 403 (4), 391 (7), 279 (15), 236 (17), 183 (44), 167 (34), 149 (100), 141 (41), 113 (44) .

[0164] b) ( S, S)- 2, 7- Diamino- okt- 4- irx- l, 8- karboksirūgšties dimetilesteris

[0165] Į a) stadijos produktą pridėta 20 ml 1.0 M HC1 ir 60 ml MeOH, kad būtų gauta 0.25 M HC1 H₂0/Me0H. Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per nakti,, ir, nustačius, kad nebeliko pradinės medžiagos, visas tirpiklis pašalintas. Likutis ištirpintas vandenyje, ekstrahuotas eteriu_^ ir vandens fazė neutralizuota iki pH 8 kone. NH₄OH. Tirpalas išplautas eteriu ir ekstrahuotas kelis kartus EtOAc, kol visas produktas perėjo \ EtOAc fazę. Tada išdžiovinta, tirpiklis pašalintas ir valino metilo esteris atskirtas iš tirpalo Kulgelrohr'o distiliacija, kad duotų 0.97 g (78 %) metilo esterio pavadinimo junginio.

[0166] 4.0 (m, 2H, HC-ct) , 3.6 (d, 6H, 2 x OCH3) , 2.6 (m, 4H, 2 x CH2) .

[0167] 171, 81.6, 61.6, 56.6, 20.5

[0168] c) ( S, S)- 2, 7- Diamino- okt- 4- ino- l, 8- dikarboksirūgštis

[0169] Pakankamai MeOH, kad ištirptų b) stadijos produktas, ir

[0170] 20 ml 6 M HC1 sumaišyta ir maišoma kambario tem-peratūroje per naktį. PSC, panaudojant 1:1:1:1/nBuOH:EtOAc:MeOH:H₂0 mišinį ir ninhidrino pul-verizatorių, parodė metilo esterio buvimą. Reakcijos mišinys deflegmuoj amas 60°C temperatūroje 24 valandas, kol buvo suhidrolizuotas visas metilo esteris. Tirpalas buvo išgarintas iki sausumo, likutis išdžiovintas aukš-tu vakuumu ir panaudotas be tolesnio gryninimo.

[0171] 172.3, 81.1, 55.0, 24.3

[0172] d) ( S, S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)-okt- 4- ino- l, 8- dikarboksirūgštis 50 ml HMDS ir 1 ml TMSC1 pridėta į produktą iš aukš-čiau, ir mišinys buvo deflegmuoj amas, esant 120°C azoto atmosferoje, kol buvo gautas skaidrus tirpalas maždaug po 24 valandų. HMDS perteklius nudistiliuotas, o gautas produktas ištirpintas 50-tyje ml sauso CH₂C1₂ ir atšaldytas iki 0°C. Maišant, palaipsniui pridėti 3 g FMOC-C1, ištirpinto 20-tyje ml sauso CH₂C1₂, ir reakcija vyko per naktį. Tirpiklis pašalintas sumažintame slė-gyje, o produktas padalintas tarp prisotinto vandeninio NaHC0₃ tirpalo ir eterio, kad būtų pašalintas nesu-reagavęs FMOC-C1 ir kiti FMOC skilimo produktai. Vandeninis tirpalas buvo atšaldytas iki 0°C bei pa-rūgštintas 2 M HC1 iki pH 3, produktas ekstrahuotas 5 kartus EtOAc, tada perplautas, išdžiovintas ir iš-garintas. Chromatografija, panaudojant CHC1₃: MeOH/96:4, davė 2.35 g (66 %) pavadinimo junginio. Nors PSC paro-dė, kad jis grynas, atvirkštinės fazės HPLC parodė priemaišų buvimą, kas beveik sutapo su pagrindinio produkto piku. Produktas, ištirpintas 40 % MeCN su 0.1 % TFA išgrynintas preparatyvine HPLC, panaudojant Beckman'o ODC C-18 kolonėlę bei 0.1 % TFA H₂0, ir 0.1 % TFA MeCN buvo kaip eliuentas.

[0173] 7.9 (d, J 7.3 Hz, 4H, arorn. H), 7.7 (d, J=7 Hz, 4H, arom. H), 7.3 (d tripletas, J 7.2 Hz, 8H, arom. H), 4.26 (m, 8H, OCH₂, 2 x CH), 2.5 (m, 4H, CH₂).

[0174] 170.4, 154.5, 142.5, 139.4, 126.5, 125.9, 124.2, 119.0, 77.6, 65.5, 53.0, 46.5, 21.7.

[0175] 4 PAVYZDYS

[0176] ( S, S)- 2, 4- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)-( E)-pentano- 1, 5- dikarboksirūgštis

[0177] a) 1, 1- Di(( 2R, 5S)- 2, 5- dihidro- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 5- pirazinil)-( E)- metanas

[0178] Į maišomą (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-izopropilpi-razino (5.53 g, 30 mmol) tirpalą THF (100 ml), esant -78°C, per švirkštą pridedamas 1.55 M butilličio (19.62 ml, 31 mmol) tirpalas heksane, ir maišymas tęsiamas ■ 1 va-landą,- esant -78°C. Tada pridedamas (E)-bromochlo-rometano (15 mmol) tirpalas THF (20 ml), ir maišymas tęsiamas per naktį. Tirpiklis pašalinamas sumažintame slėgyje ir likutis ištirpinamas dietilo eteryje bei ekstrahuojamas vandeniu. Organinis sluoksnis išdžio-vinamas magnio sulfatu, eteris išgarinamas, o likutis gryninamas impulsine chromatografija (etilo acetatas/heksanas 1/4; silikagelis).

[0179] b) ( S, S)- 2, 4- Diamino-( E)- pentan- 1, 5- dikarboksirūgšties esteris

[0180] Į l,l-di((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil)-(E)-metano (4.02 g, 9.9 mmol) ir 0.5 N HC1

[0181] (40 ml, 20 mmol) mišinį pridedama 40 ml dioksano, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Po to ekstrahuojama dietilo eteriu, vandeninis amoniakas pilamas į vandeninį tirpalą, kol pasiekiamas pH 9. Tada vandeninė fazė ekstrahuojama chloroformu ir organinis sluoksnis išdžiovinamas magnio sulfatu. Pašalinus tirpiklį, valino metilo esteris pašalinamas distiliacija iš kolbos į kolbą, esant 30-40°C (0.04 mbar). Nedistiliuotas pavadinimo junginys yra naudojamas be tolesnio gryninimo.

[0182] c) ( S, S)- 2, 4- Diamino( E)- pentan- 1, 5- dikarboksirūgšties dihidrochloridas

[0183] (S,S)-2,4-Diamino-(E)-pentano-1,5-dikarboksirūgšties dimetilo esteris (1.65 g, 7.17 mmol) virinamas su grįžtamu šaldytuvu su 6 N HC1 (10 ml, 60 mmol) 2 valandas. Tada tirpiklis išgarinamas, likutis ištir-pinamas vandenyje (10 ml) ir pridedama 100 ml etanolio. Balti kristalai nufiltruojami ir išdžiovinami vakuume, esant 40°C.

[0184] d) ( S, S)- 2, 4- Bis ( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)-( E)- pentan- 1, 5- dikarboksirūgštis

[0185] Rūgšties hidrochloridas - (S,S)-2,4-Diamino-(E)-penta-no-1, 5-dikarboksirūgšties dihidrochloridas (1.59 g, 5.8 mmol) yra suspenduojamas heksametildisilazane (20 ml) ir pridedamas 1 ml trimetilsililo chlorido. Tada suspensija deflegmuojama per naktį. Tirpiklis pašalinamas sumažintame slėgyje, o likutis ištirpinamas bevandeniame metileno chloride. Šis tirpalas atšaldomas iki 0°C, ir pridedamas 9-fluorenilmetilchloroformiato (3.10 g, 12 mmol) tirpalas metileno chloride. Tirpalas maišomas

[0186] 1 valandą, prieš pašalinant šaldymo vonią. Kitą rytą tirpiklis išgarinamas ir likutis ištirpinamas THF. Tada mišinys paveikiamas 1 N vandenine HC1 ir tirpalas mai-somas 2 valandas. Organinis tirpiklis pašalinamas ir vandens fazė ekstrahuojama chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovinamas magnio sulfatu ir išgarinamas. Likutis ištirpinamas metileno chloride ir nusodinamas eteriu.

[0187] a) 1, 6- Bis[( 2R, 5S)- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 2, 5- dihidro- 5- pirazinil] heksanas

[0188] (R)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (4.12 g, 22.4 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (22.42 mmol, 14.0 ml) . Po 30 minučių, esant -78°C, 1.6-dibromoheksano (11.2 mmol, 2.73 g) tirpalas THF sulašintas, ir tirpalas įgijo kambario temperatūrą per naktį. Po hidrolizės su fosfato buferiu (pH=7) mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, ir organinis sluoksnis plautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgS0₄) tirpiklis išgarintas, o likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 9/1).

[0189] 0.67 (d, 6H) , 1.04 (d, 6H) ," 1.10-1.30 (m, 8H) , 1.60-1.85 (m, 4H), 2.15-2.35 (m, 2H), 3.66 (s, 6H), 3.67 (s, 6H), 3.91 (dd, 2H), 3.95-4.05 (m, 2H).

[0190] 16.54, 19.08, 24.44, 29.46, 31.63, 34.15, 52.27, 52.28, 55.47, 60.68, 163.41, 163.96.

