JUNGINIAI PRIEŠ PIKORNAVIRUSĄ, JŲ GAVIMAS IR PANAUDOJIMAS

LT4846B

JUNGINIAI PRIEŠ PIKORNAVIRUSĄ, JŲ GAVIMAS IR PANAUDOJIMAS

ANTIPICORNAVIRAL COMPOUNDS, THEIR PREPARATION AND USE

Referatas

[LT] Peptidiniai arba peptidus imituojantys junginiai, kurie tinkamai inhibuoja arba blokuoja pikornovirusinės 3C proteazės biologinį aktyvumą. Šie junginiai, o taip pat ir šiuos junginius turinčios farmacinės kompozicijos tinka gydyti pacientus arba šeimininkus, kurie yra infekuoti vienu arba daugiau pikornovirusų, tokių kaip RVP. Taip pat yra pateikiami tarpiniai junginiai ir tokių junginių sintezėsbūdai.

[EN] Peptido and peptidomimetic compounds which adventageously inhibit or block the biological activity of the picornoviral 3C protease. These compounds, as well as pharmaceutical compositions containing these compounds, are useful for treating patients or hosts infected with one or more picornoviruses, such as RVP. Intermediates and synthetic methods for preparing such compounds are also provided.

Aprašymas

[0001] Šis išradimas yra skirtas panašiems į peptidus ir peptidus imituojantiems junginiams, kurie reikiamai inhibuoja pikornavirusinių 3C proteazių, ypatingai rinovirusinių 3C proteazių (RVP) fermentinį aktyvumą ir kurie stabdo virusų augimą ląstelių kultūroje. Išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių panaudojimu farmacinėse kompozicijose ir rinovirusinių infekcijų terapijai. Be to, išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių sintezės būdais ir šiai sintezei tinkamais junginiais.

[0002] Išradimo kiimė

[0003] riKornevirusai yra mažyčių, neturinčių apvalkalėlio, turinčių teigiamos grandinės RNR, virusų, kurie infekuoja žmones ir kitus gyvūnus, šeima. Tokiais virusais yra žmogaus rinovirusai, žmogaus poliovirusai, žmogaus Koksaki virusai, žmogaus echovirusai, žmogaus ir jaučio enterovirusai, encefalomiokardito virusai, meningito virusai, kojų ir burnos virusai, hepatito A virusas ir kiti. Žmogaus rinovirusai yra pagrindinė paprasto peršalimo priežastis. Iki šiol prekyboje nėra efektyvių priemonių, kurios gydytų paprastąjį peršalimą o tik priemonės, kurios palengvina simptomus.

[0004] 3C fermentus. Šių fermentų reikia natūraliam pikornavirusų subrendimui. Jie yra atsakingi už autokatalitinį genominio didelio poliproteino skaldymą į pagrindinius virusinius baltymus. 3C proteazių šeimos nariai yra cisteino proteazės, kuriose sulfhidrilo grupės dažniausiai skaldo glutamino-glicino amidinį ryšį. Manoma, kad 3C proteazių inhibavimas blokuos proteolitinį

[0005] poliproteino skaldymą kuris savo ruožtu sulėtins virusų subrendimą ir replikaciją trukdydamas virusinių dalelių gaminimuisi. Tokiu būdu, šios cisteino proteazės vykdomo proceso inhibavimas selektyviomis mažomis molekulėmis, kurios yra specifiškai atpažįstamos, turėtų vaidinti vaidmenį svarbioje ir naudingoje strategijoje, nukreiptoje į šios prigimties virusinių infekcijų, ypatingai paprastojo peršalimo, gydymą.

[0006] Neseniai buvo atrasta keletas pikornavirusinių 3C proteazių fermentinio aktyvumo inhibitorių - mažų molekulių. Žr. pavyzdžiui, JAV. patentinę paraišką Nr. 08/850398, užregistruotą 1997 m. gegužės 2 d. VVebber ir kt.; JAV patentinę paraišką Nr. 08/991282, užregistruotą 1997 m. gruodžio 16 d. Dragovich ir kt.; ir JAV patentinę paraišką Nr. 08/991739, užregistruotą 1997 m. gruodžio 16 d. VVebber ir kt. Šios JAV patentinės paraiškos, kurių aprašymai duodami kaip literatūros šaltiniai, aprašo tam tikrus junginius prieš pikornavirusus. Tačiau vis tik išlieka pageidavimas atrasti junginius - mažas molekules, kurios būtų ypatingai veiksmingi agentai prieš pikornavirusus.

[0007] Taigi, šio išradimo tikslas yra surasti mažos molekulinės masės junginius, kurie būtų ypatingai veiksmingi agentai prieš pikornavirusus. Kitas išradimo tikslas yra pateikti tarpinius junginius, tinkančius būti tarpiniais junginiais minėtas proteazes inhibuojančių junginių sintezėje, ir tokių junginių sintezės būdus. Dar kitas išradimo tikslas yra gauti farmacines kompozicijas, kurios būtų labai efektyvios gydant ligas, kuriose tarpininkauja pikornavirusinių 3C proteazių inhibavimas, kaip antai paprastąjį peršalimą

[0008] Šie tikslai buvo pasiekti atradus šio išradimo junginius, kurie yra pikomavirusinės 3C proteazės inhibitoriai, turintys ypatingai stiprų priešvirusinį aktyvumą. Netikėtai buvo rasta, kad peptidiniai ir peptidus imituojantys junginiai, kuriuose yra penkianarė heterociklinė grupė, turi aukštą rinovirusinės proteazės inhibavimo aktyvumą. Taip pat netikėtai buvo rasta, kad peptidinių ir peptidus imituojančių junginių rinovirusinės proteazės inhibavimo aktyvumą galima žymiai padidinti pakeitus į glutaminą panašią liekaną randamą kai kuriuose žinomuose rinovirusinę proteazę

[0009] inhibuojančiuose junginiuose, šonine grandine, kurioje yra gama- arba delta-laktamas.

[0010]

[0011] Y yra -N(Ry)-, -C(Ry)(Ry)- arba -O-, kur kiekvienas ič Ry nepriklausomai yra -H arba temesnysis alkilas; R_i yra -H, -F, -alkilas, -OH, -SH arba O-alkilo grupė; R₂ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H;

[0012] kur n yra sveikas skaičius nuo 0

[0013] yra pasirinkti iš C(R_4i)(R₄i), N(R₄i), S, S(O), S(0)₂ ir O, o A₄ yra NH arba NR₄₁, kur kiekvienas R₄₁ nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei du heteroatomai atsiduria iš eilės aukščiau pavaizduotame žiede, sudarytame iš Ai, A₂, (A₃)_n, A₄ ir C=0, ir bent vienas iš _^

[0014] R₂ ir R₃ yra

[0015]

[0016] R₅ ir R₆, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė;

[0017] R₇ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo

[0018] grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -OR₁₇, -SR₁₇, - NR₁₇R₁₈, -NR^NR^Ris arba -NR₁₇OR_i8, kur R₁₇, R_is ir R₁₉, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė arba acilo grupė, su sąlyga, kad bent vienas iš R₇ ir R₈ yra alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -OR₁₇, -SR₁₇, -NRi7Ri8, -NR_igNR_^R_is arba -NR₁₇OR₁₈;

[0019] Z ir Z_i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -C(0)R_2i, - CO₂R₂₁, -CN, -C(0)NR₂iR22, -C(0)NR₂i0R22, -C(S)R₂i, -C(S)NR₂iR22, -N0₂, - SOR₂i, -SO₂R₂₁, -S0₂NR₂iR2₂, -SO(NR₂i)(OR2₂), -SONR₂i, -SO₃R₂₁, - PO(OR_2I)₂, -PO(R_2I)(R₂₂), -PO(NR₂iR₂₂)(OR₂₃), -PO(NR_2IR₂₂)(NR₂₃R₂₄), - C(0)NR_2iNR₂₂R₂₃ arba -C(S)NR₂iNR22R23, kur R₂i, R₂₂, R₂₃ ir R_24>nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba kur bet kurie du iš R₂₁, R₂₂, R₂₃ ir R₂₄, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterociklinę grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;

[0020] arba Z_\ ir R_i kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę, kur Z₁ ir R₁ yra tokie, kaip apibūdinta aukščiau, išskyrus liekanas, kurios negali sudaryti cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupės;

[0021] arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę, kur Z₁ ir R₁ yra tokie, kaip_/apibūdinta aukščiau, išskyrus liekanas, kurios negali sudaryti cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupės.

[0022] Išradimas taip pat yra susijaes su I formulės junginių provaistais, farmaciškai priimtinomis druskomis, farmaciškai aktyviais metabolitais ir farmaciškai priimtinais solvatais.

[0023] Tinkamiausiuose I formulės junginių įgyvendinimo variantuose R₂ ir R₃

[0024] yra nepriklausomai H,

[0025]

, kur n yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5, kiekvienas iš R₄₁ nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, o žvaigždute pažymėto anglies atomo stereochemija gali būti R arba S; su sąlyga, kad bent vienas iš R₂ ir R₃ yra

arba

[0026] Geriau, kai Rg yra penkianaris heterociklas, turintis

[0027] Kituose tinkamiausiuose įgyvendinimo variantuose I formulės kintamieji

[0028] yra tokie. Z ir Z_i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO₂R₂₁ ir-C(0)NR_2iR₂₂, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H, kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R_2i ir R₂₂ kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra

[0029] prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę. Bent vienas iš R₂ arba Ra'yra

[0030]

o kitas yra H. R₅ ir R₆, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, alkilo grupės,"2L 3 1 cikloalkilo grupės, heterocikloalkilo grupės, arilo grupės ir heteroarilo grupės;

[0031] ' Tu geriau, kai vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas (pvz. neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas). R₇ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė, ir visų geriausia, kai vienas iš R₇ ir R_s yra H, o kitas yra alkilas (pvz. 2-propilas, 2-metil-2-propilas arba 2-metil-1-propilas) arba arilmetilas (pvz., neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas arba naftilmetilas). Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S, geriau penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir bent vieną deguonies heteroatomą (pvz. neturintis pakaitų arba turintis pakaitų 1,2-oksazolilas (t.y. izoksazolilas), 1,3-oksazolilas (t.y. oksazolilas) arba oksadiazolilas (1,2,3-oksadiazolilas, 1,2,4-oksadiazolilas arba 1,2,5-oksadiazolilas). Kai Rg yra oksadiazolilas, tinkamiausias yra neturintis pakaitų ir monometil-pakeistas I,2,4-oksadiazolilas. Ypatingai tinkamuose įgyvendinimo variantuose R₉ yra 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba neturintys pakaitų, arba kaip

[0032] pakaitus turintys vieną arba dvi metilo grupes ir/arba haiogenus; iš halogeninių pakaitų tinkamiausi yra chloras ir fluoras.

[0033] Tinkamiausiame įgyvendinimo variante junginiai, provaistai, farmaciškai priimtinos druskos, farmaciškai aktyvūs metabolitai ir solvatai turi aktyvumą prieš pikornavirusą esant EC₅₀ mažesnei arba lygiai 100 įiM H1-HeLa ląstelių kultūros teste; geriau, kai aktyvumas prieš pikornavirusą turi EC₅₀ mažesnę arba lygią 10 nM H1-HeLa ląstelių kultūroje.

[0034] Kitu aspektu išradimas yra skirtas tarpiniams II formulės, geriau M' formulės, junginiams, kurie yra tinkami tam tikrų junginių sintezei:

[0035] p yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5;

[0036] A₁₁ yra CH arba N, A₁₂ ir kiekvienas iš A₁₃ yra nepriklausomai pasirinktas iš C(R_6i)(R_6i), N(R_6i), S, S(O), S(0)₂ ir O, o A₁₄ yra NH arba NR_6i, kur kiekvienas R_6i yra nepriklausomai H, alkilas, acilas arba arilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei du heteroatomai būtų iš eilės aukščiau pavaizduotame žiede II formulėje, sudarytoje iš An, A₁₂, (Ai3)n, Au ir C⁼0;

[0037] kiekvienas iš R₁₄₁ yra nepriklausomai H arba žemesnysis alkilas;

[0038] R₅₁ yra H, alkilas, acilas arba arilas;

[0039] R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ yra nepriklausomai pasirinkti iš H, hidroksilo, alkilo, acilo ir arilo; arba bet kurie du iš R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ kartu sudaro =0 arba =C(R₅₇)(R₅₈), kur R₅₇ ir Rss yra nepriklausomai pasirinkti iš H, alkilo, C0₂(C_i-C_s)alkilo, C(0)N(C_i-C₆)alkilo ir CC>2(arilo); ir

[0040] R₅₅ ir R₅₆, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H arba tinkama azotą blokuojanti grupė. Išradimas taip pat yra skirtas II ir II' formulių junginių farmaciškai priimtinoms druskoms.

[0041] Šis išradimas taip pat yra susijęs su farmacinėmis kompozicijomis, kuriose yra terapiškai efektyvus kiekis bent vieno I formulės junginio, jo

[0042] provaisto, jo farmaciškai priimtinos druskos, jo farmaciškai aktyvaus metabolito arba jo solvato. Be to, išradimas yra susijęs su pikornavirusinės 3C proteazės inhibavimo būdais, skiriant terapiškai efektyvų kiekį bent vieno I formulės junginio, arba jo provaisto, jo farmaciškai priimtinos druskos, jo farmaciškai aktyvaus metabolito arba jo solvato.

