[LT] Išradimas apima dažų mišinį, kuris gali būti panaudotas mikrobiologiniuose ir hematologiniuose tyrimuose medicininės diagnostikos tikslais.@Pareiškiami hematologiniai dažai susideda iš metileno mėlio, azūro I ir eozino, kurių santykis yra 1 : (0,03-0,05) : 1 ir jų tirpiklio, susidedančio iš N,N- dimetilformamido ir distiliuoto vandens mišinio, santykiu 1:9.@Išradime taip pat pateiktas ir dažų mišinio paruošimo būdas.@Pareiškiamų hematologinių dažų ir jų paruošimo būdo privalumai yra tie, kad koncentruoti dažai nesudaro nuosėdų, išlieka ilgą laiką stabilūs, sutrumpina dažymo trukmę, skirtingainudažo mikroorganizmus ir neutrofilų granules bei branduolius, dažytuose tepinėliuose nesudaro nuosėdų.
[EN] The present invention relates to a dyestuff mixture and a method for preparing thereof which can be used in a microbiological and hematological analysis. The dyestuff mixture consists of methylene blue, azure I and eosin in ratio 1 : (0,03-0,05) : 1 in the mixture of solvents of N,N-dimethylformamide and distilled water in ratio 1:9. The concentrated mixture had no precipitate and is stable for a long time. According this method the microorganisms and granules and nuclei of the neutrophiles are painted in different colours.
[0001] Išradimas priskirtinas medicininei diagnostikai ir gali būti panaudotas mikrobiologiniuose, hematologiniuose tyrimuose, pvz. tiriant fagocitozę, skaičiojant kraujo formulę, atliekant LE ( lupus erythematosus) testą, likvoro ir kitų biologinių skysčių, audinių citologinį tyrimą.
[0002] Yra žinomi dažai kraujo tepinėliams dažyti, susidedantys iš eozino, metileno mėlio, ažūro I, distiliuoto vandens ir buferinio tirpalo. Dažai gaminami tokiu būdu: 1. Paruošiami dažų tirpalai: eozino (1 g ištirpinamas 1 litre distiliuoto vandens) ir ažūro I (1 g ištirpinamas 1 I distiliuoto vandens). 2. Prieš dažymą paruošiamas darbinis dažų tirpalas, kurį sudaro 25 ml ažūro II tirpalo, 20 ml eozino tirpalo ir 55 ml buferinio tirpalo (žr. Liubina A. J., Iljičiova L. P., Katasonova T. V., Petrosova S. A., Kliničeskije laborotornyje issledovanija. M: Medicina, 1984, p. 150 (rus.)).
[0003] Šio gaminimo būdo neigiamosios savybės susijusios su ilgu dažų tirpinimu (apie 2 savaites), nuosėdų susidarymu, nepastoviu eozino ir ažūro II tirpalų santykiu, kuris priklauso nuo dažų tirpalų kokybės ir distiliuoto vandens pH.
[0004] Taip pat žinomi Romanovskio-Gimzos dažai, susidedantys iš ažūro II, eozino, metanolio arba etanolio ir glicerolio. Jie ruošiami ištirpinant 3 g ažūro II (susidaro lygiomis dalimis metileno mėlis ir ažūras I) ir 0,8 g eozino ištirpinant 250 ml metanolio arba 96 % etanolio. Tirpalas laikomas tamsioje vietoje kelias paras dažnai sukratant, kad geriau ištirptų dažai. Dažams ištirpus, į gautą tirpalą įpilama 250 ml chemiškai švaraus glicerolio ir vėl laikoma 3-5 paras. Po to koncentruotų dažų tirpalas filtruojamas ir prieš dažymą skiedžiamas, atsižvelgiant į jų titrą (žiūr. ten pat, p. 149-150, prototipas).
[0005] Gaminant šiuo būdu ir tokios sudėties dažus, jų paruošimas yra ilgas ir sudėtingas, dažnai susidaro nuosėdos, dėl ko reikia koncentruotą dažų tirpalą filtruoti. Dažant šiais dažais, gaunasi ilga dažymo trukmė (25-30 min.). Leukocitų fagocituotos bakterijos nusidažo raudonai-violetine spalva, kaip ir branduoliai, dėl ko nematyti ant branduolių esančių bakterijų.
[0006] Išradimo tikslas yra supaprastinti dažų gamybos technologiją, stabilizuoti paruoštų dažų tirpalus, pagerinti jų kokybę.