[0191] FAB-MS signalai prie m/z 451.2(80), 407.2(33), 141.0(100). C₂₄H₄₂^N₄0₄ (450).

[0192] b) ( S, S)- 2, 9- Diamindekandikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0193] 1,6-Bis[ (2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil] -heksano tirpalas 40-tyje ml dioksano ir 22.8 mmol HCl (1.90 ml) 36-iuose ml vandens buvo maišoma kambario temperatūroje 6 valandas, tirpiklis pašalintas ir tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu. Vandeninis amoniako tirpalas pridedamas, kol pasiektas pH 9, ir tada tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas (MgS04) . Valino metilo esteris nudistiliuotas vakuume (0.03 torų, kambario temperatūra).

[0194] 1.20-1.70 (m, 16H), 3.36 (dd, 2H), 3.65 (s, 6H).

[0195] 25.40, 29.06, 34.77, 51.76, 54.30, 176.51.

[0196] c) ( S, S)- 2, 9- Diaminodekandikarboksirūgštis• 2HC1

[0197] Dimetilo diesteris iš b) stadijos (1.40 g, 5.38 mmol)

[0198] ištirpintas 6 N HCl (40 ml, 240 mmol) ir maišomas, N₂ atmosferoje, 60°C temperatūroje 12 valandų. Tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas EtOH ir kristalizuotas, pridedant dietilo eterio. Kristalai nufiltruoti.

[0199] 1.07-1.37 (m, 8H), 1.60-1.90 (m, 4H), 3.85 (m, 2H).

[0200] 23.81, 2 7.65, 29.61, 53.09, 172.55.

[0201] FAB-MS signalai prie m/z 439.3(15), 340.3(100), 233.2 (11) .

[0202] C₁₀H₂₂N₂Cl₂O₄ (450): Pask., %: N, 9.18.

[0203] d) ( S , S) - 2 , 9- B. is ( 9- fluorenilaretiloksikarbonilamino) - de-kandikarboksirūgštis

[0204] (S,S)-2,6-Diaminodekandikarboksirūgšties dihidrochloridas (0.50 g, 1.64 mmol) suspenduotas HMDS bei TMSC1 ir deflegmuoj amas azoto atmosferoje per naktį. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas bevandeniame CH₂C1₂. Tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėta FmocCl (1.69 g, 6.56 mmol) tirpalo CH₂C1₂. Tirpalas maišomas per naktį, tirpalas pašalintas ir likutis ištirpintas THF. Pridėjus 5 ml 0.5 M HC1, mišinys maišomas 2 valandas, ekstrahuotas chloroformu ir išdžiovintas (MgS04) . Likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heptanas/etilo acetatas/acto rūgštis 4/6/1).

[0205] Išeiga: 0.580 g (52.5 %).

[0206] 1.00-1.44 (m, 8H) , 1.44-1.80 (m, 4H) , 3.90 (s, 2H) , 4.13-4,43 (m, 4H), 7.25-8.05 (m, 16H);

[0207] 21.29, 25.63, 28.62, 31.08, 46.86, 54.17, 65.70, 120.25, 125.44, 127.20, 127.77, 140.86, 143.96, 144.04, 156.21, 174.28

[0208] FAB-MS signalai prie m/z 699.5(6), 677.4(2), 603.6(4), 409.3(4), 339.3(4); 179.1(55), 72.9(100).

[0209] a) 1, 5- Bis[( 2R, 5S)- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 2, 5- dihidro- 5- pirazinil]- pentanas

[0210] Į (R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino (3.68 g, 20 mmol) tirpalą THF (68 ml) lašinant (10 mi-nučių) pridėta 1.6 M n-BuLi tirpalo heksane (12.8 ml, 20.4 mmol), ir maišymas buvo tęsiamas, esant -78°C, 1 valandą. Tada sulašintas 1,5-dibromopentano (2.3 g, 10 mmol) tirpalas THF (13.2 ml), ir mišiniui buvo leista įsigyti kambario temperatūrą per naktį. Reakcija užgesinta, pridedant 50 ml NaHC0₃, ir mišinys padalintas tarp eterio (50 ml) ir vandens (20 ml). Po at-skyrimo, vandens sluoksnis dukart ekstrahuotas eteriu (50 ml) , ir sujungti organiniai sluoksniai išdžiovinti (MgS04) , nufiltruota, sukoncentruota ir išgryninta impulsine chromatografija (silikagelis, heksanas: etilo acetatas = 12:1).

[0211] 4.02 (kv. 2H, J. 2.1 Hz), 3.92 (t, 2H, J 3.3 Hz), 3.68 (s, 12H) , 2.28 (d sept, 2H, J 3.3, 6.8 Hz), 1.71 (m,

[0212] 4H) , 1.21 (m, 6K) , 1.05 (d, 6H, J 6.8), 0.68 (d, 6H, J 6. 8) ;

[0213] 163.89, 163.31, 60.62, 55.40, 52.22. 52.19, 34.02, 34.56, 29.31, 2.4.33, 19.01, 16.48.

[0214] C₂₃H₄₀N₄O₄ (436.59): Pask., %: C, 63.28; H, 9.23; N, 12.83.

[0215] Rasta %: C, 62.95; H, 9.01; N, 129.91.

[0216] b) ( S, S) - 2 , 8- Diami. nononandikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0217] 1r 5-Bis[ (1 S, 4R) -3, 6-4-izopropil-2,5-dihidropirazinil] - pentanas (2.8 g, 6.4 mmol) ištirpintas dioksane (51.2 nu) bei 0.5 M HC1 (51.2 ml) ir maišomas 4 valandas kambario temperatūroje. Šis mišinys plautas dietilo eteriu (100 ml) , pH padarytas 9, pridedant 25 % amoniako vandenyje, ir greitai ekstrahuotas CHC'l3 (3 x 75 ml) . Organinis sluoksnis buvo išdžiovintas MgS0₄, nufiltruotas ir sukoncentruotas. Metilo valinatas buvo pašalintas Kulgelrohr'o distiliacija (25-50°C, 0.01 torų), ir gauta 1.505 g (0.11 mmol, 95.5 %) išeiga.

[0218] 3.71 (s, 6H) , 3.43 (t, 2H, J 6.0 Hz), 1.70 (m, 2H) , 1.57-1.34 (m, 8H).

[0219] 176.40, 54.33, 51.86, 34.79, 29.03, 25.42.

[0220] Esteris iš b) stadijos buvo maišomas deflegmuojant 6 M

[0221] HC1 (7.2 ml) 2 valandas azoto atmosferoje. Lakūs junginiai išgarinti. Likutis ištirpintas vandenyje (5 ml), pridėta etanolio (20 ml), ir lėtas eterio įdėjimas davė baltas, kristalines nuosėdas. Šis mišinys laikomas 12 va-landų šaldytuve, nufiltruotas, plautas eteriu ir iš-džiovintas vakuume.

[0222] 3.74 (m, 2H), 1.80-1.63 (m, 4H), 1.38-1.15 (m, 6H).

[0223] 173.35, 53.62, 29.71, 27.65, 23.65.

[0224] C₉H₂₀Cl₁₂N₂O₄ (291.17): Pask., %: C, 37.13; H, 6.92.

[0225] d) ( S, S)- 2, 8- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)- no-nandikarboksirūgštis

[0226] (S,S)-2,8-Diaminononano dirūgštis (291 mg, 1 mmol) TMSC1 (260 mg; 2.4 mmol) ir HMDS (3.5 ml) deflegmuojama azoto atmosferoje per naktį. Atšaldžius iki kambario temperatūros, lakios dalys pašalintos (iki 50°C, 0.01 to-rų), likutis ištirpintas CH₂C1₂ (6.6 ml), atšaldytas iki 0°C, ir lašinant pridėta FmocCl (905 mg, 3.5 mmol) CH₂C1₂ (6.6 ml). Mišiniui leista įgyti kambario tem-peratūrą per naktį. Tirpiklis išgarintas, likutis iš-tirpintas THF (7.5 ml) , ir pridėta 1 M HC1 (7.5 ml) .

[0227] Šis mišinys maišomas 4 valandas kambario temperatūroje. Tada pridėta chloroformo (50 ml) ir sūrymo (40 ml) , ir fazės atskirtos. Vandens sluoksnis ekstrahuotas 2 x CHC1₃ (50 ml) . Sujungti organiniai sluoksniai išdžio-vinti (MgS04) , sukoncentruoti ir išgryninti impulsine chromatografija (silikagelis, heksanas: etilo acetatas: acto rūgštis = 50 : 50 : 5) . Produktą turinčios frak-cijos buvo sukoncentruotos ir iiofilizuotos, gauta 615 mg (0.928 mm.ol, 92.8 %) išeigą.

[0228] 7.86 (d, 4H, J 7.2 Hz), 7.70 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.41-7.27 (m, 8H), 4.24 (m, 6H) , 3.86 (kv, 2H, J" 4.5 Hz), 1.62 (m, 4H), 1.24 (m, 6H).

[0229] 174.40, 172.39, 156.30, 14 4.31, 144.22, 141.10, 129.31, 127.99, 127. 68, 127.44, 125.67, 121.77, 120.46, 65.91, 54.66, 47.12, 31.40, 28.68, 25.57, 21.53.