[0043] t

[0044] i Šis išradimas yra susijęs su junginiais, kurių formulė I:

[0045]

kurioje Y, Ri, R₂, R₃, R₅, R_č, R₇, R₈, R₉, Z ir Z₁ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinomis druskomis, provaistais, aktyviais metabolitais ir solvatais. Pageidautina, kad tokie junginiai, farmaciškai priimtinos druskos, provaistai, aktyvūs metabolitai ir solvatai turėtų aktyvumą prieš pikomavirusą geriau prieš rinovirusą, atitinkantį EC₅₀ mažesnei arba lygiai 100 įiM H1-HeLa ląstelių kultūros teste, geriau, atitinkantį EC₅₀mažesnę arba lygią 10 įiM H1 -HeLa ląstelių kultūros teste. Šis išradimas taip pat yra susijęs su tinkamesniais junginiais, kurių formulės I-A, l-B ir l-C:

[0046] kuriose Ry (I-A formulėje) yra H arba žemesnysis alkilas, o R_i, R₂, R₃, R_s, R₆, R₇, R_8i Rg, Z ir Z₁ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinomis druskomis, provaistais, aktyviais metabolitais ir solvatais.

[0047] Išradimo I-A formulės junginiai, kurie čia yra vadinami "panašiais į peptidus" junginiais, l-B, kurie čia yra vadinami "ketometileno tipo" junginiais, ir l-C, kurie čia vadinami "depsipeptidiniais" junginiais, skiriasi savo karkasais, kurie gali veikti specifinį biopasiskirstymą arba kitas fizikines savybes; vis tik visi jie pasižymi stipriu rinovirusinės proteazės inhibavimo aktyvumu.

[0048] Tinkamiausiuose aukščiau duotų I-A, l-B ir l-C formulių junginių variantuose: R_t yra H, F arba alkilo grupė;

[0049] Ry (I-A formulėje) yra H arba metilas;

[0050] kiekvienas iš R₃, R₅ ir R_s yra H;

[0051]

[0052] R₆ yra alkilo grupė, kurioje gali būti kaip tinkamiausias pakaitas arilo grupė;

[0053] R₇ yra alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikoalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė;

[0054] Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų pasirinktų iš O, N ir S, geriau, kai bent vienas iš heteroatomų yra azotas, kuris neturi pakaitų arba turi pakaitų kur geriau, kai galimi pakaitai yra halogenas arba žemesnysis alkilas, o dar geriau vienas chloras arba fluoras, arba metilo grupė; ir

[0055] Z ir Z₁, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -C(0)R_2i, - CO₂R₂₁, -CN, -C(0)NR₂iR22, -C(0)NR₂i0R₂₂, -C(S)R_2I, -C(S)NR_2IR₂₂, -N0_2i - SOR₂₁, -SO₂R₂₁, -SO₂NR₂₁R₂₂, -SO(NR₂i)(OR22), -SONR₂₁, -SO₃R₂₁, - PO(OR₂i)2, -PO(R₂₁)(R₂₂), -PO(NR_2IR₂₂)(OR₂₃), -PO(NR₂₁R₂₂)(NR₂₃R₂₄), - C(0)NR₂iNR22R23 arba -C(S)NR_2iNR₂₂R₂₃, kur Z ir Z₁ abu kartu nėra H ir kur R₂₁, R₂₂, R₂₃ ir R₂₄, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba kur bet kurie du iš R₂₁, R22 , R₂₃ ir R₂₄, kartu su atomu( ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterociklinę grupę,

[0056] arba Z ir Z₁ ( abu tokie kaip apibūdinta aukščiau) kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę.

[0057] Tinkamiausiame variante šio išradimo junginiai yra tokie, kurių formulės I- A', l- B' ir l- C' :

[0058] R₁, Z ir Z1 yra tokie kaip apibūdinta aukščiau; n yra 1 arba 2; Ry ( I- A formulėje) yra H arba žemesnysis alkilas; R₆ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas arba heteroarilas; R₇ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas, -OR₁₇, -SR₁₇, - NR17R18, - NR19NR17R18 arba — NR17OR18, kur R₁₇, R_is ir R₁₉nepriklausomai vienas nuo kito yra H, alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas arba acilas;

[0059] R₉ yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S, kuris neturi pakaitų arba turi pakaitų, kur geriau, kai galimi pakaitai yra viena arba dvi žemesniojo alkilo grupės ir/arba halogenai.

[0060] Išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių provaistais, farmaciškai priimtinomis druskomis, farmaciškai aktyviais metabolitais ir solvatais.

[0061] Tinkamiausiame variante šio išradimo RVP inhibuojantys junginiai yra junginiai bet kurios iš stereospecifinių formulių I-A", l-B" ir l-C": _'

[0062]

[0063] kuriose Ry, R_i, r₂, R₆, R₇ R₉, Z ir Z₁ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinos druskos, provaistai, aktyvūs metabolitai ir solvatai.

[0064] Ry (I-A" formulėje) yra H arba metilas;

[0065]

[0066] R₆ yra arilmetilas arba ariltiometilas, kur geriausia, kai arilas yra pakaitų galinti turėti fenilo grupė;

[0067] R₇ yra alkilo grupė, geriausia pasirinkta iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1 -propilo ir arilmetilo, kur geriausia, kai arilas yra fenilas arba naftilas;

[0068] Rgyra izoksazolilas, oksazolilas arba oksadiazolilas, kuriuose pakaitais gali būti viena arba dvi žemesniojo alkilo grupės ir/arba halogenai; ir

[0069] Z yra H, o Z_i yra -CO₂R₂₁, -CN arba -C(0)NR₂iR22, kur R₂₁ ir R₂₂ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, arba Z ir Z₁ kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.

[0070] Dar tinkamesni šio išradimo RVP inhibuojantys agentai yra junginiai, kurių formulės I-A"', l-B'" ir l-C'":

[0071] kuriose n, Ry, R^ R_2o, R₆, R₇, R₉, Z ir Z1 yra tokie kaipapibūdinta aukščiau, irjųfarmaciškai priimtinos druskos, provaistai, aktyvūs metabolitai ir solvatai.

[0072] Ry (I-A" formulėje) yra H arba metilas;

[0073] R₂₀ yra vandenilis;

[0074] R₆ yra arilmetilas arba ariltiometilas, kur geriausia, kai arilas yra pakaitų neturintis fenilas arba fenilas, pakaitais turintis halogeną žemesnįjį alkilą ir/arba žemesniąją alkoksigrupę;

[0075] r₇ yra alkilo grupė, geriausia pasirinkta iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1 -propilo ir arilmetilo, kur geriausia, kai arilo grupė yra fenilas arba naftilas;

[0076] Rg yra izoksazolilas, oksazolilas arba oksadiazolilas, kuriuose pakaitais gali būti viena arba dvi žemesniojo alkilo grupės ir/arba halogenai; ir

[0077] Z yra H, o Zi yra -CO₂R₂₁, -CN arba -C(0)NR₂iR₂₂, kur R_2i ir R₂₂ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, arba Z ir Z₁ kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.

[0078] Ypatingai tinkamuose šio išradimo I bendrosios formulės (ir iš jos išvestų bendrųjų formulių) junginiuose R₁ yra H arba F.

[0079] Kitu aspektu šis išradimas yra skirtas tarpiniams junginiams, kurių formulės II ir II':

[0080] kuriuose kintamieji (p, An, A₁₂, A₁₃, A₁₄, R₅₁, R₅₂, R₅₃, R₅₄, R₅₅, Rse ir R₁₄₁) yra tokie kaip apibūdinta aukščiau. Šie junginiai tinka farmaciškai naudingiems I formulės junginiams sintetinti.

[0081] Tinkamiausios R₅₅ ir R₅₆ grupės yra H ir tinkamos azotą blokuojančios grupės, pavyzdžiui, BOC (t-butiloksikarbonilas), CBZ (benziloksikarbonilas), FMOC (fluoren-9-metiloksikarbonilas), kiti alkiloksikarbonilai (pvz., metiloksikarbonilas) ir tritilas (trifenilmetilas). Kitas tinkamas azotą blokuojančias grupes nesunkiai parinks specialistas (žr. pvz., Greene and Wutz, Protecting Groups in Chemical Synthesis (2^nd ed.), John Wiley & Sons, NY (1991)). Tinkamiausios R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ grupės yra H, alkoksigrupė, hidroksilas ir karbonilas.

[0082] Tinkamiausi II formulės junginiai yra šie toliau duodami junginiai, kuriuose PN yra tinkama azotą blokuojanti grupė, o q yra 1 arba 2:

[0083] Kiti tinkamiausi tarpiniai junginiai apima šiuos toliau duodamus junginius, kuriuose BOC yra t-butiloksikarbonilas:

[0084] Iš šių junginių tinkamiausi stereoizomerai yra:

[0085] Ypatingai tinkami tarpiniai junginiai yra šie:

Pagal įprastą šioje srityje žymėjimą

[0086] yra naudojamas struktūrinėse

[0087] formulėse pažymėti jungčiai, t.y. liekanos arba pakaito prijungimo taškui prie šerdinės arba karkasinės struktūros.

[0088] Kai cheminėse struktūrose yra chiralinių anglies atomų, jeigu nėra pavaizduota konkreti orientacija, laikoma, kad išradimas apima abi stereoizomerines formas.

[0089] Čia naudojamas terminas "alkilo grupė" reiškia tiesiosios arba šakotosios grandinės sočių ir/arba nesočių anglies atomų ir vandenilio atomų vienvalentį radikalą tokį kaip metilas (Me), etilas (Et), propilas, izopropilas, butilas, izobutilas, t-butilas, etenilas, pentenilas, butenilas, propenilas, etinilas, butinilas, propinilas, pentinilas, heksinilas ir panašūs, kurie gali neturėti pakaitų (t.y. turėti tik anglį ir vandenilį), arba gali turėti vieną arba daugiau tinkamų pakaitų kaip apibūdinta žemiau (pvz. vieną arba daugiau halogenų,

[0090] kaip antai F, Cl, Br ir I, iš kurių tinkamiausi yra F ir Cl). Priimama, kad "žemesnioji alkilo grupė" reiškia alkilo grupę, turinčią 1-4 anglies atomus grandinėje.

[0091] Laikoma, kad "cikloalkilo grupė" reiškia nearomatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą turintį 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 arba 14 žiedo anglies atomų, iš kurių kiekvienas gali būti sotus arba , nesotus, ir kuriame gali nebūti pakaitų arba būti vienas arba daugiau žemiau apibūdintų pakaitų, ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau heterocikloalkilo grupių arilo grupių arba heteroarilo grupių kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Cikloalkilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

[0092]

Laikoma, kad "heterocikloalkilo grupė" reiškia nearomatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą kuris yra sotus arba nesotus, turintį 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 arba 18 žiedo atomų į kuriuos įeina 1, 2, 3, 4 arba 5 heteroatomai, pasirinkti iš azoto, deguonies ir sieros, kur šiame radikale nėra pakaitų arba yra vienas arba daugiau žemiau apibūdintų tinkamų pakaitų ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau cikloalkilo grupių arilo grupių arba heteroarilo grupių kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų Heterocikloalkilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

[0093] Laikoma, kad "arilo grupė" reiškia aromatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą, turintį 6, 10, 14 arba 18 žiedo anglies atomų, kuriame gali nebūti pakaitų arba gali būti vienas arba daugiau žemiau

[0094] i

[0095] apibūdintų tinkamų pakaitų, ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau cikloalkilo grupių, heterocikloalkilo grupių arba heteroarilo grupių, kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Arilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

[0096]

[0097] Laikoma, kad "heteroarilo grupė" reiškia aromatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą turintį 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 arba 18 žiedo atomų, į kuriuos įeina 1, 2, 3, 4 arba 5 heteroatomai, pasirinkti iš azoto, deguonies ir sieros, kur šiame radikale nėra pakaitų arba yra vienas arba daugiau žemiau apibūdintų tinkamų pakaitų, ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau cikloalkilo grupių, heterocikloalkilo grupių arba arilo grupių, kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Heteroarilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

[0098] Laikoma, kad "heterciklas" reiškia heteroarilo arba heterocikloalkilo grupę (kiekvienoje iš jų, kaip apibūdinta aukščiau, gali būti pakaitų).

[0099] Laikoma, kad "acilo grupė" reiškia -C(0)-R racjikalą kur R yra pakaitas, toks kaip apibūdinta aukščiau.

[0100] Laikoma, kad "tioacilo grupė" reiškia -C(S)-R radikalą, kur R yra pakaitas, toks kaip apibūdinta aukščiau.

[0101] Laikoma, kad "sulfonilo grupė" reiškia -SO₂R radikalą kur R yra 1

[0102] TS^*'

[0103] pakaitas, toks kaip apibūdinta aukščiau.

[0104] Laikoma, kad "hidroksilo grupė" reiškia -OH radikalą. Laikoma, kad "aminogrupė" reiškia -NH₂ radikalą.