[0007] Nurodytas tikslas pasiekiamas tuo, kad hematologiniuose dažuose, susidedančiuose iš metileno mėlio, ažūro I, eozino ir jų tirpiklių, esant santykiui tarp metileno mėlio, ažūro I ir eozino - 1: (0,030-0,05): 1, o jų tirpiklis - N,N-dimetilformamido ir distiliuoto vandens mišinys, o taip pat tuo, kad hematologinių dažų gaminimo būdas , supilant ir sumaišant metileno mėlj ir ažūrą I bei eoziną minėtame tirpiklyje, susidaro iš dviejų dažų tirpalų, vieno iš jų - sudrėkinto keliais distiliuoto vandens lašais metileno mėlio ir ažūro I tirpinimo distiliuotame vandenyje ir N.N-dimetilformamide ir antro - sudrėkinto keliais lašais distiliuoto vandens lašais eozino tirpinimo distiliuotame vandenyje, pagaminimo, jų supylimo į stiklinį indą ir sumaišymo.
[0008] Išradimas iliustruotas paveikslais, kuriuose pateikti fagocitozės tyrimo rezultatai, nudažius kraujo tepinėlius prototipo, t. y. Romanovskio-Gimzos dažais (1 pav.) ir siūlomais dažais (2 pav.).
[0009] Siūlomų hematologinių dažų sudėtį sudaro metileno mėlis, ažūras I ir eozinas santykiu 1 : (0,03-0,05) : 1, jų tirpiklis yra N,N-dimetilformamidas ir distiliuotas vanduo.
[0010] 0,133 g metileno mėlio ir 0,33 g ažūro I supilami į 1-ąjį stiklinį indą ir sudrėkinami keliais distiliuoto vandens lašais. J sudrėkintus dažus įpilama 5 ml distiliuoto vandens ir 5 ml N,N-dimetilformamido. Po to, maišant dažus stikline lazdele, lėtai supilama 40 ml distiliuoto vandens. 0,133 g eozino supilama į 2-ąjį stiklinį indą ir sudrėkinama keliais distiliuoto vandens lašais Maišant stikline lazdele, į indą lėtai supilama 45 ml distiliuoto vandens. Abu dažų tirpalai supilami į vieną stiklinį indą ir sumaišomi. Po to pirmasis indas dar praplaunamas 5 ml N.N-dimetilformamido ir jo turinys supilamas į indą su dažais. Gaunamas koncentruotų dažų tirpalas.
[0011] Paruošti dažai panaudoti fagocitozės tyrimui: paruošti kraujo tepinėliai fiksuojami 25-30 min. 96 % etanolio ir eterio mišiniu (santykiu 1:1) ir dažomi 14 ± 3 min. praskiestais koncentruotais dažais santykiu 1:1. Dažymo rezultatai pateikti 2 pav.
[0012] Siūlomų hematologinių dažų ir jų gamybos būdo privalumai, lyginant su prototipu: 1. Pagaminti koncentruoti dažai nesudaro nuosėdų, išlieka stabilūs iki 48 mėnesių.
[0013] 3. Dažymui paruošti, t. y. praskiesti distiliuotu vandeniu koncentruoti dažai santykiu 1:1 išlieka stabilūs ir kokybiški, laikant juos tamsaus stiklo inde ir kambario temperatūroje iki 6 mėnesių. 4. Skirtingai nusidažo mikroorganizmai ir neutrofilų granulės bei branduoliai, todėl bakterijos gerai matomos branduolio fone.
[0014] 5. Dažytuose tepinėliuose dažai nesudaro nuosėdų.
1. Hematologiniai dažai, kurių sudėtyje yra metileno mėlis, ažūras I, eozinas ir jų tirpiklis, besiskiriantys tuo, kad metileno mėlio, ažūro I ir eozino santykis yra 1 : (0,03-0,05) : 1, o jų tirpiklis - N,N-dimetilformamido ir distiliuoto vandens mišinys.
2. Hematologiniai dažai pagal 1 punktą, besiskiriantys tuo, kad N,N-dimetilformamido ir distiliuoto vandens santykis yra 1 : 9.
3. Hematologinių dažų gaminimo būdas, supilant ir sumaišant metileno mėlį ir ažūrą I bei eoziną tirpiklyje, besiskiriantis tuo, kad gamina du dažų tirpalus, vieną iš jų - metileno mėlį ir ažūrą I sudrėkina keliais distiliuoto vandens lašais, tirpina distiliuotame vandenyje ir N.N-dimetilformamide, antrą - eoziną sudrėkina keliais distiliuoto vandens lašais ir tirpina distiliuotame vandenyje, po to abu tirpalus supila į vieną (stiklinj) indą ir sumaišo.