[0230] FAB-MS m/z 6 63 (M⁺ +1);

[0231] C₃₉H₃₈N₂0₈ (662.73). Pask., %: C, 70.68; H, 5.78; N, 4.23.

[0232] Rasta, %: C, 71.20; H, 5.62; N, 4.07.

[0233] Į mechaniškai maišomą mezo-2,3-dibromogintaro rūgšties

[0234] (27.6 g, 0.1 mol) tirpalą alkoholyje (200 ml) lėtai pridėta benzilamino (85 g, 0.8 mol) kambario tempera-tūroje. Sudėjus viską, mišinys deflegmuoj amas per nak-

[0235] ti,. Pasirodė sunkios druskų nuosėdos. Mišinys atšal-dytas iki 50°C, ir pridėta koncentruotos hidrochloro rūgšties, kol pH pasiekė 4-5. Nuosėdos nufiltruotos, kelis kartus vandeniu bei alkoholiu ir išdžiovintos.

[0236] 3.08 (2H, s), 3.30 (2H, d, J 13 Hz), 3.55 (2H, d, J 13 Hz), 7.2 (10H, m).

[0237] 50.9, 64.7, 127.1, 128.5 (br), 139.2, 179.0.

[0238] b) Mezo- 2, 3- diaminogintaro rūgštis

[0239] Mezo-2,3-bis(benzilamino)gintaro rūgštis (9.5 g, 0.029 mol)

[0240] ištirpinta ledinės acto rūgšties (50 ml) ir koncentruotos hidrochloro rūgšties (50 ml) mišinyje. Hidro atliekama kambario temperatūroje 10 % paladžiu/medžio anglies (1.0 g) kaip katalizatoriumi. Reakcija vyko, kol BMR parodė, kad daugiau nėra nesureagavusios pra-dinės medžiagos. Buvo pridėta vandens (100 ml), ir katalizatorius pašalintas filtruojant. Filtratas sukoncentruotas (rotaciniu garintuvu), o likutis ištirpintas atskiestame vandeniniame natrio hidrokside. pH sure-guliuotas iki apytikriai 5, įdedant ledinės acto rūgš-ties. Kristalai nufiltruoti ir perplauti.

[0241] 3.21 (s).

[0242] 40

[0243] 60.3, 180.0.

[0244] C₄H₈N₂0₄ Pask. %: C, 32.44; H, 5.44; N, 18.91.

[0245] Rasta %: C, 31.51; H, 5.41; N, 18.32.

[0246] c) Mezo~ 2, 3~ bis( trimetilsililamino) gintaro rūgšties di( trimetilsilil) esteris

[0247] Reakcija buvo atliekama azoto atmosferoje. Mezo-2,3-diaminogintaro rūgšties (296 mg, 2.00 mmoi) suspensija heksametildisilazane (10 ml) ir trimetilchlorsilane (1 ml) maišoma, esant 100°C per nakti,, davė skaidrų tirpalą. Sililinančių reagentų perteklius nudistiliuotas suma-žintame slėgyje. Kietas baltas likutis tiesiai panaudotas acilinimo reakcijose.

[0248] 0.03 (18H, s), 0.28 (18H, s), 3.5 (2H, m).

[0249] -0.3, 0.03, 60.9, 174.1.

[0250] d) Mezo- 2, 3- bis[( 9- fluorenilmetoksikarbonil) amino] gintaro rūgštis

[0251] Reakcija atliekama azoto atmosferoje. Sililinta diamino gintaro rūgštis, gauta c) stadijoje, ištirpinta sausame dichlormetane (10 ml) ir atšaldyta iki 0°C. Buvo pri-dėtas 9-fluorenilmetilo chloroformiato (1.14 g, 4.4 mmol) tirpalas sausame dichlormetane (4 ml) . Reakcijos miši-nys maišomas per naktį ir po to sukoncentruotas. Likutis ištirpintas THF (10 ml), ir buvo pridėta vandens (apytikriai 1 ml) . Mišinys maišomas 10 minučių ir tada sukoncentruotas. Produktas ekstrahuotas etilo acetatu, tirpalas plautas vandeniu, išdžiovintas (MgS0₄) ir nufiltruotas. Buvo pridėta heksano, ir nuo-sėdos nufiltruotos bei plautos heksanu. Galiausiai produktas gryninamas kolonėlės chromatografija (silicio dioksidas, heksanas/etilo acetatas/acto rūgštis 1:3:1).

[0252] 4.1-4.3 (6H, m), 4.5 (2H, d), 7.2-7.4 (12H, m), 7.6-7.7 (4H, 7.8-7.9 (4H, m).

[0253] 47.0, 56.1, 66.5, 120.5, 125.9, 127.5, 128.0, 141.0, 144.1, 156.4, 171.1.

[0254] FAB-MS signalai prie m/z 637.2(3), 631.1(5), 615.2 (21), 593.2, 435.1(9), 326.3(15), 179.1(100).

[0255] e) Raceminis- 2, 3- bis[( 9- fluorenilmetoksikarbonil) amino] gintaro rūgšties anhidridas

[0256] Mezo-2,3-bis[ (9-fluorenilmetoksikarbonil)-amino] gintaro rūgšties (150 mg, 0.25 mmol) suspensija acto rūgšties anhidride maišoma, esant 120°C, kol ištirpo visa me-džiaga (1-2 minutes). Anhidrido perteklius atskirtas vakuume. Žalias produktas buvo panaudotas peptido sin-tezėje be tolesnio gryninimo.

[0257] 4.25 (2H, t), 4.39 (4H, d), 4.80 (2H, d), 7.2-7.4 (8H, m), 7.66 (4H, d), 7.88 (4H, d), 8.30 (2H, d).

[0258] ⁴Z

[0259] 46.8, 55.6, 66.9, 120.6, 125.5, 127.5, 128.1, 141.1, 143.9, 156.4, 168.2.

[0260] 8 PAVYZDYS

[0261] a) 1, 4- Bis [ ( 2R, 5S) - 3, 6- dimetoksi- 2- izoprop. il- 2 , 5- dihidro- 5- pirazinil]- E- but- 2- enas

[0262] (2R)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (5.53 g, 30 mr^pol) ištirpincas bevandeniame THF ir tirpalas atšaldytas iki -7S°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (19.62 ml, 31.0 irimo 1) . Po 60 rainučių -78°C temperatūroje lašinant buvo pridėtas E-l,4-dibromobut-2-eno (3.21 g, 15 mmol) tirpalas 30-tyje ml THF, ir tirpalas per naktį igijo kambario temperatūrą. Po hid-rolizės su fosfato buferiu (pH 7) mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, organinis sluoksnis plautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgS04) , tirpiklis išgarintas ir likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 4/1).

[0263] 0.67 (d, 6H), 1.04 (d, 6H), 2.1-2.4 (m, 2H), 2.48 (dd, 4H) , 3.67 (s, 6H) , 3.68 (s, 6H) , 3.93 (dd, 2H) , 4.03 (dd, 2H), 5.35 (dd, 2H).

[0264] 16.52, 19.07, 31.61, 37.09, 52.16, 52.23, 55.62, 60.60, 128.50

[0265] C33h36N4 °4 ( 420) : Pask., % : C, 62. 86; H, b. 57.

[0266] b) ( S, S)- 2, 7- diamino- E- okt- 4- enodikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0267] 1,4-Bis[ (2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil]-E-but-2-eno (4.02 g, 9.9 mmol) tirpalas 40-tyje ml dioksano ir 20.0 mmol HC1 (1.67 ml) 38-iuose ml vandens maišomas kambario temperatūroje 4 valandas, po to tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu. Buvo pridėta vandeninio amoniako tirpalo, kol buvo pasiektas pH 9, ir tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas (MgS04) . Valino metilo esteris nudistiliuotas vakuume (0.04 torų, kambario temperatūra).

[0268] 1.70 (s, 4H), 2.2-2.6 (m, 4H), 3.51 (dd, 2H), 3.69 (s, 6H), 5.46 (dd, 2H) .

[0269] 37.99, 52.00, 54.11, 128.84, 175.32.

[0270] c) ( S , S) - 2, 7- Diamino- E- okt.- 4- enodikarboksirūgštis • 2 HC1

[0271] Dimetilo diesteris iš b) stadijos (1.65 g, 7.17 mmol)

[0272] ištirpintas 6N HC1 (10 ml, 60 mmol) ir deflegmuojamas azoto atmosferoje 2 valandas. Tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas 10-tyje ml vandens ir kristalizuotas, pridedant EtOH (100 ml) . Kristalai nufiltruoti .

[0273] 2.53 (dd, 4H), 3.97 (dd, 2H) , 5.52 (dd, 2H).

[0274] ¹³C - (D20): 8

[0275] 33.57, 53.07, 128.85, 171.49.

[0276] FAB-MS signalai prie m/z 405.3(11), 203.2(100), 157.(19), 130.1(7), 93.0(18), 73.9(13).

[0277] C₈^H₁₆N₂0₄C1₂ (275) : Pask. %: C, 34.91; H, 5.81; N, 10.18; Cl, 25.78.

[0278] Rasta %: C, 36.58; H, 5.80; N, 9.70; Cl, 26.01.