[0105] Laikoma, kad "alkilaminogrupė" reiškia -NHR_a radikalą kur Ra yra alkilo grupė.

[0106] Laikoma, kad "dialkilaminogrupė" reiškia -NR_aR_b radikalą kur Ra ir Rb nepriklausomai viena nuo kitos yra alkilo grupė.

[0107] Laikoma, kad "alkoksigrupė" reiškia -OR_a radikalą kur Ra yra alkilo grupė. Alkoksigrupių pavyzdžiais yra metoksi-, etoksi-, propoksi- ir panašios grupės.

[0108] Laikoma, kad "alkilsulfonilo grupė" reiškia -S0₂R_a radikalą kur Ra yra alkilo grupė.

[0109] Laikoma, kad "alkilaminokarbonilo grupė" reiškia -C(0)NHR_a radikalą

[0110] Laikoma, kad "dialkilaminokarbonilo grupė" reiškia -C(0)NR_aR_bradikalą kur Ra ir Rb nepriklausomai viena nuo kitos yra alkilo grupė.

[0111] Laikoma, kad "alkiltiogrupė" reiškia -SR_a radikalą, kur Ra yra alkilo

[0112] Laikoma, kad "karbamoilo grupė" reiškia -C(0)NH₂ radikalą.

[0113] Laikoma, kad "ariloksigrupė" reiškia -OR_c radikalą kur Rc yra arilo grupė.

[0114] Laikoma, kad "heteroariloksigrupė" reiškia -OR_d radikalą kur Rd yra

[0115] Laikoma, kad "ariltiogrupė" reiškia -SRc radikalą kur Rc yra arilo grupė. Laikoma, kad "heteroariltiogrupė" reiškia -SR_d radikalą kur Rd yra

[0116] Laikoma, kad terminas "tinkama organinė liekana" reiškia bet kokią organinę liekaną kurią įprasto testavimo būdu specialistai pripažįsta nepalankiai neveikiančia išradimo junginių inhibicinio aktyvumo. Tinkamų organinių liekanų iliustraciniais pavyzdžiais yra (bet jomis neapsiribojama) hidroksilo grupės, alkilo grupės, oksogrupės, cikloalkilo grupės, heterocikloalkilo grupės, arilo grupės, heteroarilo grupės, acilo grupės, sulfonilo grupės, merkaptogrupės, alkiltiogrupės, alkoksigrupės, karboksigrupės, aminogrupės, alkilaminogrupės, dialkilaminogrupės, karbamoilo grupės, ariltiogrupės, heteroariltiogrupės ir panašios.

[0117] Laikoma, kad terminas "pakaitas" arba "tinkamas pakaitas" reiškia bet kokį pakaitą kurį įprasto testavimo būdu specialistai gali atpažinti arba pasirinkti. Tinkamų pakaitų iliustraciniais pavyzdžiais yra hidroksilo grupės, halogenai, oksogrupės, alkilo grupės, acilo grupės, sulfonilo grupės, merkaptogrupės, alkiltiogrupės, alkoksigrupės, cikloalkilo grupės, heterocikloalkilo grupės, arilo grupės, heteroarilo grupės, karboksigrupės, aminogrupės, alkilaminogrupės, dialkilaminogrupės, karbamoilo grupės, ariloksigrupės, heteroariloksigrupės, ariltiogrupės, heteroariltiogrupės ir panašios.

[0118] Laikoma, kad terminas "gali būti pakeistas" aiškiai rodo, kad nurodytoje grupėje nėra pakaitų arba joje yra vienas arba daugiau tinkamų pakaitų, nebent galimi pakaitai yra aiškiai apibūdinti, o šiuo atveju terminas rodo, kad grupėje nėra pakaitų arba yra konkrečių pakaitų. Kaip aukščiau minėta, įvairios grupės gali neturėti pakaitų arba turėti pakaitų (t.y. jose gali būti pakaitų), jeigu nenurodyta kitaip (pvz. pažymint, kad konkrečioje grupėje nėra pakaitų).

[0119] Laikoma, kad "provaistas" reiškia junginį, kuris fiziologinėse sąlygose, solvolizės būdu arba dėl metabolizmo paverčiamas konkrečiu junginiu, kuris yra farmaciškai aktyvus.

[0120] Laikoma,, kad "farmaciškai aktyvus metabolitas" reiškia farmakologiškai aktyvų produktą gaunamą vykstant konkretaus junginio metabolizmui organizme.

[0121] Laikoma, kad "solvatas" reiškia konkretaus junginio farmaciškai priimtiną solvato formą kuri išlaiko tokio junginio biologinį efektyvumą. Solvatų pavyzdžiais yra išradimo junginių deriniai sū vandeniu, izopropanoliu, etanoliu, metanoliu, DMSO, etilacetatu, acto rūgštimi arba etanolaminu. -

[0122] Laikoma, kad "farmaciškai priimtina druska" reiškia druską kuri išlaiko

[0123] konkrečių junginių laisvų rūgščių ir bazių biologinį efektyvumą ir kuri nėra biologiškai ar kaip nors kitaip nepageidautina. Farmaciškai priimtinų druskų _^pavyzdžiais yra sulfatai, pirosulfatai, rūgštieji sulfatai, sulfitai, rūgštieji sulfitai, * fosfatai, monohidrofosfatai, dihidrofosfatai, metafosfatai, pirofosfatai, chloridai, bromidai, jodidai, acetatai, propionatai, dekanoatai, kaprilatai, akrilatai, -j formiatai, izobutiratai, kaproatai, heptanoatai, propiolatai, oksalatai, malonatai, sukcinatai, suberatai, sebacatai, fumaratai, maleatai, butin-1,4-dioatai, heksin- ? 1,6-dioatai, benzoatai, chlorbenzoatai, metilbenzoatai, dinitrobenzoatai, hidroksibenzoatai, metoksibenzoatai, ftalatai, sulfonatai, ksilensulfonatai, fenilacetatai, fenilpropionatai, fenilbutiratai, citratai, laktatai, y-hidroksibutiratai, glikoliatai, tartratai, metansulfonatai, propansulfonatai, naftalen-1-sulfonatai, naftalen-2-sulfonatai ir mandelatai.

[0124] bet kokiu žinomu būdu, įskaitant laisvos bazės veikimą neorganine rūgštimi, tokia kaip vandenilio chlorido rūgštis, vandenilio bromido rūgštis, sulfato rūgštis, nitrato rūgštis, fosfato rūgštis ir panašios, arba organine rūgštimi, tokia kaip acto rūgštis, maleino rūgštis, gintaro rūgštis, migdolų rūgštis, fumaro rūgštis, malono rūgštis, piruvo rūgštis, oksalo rūgštis, glikolio rūgštis, salicilo rūgštis, piranozidilo rūgštis, tokia kaip glukurono rūgštis arba galakturono

[0125] rūgštis, alfa-hidroksirūgštis, tokia kaip citrinų rūgštis arba vyno rūgštis, aminorūgštis, tokia kaip asparto rūgštis arba glutamo rūgštis, aromatinė rūgštis, tokia kaip benzenkarboksirūgštis arba cinamono rūgštis, sulfonrūgštis, tokia kaip p-toluensulfonrūgštis arba etansuifonrūgštis, arba panašios.

[0126] Jeigu išradimo junginys yra rūgštis, norima druska gali būti pagaminama bet kokiu žinomu būdu, įskaitant laisvos rūgšties veikimą neorganine arba organine baze, kaip antai aminu (pirminiu, antriniu arba 1 tretiniu), šarminio metalo arba žemės šarminio metalo hidroksidu arba panašiais. Tinkamų druskų iliustraciniais pavyzdžiais yra organinės druskos gautos su aminorūgštimis, tokiomis kaip glicinas ir argininas, amoniaku, pirminiais, antriniais ir tretiniais aminais, ir ciklinais aminais, tokiais kaip piperidinas, morfolinas ir piperazinas, bei neorganinės druskos, kaip antai natrio, kalcio, kalio, magnio, mangano, geležies, vario, cinko, aliuminio ir ličio.

[0127] Junginių druskų arba solvatų, kurie yra kieti, atveju specialistai supras, kad išradimo junginiai, druskos arba solvatai gali egzistuoti skirtingose kristalinėse formose, ir yra laikoma, kad visas jas apima šis išradimas ir konkrečios formulės.

[0128] Išradimo junginiai gali egzistuoti kaip atskiri stereoizomerai, racematai ir/arba enantiomerų, ir/arba diasteromerų mišiniai. Laikoma, kad visi tokie atskiri stereoizomerai, racematai ir jų mišiniai patenka į plačiąją išradimo sferą. Tačiau yra pageidautina, kad išradimo junginiai būtų naudojami optiškai grynos formos.

[0129] Kaip paprastai yra aišku šios srities specialistams, optiškai grynas junginys yra toks, kuris yra enantiomeriškai grynas. Čia naudojamas terminas "optiškai grynas" yra suprantamas kaip reiškiantis junginį bent jau pakankamo aktyvumo. Pageidautina, kad atskiro enantiomero, kuris yra junginyje turinčiame norimą farmakologiškai gryną šio išradimo junginį, optinis kiekis sudarytų bent 90 % atskiro izomero (80 % enantiomerinis perteklius), geriau - bent 95 % (90 % e.p.), dar geriau - bent 97,5 % (95 % e.p.) ir visų geriausia - bent 99 % (98 % e.p.).

[0130] Geriau, kad I formulės (arba bet kurioje iš jos išvestų formulių) junginiuose R_i būtų H arba F.

[0131] Pageidautina, kad I formulės junginiuose Rg būtų neturinti pakaitų arba turinti pakaitų izoksazolilo grupė, kurioje geriausiais galimais pakaitais yra viena arba dvi metilo grupės ir/arba halogenai.

[0132] Ypatingai tinkami išradimo [gyvendinimo variantai yra aprašyti žemiau remiantis toliau duodama formule I-A":

[0133] Tinkamiausi šio išradimo junginiai apima peptidinius (panašius į peptidus) aukščiau duotos I-A" formulės junginius (A-1) - (A-8), kuriuose R_iyra H, Z yra H, Ry yra H, o R₂, R₆, R₇, Z₁ ir Rg yra tokie, kaip atitinkamai apibūdinta žemiau: (A-1) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z₁yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

(A-2) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z_^yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

(A-3) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R_s yra

R₇ yra C(CH₃)₃l Z₁ yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

(A-4) R₂ yra CH,CH₂C(0)NH_2l R₆ yra

R₇ yra C(CH3)3, Z₁yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

(A-5) R₂ yra

R6 yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Zi yra CO₂OH₂CH₃, o Rg yra

(A- 6)) R₂ yra CH 2CH2C( 0)NH2l R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yra C02 CH2 CH3i o Rg yra

(A-7) R₂ yra

R₆ yra

, R₇ yra C(CH₃)₃, Z₁ yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra H3C (A-8) R₂ yra

[0134] , R₇ yra CH(CH₃)_2l Z₁ yra

[0135] C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

[0136] n- N

[0137] h₃c

[0138] Tinkamiausi panašūs į peptidus I-A'" formulės junginiai dar apima žemiau duodamus junginius (A-9) - (A-13), kuriuose R₁ yra H, Z yra H, Z₁ yra C0₂CH₂CH₃, Ry yra CH₃, o R₂, R₆, R₇ ir R₉ yra tokie, kaip atitinkamai apibūdinta žemiau:

[0139] (A-9) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

R7 yra

o Rg yra

(A-10) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂| o

(A-11) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, Re yra

R₇ yra

, o Rg yra

(A-12) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

R₇ yra • CH₂CH(CH₃)₂, o Rg yra

(A-13) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

R7 yra

o Rg yra

[0140] Kiti tinkamiausi panašūs į peptidus junginiai apima tokius junginius:

[0141] Tinkamiausi šio išradimo ketometileninio tipo junginiai (B-1) - (B-4) yra a_Drašvti žemiau nurodant toliau duodama formule l-B":

[0142]

(B-1) R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

(B-2) R₂ yra

R6 yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H, Z! yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

(B-3) R2 yra

R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z ir Z_\kartu yra

kur karbonilo grupė yra cis-padėtyje vandenilio atžvilgiu atitinkanti R t I formulėje, o Rg yra

(B-4) R₂ yra

R6 yra

, R7 yra CH(CH3)2, Z yra H, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra H

[0143] Tinkamiausi šio išradimo depsipeptidinio tipo junginiai (C-1) ir (C-2) yra aprašyti žemiau nurodant toliau duodamą formulę l-C", kurioje R_i yra H:

[0144]

(C-1) Z yra H, R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH_2l R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)_2l Z₁ yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

(C-2) Z yra H, R₂ yra

, R_s yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

[0145] Gali būti pagaminti papildomi I formulės junginiai, pasirenkant kintamuosius iš tokių pakaitų: Ry = H arba CH₃; R₁ = H arba CH₃;

[0146] grupėje gali būti vienas, du arba trys pakaitai, nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš halogenų, metoksigrupės ir metilo;

[0147] R₇ = 2-metil-1 -propilas, 2-propilas, 2-metil-2-propilas, benzilas arba

[0148] Šis išradimas taip pat yra skirtas pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibavimo būdui, apimančiam šios proteazės sąlytį su efektyviu kiekiu I formulės junginio, jo farmaciškai priimtinos druskos, provaisto, farmaciškai aktyvaus metabolito arba solvato. Pavyzdžiui, pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumas gali būti inhibuojamas žinduolio audiniuose, skiriant jam I formulės junginį, jo farmaciškai priimtiną druską provaistą farmaciškai aktyvų metabolitą arba solvatą. Labiau pageidautina, kad šis būdas būtų skirtas rinovirusinės proteazės aktyvumo inhibavimui.