[0279] d) ( S, S) - 2, 7- Bis ( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino) - E-okt- 4- enodikarboksirūgštis

[0280] (S, S) -2, 7~Diamino-E-oct-4-enodikarboksirūgšt.ies dihidrochloridas (1.59 g, 5.8 mmol) suspenduotas HMDS (20 ml) bei TMSC1 ir def legmuo j amas per nakti,. Tirpikliai paša-linti, likutis ištirpintas bevandeniame dichlormetane. Šis tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėtas FmocCl (3.10 g, 12 mmol) tirpalas dichlormetane. Tirpalas buvo maišomas 1 valandą, esant šiai temperatūrai, ir per nakti,, esant kambario temperatūrai. Tirpiklis išga-rintas, likutis ištirpintas THF. Pridėjus 1 N vandeninio HCi, tirpalas maišomas dvi valandas, ekstrahuotas chloroformu ir išdžiovintas (MgS04) . Likutis ištir-pintas dichlormetane ir kristalizuotas, pridėjus di-etileterio.

[0281] 2.2-2.4 (s, 4H), 3.6 (s, 2H), 3.9-4.5 (m, 8H), 5.55 (s, 2H), 7.2-8.1 (m, 16H).

[0282] 33.98, 46.56, 53.93, 65.49, 119.66, 124.81, 126.61, 127.17, 127.98, 140.19, 143.28, 155.43, 172.59

[0283] C₃₈N₃₄N₂0₈ (646) : Pask. %: C, 70.59; N, 5.26_/ N, 4.33.

[0284] Rasta %: C, 70.17; Nr 5.58; N, 4.08.

[0285] FAB-MS signalas prie m/z 661.3(3), 647.4(3), 191.2(17), 179.2(100), 165.1(18), 78.9(31).

[0286] 9 PAVYZDYS

[0287] a) 1, 4- Bis[( 2R, 5S)- 3, 6- diraetoksi- 2- izopropil- 2, 5- dihidro- 5- pirazinil]- Z- but- 2- enas

[0288] (2R)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (7.3 g, 39.2 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (24.5 ml, 39.2 mmol). Po 15 minučių, esant -78°C temperatūrai, pridėta 16.9 ml 1,3-dimetil-2-imidazolindikarboksi rūgšties (156 mmol), o po 5 mi-nučių lašinant pridėtas Z-l,4-dichlorobut-2-eno (2.45 g, 19.6 mmol) tirpalas 10-tyje ml THF, ir tirpalas mai-šomas 6 valandas bei laikomas -20°C, per naktį. Po hidrolizės su fosfato buferiu (pH=7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, o organinis sluoksnis plautas vandeniu bei sūrymu. Po išdžiovinimo (MgS04) , tirpiklis išgarintas, o likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 9/1) .

[0289] U

[0290] 0.67 (d, 6H), 1.03 (d, 6H), 2.25 (m, 2H) , 2.55 ( m, 4H), 3.66 (s, 6H) , 3.68 (s, 6H) , 3.91 (dd, 2H) , 4.07 (m, 2H), 5.38 (dd, 2H).

[0291] 16.50, 19.01, 31.57, 32.01, 52.22, 52.31, 55.46, 60.67, 127.30, 163.19, 163.66.

[0292] b) ( S, S) - 2, 7- Dianinc- Z- okt- 4- endikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0293] 1,4-bis[ (1S,4R)-3,6-dimetoksi-4-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinj.l] -Z-but-2_-eno (0.23 g, 0.55 mmol) tirpalas 30-tyje ml dioksano ir 2.2 mrriol HC1 (0.183 ml) 10-tyje rnl vandens maičcma kambario tempara t ūro j 9 12 valandų. Tirpalas ekstrahuotas dietileteriu. Buvo pridėta vandeninio amoniako tirpalo, kol pasiektas pH 9, ir tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas (MgS04) . Valino metilo esteris nudistiliuotas (0.02 torų, kambario temperatūra).

[0294] 1.54 (s, 4H) , 2.3-2.6 (m, 4H) , 3.52 (dd, 2H), 3.71 (s, 6H), 5.54 (m, 2H).

[0295] 32.55, 52.02, 54.17, 127.94, 175.67.

[0296] Į dimetilo diesterio iš b) stadijos (0.108 g, 0.47 mmol)

[0297] tirpalą 0.7 ml metanolio pridėtas 2N LiOH tirpalas vandenyje (1.41 mmol, 0.71 ml) . Mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį, tada parūgštintas, lašinant pridėjus 1 N HC1. Kristalai nufiltruoti.

[0298] 2.58 (m, 4H), 3.99 (m, 2H), 5.51 (m, 2H).

[0299] 27.59, 52.20, 126.84, 171.10.

[0300] d) ( S, S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)- Z-okt- 4- endikarboksirūgštis

[0301] (S,S)-2,7-Diamino-Z-okt-4-endikarboksirūgštis (0.050 g, .0.25 mmol) ir Na₂C0₃ (0.21 g, 20.0 mmol) ištirpinta 3-juose ml vandens ir 2-juose ml dioksano. Tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėtas FmocCl (0.26 g, 1.0 mmol) tirpalas 1-ame ml dioksano. Šis mišinys maišomas 0°C 3 valandas, ir įgijo kambario temperatūrą per naktį. Po ekstrahavimo dietilo eteriu, jis parūgštintas, pridėjus hidrochloro rūgšties. Tirpalas ekstrahuotas chloroformu, o aminorūgštis kristalizuota iš chlorofor-mo/heksano. Junginys toliau gryninamas impulsine chromatografija (chloroformas/acto rūgštis 9/1).

[0302] 2.12-2.64 (m, 4H) , 3.88 (s, 2H) , 4.04-4.37 (m, 6H) , 5.42 (s, 2H), 7.02 (s, 2H), 7.20-8.00 (m, 16H) .

[0303] 29.77, 46.88, 55.53, 65.66, 120.23, 125.43, 127.23, 127.74, 129.08, 140.84, 144.11, 155.59, 174.10.

[0304] FAB-MS signalai prie m/z 676.2(2), 587.5 (5), 447.4 (10), 419.3 (45), 391.3(100), 363.3(38), 261.2(45), 233.2(29).

[0305] a) 1, 4- Bis- ( ( 2R, 5S) - 3 , 6- d:imetoksi- 2- izopropil- 2 , 5- dihidro- 5- pirazinil) but- 2- inas

[0306] Į (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino (4.605 g, 25 mmol) ir 1,3-dimetil-2-imidazolidinono (11.4 g, 102 mmol) tirpalą THF (48 ml) lašinant pridėta 1. 6 M n-BuLi (16 ml, 25.5 mmol). Po 1 valandos lašinant pridėtas 1,4-dichlor-2-butino (1.54 g, 12.5 mmol) tirpalas THF. Mišiniui leista i,gyti kambario temperatūrą per naktį, ir jis užgesintas 1 M fosfato buferiu (pH 7). Mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu (150 ml) bei vandeniu (40 ml) , ir sluoksniai atskirti. Vandens sluoksnis dukart ekstrahuotas eteriu (2 x 150 ml), ir sujungti organiniai sluoksniai išdžiovinti (MgS04) , nufiltruoti, sukoncentruoti ir išgryninti impulsine chromatografija (silikagelis, heksanai: eteris = 7:1).

[0307] 4. 05- 3. 99 ( m, 4H) , 3. 68 ( s, 6H) , 3. 67 ( s, 6H) , 2. 70

[0308] <dd, 2H, J - 14. 1, 3. 0 Hz), 2. 57 ( dd, 2H, J - 14. 1, 3. 0 Hz), 2. 26 ( d sept, 2H, J 6. 9, 3. 0 Hz), 1. 05 ( d, 6H, J 6. 9 Hz), 0. 64 ( d, 6H, J 6. 9 Hz).

[0309] 164. 56, 161. 53, 77. 52, 60. 51, 54. 46, 52. 34, 52. 22, 31. 43, 25. 26, 19. 07, 16. 40.

[0310] C₂₂h₃₄N₄°₄ ( 418. 53) : Pask. % : C, 63. 14; H, 8. 19; N, 13. 39.

[0311] Rasta % : C, 63. 27; H, 8. 12; N, 13. 54.

[0312] b) ( S, S)- 2, 7- Diamino- okt- 4- indikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0313] 1, 4- Bis-(( 2R, 5S)- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 2, 5- dihidro-5- pirazinil) but- 2- inas ( 920 mg, 2. 2 mmol) ištirpintas dioksane ( 18 ml) bei 0. 5 M HC1 ( 18 ml) ir maišomas kambario temperatūroje 12 valandų. Šis mišinys plautas dietilo eteriu ( 30 ml), pridėjus 25 % amoniako vandenyje, vandens sluoksnio pH padarytas 9, ir greitai ekstrahuotas CHC1₃ ( 3 x 75 ml) . Organinis sluoksnis išdžiovintas MgS0₄, nufiltruotas ir sukoncentruotas. Metilo valinatas pašalintas Kugelrohr' o distiliacija ( 25- 50°C, 0. 01 torų).

[0314] 3. 74 ( s, 6H) , 3. 59 ( t, 2H, J 5. 4 Hz), 2. 60 ( d, 4H, J

[0315] u u

[0316] 174.46, 78.31, 53.31, 52.22, 25.15.

[0317] c) ( S, S)- 2, 7- Diamino- Z- okt- 4- indikarboksiriigštis • 2 HC1

[0318] Dimetilo diesterio iš b) stadijos (450 mg, 1.97 mmol)

[0319] tirpalas šildom-as su 6 M HC1 (7.2 ml) iki 50-60°C 12 va-landų, azoto atmosferoje. Lakūs junginiai išgarinti (rotacinis garintuvas, vandens vonia 40°C). Likutis ištirpintas vandenyje (1 ml, drumstas), pridėta etanolio (20 ml) , ir lėtas eterio pridėjimas davė baltas kristalines nuosėdas. Šis mišinys laikomas 12 valandų šaldytuve, nufiltruotas, plautas eteriu ir išdžiovintas vakuume.

[0320] 4.18 (t, 2H, J 4.8 Hz), 2.85 (m, AA'X, 4H) ;

[0321] 172.62, 79.88, 53.75, 22.60.

[0322] d) ( S, S) - 2, 7- Bis ( 9- fluorenilmetiloksikarbonilami. no) - okt- 4- indikarboksirūgštis

[0323] (S,S)-2,7-Diamino-Z-okt-4-indikarboksirūgšties • 2 HC1 (400 mg, 1.46 mmol) tirpalas dioksane ir 1 M Na₂C0₃ - tirpalas (10.22 ml-, 10.22 mmol) atšaldyti iki 0°C, ir pridėta FmocCl (1.14 g, 4.39 mmol) tirpalo 4-iuose ml dioksano. Šis mišinys maišomas 0°C temperatūroje 1 va-landą, ir jam leista įgyti kambario temperatūrą per

[0324] naktį. Po ekstrahavimo dietilo eteriu, (2 x 50 ml) vandens sluoksnis parūgštintas, pridėjus atskiestos HC1. Tirpalas ekstrahuotas chloroformu (3 x 50 ml) , išdžio-vintas (MgS0₄) ir sukoncentruotas. Likutis išgrynintas impulsine chromatografija (silikagelis, heksanas: etilo acetatas: acto rūgštis = 10:10:1).

[0325] 7.87 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.73 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.41 (t, 4H, J 7.5 Hz), 7.33 (d, 4H, J 7.5 Hz), 4.26 (m, 8H), 2.52 (m, 4H).

[0326] 170.43, 154.62, 152.58, 142.32. 139.47, 126.22, 125.94, 124.35, 119.12, 77.68, 65.45, 53.08, 46.57, 21.77.

[0327] ^₃₈^₃₂^₂0₈ (644.67) : Pask. %: C, 70.80; H, 5.00; N, 4.35.

[0328] Rasta %: C, 69.20; H, 5.34; N, 4.13.

[0329] 11 PAVYZDYS

[0330] ( 2S, 4R, 5R, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilidenoktandikarboksirūgštis

[0331] a) ( 2R, 3R,)- 1, 4- Bis( 2R, 5S)- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil-2, 5- dihidro- 5- pirazinil)- 2, 3- dihidroksi- 2, 3- 0, 0-izopropilidenbutanas

[0332] (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (7.36 g, 40 mmol) ištirpintas vandeniniame THF, ir tir-

[0333] palas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (40.0 mmol, 25 ml). Po 20 minučių, esant -78°C, (2R,3R)-1,4-dibrom-2,3-dihidroksi-2,3-O-izopropilideno-butano (3.78 g, 13.1 mmci) tirpalas 10-tyje ml THF pridėtas lašinant, ir tirpalas laikomas 4°C tempera-tūroje 36 valandas. Po hidrolizės fosfato buferiu (pH 7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, organinis sluoksnis išplautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgS0₄), tirpiklis išgarintas, ir likutis išgrynintas pakartotinu kristalizavimu iš acetonitrilo.

[0334] 0.68 (d, 6H), 1.03 (d, 6H), 1.34 (s, 6H), 1.95-2.15 (m, 4H) , 2\24 (m, 2H) , 3.65 (s, 6H) , 3.67 (s, 6H) , 3.94 (m, 211), 4.04 (m, 2H) , 4.11 (m, 2' 1).

[0335] 16.91, 19.05, 27.39, 31.73, 38.32, 52.27, 52.36, 52.70, 60.60, 77.89, 108.19, 163.66, 163.70.

[0336] C25H42N40 (494): Pask. %: C, 60.71; H, 8.56; N, 11.33.

[0337] Rasta %: C, 60.76; H, 8.32; N, 11.36.

[0338] b) ( 2S, 4R, 5R, 7S)- 2, 7- diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilidenoktandikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0339] (2R,3R,)-1,4-Bis((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,0-izopropil-idenobutanas (1.22 g, 2.47 mmol) ištirpintas 10-tyje ml dioksano ir 20-tyje ml MeOH. Buvo pridėta 9.88 mmol HC1

[0340] tirpalo vandenyje, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje per nakti,. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas vandenyje ir ekstrahuotas dietilo esteriu. Į vandenini, sluoksnį pridėta amoniako, kol pasiektas pH 9, ir šis sluoksnis ekstrahuotas chloroformu. Po išdžio-vinimo (MgS04) , tirpiklis pašalintas ir valino metilo esteris nudistiliuotas (30-40°C, 0.04 torų).

[0341] 1.34 (s, 6H) , 1.64 (pl s, 4H), 1.72-1.84 (m, 2H), 1.99-2.08 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.71 (s, 6H), 3.80 (m, 2H).

[0342] 27.17, 37.54, 52.04, 52.74, 78.78, 108.99, 175.51.

[0343] _C) ( 2S, 4R, 5R, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilidenoktandikarboksirūgštis

[0344] Dimetilo diesteris iš b) stadijos (0.62 g, 2.04 mmol) ištirpintas 2.5 ml dioksano ir pridėta 2.1 ml 2N LiOH tirpalo vandenyje (4.1 mmol), ir tirpalas maišomas argono atmosferoje per nakti,. PSC parodė kiekybini pavadinimo junginio susidarymą. Nevalytas reakcijos tirpalas buvo panaudotas kitoje stadijoje.

[0345] d) ( 2S, 4R, 5R, 7S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino)- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izopropilidenoktandikar-boksirūgštis

[0346] Nevalytas (2S,4R,5R,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgšties (2.04 mmol) tirpalas atšaldytas iki 0°C ir pridėta 10 ml dioksano bei 1N NaOH (10 mmol) tirpalo. Tada pridėta 2.07 g FmocCl (8.0 mmol) mažomis porcijomis, ir mišinys maišomas, esant 0°C, 5 valandas kambario temperatūroje per naktį. Mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu ir parūgštintas, pridedant KHS0₄.

[0347] Iš ekstrahavus CHC1₃, organinis sluoksnis išdžiovintas (MgS0₄), tirpiklis pašalintas. Nesureagavusio FmocCl perteklius atskirtas filtracija ant silikagelio ace-tonu/MeOH, ir likutis buvo išgrynintas, nusodinant iš CHCl₃/EtOEt.

[0348] 1.20 (s, 6H) , 1.73 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 4.14-4.24 (m, 6H) , 7.23-7.82 m, 16H).

[0349] 27.78, 36.21, 47.27, 53.75, 66.19, 78.82, 107.89, 12 0.67, 125.81, 127.76, 128.32, 141.24, 144.39, 156.12, 175.96.

[0350] FAB-MS signalas prie m/z 563.2(2), 179.1 (100)

[0351] C₄₁H₄₀N₂O₁₀ (720): Pask.: N, 3.89

[0352] 12 PAVYZDYS

[0353] ( 2S, 4S, 5S, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0-izopropilidenoktandikarboksirūgštis

[0354] a) ( 2S, 3S)- 1, 4- Bis(( 2R, 5S)- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil 2, 5- dihidro- 5- pirazinil) - 2 , 3- dihidroksi- 2 , 3- 0, 0-- izopr

[0355] pilidenbutanas

[0356] (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (9.59 g, 52.1 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėta BuLi tirpalo heksane (52 mmol, 32.5 ml) . Po 60 minučių, esant -78°C, lašinant pridėta (2S, 3S)-1, 4-dibrom-2,3-dihidroksi-2,3-0,O-izopropilideno-butano (6.0 g, 20.83 mmol) tirpalo 10-tyje ml THF, ir tirpalas įgijo kambario temperatūrą per naktį, bei buvo maišomas dar 24 valandas. Po hidrolizės fosfato buferiu (pH 7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, o organinis sluoksnis plautas vandeniu bei sūrymu. Po išdžiovinimo (MgS04) , tirpiklis išgarintas, o likutis išgrynintas pakartotinu kristalizavimu iš MeCN.

[0357] 0.70 (d, 6_H), 1.03 (d, 6H), 1.44 (s, 6H), 2.15-2.30 (m, 4H), 3.66 (s, 6H), 3.69 (s, 6H), 3.92 (m, 2H), 4.04 (m, 2H), 4.09-4.20 (m, 4H) .

[0358] 16.78, 19.11, 27.67, 31.88, 38.38, 52.37, 52.44, 52.83, 60.84, 77.65, 108.57, 163.15, 163.88

[0359] FAB-MS signalas prie m/z 495.4(53), 253.2(40), 197.2(58), 141.1(100)

[0360] C₂₅H₄₂N₄0 (494) : Pask. %: C, 60.71; H, 8.56; N, 11.33.

[0361] Rasta %: C, 60.89; H, 8.42; N, 11.45.