[0149] Laikoma, kad terminai "gydant" arba "gydymas" reiškia žinduolių, kaip antai žmogaus, ligos būklės bent jau sušvelninimą kuri yra palengvinama inhibuojant vienos arba daugiau pikornavirusinių 3C proteazių tokių kaip žmogaus rinoviruso, žmogaus polioviruso, žmogaus Koksaki viruso, encefalomiokardito viruso, meningito viruso, hepatito A viruso, aktyvumą ir apima: (a) profilaktinį žinduolio gydymą kai nustatyta, kad žinduolis yra linkęs į tokią ligą bet dar nėra diagnozuota, kad jis serga šia liga; (b) ligos būklės nuslopinimą ir/arba (c) ligos būklės dalinį arba pilną palengvinimą.

[0150] Išradimo junginių, kaip pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibitorių, aktyvumas gali būti išmatuotas bet kokiu tinkamu šioje srityje žinomu metodu, įskaitant in vivo ir in vitro testus. Tinkamo testo aktyvumui išmatuoti pavyzdys yra čia aprašytas priešvirusinis H1-HeLa ląstelių kultūros testas.

[0151] I formulės junginių ir jų farmaciškai priimtinų provaistų druskų, aktyvių metabolitų ir solvatų įvedimas gali būti vykdomas bet kokiu priimtu specialistams žinomu vartojimo būdu. Tinkamų vartojimo būdų pavyzdžiais yra peroralinis, nosinis, parenterinis, vietinis, transderminis ir rektalinis.

[0152] I formulės išradimo junginys arba jo farmaciškai priimtina druska, provaistas, aktyvus metabolitas arba solvatas gali būti vartojami farmacinės kompozicijos pavidalu bet kokia farmacine forma, kurią specialistai pripažįsta tinkama. Tinkamomis farmacinėmis formomis yra kietos, pusiau kietos, skystos arba liofilizuotos vaisto formos, kaip antai tabletės, milteliai, kapsulės, žvakutės, suspensijos, liposomos ir aerozoliai. Šio išradimo farmacinėse kompozicijose taip pat gali būti tinkamų pagalbinių medžiagų, skiediklių, tirpiklių ir nešiklių, o taip pat ir kitų farmaciškai aktyvių agentų priklausomai nuo to, kam jas numatoma panaudoti. Tinkamiausiuose įgyvendinimo variantuose šio išradimo farmacinės kompozicijos yra skirtos intranosiniam vartojimui suspensijų forma.

[0153] Priimtini tinkamų farmacinių kompozicijų farmacinių formų pagaminimo būdai yar žinomi arba juos gali įprastais būdais nustatyti šios srities specialistas. Pavyzdžiui, farmaciniai preparatai gali būti pagaminami pagal įprastas farmacinės chemijos metodikas, į kurias įeina stadijos, tokios kaip sumaišymas, granuliavimas ir presavimas, jeigu reikia tablečių formos, arba sumaišymas, užpildymas ir ingredientų ištirpinimas, kurių reikia norint gauti norimą produktą, skirtą vartoti peroraliniu, parenteriniu, vietiniu, intravaginaliniu, intranosiniu, intrabronchiniu, intraokuliniu, intraausiniu ir/arba rektaliniu būdu.

[0154] Šiose farmacinėse kompozicijose gali būti naudojami kieti arba skysti farmaciškai priimtini nešikliai, skiedikliai, tirpikliai arba pagalbinės medžiagos. Iliustraciniais kietais nešikliais yra krakmolas, laktozė, kalcio sulfato dihidratas, terra alba, sacharozė, talkas, želatina, pektinas, gumiarabikas,$ magnio stearatas ir stearino rūgštis. Iliustraciniais skystais nešikliais yra * sirupas, žemės riešutų aliejus, alyvų aliejus, valgomosios druskos tirpalas ir _£vanduo. Nešikliuose arba skiedikliuose gali būti tinkama prolonguotą išskyrimą duodanti medžiaga, kaip antai glicerilmonostearatas arba glicerildistearatas, vieni arba su vašku. Kai naudojamas skystas nešiklis,

[0155] preparatai gali būti sirupo, eleksyro, emulsijos, skystos želatininės kapsulės, sterilaus injekcijoms skirto skysčio (pvz. tirpalo) arba nevandeninės arba vandeninės skystos suspensijos formų.

[0156] Farmacinės kompozicijos dozė turi veikliojo junginio (t.y. I formulės junginio arba jo farmaciškai priimtinos druskos, provaisto, veikliojo metabolito arba solvato) bent jau terapiškai efektyvų kiekį, ir geriausia, kai jis yra sudarytas iš vieno arba daugiau farmacinių dozuotų vienetų. Pasirinktą dozę pacientas-žinduolis, pavyzdžiui žmogus, reikalingas gydymo, kuriame tarpininkauja pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibavimas, gali suvartoti bet kokiu žinomu arba tinkamu dozės vartojimo būdu, įskaitant vietinį, pavyzdžiui, kaip tepalą arba kremą peroralinį, rektalinį, pavyzdžiui,

[0157] kaip žvakutę, parenterinį injekcijos būdu arba nepertraukiamą kaip

[0158] intravaginalinę, intranosinę, intrabronchinę, intraausinę arba intraokulinę infuziją.

[0159] Laikoma, kad "terapiškai efektyvus kiekis" reiškia kiekį išradimo junginio, kurio, jeigu jis įvedamas šio junginio reikalingam žinduoliui, pakanka gydymui ligos, palengvinamos inhibuojant vienos arba daugiau pikornavirusinių 3C proteazių, tokių kaip žmogaus rinoviruso, žmogaus polioviruso, žmogaus Koksaki viruso, encefalomiokardito viruso, meningito viruso, hepatito A viruso, aktyvumą. Šio išradimo duoto junginio kiekis, kuris bus terapiškai efektyvus, keisis priklausomai nuo faktorių, tokių kaip konkretus junginys, liga ir jos sunkumo laipsnis, gydomo žinduolio identitetas, ir šį kiekį paprastai nustato specialistas.

[0160] Iliustracijos tikslams šio išradimo junginių nosinio vartojifrio vaisto forma rinovirusinių infekcijų gydymui gali būti pagaminama toliau aprašomu būdu, kur visi procentai yra masės/masės procentai, o suspensija gaminama grynintame vandenyje. I formulės junginys yra mikronizuojamas norint sumažinti dalelių dydį taip, kad D₉₀ < 10 _Įim. Suspensija pagaminama taip, kad galutinė koncentracija būtų nuo maždaug 0,01 % iki maždaug 2 % veikliojo junginio, geriau nuo maždaug 0,2 % iki 2 %. Į ją gali būti įdėta apsaugančios medžiagos, pasirinktos iš šioje srityje žinomų medžiagų pavyzdžiui, benzalkonio chlorido/EDTA, kad atitinkama galutinė koncentracija būtų, pvz., maždaug 0,02%/0,01%. Taip pat gali būti įdėta suspenduojančio agento, tokio kaip mikrokristalinės celiuliozės (galutinė koncentracija maždaug 1 % - 1,5 %, geriau apie 1,2 %) ir natrio karboksimetilceliuliozės (galutinė koncentracija maždaug 0,1 % - 0,2 %, geriausia apie 0,13 %) mišinys. Gali būti įdėta paviršinio aktyvumo medžiagos, tokios kaip polisorbatas 80, kurio galutinė koncantracija yra nuo maždaug 0,05 % iki 0,2 %, geriausia apie 0,1 %. Taip pat gali būti įdėta toniškumo modifikatoriaus, tokio kaip dekstrozė, padarant jo galutinę koncentraciją maždaug nuo 4 % iki 6 %, geriausia apie 5 %. Galutinio tirpalo pH sureguliuojamas iki fiziologinio pH intervalo, pvz. 4-6, naudojant netoksišką rūgštį ir/arba bazę, kaip antai HCI ir/arba NaOH.

[0161] Pavyzdinė šio išradimo 17 pavyzdžio junginio nosinio vartojimo vaisto forma turi tokią sudėtį, kur visi procentai yra masės/masės procentai, o suspensija yra pagaminta grynintame vandenyje.

[0162] Šio išradimo (I) formulės junginius yra patogu gaminti šio išradimo būdais, įskaitant toliau aprašytus bendruosius sintezės būdus. Kiekviename iš šių bendrųjų būdų R_i, R₂, R₃, R₅, Re, R₇, R_s, R₉, Ry, Z ir Z₁ yra tokie, kaip apibūdinta aukščiau, ir yra naudojamas R₄ (kaip sutrumpinimas), kuris reiškia:

[0163]

kur R₇, R_s ir R₉ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau. ?: I bendrajame sintezės būde, tinkančiame panašių į peptidus I-A formulės junginių sintezei, aminorūgštis A, kurioje Pi yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, leidžiama į amido sudarymo reakciją su aminoalkoholiu (arba jo druska) B, gaunant amidą C. Po to junginys C yra deblokuojamas gaunant laisvą aminą (arba jo druską) D. Aminas D ir aminorūgštis E, kurioje ... gali būti arba R₄ grupė, arba azotą blokuojanti grupė (P₂) yra leidžiami [ ryšio sudarymo reakciją duodančią junginį F. Junginys F yra oksidinamas į tarpinį junginį G, kuris po to transformuojamas į nesotų produktą H. Jeigu aminorūgštyje E arba bet kurioje iš R (R₁-R₉) grupių ir/arba Ry, ir/arba Z, ir/arba Z₁ grupių buvo panaudota blokuojanti grupė, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

[0164] Kitas tarpinio junginio F pagaminimo būdas yra aprašomas taip. Aminorūgštis E ir aminorūgštis (arba jos druska) I, kurioje P₃ yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė, yra leidžiamos į ryšio sudarymo reakciją gaunant tarpinį junginį J. J molekulė yra deblokuojama, gaunant laisvą karboksirūgštį K, kuri po to leidžiama į amido sudarymo reakciją su aminoalkoholiu (arba jo druska) B, gaunant tarpinį junginį F.

[0165] II bendrajame būde, kuris taip pat yra tinkamas panašiems į peptidus I-A formulės junginiams sintezuoti, aminorūgštis L, kurioje Pi yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama į karbonilinį darinį M, kur "Lv" yra atskylanti grupė. Junginys M yra leidžiamas į reakciją kurioje Lv yra pakeičiama R₁, gaunant darinį N. Po to darinys N yra transformuojamas į nesotų produktą O. Nesotus junginys O yra deblokuojamas ir gaunamas laisvas aminas (arba jo druska) P, arba modifikuojamas Z ir Z₁ grupėse, pirmiausia gaunant O', po to deblokuojant ir gaunant P. Po to tarpinis junginys P yra leidžiamas į amido sudarymo reakciją su karboksirūgštimi K, gaunant galutinį produktą H. Jeigu bet kurioje iš R (R₁-R₉) grupių ir/arba Ry, ir/arba Z, ir/arba Z₁ grupių buvo panaudotos blokuojančios grupės, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

[0166] Kitas tarpinio junginio N pagaminimo būdas yra toks kaip aprašyta žemiau. Junginys M yra leidžiamas į reakciją kurioje "Lv" yra redukuojama, blokuojant aminoalkoholį Q. Po to tarpinis junginys Q oksidinamas iki darinio

[0167] N.

[0168]

III bendrajame būde, kuris taip pat yra tinkamas panašiems [ peptidus I-A formulės junginiams sintezuoti, aminorūgštis L, kurioje Pi yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama į karbonilinį darinį M, kur "Lv" yra atskylanti grupė. Junginys M yra deblokuojamas, gaunant laisvą aminą (arba jo druską) R, kuris po to leidžiamas į amido sudarymo reakciją su karboksirūgštimi K, gaunant tarpinį produktą. ,S. Po to junginys S arba tiesiogiai paverčiamas karboniliniu tarpiniu junginiu G, arba pirmiausia laipsniškai redukuojamas iki alkoholio F, kuris oksiduojamas iki G. Junginys G leidžiamas į reakciją kurioje gaunamas nesotus galutinis produktas H. Jeigu bet kurioje iš R (R₁-R₉) grupių ir/arba Ry, ir/arba Z, ir/arba Z₁ grupių buvo panaudotos blokuojančios grupės, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

[0169] IV bendrajame būde, kuris yra tinkamas panašiems į peptidus I-A formulės junginiams sintezuoti, laisvas aminas (arba jo druska) P, pagamintas iš tarpinio junginio O kaip aprašyta II bendrajame būde, yra paverčiamas amidu T, veikiant aminorūgštimi A, kur Pt yra atitinkama azotą blokuojanti grupė. Junginys T yra toliau deblokuojamas iki laisvo amino (arba jo druskos) U, kuris po to paverčiamas į H veikiant aminorūgštimi E. Jeigu bet kurioje iš R (R₁-R₉) grupių ir/arba Ry, ir/arba Z, ir/arba Z₁ grupių buvo panaudotos blokuojančios grupės, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

[0170] V bendrajame būde, kuris yra tinkamas ketometileninių l-B formulės junginių sintezei, optiškai aktyvus laktonas AA, kuriame P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, o R₅ ir R_s yra H (kuris gali būti pagamintas pagal žemiau aprašytą metodą ir įvairius literatūroje aprašytus metodus, įskaitant: (a) Herold et al., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178; (b) Bradbury et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3845; (c) Bradbury et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 2335; (d) Wuts et al., J. Org. Chem. 1992, 57, 6696; (e) Jonės et al., J. Org. Chem. 1993, 58, 2286; (f) Pegorier et all., Tetrahedron Lett. 1995, 36, 2753; ir (g) Dondoni et al., J. Org. Chem. 1995, 60, 7927), yra transformuojamas pagal dviejų stadijų metodiką (bazinė hidrolizė ir po jos einantis oksidinimas) į karboksirūgštį BB. Ši medžiaga neišskiriama, bet toliau leidžiama į amidinio ryšio sudarymo reakciją su aminu (arba jo druska) P, gaunant galutinį produktą CC. Blokuojanti grupė P₄ kartu su kitomis papildomomis blokuojančiomis grupėmis, kurios buvo panaudotos bet kurioje iš R (Ri, R₂, R₃, R₆ ir/arba R₇) grupių ir/arba Z, ir/arba Z₁ grupių, yra po to deblokuojama ir/arba toliau modifikuojama gaunant deblokuotą arba modifikuotą CC.

[0171] Laktonas AA gali būti pagamintas optiškai aktyvios formos pagal toliau duodamą VI bendrąjį būdą (žr.: Herold et al., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178; Bradbury et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3845; ir Bradbury et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 2335). y,8-Nesoti karboksirūgštis DD, kurioje yra R₇, yra paverčiama atitinkamu chloranhidridu (neparodyta). Šis chloranhidridas yra leidžiamas į amidinį ryšį sudarančią reakciją su chiraliniu aminu arba chiraliniu oksazolidonu, gaunant darinį EE (kuriame Xi yra chiralinis aminas arba chiralinis oksazolidonas). Po to junginys EE yra deprotonuojamas ir susidaręs enoliatas diastereoselektyviai alkilinamas R₆ atitinkančiu elektrofilu, gaunant junginį FF, kuriame R₅ yra H. Po to ši medžiaga leidžiama į halogenlaktonizacijos reakciją gaunant halogen-laktoną GG, kuriame R₅ ir R_syra H, o "hal" yra Br arba I. Po to halogen-laktonas GG yra paverčiamas azidu HH, o tada ši medžiaga paverčiama laktonu AA, kuriame P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė.

y,5-Nesoti karboksirūgštis DD gali būti pagaminta pagal toliau duodamą VII bendrąjį būdą (žr.: Herold etai., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178). Aldehidas II, kuriame yra R₇, yra kopuliuojamas su vinilmagnio bromidu ir gaunamas alkoholis JJ. Po to alkoholis JJ transformuojamas į y,6-nesočią karboksirūgštį DD pagal trijų stadijų metodiką taip: (I) veikiant dietilmalonatu ir katalitiniu kiekiu Ti(OEt)₄ 160 °C temperatūroje 1 valandą (ii) kaitinant 190 °C temperatūroje 4 valandas ir (iii) hidrolizuojant etanoliniu KOH virinant su grįžtamu šaldytuvu.

[0172] Karboksirūgštis BB gali būti pagaminta pagal VIII bendrąjį būdą (žr. Hoffman et al., Tetrahedron, 1997, 53, 7119). Aminorūgštis KK, kurioje yra R₇ir kurioje P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama p-ketoesteriu LL. Junginys LL yra deprotonuojamas ir susidaręs anijonas yra kondensuojamas su triflatu MM, kuriame yra R₆. Tokiu būdu gautas kopuliavimo produktas yra veikiamas trifluoracto rūgštimi, gaunant ketoesterį NN, o ši medžiaga po to hidrolizuojama ir gaunama karboksirūgštis BB. Jeigu bazinė hidrolizė duoda epimerizaciją ketoesteris NN gali būti peresterintas (alilo alkoholis, Ti(0_/-Pr)₄) ir po to deblokuotas neutraliomis sąlygomis (Pd(PPh₃)₄, morfolinas) ir gaunama karboksirūgštis BB. Triflatas MM savo ruožtu gali būti pagamintas iš atitinkamo alkoholio, veikiant trifluormetansulfonanhidridu ir 2,6-lutidinu.

[0173]

Laktonas AA taip pat gali būti pagaminamas pagal IX bendrąjį būdą (žr.: Askin et al., J. Org. Chem. 1992, 57, 2771; ir McVVilliams et ai., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11970). Aminorūgštis KK, kurioje yra R₇ ir P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama epoksidu 00 (vienas diastereomeras) pagal Luly et al. J. Org. Chem. 1987, 52, 1487 aprašytą būdą. Epoksidas 00 yra kondensuojamas su anijonu, gautu iš junginio PP, kuriame yra R₆ ir kuriame X₂ yra chiralinė pagalbinė grupė (įskaitant (1S,2R)-1-aminoindan-2-olio acetonidą), ir gaunamas kopuliavimo produktas QQ. Po to ši medžiaga ciklizuojama rūgštinėse sąlygose, gaunant laktoną AA. Junginys PP gali būti pagaminamas iš atitinkamos karboksirūgšties (neparodyta) pagal Askin et al., J. Org. Chem. 1992, 57, 2771 aprašytą būdą.

[0174] X bendrasis būdas, kuris yra tinkamas depsipeptidiniams l-C formulės junginiams pagaminti, iliustruoja tarpinio junginio TT sintezės būdą.

[0175] Aminorūgštis E ir alkoholis RR, kuriame P₅ yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė, yra leidžiami į esterinį ryšį sudarančią reakciją ir gaunamas tarpinis junginys SS. SS molekulė yra deblokuojama, gaunant laisvą karboksirūgštį TT, kuri gali būti naudojama vietoj karboksirūgšties K bet kuriame iš aukščiau aprašytų bendrųjų sintezės būdų.

[0176] i

[0177] Įvairiems šio išradimo junginiams pagaminti taip pat gali būti naudojami toliau duodami specifiniai būdai.

[0178] I specifiniame būde aprašomas specifinio tarpinio junginio 01, kuris gali būti naudojamas kaip tarpinis produktas O aukščiau aprašytuose bendruose būduose, pagaminimas. Taigi, hidrolizuojamas esteris A1 (pagamintas pagal Chida et al., J. chem. Soc. Chem. Commun. 1992, 1064 aprašymą) ir gaunama rūgštis B1, kuri savo ruožtu transformuojama į oksazolidinoną C1. Po to junginys C1 yra deprotonuojamas ir susidaręs enoliatas yra diastereoselektyviai alkilinamas gaunant alilinį tarpinį junginį D1. Ši medžiaga yra oksidinama ozonolizės būdu, ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į redukcinio amininimo reakciją gaunant laktamą E1. Po to rūgštimis katalizuojama E1 metanolizė duoda alkoholį F1. Šis tarpinis junginys yra oksidinamas Svvern'o metodu (arba kitose tinkamose oksidinimo srlygose) ir gaunamas aldehidas (neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją, gaunant specifinį tarpinį junginį 01.

[0179]

II specifiniame būde aprašomas specifinio tarpinio junginio 02, kuris gali būti naudojamas kaip tarpinis produktas O aukščiau aprašytuose bendruose būduose, pagaminimas. Alilinis tarpinis junginys D1 yra leidžiamas į hidroborinimo/oksidinimo reakcijų seką ir gaunamas pirminis alkoholis (neparodytas). Ši medžiaga yra oksidinama Svvem'o metodu (arba kitose tinkamose oksidinimo sąlygose) ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į redukcinio amininimo reakciją gaunant laktamąGI. Po to rūgščių katalizuojama G1 metanolizė duoda alkoholį H1. Šis tarpinis junginys yra oksidinamas Svvern'o metodu (arba kitose tinkamose oksidinimo sąlygose) ir gaunamas aldehidas (neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją ir gaunamas tarpinis junginys 02.

[0180] Aukščiau aprašytuose bendruosiuose būduose, norint pakeisti pakaito R₂ padėtį, vietoj tarpinio junginio O gali būti naudojami tarpiniai junginiai P1, P2 ir P3.

[0181]

Žemiau yra aprašyta tarpinio junginio P1 sintezė. Tarpinis junginys C1 (aprašytas aukščiau) yra deprotonuojamas ir susidarantis enoliatas gaudomas atitinkamu disulfidu (simetriniu arba mišriu), gaunant sulfidą p1 (P yra tinkama deguonį blokuojanti grupė). Po to atskeliama deguonį blokuojanti grupė ir gaunamas alkoholis p2. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Swern'o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sąlygas) ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į redukcinio amininimo reakciją duodančią laktamą p3. Po to rūgščių katalizuojama p3 metanolizė duoda alkoholį p4. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Svvern'o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sflygas) ir gaunamas aldehidas (taip pat neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją gaunant tarpinį junginį p5. Šis junginys gali būti naudojamas vietoj tarpinio junginio O aukščiau aprašytuose bendruosiuose sintezės būduose; kitu atveju, gali būti pašalinama laktamo blokavimo grupė ir gaunamas tarpinis junginys P1.

[0182] Norint susintezuoti tarpinį junginį P2, tarpinis junginys C1 yra..--deprotonuojarnas ir susidarantis enoliatas yra .gaudomas atitinkamu elektrofilinio deguonies šaltiniu (pvz. oksaziridinu), gaunant alkoholį p6. Šis tarpinis junginys yra alkilinamas tinkamą funkcinę grupę turinčiu alkilhalogenidu arba triflatu ir gaunamas eteris p7 (P yra atitinkama azotą blokuojanti grupė). Po to azotą blokuojanti grupė yra atskeliama ir gautas aminas (neparodytas) yra leidžiamas į ciklizaciją gaunant laktamą p8. Po to rūgščių katalizuojama p8 metanolizė duoda alkoholį p9. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Svvern'o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sąlygas) ir gaunamas aldehidas (taip pat neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją gaunant tarpinį junginį P2.

[0183] Dabar bus aprašyta specifinio tarpinio junginio P3 sintezė. Tarpinis junginys D1 (aprašytas aukščiau) yra ozonuojamas ir gautas aldehidas (neparodytas) yra redukuojamas į atitinkamą alkoholį (taip pat neparodytas). Po to šis tarpinis junginys yra blokuojamas, gaunant junginį p10 (Pi yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė). p10 esanti imidinė funkcinė grupė yra hidrolizuojama iki karboksirūgšties p11, ir šis tarpinis junginys yra kopuliuojamas su tinkamai blokuotu hidroksilamino dariniu, gaunant amidą p12 (P₂ yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė, kuri yra stabili Pi atskėlimo sąlygose). Po to atskeliama P_^ blokuojanti grupė, ir gautas alkoholis ( p13) yra paverčiamas atitinkama atskylančia grupe (halogenidu arba triflatu, neparodyta). Tada atskeliama P₂ blokuojanti grupė, ir gauta hidroksamo rūgštis ciklizuojama gaunant tarpinį junginį p14. Po to rūgščių katalizuojama p14 metanolizė duoda alkoholį p15. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Svvern'o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sąlygas) ir gaunamas aldehidas (neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją gaunant tarpinį junginį P3.

[0184] III specifiniame būde aprašoma tarpinių junginių Q1, Q2 ir Q3, kurie gali būti naudojami aukščiau aprašytuose bendruosiuose būduose, _"pagaminimas. Žinomas junginys 11 yra transformuojamas į literatūroje aprašytą molekulę J1 pagal modifikuotą publikuotą metodiką (Ikuta et al., J.

[0185] Med. Chem. 1987, vol. 30, p. 1995). Nepriklausomai nuo to, yra blokuojamas aminorūgšties esteris K1, gaunant sililo esterį L1. Šis esteris yra redukuojamas DIBAL (arba naudojant kitas tinkamas redukcijos sąlygas), ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją

[0186] su tarpiniu junginiu J1, gaunant M1. Po to M1 sililo deblokavimas duoda alkoholį N1. Šis tarpinis junginys yra leidžiamas į įvairias hidrinimo sąlygas ir gaunami tarpiniai junginiai Q1, Q2 ir Q3. Šie tarpiniai junginiai gali būti paverčiami į tarpinius junginius, analogiškus tarpiniam junginiui 01 (žr. aukščiau aprašytą I specifinį būdą) oksidinant, o po to olefininant.