[0362] b) ( 2R, 4S, 5S, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilidenoktandikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0363] (2S,3S)-l,4-Bis((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0, 0-izopropilidenbutanas (2.5 g, 5.06 mmol) ištirpintas 40-tyje ml dioksano. Buvo pridėta 20.0 mmol HC1 tirpalo 40-tyje ml vandens, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje per naktį. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas vandenyje ir ekstrahuotas dietilo eteriu. Į vandenini, sluoksnį pridėta amoniako, kol buvo pasiektas pH 9, ir šis sluoksnis ekstrahuotas chloroformu. Po išdžiovinimo (MgS04) , tirpiklis atskirtas ir valino metilo esteris nudistiliuotas (30-40°C, 0.04 torų).

[0364] Išeiga: 1.507 g (98.0 %).

[0365] 1.32 (s,6H), 1.53 (br s,4H) 1.60-1.68 (m,2H), 1.85-1.94 (m,2H), 3.63 (m,2H), 3.67 (s,6H), 3.80 (m,2H).

[0366] 27.25, 37.20, 51.96, 52.74, 77.58, 108.80, 176.10.

[0367] c) ( 2S, 4S, 5S, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilideno- oktandikarboksirūgštis

[0368] Dimetilo diesteris iš b) stadijų (1.51 g, 4.96 mmol) ištirpintas 5-iuose ml dioksano, buvo pridėta 4.95 ml 2N LiOH tirpalo vandenyje (9.91 mmol), ir tirpalas maišomas argono atmosferoje per naktį. PSC parodė kiekybinį (2S,4S,5S,7S)-2, 7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,O-izopropilidenoktandikarboksirūgšties susidarymą. Nevalytas tirpalas buvo panaudotas kitoje stadijoje.

[0369] d) ( 2S, 4S, 5S, 7S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, O- izopropilidenoktandikar-boksirūgštis

[0370] 5 (2S,4S,5S,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izo-propilidenoktandioinės rūgšties nevalytas tirpalas (4.96 mmol) atšaldytas iki 0°C ir pridėta 16 ml 1 N NaOH tirpalo (16 mmol). Tada mažomis porcijomis pridėta

[0371] 3.89 g FmocCl (15.0 mmol) tirpalo 16-yje ml dioksano, 0 ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 90 minučių.

[0372] Tirpalas parūgštinamas, pridedant KHS0₄. Po ekstrahavimo CHC1₃, organinis sluoksnis išdžiovintas (MgS0₄), tirpiklis pašalintas. Likučio mėginys išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas/acto 5 rūgštis 5/5/1) .

[0373] 0

[0374] 1.23 (s,6H), 1.7-2.0 (m,4H), 3.62 (m,2H), 4.02 (m,2H) , 4.1-4.35 (m,6H), 7.2-7.9 (m,16H).

[0375] 5

[0376] 27.94, 34.59, 47.39, 52.29, 66.45, 77.49, 109.13, 120.90, 125.91, 127.97, 128.59, 141.44, 144.44, 157.02, 174.75.

[0377] 0 FAB-MS signalas prie m/z 743.3(28), 563.2(58),

[0378] 502.2 (72) .

[0379] ^₄₁^₄₀^₂^₁₀ (720) :

[0380] 30

[0381] 13 PAVYZDYS

[0382] ( 2S, 4R, 5S, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- izopropil-idenoktandikarboksirūgštis

[0383] a) ( 2R, 3S)- 1, 4- Bis[( 2R, 5S)- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil-2, 5- dihidro- 5~ pirazinil]- 2, 3- dihidroksi- 2, 3- 0, 0- izopro-pilidenobutanas

[0384] (2R)-2,5-dihidro-3,5-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (6.08 g, 33.0 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78^cC. Buvo pridėta BuLi tirpalo heksane (33.0 mmol, 20.6 ml) . Po 45 minučių, esant -78°C, lašinant pridėta (2R,3S)-1,4-dibromo-2,3-dihidroksi-2,3-0-izopropilidenobutano (4.52 g 15.7 mmol) tirpalo 10-tyje ml THF. Per n akt i, tirpalas įgavo kambario temperatūrą bei buvo maišomas dar 24 valandas. Po hidro_lizes fosfato buferiu (pH 7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, o organinis sluoksnis plautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgS04) , tirpiklis išgarintas ir likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 9/1).

[0385] 0.68 (m,6H) , 1.03 (m,6H), 1.32 (s,3H), 1.45 (s,3H), 1.30-1.55 (m, 1H), 1.85-2.30 (m,5H), 3.62 (s,3H), 3.66 (s,3H), 3.68 (s,6H), 3.92 (m,2H), 4.06-4.26 (m,3H), 4.45 (m,1H).

[0386] 16.62, 16.77, 19.04, 19.08, 26.20, 28.49, 31.71, 31.91, 33.69, 35.07, 52.21, 52.27, 52.32, 52.35, 52.40, 52.98, 60.58, 60.80, 74.31, 74.66, 107.16, 163.03, 163.40, 163.91, 164.30.

[0387] b) ( 2S, 4R, 5S, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilidenoktanodikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0388] (2R,3S)-1, 4-Bis( (2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropii-2, 5-dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,0-izopropilidenbutanas (0.77 g, 1.55 mmol) ištirpintas 12-oje ml dioksano. Buvo pridėta 6.0 mmol HC1 tirpalo 12-oje ml vandens, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 valandas. Buvo pridėta amoniako, kol pasiektas pH 9, ir tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Po išdžiovinimo (MgS0₄), tirpiklis pašalintas ir valino metilo esteris buvo nudistiliuotas (30-40°C, 0.05 torų).

[0389] 1.30 (s,3H),1.41 (s,3H), 1.40-1.48 (m,1H), 1.72 (s,4H), 1.75-2.00 (m,3H), 3.60-3.67 (m,2H), 3.70 (s,6H), 4.20-.4.40 (m,2H).

[0390] 25.81, 28.26, 34.69, 34.89, 51.55, 52.00, 52.02, 52.66, 74.26, 75.20, 108.23, 175.43, 176.51.

[0391] c) ( 2S, 4R, 5S, 7S)- 2, 7- Diamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, 0- izo-propilidenoktandikarboksirūgštis

[0392] Dimetilo diesteris iš b) stadijos (0.36 g, 1.19 mmol) ištirpintas 5-iuose ml dioksano, pridėta 1.19 ml 2 N LiOH tirpalo vandenyje (2.38 mmol), ir tirpalas mai-šomas argono atmosferoje per naktį. PSC kontrolė parodė kiekybinį (2S, 4R, 5S, 7S) -2, 7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,O-izopropilidenoktandioinės rūgšties susidarymą. Ža-lias reakcijos tirpalas panaudotas kitoje stadijoje.

[0393] d) ( 2S, 4R, 5S, 7S)- 2, 7- Bis( 9- fluorenilmetiloksikarbonilamino- 4, 5- dihidroksi- 4, 5- 0, O- izopropilidenoktandikar-boksirūgštis

[0394] Nevalytas (2 S,4R,5S,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,O-izopropilidenoktandikarboksirūgšties tirpalas (1.19 mmol) atšaldytas iki 0°C ir pridėta 4.0 ml 1 N NaHC0₃ tirpalo (4.0 mmol). Tada mažomis porcijomis pridėta 1.03 g FmocCl (4.0 mmol) tirpalo 4-iuose ml dioksano ir mi-šinys maišomas kambario temperatūroje 60 minučių. Tirpalas parūgštintas, pridedant KHS0₄. Po ekstrahavimo CHC1₃, organinis sluoksnis išdžiovintas (MgS0₄) ir tirpiklis pašalintas. Likutis išgrynintas impulsine chromatografija, (heksanas/etilo acetatas/acto rūgštis 5/5/1).

[0395] Išeiga: 0.566 (66 %) .

[0396] 1.16 (s,3H), 1.30 (s,3H), 1.50-2.05 (m,4H), 3.80-4.40 (m,8H), 7.15-8.0 (ra,16H).

[0397] 26.63, 29.05, 31.50, 31.94, 47.43, 51.52, 52.19, 66.50, 74.10, 75.10, 108.36, 120.88, 125.93, 127.98, 128.60, 141.48, 144.39, 144.76, 156..82, 157.12, 174.11, 175.11.

[0398] 14 PAVYZDYS

[0399] a) Bis[( 2R, 5S)- 2, 5- dihidro- 3, 6- dimetoksi- 2- izopropil- 5-pirazinil] metilo eteris

[0400] Butillitis heksane (1.6 M, 6.25 ml, 10 mmol) pridėtas i, (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino (1.84 g, 10.0 mmol) tirpalą sausame THF (8 ml), esant -78°C. Mišinys maišomas 15 minučių. Buvo pridėta bis (chlormetil) eterio (0.67 g, 5.0 mmol) tirpalo sausame THF (2 ml) . Reakcijos mišiniui leista Įgyti kambario temperatūrą per naktį. Tirpiklis išgarintas, o likutis užpiltas dietilo eteriu. Eterio tirpalas plautas vandeniu, išdžiovintas (MgS0₄) ir išgarintas. Produktas išgrynintas chromatografija (silikagelis, heksanas/etilo acetatas 2:1).

[0401] 0.63 (6H, d), 1.05 (6H, d), 2.25 (2H, m), 3.58 (2H, dd) , 3.63 (6H, s), 3.64 (6H, s), 3.76 (2H, dd) , 3.83 (2H, t), 3.98 (6H, m).

[0402] 16.4, 19.1, 30.1, 52.1, 52.2, 56.9, 60.3, 72.5, 161.0, 165.0.