[0187]

[0188] Specialistas turėtų suprasti, kad įvairūs šio išradimo junginiai gali būti pagaminami pagal aukščiau aprašytus bendruosius ir specifinius būdus bei šioje srityje žinomas metodikas, įskaitant čia cituojamus literatūros šaltinius, kurių aprašymai yra pridedami. Be to, specialistas gali pagaminti įvairius šio išradimo junginius pagal toliau aprašomus pavyzdžius arba panaudodamas čia aprašytos sintezės įprastas modifikacijas.

[0189] Toliau yra duodami tinkamiausių I formulės junginių pavyzdžiai. Šiuose pavyzdžiuose duodamų junginių struktūros buvo patvirtintos vienu arba daugiau iš šių metodų: protonų magnetinio rezonanso spektroskopija, infraraudonąja spektroskopija, elementine mikroanalize, masių spektrometrija, plonasluoksne chromatografija, lydymo temperatūros nustatymu ir virimo temperatūros nustatymu. Jeigu yra neatitikimų tarp parodyto junginio duotos struktūrinės formulės ir jo pateikto cheminio pavadinimo, reikia taikyti struktūrinę formulę.

[0190] Protonų magnetinio rezonanso (¹H BMR) spektrai buvo išmatuoti naudojant Varian UNITY plus 300 spektrometrą "dirbantį esant 300 megahercų

[0191] (MHz) stiprumo laukui. Cheminiai poslinkiai yra duoti milijoninėmis dalimis (m.d., 8) mažėjančio lauko kryptimi nuo vidinio standarto - tetrametilsilano. Kitu atveju, ¹H BMR spektrai standartizuoti pagal likusių protoninių tirpiklių signalus, kaip antai: CHCb = 7,26 m.d.; DMSO = 2,49 m.d.; C₆HD₅ = 7,15 m.d. Smailių multipletiškumas yra pažymėtas taip: s = singletas, d = dubletas, dd = dvigubas dubletas; t = tripletas; kv = kvartetas; pl = platus rezonansas ir m = multipletas. Sukinio-sukinio sąveikos konstantos yra duotos hercais. Infraraudonieji sugerties (IR) spektrai buvo gauti naudojant Perkin-Elmer 1600 serijos FTIR spektrometrą. Elementine analizė buvo atlikta Atlantic Microlab Inc. (Norcross, GA) ir davė rezultatus nurodytiems elementams ±0,4 % ribose nuo teorinių reikšmių. Sparčioji kolonėlių chromatografija buvo vykdoma naudojant silikagelį 60 (Merck Art 9385). Analitinė plonasluoksnė chromatografija (TLC) buvo vykdoma naudojant padengtas Silica 60 F₂₅₄(Merck Art 5719) plokšteles. Lydymosi temperatūros (sutrumpinta lyd. temp.) buvo nustatytos Met-Temp prietaisu ir nekoreguotos. Visos reakcijos buvo vykdomos uždarose kolbose naudojant šiek tiek teigiamą argono slėgį, jeigu nenurodyta kitaip. Visi prekybiniai reagentai buvo naudoti tokie, kokie gauti iš atitinkamų jų tiekėjų, išskyrus tai, kad: prieš naudojant tetrahidrofuranas (THF) buvo nudistiliuotas nuo natrio benzofenonketilo; prieš naudojant dichlormetanas (CH₂CI₂) buvo nudistiliuotas nuo kalcio hidrido; bevandenis

[0192] ličio chloridas buvo pagamintas kaitinant 110 °C temperatūroje vakuume per naktį.

[0193] Čia naudojami tokie sutrumpinimai: Et₂Ū reiškia dietilo eterį; DMF reiškia N.N-dimetilformamidą; DMSO reiškia dimetilsulfoksidą; o MTBE reiškia tret-butilo-metilo eterį. Kiti sutrumpinimai yra: CH₃OH (metanolis), EtOH (etanolis), EtOAc (etilacetatas), DME (etilenglikolio dimetilo eteris), Ac (acetilas), Me (metilas), Ph (fenilas), Tr (trifenilmetilas), Cbz (benziloksikarbonilas), Boc (tret-butoksikarbonilas), TFA (trifluoracto rūgštis), DIEA (N.N-diizopropiletilaminas), DBU (1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-enas), HOBt (1-hidroksibenzotriazolo hidratas), PyBOP (benzotriazol-1-il-oksi-tris-pirolidinofosfonio heksafluorfosfatas), HATU (0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio heksafluorfosfatas), EDC (1 -(3-dimetilaminopropiI)-3-etilkarbodiimido hidrochloridas), DCC (dicikloheksilkarbodiimidas), DDQ (2,3-dichlor-5,6-diciano-1,4-benzochinonas), DMAP (4-dimetilaminopiridinas), Gln (glutaminas), Leu- (leucinas), Phe (fenilalaninas), Vai (valinas), His (histidinas), 1-Naphth (1-naftilalaninas), 2-Naphth (2-naftilalaninas), a-t-Butyl-Gly (tret-butilglicinas), (S)-Pyrrol-Ala ((2S,3'S)-2-amino-3-(2_,-oksopirolidin-3'-il)propiono rūgštis) ir (S)-Piper-Ala ((2S,3'S)-2-amino-3-(2'-oksopiperidin-3'-il)propiono rūgštis). Be to, "L" reiškia gamtines aminorūgštis.

[0194] Kai kurių tarpinių junginių ir produktų identifikavimui yra naudojama supaprastinta pavadinimų sistema, panaudojant aminorūgščių sutrumpinimus. Sudarant junginių pavadinimus, kursyvu pažymėtas aminorūgšties sutrumpinimas reiškia modifikacijas liekanos C-gale, kur yra naudojami tokie pažymėjimai: (1) akrilo rūgšties esteriai yra vadinami "E" (trans) propenoatais; (2) pakaitų turintys 3-metilen-dihidrofuran-2-onai yra vadinami "E" (trans) 2-(a-vinil_^y-butirolaktonais); ir (3) 5-vinilizoksazolai yra vadinami "E" (trans) propenizoksazolais. Be to, terminologija "AA_iYįCOChfeH^" rodo, kad bet kokioje peptidinėje sekoje dvi aminorūgštys (AA_i ir AA₂), kurios paprastai yra sujungtos amidiniu ryšiu, yra pakeistos ketometilenine dipeptidine izosterine liekana. Terminologija "AA₁-NCH₃-AA₂" rodo, kad bet kokioje peptidinėje sekoje amidinis ryšys, kuris paprastai jungia dvi aminorūgštis (AA₁ ir AA₂), yra pakeistas N-metil-amidiniu ryšiu. Terminologija "AA^O-AAz rodo, kad bet

[0195] 47

[0196] kokioje peptidinėje sekoje amidinis ryšys, kuris paprastai jungia dvi aminorūgštis (Mi ir AA₂), yra pakeistas esteriniu ryšiu.

[0197] 1 pavyzdys: Palyginamojo junginio # 1 - 5-( 3'( Cbz- L- Leu- L- Phe- L- G/ n)- E-propen) izoksazo! o- gavimas

[0198]

[0199] į acetilchlorido (0,25 ml, 3,52 mmol, 7,0 ekv.) tirpalą CH₃OH (5 ml) ; pridedama Cbz-L-(Tr-Gln) (0,26 g, 0,50 mmol, 1 ekv.) ir maišoma 23 °C temperatūroje 1 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje, liekana ištirpinama CH₂CI₂ (100 ml) ir plaunama vandeniu (100 ml), sočiu NaHCŪ₃(100 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas Na2SC>4 ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (20 % EtOAc heksanuose), gaunamas Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe (0,23 g, 84 % išeiga), kuris yra balta kieta medžiaga; lyd. temp. = 139-140 °C; IR (cm'¹) 1742, 1207; 1H BMR (DMSO-d₆) 5 1,16 (t, 1 H, J = 7,0),

[0200] 1,77 (m, 1H), 1,97 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 4,99 (m, 1H), 5,03 (s, 2H), 7,02-7,55

[0201] (m, 20H), 7,69 (d, 1H, J = 7,7), 8,59 (s, 1H); analizė (C₃₃H₃₂N₂O₅) C, H, N.

[0202] (30 ml) pridedama ličio chlorido (0,24 g, 5,66 mmol, 2,0 ekv.) ir mišinys maišomas 23 °C temperatūroje tol, kol visos kietos medžiagos ištirpsta (10 min.). Pridedama natrio borhidrido (0,21 g, 5,55 mmol, 2,0 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas per naktį 23 °C temperatūroje. Tirpikliai nugarinami sumažintame slėgyje, liekana ištirpinama vandenyje (50 ml) ir parūgštinama

[0203] 10 % HCI iki pH 2-3. Produktas ekstrahuojamas EtOAc (50 ml) ir prieš džiovinant MgSCU organinis sluoksnis plaunamas vandeniu (50 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (50 ml). Organinis sluoksnis sukoncentruojamas, ir liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 20->50 % EtAc benzene) ir gaunamas Cbz-L-(Tr-glutaminolis)

[0204] (1,02 g, 72 % išeiga), kuris yra balta stiklo pavidalo medžiaga: lyd. temp = 66-70 °C; ; IR (cm^*1) 3318, 1699, 1510, 1240; ¹H BMR (DMSO-cfe) 8 1,40 (m, 1H), 1,72 (m, 1H), 2,26 (m, 2H), 3,17-3,50 (m, 3H), 4,64 (t, 1H, J = 5,0), 5,00 (s, 2H), 7,00-7,40 (m, 20H), 6,96 (d, 1H, J = 8,5), 8,54 (s, 1 H);, analizė

[0205] Cbz-L-(Tr-glutaminolio) (1,93 g, 3,79 mmol) suspensija CH₃OH (25 ml) ir Pd/C (10 %, 0,19 g) maišoma vandenilio atmosferoje (iš baliono) 4 valandas, po to nufiltruojama per celito sluoksnį. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir gaunamas L-(Tr-glutaminolis), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga (1,38 g, 98 % išeiga): lyd. temp.= 191-193 °C; IR (cm"¹) 3255 (pl), 1642, 1527; 1H BMR (DMSO-cfe) 8 1,29 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 2,29 (m, 2H), 3,08 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,38 (s, pl., 2H), 4,43 (s, pl„ 1H), 7,14-7,28 (m,15 H), 8,62 (s, 1H).

[0206] [ Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,41 g, 1,0 mmol, 0,95 ekv.) tirpalą THF (10 ml) pridedama karbonildiimidazolo (0,17 g, 1,05 mmol, 1,0 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 1 vai. Po to sudedamas L-(Tr-glutaminolis) (0,39 g, 1,05 mmol, 1 ekv.) ir gautas tirpalas maišomas per naktį. Lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje, o liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 2->4 % CH₃OH CHCI₃) ir gaunamas Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-glutaminolis) (0,47 g, 62 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: lyd. temp. = 92-95 °C; 70 °C; IR (cm"¹) 3302, 1657, 1520, 1238; ¹H BMR (DMSO-d_e) 8 0,79 (t, 6H, J = 7,0), 1,30 (m, 2H), 1,44 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 2,82 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,63 (m,

[0207] 1H), 3,95 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,65 (t, 1H, J = 5,0), 4,96 (d, 1H, J = 13,0), 5,02 (d, 1H, J= 13,0), 7,07-7,33 (m, 25H), 7,42 (d, 1H, J = 8,0), 7,66 (d, 1H, J

[0208] [ Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-glutaminolio) (0,58 g, 0,75 mmol, 1 ekv.) tirpalą DMSO (7,5 > ml) 23 °C temperatūroje pridedama o-jodoksibenzenkarboksi-rūgšties (0,63 g, 2,25 mmol, 3,0 ekv.). Pamaišius 2 valandas, numažintame slėgyje nugarinamas DMSO. Liekana, praskiedžiama du kartus CH₂CI₂ ir nugarinamas tirpiklis likusiam DMSO pašalinti. Liekana praskiedžiama EtOAc (30 ml) ir nufiltruojama, o filtratas plaunamas 5 % Na₂S₂0₃/5% NaHC0₃ tirpalu (30 ml), vandeniu (30 ml) ir sočiu NaCI tirpalu

[0209] (30 ml), po to džiovinamas Na₂S0₄. Sumažintame slėgyje nugarinus tirpiklį, gaunamas Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H (0,53 g, 92 % išeiga), kuris yra

[0210] balta stiklo pavidalo medžiaga; ji buvo naudojamma tuoj pat po pagaminimo ų be papildomo gryninimo: ¹H BMR (DMSO-d_e) 8 0,79 (m, 6H), 1,00-1,98 (m, ._%■ 5H), 2,27 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 3,02 (m, 1H), 3,98 (m, 2H), 4,58 (m, 1H),$ 4,99 (s, 2H), 7,14-7,32 (m, 25H), 7,39 (d, 1H, J = 8,1), 7,97 (d, 1H, J = 8,5), 8,38 (d, 1 H, J = 8,0), 8,60 (s, 1 H), 9,20 (s, 1 H).

[0211] Į izoksazol-5-ilmetiltrifenilfosfonio bromido (0,222 g, 0,525 mmol, 1,1 ekv.) suspensiją THF (20 ml) 0 °C temperatūroje įpilama,^(<(>13)381)2 tirpalo (0,95 ml 0,5 M tirpalo THF, 0,477 mmol, 1,0 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 minučių. Įpilama Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H (0,366 g, 0,477 mmol, 1 ekv.) tirpalo THF (10 ml) ir tada reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį. Tirpiklis nugarinamas vakuume, liekana praskiedžiama EtOAc (30 ml), plaunama vandeniu (30 ml),

[0212] po to džiovinama MgS0₄. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje, o liekana gryninama sparčiosios chromatografijos per silikagelį metodu (gradientinis eliuavimas, 0->1% CH₃OH CHCI₃), ir gaunamas 5-{3'-Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propen}izoksazolas (0,307 g, 70 % išeiga), kuris yra amorfinė kieta medžiaga: IR (cm"¹) 3423, 1678, 1568, 1265, 1043, 711; ¹H

[0213] BMR (DMSO- d6) 5 0,77-0,81 (m, 6H), 1,21-1,36 (m, 2H), 1,40-1,55 (m, 1H), 1,60-1,80 (m, 2H), 2,34-2,45 (m, 2H), 2,82-2,87 (m, 1H), 2,91-3,04 (m, 1H), 3,95-4,00 (m, 1H), 4,41-4,50 (m, 1H), 4,53-4,60 (m, 1H), 4,99 (kv, 2H, J = 6,0), 6,19 (d, 1H, J = 15,0), 6,36 (dd, 1H, J = 15,0, 6,0), 6,46 (s, 1H), 7,15-7,33 (m, 20H), 7,42 (d, 1H, J = 9,0), 7,56-7,63 (m, 5H), 7,96 (d, 1H, J = 9,0), 8,08 (d, 1H, J = 9,0), 8,51 (s, 1H), 8,58 (s, 1H); DSGMS apskaičiuota pagal C₅₁H₅₃N₅O₆+C_S 964,3050 (M+Cs), rasta 964,3018.

[0214] Produkto - 5-( 3'-( Cbz- L- Leu- L- Phe- L- G/ n)- E- propen) izoksazolo - gavimas

[0215] Į 5-{3'-Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G//))-E-propen}izoksazolo (0,214 g, 0,257 mmol) tirpalą CH2CI2 (10 ml) pridedama trifluoracto rūgšties (1 ml) ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana gryninama sparčiosios chromatografijos per silikagelį metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»1% CH₃OH CHCI₃) ir gaunamas 5-(3'-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propen)izoksazolas (0,054 g, 36 % išeiga), kuris yra balta kieta medžiaga: 1H BMR (DMSO-cfe) 5 0,77-0,83 (m, 6H), 1,26-1,46 (m, 2H), 1,47-1,62 (m, 1H), 1,69-1,79 (m, 2H), 2,04-2,29 (m, 2H), 2,83-2,88 (m, 1H), 2,97-3,10 (m, 1H), 3,99-4,12 (m, 1H), 4,37-4,43 (m, 1H), 4,48-4,57 (m,1H), 5,01 (kv, 2H, J = 6,0), 6,20 (d, 1H, J = 15,0), 6,36 (dd, 1H, J = 15,0, 6,0), 6,45 (d, 1 H, J = 3,0), 6,75 (s, 1H), 7,14-7,29 (m, 6H), 7,31-7,40 (m, 5H), 7,45 (d, 1H, J = 9,0), 8,04 (d, 1H, J= 9,0), 8,07 (d, 1H, J = 9,0), 8,51 (d, 1H, J = 3,0); analizė (C₃₂H₃₉N₅O₆) C, H, N.

[0216] 2 pavyzdys: Junginio A- 1 - etil- 3-(( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Leu- L-Phe- L- G/ n)- E- propenoato - gavimas

[0217]

[0218] l Boc-L-(Tr-Gln)-OH (18,7 g, 36,7 mmol, 1 ekv.) ir 4-metilmorfolino (8,08 ml, 73,5 mmol, 2,0 ekv.) tirpalr CH₂CI₂ (250 ml) 0 °C temperatūroje pridedama izobutilo chlorformiato (4,77 ml, 36,8 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 20 min. (minučių), po to pridedama N,0-dimetilhidroksilamino hidrochlorido (3,60 g, 36,7 mmol, 1,0 ekv.). Gautas tirpalas maišomas 0 °C temperatūroje 20 min., ir 23 °C temperatūroje 2 vai.

[0219] (valandas), po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksnia džiovinami Na2SC>4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 40-»20 % heksanai EtOAc), gautas Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me (16,1 g, 82 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; ¹H BMR (CDCI₃) 6 1,42 (s, 9H), 1,63-1,77 (m, 1H), 2,06-2,17 (m, 1H), 2,29-2,43 (m, 2H), 3,17 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,73 (s, pl„

[0220] 1 H), 5.38-5,41 (m, 1H), 7,20-7,31 (m, 15H); analizė (C_aiH_^N_aO_s) C,_~H, N/ ,!

[0221] Tarpinio Boc- L-( Tr- Gln)- H gavimas

[0222] °C temperatūroje pridedama diizobutilaliuminio hidrido (50,5 ml 1,5 M tirpalo toluene, 75,8 mmol, 2,5 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 4 valandas. Įpilama metanolio (4 ml); o po to 1,0 M HCI (10 ml)

[0223] ir mišinys sušildomas iki 23 °C temperatūros. Gauta suspensija praskiedžiama Et2Ū (150 ml) ir plaunama .1,0 M HCI (3 x 100 ml), pusiau sočiu NaHC03 (100

[0224] ml) ir vandeniu (100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgSO^ nufiltruojamas ir sukoncentravus gaunamas negrynintas Boc-L-(Tr-Gln)-H (13,8 g, 97 % išeiga), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 114-116 °C; IR (cm1) 3313,1697, 1494; 1H BMR (CDCI3) S 1,44 (s, 9H), 1,65-1,75 (m, 1H), 2,17-2,23 (m, 1H), 2,31-2,54 (m, 2H), 4,11 (s, pl„ 1H), 5,38-5,40 (m, 1H), 7,11

[0225] (s, 1H), 7,16-7,36 (m, 15H), 9,45 (s, 1H).

[0226] -78 °C temperatūroje pridedama natrio bis(trimetilsilil)amido (22,9 ml 1,0 M

[0227] tirpalo THF, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) ir gautas tirpalas maišomas 20 minučių šioje temperatūroje. Per kanulę pridedama negryninto Boc-L-(Tr-Gln)-H (10,8 g, 22,9 mmol, 1 ekv.) THF (50 ml), ir reakcijos mišinys maišomas 2 valandas -78 °C temperatūroje, sušildomas iki 0 °C ir palaikoma 10 minučių, po to paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SŪ₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-(Boc-L-(Tr-G//?))-E-propenoatas (10,9 g, 88 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm"1) 3321,1710; 1H BMR (CDCI₃) 5 1,27 (t, 3H, J = 7,2), 1,42 (s, 9H), 1,70-1,78 (m, 1H), 1,80-1,96 (m, 1H), 2,35 (t, 2H, J = 7,0), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,29 (s, pl., 1H), 4,82-4,84 (m, 1H), 5,88 (dd, 1 H, J = 15,7, 1,6), 6,79 (dd, 1 H, J = 15,7, 5,3), 6,92 (s, 1 H), 7,19-7,34 (m, 15H); analizė (C₃₃H₃₈N₂O₅) C, H, N.

[0228] HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 15 ml) 23 °C temperatūroje supilamas į etil-3-(Boc-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (3,26 g, 6,01 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (15 ml). Po 2 valandų lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje ir gaunamas etil-3-(H₂N-L-(Tr-G/n)-E-propenoato-HCI. Ši medžiaga ištirpinama CH₂CI₂ (60 ml) ir iš eilės dedama Boc-L-Phe-OH (1,59 g, 6,01 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (1,22 g, 9,02 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolinas (1,98 ml, 18,03 mmol, 3 ekv.) ir EDC (1,73 g, 9,02 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, koncentruojami, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksane), gaunamas etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G//7))-E-propenoatas (3,55 g, 85 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm"1) 3306, 1706,1661; 1H BMR (CDCI₃) 8 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,76 (m, 1 H), 1,87-1,99 (m, 1 H), 2,25-2,27 (m, 2H), 2,94-3,01 (m, 2H), 4,14-4,26 (m, 3H), 4,48-4,53 (m, 1H), 4,95 (s, pl., 1H), 5,64 (d, 1 H, J = 15,8), 6,29 (d, 1 H, J = 8,1), 6,64 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,4), 6,80 (s, pl., 1H), 7,14-7,32 (m, 20H); analizė (C₄₂H₄₇N₃O₆) C, H, N.

[0229] į etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (6,40 g, 9,28 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (15 ml). Po 2 valandų lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (100 ml) ir iš eilės dedama Boc-L-Leu-OH (2,58 g, 11,1 mmol, 1,2 ekv.), HOBt (1,88 g, 13,9 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolinas (3,06 ml, 27,8 mmol, 3 ekv.) ir EDC (2,67 g, 13,92 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, koncentruojami, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (2 % CH₃OH CH₂CI₂), gaunamas etil-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (6,46

[0230] g, 87 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm_"¹) 3284, 1651, 1515; ¹H BMR (CDCI₃) 5 0,86 (d, 3H, J = 6,0), 0,89 (d, 3H, J = 6,0), 1,29 (t,

[0231] 3H, J = 7,2), 1,38-1,60 (m, 3H), 1,62-1,89 (m, 1H), 1,95-1,97 (m, 1H), 2,28-2,30 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 2H), 3,92-3,94 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,48-4,51 (m, 2H), 4,67 (m, 1H), 5,66 (d, 1H, J = 15,9), 6,51-6,57 (m, 2H), 6,69 (dd, 1H, J = 15,6, 5,1), 7,10-7,33 (m, 21H); analizė

[0232] (C«H58N407-0,33H20) C, H, N.

[0233] Tarpinio etil- S-^ S'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L- Leu- L- Phe- L- fTr- G/ riJJ- E-propenoato gavimas

[0234] HCi iiipaids 1,4-dioksane (4,0 M, 3 ml) 23 °C temperatūroje supilamas į etil-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (0,216 g, 0,27 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (3 ml). Po 2 valandų lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (15 ml), atšaldoma iki 0 °C ir pridedama trietilamino (0,112 ml, 0,81 mmol, 3 ekv.), o po to 5-metilizoksazoll-3-karbonilchlorido (0,058 g, 0,40 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstomas tarp vandens (50 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 50 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, koncentruojami, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (2 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (0,199 g, 91 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm"¹) 3286, 1650, 1541; ¹H BMR (CDCI₃) 5 0,86 (d, 3H, J = 5,4), 0,89 (d, 3H, J = 5,7), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,43-1,59 (m, 2H), 1,67-1,75 (m, 1H), 1,95-1,99 (m, 2H), 2,28 (t, 2H, J= 7,2), 2,41 (s, 3H), 2,97-3,04 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J= 7,2), 4,31-4,33 (m, 1H), 4,48-4,52 (m, 2H), 5,72 (d, 1H, J = 15,9), 6,19 (s, 1H), 6,41 (d, 1H, J = 7,5), 6,59 (d, 1H, J = 8,1), 6,71 (dd, 1H, J = 15,3, 6,0), 6,95 (d, 1H, J = 6,6), 7,09-7,21 (m,'21 H); analizė (C_^H_saN_sOy-H_zO) C, H, N.

[0235] Produkto - etil- S-^ S'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L- Leu- L- Phe- L- G/ nJ- E-propenoato - gavimas

[0236] Į etil-3-((5_,-metilizoksazol-3'-karboniJ)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (0,185 g, 0,21 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (3 ml) 23 °C temperatūroje pridedama iš pradžių triizopropilsilano (0,077 ml, 0,376 mmol, 1,8 ekv.), o po to trifluoracto rūgšties (3 ml); susidaro ryškiai geltonas tirpalas. Reakcijos mišinys maišomas 30 minučių 23 °C temperatūroje; per šį laiką jis pasidaro bespalvis. Lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje, o likusi balta kieta medžiaga trinama su Et₂Ū (10 ml), nufiltruojama ir išdžiovinus ore gaunamas etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propenoatas (0,87 g, 81 % išeiga), kuris yra balta kieta medtiaga; lyd. temp. = 223-225 °C; IR (cm'¹) 3298, 1662, 1544, 1457, 1278; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,81 (d, 3H, J= 6,0), 0,85 (d, 3H, J = 6, 3), 1,23 (t, 3H, J= 6,9), 1,38-1,42 (m, 1H), 1,48-1,77 (m, 4H), 2,04 (t, 2H, J = 7,2), 2,46 (s, 3H), 2,78-2,86 (m, 1 H), 2,93-3,00 (m, 1H), 4,11 (kv, 2H, J = 7,2), 4,36-4,54 (m, 3H), 5,63 (d, 1H, J = 15,6) 6,56 (s, 1H), 6,68 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,76 (s, pl„ 1H), 7,19 (m, 6H), 8,09 (d, 1H, J = 8,1), 8,14 (d, 1H, J =7,8), 8,58 (d, 1H, J = 7,5); analizė (C₂₉H₃₉N₅O₇) C, H, N.