[0403] b) ( S, S)- 2, 6- Diamino- 4- oksaheptandikarboksirūgšties dimetilo diesteris

[0404] Bis[ (2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil] metilo eteris (0.65 g, 1.49 mmol) ištirpintas metanolyje (5 ml), ir pridėta 0.25 M hidrochloro rūgšties (23.8 ml, 5.96 mmol). Mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Vandens/metanolio tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu. Tada pH su-reguliuotas iki pH 10, pridedant amoniako, ir D-valino metilo esteris ekstrahuotas eteriu. Didžioji vandens dalis išgarinta. Likutis buvo naudojamas kitoje stadijoje be tolesnio gryninimo.

[0405] 3.72 (6H, s), 3.85 (4H, m), 4.23 (2H, t).

[0406] 52.8, 53.2, 68.9, 168.4.

[0407] c) ( S, 3) - 2, 6- Diaraino- 4- oksaheptandikarboksirūgštis • 2HC1

[0408] Dimetilo esteris, aprašytas aukščiau, deflegmuojamas 6M

[0409] hidrochloro rūgštyje (5 ml) 3 valandas. Tirpalas išga-rintas ir išdžiovintas užsaldant.

[0410] 3.87 (2H, dd, J 10.8 Hz, J 3.2 Hz), 3.95 (2H, dd, J 10.8 Hz J 4.6 Hz), 4.13 (2H, dd J 3.2 ir 4.6 Hz).

[0411] 53.4, 68.40, 170.3.

[0412] d) ( S, S)- 2, 6- Bis[( 9- fluorenilmetoksikarbonil) amino]- 4-oksaheptandikarboks irūgšti s

[0413] Reakcija buvo atliekama azoto atmosferoje. (S,S)-2,6-diamino-4-oksaheptandioinės rūgšties dihidrochlorido (200 fxg, 0.75 mmol) suspensija heksametildisilazane (10 ml) ir chlorotrimetilsilane (1 ml) šildoma, esant 120°C, tris valandas ir gautas skaidrus tirpalas. Sili-linančių reagentų perteklius atskirtas vakuume, o likutis ištirpintas sausame dichlormetane (5 ml) . Tirpalas atšaldytas iki 0°C ir pridėta 9-fluorenil-chloroformiato (425 mg, 1.65 mmol) tirpalo sausame dichlormetane (2 ml). Mišinys maišomas 2 valandas ir tada išgarintas. Likutis užpiltas THF (5 ml), ir pridėta 1 ml 0.1 M hidrochloro rūgšties. Mišinys maišomas 15 minučių ir tada išgarintas. Likutis užpiltas etilo acetatu. Organinė fazė plauta vandeniu, išdžiovinta (MgS0₄) ir išgarinta. Produktas išgrynintas kolonėlės chromatografija (silicio dioksidas, chloroformas/ metanolis/ acto rūgštis 85:10:5).

[0414] 3.7 (4H, m), 4.1 (2H, m), 4.25 (6H, m), 7.2-7.4 (10H, m) , 7.7 (4H, d), 7.8 (4H, d) .

[0415] 15 PAVYZDYS

[0416] a) ( S, S)- 2, 7- Bis( tret- butiloksikarbonilamino)- 4- azaok-tandikarboksirūgštis

[0417] (S)-4-Amino-2-tret-butiloksikarbonilamino sviesto rūgš-ties (1.03 g, 4.70 mmol) tirpalas acetonitrile (50 ml)

[0418] pridėtas i, (S)-boc-serino-p-laktono (0.8 g, 4.27 mmol) tirpalą acetonitrile (50 ml) ir degazuotame H_z0. Reakcijos terpės pH palaikomas apie 5,5 lašinant 1 M NaHC0₃ ir maišant. Mišinys buvo maišomas 5 dienas kambario temperatūroje. pH buvo reguliuojamas, pridedant NaHC0₃, ir reakcija valdoma PSC. Tirpikliai nudistiliuoti, likutis sutrintas i miltelius su chloroformu (5 ml), \ kuri, pridėta acto rūgšties, kad būtų gautas pH 5. Chloroformo tirpalas išgarintas, o produktas atskirtas chromatografija ant silik.agel.io ((CHC1₃: MeOH 2:1).

[0419] 7.33 (d, J 6.3 Hz; 1H) , 6.27 (d, J 5.7 Hz; 1 H), 4.42 (d, J 7.5 Hz; 1 H) , 4.15 (dd, J: 10.5 Hz, J₂ 3.9 Hz; 1 H), 4.01 (d, J 6.3 Hz; 1H), 3.87 (pl s; 1 H), 2.78 (pl s,v 1 H), 1.78-2.21 (m; 4H), 1.36 ir 1.35 (2 s; 18 H).

[0420] 174.95, 155.74, 155.25, 79.58, 78.22, 78.04, 62.97, 56.42, 56.00, 51.17, 48.99, 38.14, 28.62, 28.46.

[0421] C₁₇H₃₁N₃0₈ (405.45).

[0422] b) ( S, S)- 2, 7- Bis( tret- butiloksikarbonilamino)- 4-( benziloksikarbonil)- 4- azaoktandikarboksirūgštis

[0423] 1 M NaHC0₃ (5.9 ml, 5.92 mmol) ir benziloksikarbonilo chloridas (0.5 g, 0.42 ml, 2.96 mmol) pridėtas i, (S, S) — 2,7-bis(tret-butiloksikarbonilamino)-4-azaoktandikarbok-sirūgšties (0.6 g, 1.48 mmol) tirpalą dioksane (40 ml) ir H₂0 (30 ml), esant 0°C. Mišinys buvo maišomas, esant 0°C, tris valandas kambario temperatūroje - 6 valandas, išgarintas, likutis sutrintas i, miltelius su chloroformu (5 ml) ir acto rūgštimi iki pH 5. Chloroformo tirpalas išgarintas, o produktas atskirtas chromatografija ant silikagelio (CHCl₃:MeOH 4:1).

[0424] 7.21-7.37 (m, 5H) , 7.18 (d, J 7.8 Hz; 1 H), 6.23 (d, J 6.3 Hz; 1 H), 4.98 (s, 2H), 4.43 (dd, J 10.8 Hz, J 3.3 Hz; 1 H), 4.09 (dd, J 10.2 Hz, J 6.3 Hz; 1H) , 3.88-4.02 (m; 2H) , 3.01 (d, J 5.7 Hz; 2H) , 1.74-1.88 (m,lH), 1.59-1.72 (m, 1H), 1.35 ir 1.33 (2d, 18H).

[0425] 177.42, 177.38, 161.20, 160.63, 160.16, 142.20, 133.48, 132.91, 132.78, 83.55, 83.14, 70.76, 70.40, 59.39, 56.44, 53.61, 42.30, 36.01, 33.28.

[0426] ^₂₅^₃₇^₃^₁₀ (539.58) .

[0427] c) ( S, S)- 2, 7- Diamino- 4- benziloksikarbonil- 4- azaoktan-dikarboksirūgštis

[0428] (S,S)-2,7-Bis(tret-butiloksikarbonilo)-4-benzoloksikar-bonil-4-azaoktandikarboksirūgštis (0.29 g, 0.37 mmol) ištirpinta THF (10 ml), tirpalas maišomas kambario temperatūroje 2 valandas, ir TFA buvo nudistiliuotas, gautas pavadinimo junginys, kuris naudojamas kitoje stadijoje be tolesnio gryninimo.

[0429] u u

[0430] d) ( S, S)- Benziloksikarbonil- 2, 7- bis( 9- fluorenil- metoksi- karbonil)- 4- azaoktandikarboksirūgštis

[0431] (S,S)-2,7-Diamino-4-benziloksikarbonil-4-azaoktandikar-boksirūgš tis

[0432] (0.2 g, 0.37 mmol) ištirpinta dioksane (10 ml) ir H₂0 (10 ml), pridėta 9-fluorenilmetilchloroformiato (0.29 g, 1.11 mmol) ir 1M NaHC0₃ (2.96 ml, 2.96 mmol) , maišant 0°C temperatūroje, ir maišymas tęsiamas 10 valandų kambario temperatūroje, po to tirpikliai nugarinti. Likusi kieta medžiaga buvo sutrinta i, miltelius su chloroformu (5 ml), o pH buvo palaikomas apie 5, pridedant acto rūgšties. Tirpalas paskui išgarintas ir produktas atskirtas chromatografija ant silikagelio (AcOEt:heksanas:AcOH 10:10:1).

[0433] 7.21-7.44, 7.61-7.91 (m, 22H), 6.88 (d, J 6.3 Hz; 1H), 4.96 (s, 2H), 4.56' (dd, J 10.8 Hz, J 3.3 Hz; 1H), 3.94-4.28 (m, 8H), 3.08 (d, J 5.7 Hz; 2H) , 1.86-1.98 (m, 1H)., 1. 69-1. 82 (m; 1H) .

[0434] 172.98, 172.49, 156.49, 156.04, 144.32, 144.24, 144.17, 142.97, 141.07, 139.81, 137.82, 137.55, 129.30, 128.66, 128.06, 127.99, 127.66, 127.4 6, 125.68, 121.75, 120.39, 110.06, 66.22, 65.60, 55.2 6, 52.20, 47.08, 47.04, 36.63, 37.74.

[0435] C₄₅H₄₁N₃O₁₀ (783.83).

[0436] Kietos fazės peptidų sintezė

[0437] Kietos fazės peptido sintezė atliekama iš esmės pagal fluorenilmetoksi karbonilo (Fmoc)-poliamido sintezės principus (Atherton and Sheppard, Solid phase peptide synthesis: a practical approach, Oxford: IRL Press at Oxford University Press, 1989). Buvo panaudotos prekyboje turimos sintetinės dervos; periodine sinteze arba rankomis, arba naudojant pusiau automatini prie-taisą (Labortec Peptide Synthesizer 5P 650) jos buvo polistireno su rūgšties labilaus (Wang, J. Amer. Chem. Soc., 95, 1328- 1333, 1973) arba rūgšties hiperlabilaus ryšio agentais (Merger et al., Tetrahedron Letters 29, 4005-4008, 1988) . Alternatyviai, peptidai sukonstruoti visiškai automatiškai ant takių dervų (Atherton et al., J. Chem. Soc.. Chem. Commun., 1151-2, 1981), panaudojant LKB Biolynx 4170 automatini, peptidų sintezatorių. Buvo įsigytos dervos, kurios jau turėjo apsaugotą reikalingą C-galinę Fmoc-aminorūgšties liekaną. Gran-dinės pailginimas pasiektas įvairiai su šoninės gran-dinės apsaugotais Fmoc-aminorūgšties pentafluorenilo esteriais (Kisfaludy and Schoen, Synthesis. 325-327, 1983), panaudojant aktyvaciją su dicikloheksil-'karbodiimido (DDC)/1-hidroksibenzotriazolu (HOBt)

[0438] arba panaudojant prijungimo reagentą PyBOP (Coste et al., Tetrahedron Lett. 31, 205-208, 1990). Lizino šoninės grandinės amino grupė buvo apsaugota t-bu-tiloksikarbonilu, glutamino arba asparagino rūgšties toninės grandinės karboksilo grupės buvo apsaugotos kaip t-butilo esteriai.

[0439] Sintetinės dervos, nešančios reikalingą N-deblokuotą C-galinę liekaną, buvo acilintos 1/2 ekvivalento, Fmoc-_dpsaugota diaminokarboksilo rūgštimi, pridedant DCC ir HOBt, Reakciją užbaigus, reagentų perteklius buvo nuplautas. Peptidilinė derva paveikta dar kartą DCC/HOBt, kad būtų prijungtos karboksilo grupės, kurios galėjo likti laisvos. Po šios stadijos derva nuplauta me-tanoliu, kad būtų dezaktyvuotos bet kurios karboksilo grupės, negalinčios susijungti su derva sujungtomis amino grupėmis. Galiausiai, amino grupių perteklius acetilinamas. Peptido sintezė paskui buvo tęsiama kaip iprasta.

[0440] Po visiško reikalingų sekų ant kietos fazės sudarymo, peptidai skaldomi iš sintezės dervų su kartu einančiu šoninės grandinės deblokavimu, panaudojant trifluoracto rūgšti, i kurią buvo pridėti tinkami valantys che-mikalai (King et al., Int. J. Peptide Protein Res., 35, 255-268, 1990) . Po išgarinimo, peptidai atskirti, nusodinant dietilo eteriu ir išdžiovinant. Gryninimas atliktas preparatvvine atvirkščios fazės skystine chromatografija

[0441] Peptidas sintezuotas, panaudojant Labortec peptidų sintezatorių. Fmoc-Lys(Boc)-Sasrino polimeras (1.0 g, 0.6 mmol; BAchem A.G.; pakeitimas 0.6 mmol/g) sudėtas į 100 ml reakcijos kolbą. Fmoc-DHs (150 mg; 0.23 mmol), DCC (290 mg, 1.4 mmol) ir HOBt (211 mg, 1.4 mmol) DMF'e (20 ml) pridėta i, polimerą, ir reakcijai leista vykti 9 valandas. Papildomai buvo pridėta DCC (1.4 mmol) ir HOBt (1.4 mmol), ir reakcijai leista vykti dar 2 valandas. Tada polimeras nuplautas CH₂C1₂, 30 % MeOH/CH₂Cl₂ ir DMF. Laisvos amino grupės polimere acetilintos, panaudojant 10 % Ac₂0 / DMF (3x per 1 valandą; neigiamas Kaiser'io testas).

[0442] Likusi sintezė buvo atliekama pagal standartinę me-todiką panaudojant Fmoc-Asp (OtBu)-Opfp (1.35 g, 2.3 mmol), Fmoc-Glu (OtBu)-Opfp (1.35 g, 2.3 mmol) ir pGlu-pentachlorfenilo esteri, (0.86 g, 2.3 mmol). HOBt (35 mg, 2.3 mmol) pridėta kiekvienoje prijungimo stadijoje, kuriai leista vykti 1 valandą. Prijungimo pabaiga nu-statyta neigiamu Kaiser'io testu. Po sujungimo su Fmoc-amino rūgštimi, polimeras nuplautas DMF'u, apsauginė grupė atskelta 20 % piperidino tirpalu DMF1 e ir polimeras vėl nuplautas DMF'u. Po galutinio prijungimo, polimeras nuplautas MeOH/CH₂Cl₂ ir CH₂C1₂. Išdžiovinto polimero-peptido svoris buvo 1 g. Peptidas atskeltas nuo polimero TFA: CH₂C1₂ 1:1, tirpalas išdžiovintas užsaldant, likutis ištirpintas vandenyje, filtruotas (0.45 Į. i) , o filtratas išdžiovintas užsaldant; išeiga 430 mg. Tolesniam gryninimui 100 mg šio produkto ištirpinta vandenyje (0.5 ml) ir nukreipta prepa-ratyvinei AVSC, panaudojant 2.1x15 cm Beckman Ultras-phere ODS kolonėlę ir tirpalus A 0.1 % TFA H₂0, B 0.1 % TFA MeCN:H₂0 40:60. Gradientas buvo 0-15 % B, 120 mi-nučių, srauto greitis 5 ml/min. 19 mg gryno peptido (>95 %) buvo gauta po išdž.iovinimo šaldant. FAB-MS: [ M+H] 1169.3.

[0443] (E)-DHs = (S,S)-2,7-Diamino-(E)-okt-4-eno-l,8-dikarbok-silo rūgštis

Apibrėžtis

1. Peptidinis junginys, sudarytas iš dviejų vienos grandinės hemoreguliacinių peptidų, prijungtų kartu prie negalinių aminorūgščių C atomų ekvivalentiškose vietose kiekviename minėtame peptide per anglis- anglis jungti, arba per dvivalentę jungiančią tilteliu grupę-A-, kur A yra anglies grandinė, kuri yrai) a) mono- arba poli-pakeista grupe -RA, -OR^A, -SR^A,-NR^aR^a arba -COOR^A, arba halogeno atomu, tokiu kaip fluoras, chloras, bromas arba jodas (kur kieviena R nepriklausomai reiškia vandenilio atomą arba C^-alkilo, -alkanoilo arba -alkoksialkilo grupę, kuri gali būti mono- arba poli-hidroksilinta)ir/arbab) \ kurią įterpta viena arba daugiau anglis-anglis dvigubų arba trigubų jungčiųir/arbac) i, kurią įterpta viena arba daugiau grupių -Z-, kur kiekviena -Z- yra nepriklausomai -0-, -CO-, ^>C = NR^b arba -NR^B- (kur kiekvienas RB yra nepriklausomai vandenilio atomas arba C_^-alkilo arba _cl_₆-arilo grupė) arba kur vienas arba daugiau pakaitalų, arba neprisotintų anglis-anglis jungčių yra grupėje -A-, -Z- taip pat gali būti -S-arbaii) (CH₂)y, kur y yra 1, 5 arba 6, prie kiekvieno iš minėtų Ca atomų nėra natyvios oo-šo-ninės grandinės.

2. Peptidinis junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta jungianti tilteliu grupė-A- yra parenkama iš

3. Peptidinis junginys pagal 2 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad minėta jungianti tilteliu grupe- A- yra parenkama iš( E)- buten- 2- enileno,( Z)- buten- 2- enileno,buten- 2- inileno,metileno,n- pentileno irheksileno.

4. ^peptidiniai junginiai pagal bet kuri, 1- 3 punktą, b e siskiriantys tuo, kad minėti vienos grandinės homoreguliaciniai peptidai yra aprašomi I formule

5. Peptidiniai junginiai pagal 4 punktą, besiskiriantys tuo, kad jie aprašomi II formule

6. Farmacinė kompozicija, kurią sudaro peptidinis junginys kartu su farmaciniu nešikliu arba užpildu, besiskirianti tuo, kad peptidinis junginys yra junginys pagal bet kuri, iš 1-5 punktų.

7. Peptidinis junginys pagal bet kurį iš 1-5 punktų, skirtas panaudoti stimuliuojant mielopoezę arba kaulų čiulpų regeneraciją.

8. Peptidinio junginio pagal bet kuri, iš 1-5 punktų gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kada) bis-laktimo eteri, metalina ir po to alkilina, kad sudarytų bis-laktimo dipept idini, eteri,;b) bis-laktimo dipeptidini, eteri, iš a) stadijos hid-rolizuoja, kad sudarytų tiltelinę a,oc'-diamino-rūgšti,;c) likusias aminorūgštis įveda i, peptidines grandines;ird) bet kurią apsaugotą grupę deblokuoja.

9. Tiltelinės a,a^!-diaminorūgštys pagal formulę

10. Bis- laktimo dipeptidiniai eteriai pagal formulęl i i

Brėžiniai