[0237] 3 pavyzdys: Junginio A- 2 - etiI- 3-(( izoksazol- 5'- karbonil)- L- Leu- L- Phe- L-G// j)- E- propenoato - gavimas

[0238]

J Tarpinio etil- 3-(( izoksazol- 5'- karbonil)- L- Leu- L- Phe- L-( Tr- G/ n)- E-propenoaio gavimas Šis junginys buvo pagamintas iš etil-(Boc-L-leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato ir izoksazol-5-karbonilchlorido, naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propenoatui gauti. IR (cm'¹) 3282, 1643, 1530; ¹H BMR (CDCI₃) 8 0,87 (t, 6H, J = 6,6), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,49-1,64 (m, 3H), 1,69-1,80 (m, 1 H), 1,90-1,96 (m, 1 H), 2,30 (t, 2H, J = 7,2), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,02-3,09 (m, 1 H), 4,17 (kv, 2H rJ = 7,2), 4,42-4,4& (m, 3H), 5,69 (d, 1H, J = 15,3), 6,65 (s, pl„ 1H), 6,66 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,76-6,79 (m, 2H), 7,00-7,31 (m, 22H), 8,24 (s, 1 H); analizė (C47H51N5O7 O75H2O) C, H, N. Etil- 3-(( izoksazol- 5'- karbonil)- L- Leu- L- Phe- L- G// 7)- E- propenoato gavimas Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-((izoksazol-5'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato, naudojant metodiką analogišką aukščiau aprašytai (7 pavyzdys) metodikai etil-3-((5'-metilizp_Ksazo|r3'>-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/A?)-E-propenoatui gauti: lyd. temp. = 217-220 °C; IR (cm_"¹) 3302, 1655, 1541; 1H BMR (DMSO-cfe) 6 0,81 (d, 3H, J = 6,0), 0,86 (d, 3H, J = 7,2), 1,42-1,75 (m, 5H), 2,04 (t, 2H, J = 7,2), 2,78-2,87 (m, 1H), 2,94-3,01 (m, 1 H), 4,11 (kv, 2H, J- 7,2), 4,37 (m, 1H), 4,41-4,52 (m, 2H), 5,64 (d, 2H, J = 15,6), 6,68 (dd, 1 H, J = 15,9, 5,4), 6,76 (s, pl„ 1H), 7,12-7,19 (m, 7H), 8,02 (d, 1 H, J = 8,1), 8,20 (d, 1 H, J = 8,1), 8,74 (d, 1 H, J = 1,8), 8,94 (d, 1 H, J = 7,8);

[0239] 4 pavyzdys: Junginio A- 3 - etil- 3-(( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-a-( t-butil- Gly)- L-( 4- Me- Phe)- L- G/ n)- E- propenoato - gavimas

[0240]

[0241] Tarpinio etil- 3-( Boc- L-( 4- Me- Phe)- L-( Tr- G/ n)- E- propenoato gavimas

[0242] Etil-3-(H₂N-L-(Tr-G/n))-E-propionatoHCI (pagamintas kaip aprašyta aukščiau duotame 2 pavyzdyje, 1,37 g, 3,10 mmol) ištirpinamas DMF (10 ml) 23 °C temperatūroje. Pridedama diizopropiletilamino (1,08 ml, 6,20 mmol), o po to Boc-L-(4-Me-Phe)-OH (0,87 g, 3,10 mmol). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C. Pridedama HATU (1,18 g, 3,10 mmol) ir reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. DMF nugarinamas vakuume. Liekana ištirpinama EtOAc (30 ml) ir organinė fazė plaunama iš'eilės 10 % HCI tirpalu (25 ml), sočiu NaHCC_b tirpalu (25 ml), H₂0"(25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml). Tirpiklis išdžiovinamas (MgSC_U) ir nufiltruojamas, o liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0->0,75% CH₃OH CHCb) ir gaunamas etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (1,48 g, 68 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm'¹) 1713, 1655, 1491, 1175; ¹H BMR (DMSO-d₆) 8 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,30 (s, 9H), 1,62-1,66 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,72 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 4,07-4,09 (m, 1H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,0), 4,38 (m, 1H), 5,64 (d, 1 H, J = 15,6), 6,72 (dd, 1 H, J = 15,5, 5,5), 6,88 (d, 1 H, J = 8,0), 7,04 (d, 2H, J = 7 J), 7,10 (d, 2H, J = 7,7), 7,14-7,28 (m, 15H), 8,02 (d, 1H, J = 8,0), 8,53 (s, 1H); analizė (C₄₃H₄₉N₃O₆) C, H, N.

[0243] Tarpinio etil- 3-( Boc- L-a-( t- butil- Gly)- L-( 4- Me- Phe)- L-( Tr- G// ?)- E-propenoato gavimas

[0244] Etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (1,45 g, 2,06 mmol) ištirpinamas 1,4 dioksane (27 ml) ir įpilama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 14 ml). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Tirpiklis nugarinamas, o liekana ištirpinama EtOAc (50 ml). Organinė fazė

[0245] plaunama sočiu NaHC0₃ tirpalu (50 ml), po to sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgS0₄), ir sumažintame slėgyje nugarinus tirpiklį gaunama 1,23

[0246] g nebaltos amorfinės kietos medžiagos. Ši medžiaga kopuliuojama su Boc-L-a-(t-butil-Gly)-OH, naudojant aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui sintezuoti, ir gaunamas etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G//7)-E-propenoatas (49 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm"¹) 1655, 1507, 1248, 1171;¹H BMR (DMSO-

[0247] cfe) 6 0,81 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,37 (s, 9H), 1,52-1,70 (m, 2H), 2,22

[0248] (s, 3H), 2,26-2.28 (m, 2H), 2,73-2,91 (m, 2H), 3,86 (d, 1H, J = 9,6), 4,05-4,14

[0249] (m, 2H), 4,31-4,36 (m, 1H), 4,47-4,55 (m, 1H), 5,54 (d, 1H, J = 15,4), 6,37 (d, 1H, J = 9,6), 6,65 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 7,01 (d, 2H, J" 8,1), 7,07 (d, 2H, J = 7,7), 7,11-7,32 (m, 15H), 8,03 (d, 2H, J = 8,1), 8,10 (d, 1H, J = 7,7), 8,49 (s, 1H); analizė (C49H 6oN407 0,4H20) C, H, N.

[0250] Tarpinio etil- 3-(( 5'- inetilizoksazoi- 3'- karbor. il)- L- a-( t- butil- Gly)- L*( 4- l\/ le-Phe)- L-( Tr- G/ n)- E- propenoato gavimas

[0251] buvo deblokuotas naudojant metodiką aprašytą aukščiau minėtam etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui deblokuoti, ir gautas aminas (0,22 g, 0,30 mmol) ištirpinamas CH2fcl2 (3 ml). Pridedama piridino (0,025 ml, 0,32 mmol) ir reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C. Pridedama 5-metilizoksazol-3-karbonilchlorido (0,04G g, 0,32 mmol). Reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir maišoma vieną valančią. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0->1% CH₃OH CH₂CI₂) ir gaunamas etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (0,19 g, 77 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm_'¹) 1651, 1518; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,88 (s, 9H), 1,20 (t,

[0252] 3H, J = 7,0), 1,55-1,67 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 1H), 2,86-2,93 (m, 1H), 4,07-4,14 (m, 2H), 4,46 (d, 1H, J = 9,6), 4,50-4,55 (m, 1 H), 5,54 (d, 1 H, J = 15,8), 6,59 (s, 1 H), 6,65 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5, 15,8), 6,95 (d, 2H, J = 8,1), 7,05 (d, 2H, J = 8,1), 7,13-7,28 (m, 15H), 7,60

[0253] (d, 1H, J = 9,6), 8,13 (d, 1H, J = 8,1), 8,41 (d, 1H, J = 8,1), 8,51 (s, 1H); analizė (C₄₉H₅₅N₅O₇) C, H, N.

[0254] Produkto - etil- 3-(( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-a-( t- butil- Gly)- L-( 4- Me-Phe)- L- G/ n)- E- propenoato - gavimas

[0255] Etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G//?)-E-propenoatas (0,17 g, 0,20 mmol) ištirpinamas CH₂CI₂ (4 ml) 23 °C_'temperatūroje. Pridedama trifluoracto rūgšties (0,4 ml) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje šešias valandas. Tirpikliai nugarin_ami vakuume, o liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»2 % CH₃OH CH₂CI₂) ir gaunamas etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-G//?)-E-propenoatas (0,085 g, 73 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm_"¹) 1661, 1541, 1206; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,88 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J= 7,0), 1,60-1,73 (m, 2H), 2,01-2,06 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 1H), 2,86-2,93 (m, 1H), 4,07-4,14 (m, 2H), 4,34-4,37 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J = 9,6), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,57 (d, 1H, J = 15,8), 6,60 (s, 1H), 6,66 (dd, 1H, J = 15,8, 5,5), 6,75 (s, pl„ 1H), 6,96 (d, 2H, J = 8,1), 7,06 (d, 2H, J= 7, 7), 7,17 (s, pl„ 1H), 7,65 (d, 1H, J= 9,6), 8,14 (d, 1H, J = 8,1), 8,40 (d, 1 H. J = 7.7); analizė (C_3oH_4iN₅0₇-₀,5TFAO,5H₂0) C, H, N.

[0256] 5 pavyzdys: Junginio A- 4 - etiI- 3-(( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-a-( t-butil- Gly)- L-( 4- F- Phe)- L- G// j)- E- propenoato - gavimas

[0257]

[0258] Tarpinio etil- 3-( Boc- L-( 4- F- Phe)- L-( Tr- G/ n))- E- propenoato gavimas

[0259] Boc-L-(4-F-Phe)-OH (1,41 g, 5,0 mmol) ištirpinamas THF (50 ml). Pridedama etil-3-(H₂N-L-(Tr-G/n)-E-propenoato-HCI (pagaminto pagal aukščiau aprašytą 2 pavyzdį, 1,0 g, 5,0 mmol), o po to Et₃N (0,70 ml, 5,0 mmol). Pridedama karbonildiimidazolo (0,81 g, 5,0 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 20 valandų. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»1% CH₃OH CH₂CI₂) ir gaunamas etil-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (1,13 g, 32 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm"¹) 1712, 1666, 1510, 1169; ¹H BMR (DMSO-d₆) 6 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,29 (s, 9H), 1,61-1,70 (m, 2H), 2,27-2,34 (m, 2H), 2,74-2,78 (m, 1H), 2,86-2,90 (m, 1H), 4,06-4,13 (m, 3H), 4,36-4,40 (m, 1H), 5,58 (d, 1H, J = 15,6), 6,71 (dd, 1H, J = 15,6, 5,5), 6,98 (d, 1H, J = 8,1), 7,03-7,09 (m, 2H), 7,14-7,28 (m, 17H), 8,06 (d, 1H, J = 8,1), 8,53 (s, 1 H); MSGMS (M+Na) 730.

[0260] Tarpinio etil- 3-( Boc- L- a-( t- butil- Gly)- L-( 4- F- Phe)- L-( Tr- G// 7))- E- propenoato gavimas

[0261] Etil-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas buvo deblokuotas, ir * kopuliuotas su Boc-L-a-(t-butil-G!y)-OH, naudojant aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatui gauti, ir gautas etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//?))-E-propenoatas (54 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm"¹) 1720, 1651, 1503, 11BS; ¹H BMR (DMSO-d₆) 6 0;80 (s,-QH)-1;20 ,(t,_3H, J = 7.0), 1,36 (s, 9H), 1,53-1,67 (m, 2H), 2,23-2,28 (m, 2H), 2,79-2,94 (m, 2H), 3,85 (d, 1H, J = 9,9), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,53-4,55 (m, 1 H), 5,46 (d, 1 H, J = 15,8), 6,36 (d, 1 H, J = 9,2), 6,64 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 6,97-7,03 (m, 2H), 7,13-7,28 (m, 17H), 8,08 (d, 1H, J = 8,1), 8,14 (d, 1H, J = 8_.1), 8,49 (s, 1 H); analizė (C₄₈H_S7N₄O₇F) C, H, N.

[0262] Tarpinio etil- 3-(( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- a-( t- butil- Gly)- L-( 4- F-Phe)- L-( Tr- G/ n))- E- propenoato gavimas

[0263] Etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas deblokuojamas ir kopuliuojamas su 5-metilizoksazol-3-karbonilchloridu, naudojant aukščiau aprašytas metodikas etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G//7))-E-propenoatui gauti, ir gaunamas etil-3-((5_,-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (74 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm" ¹) ₁₆₅₉, ₁535, 1510; ¹H BMR (DMSO-cfe) 6 0,88 (s, 9H), 1,20 (t, 3H, J = 7,4), 1,52-1,67 (m, 2H), 2,23-2,28 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,75-2,82 (m, 2H), 2,89-2,96 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,32-4,36 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J = 9,6), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,44 (d, 1 H, J = 15,6), 6,58 (s, 1H), 6,63 (dd, 1H, J= 15,6, 5,5, 15,6), 6,93-6,99 (m, 2H), 7,13-7,28 (m, 17H), 7,64 (d, 1 H, J = 9,6), 8,16 (d, 1H, J = 8,5), 8,46 (d, 1H, J = 8,1), 8,51 (s, 1 H); analizė (C₄₈H₅₂N₂O₇F) C,

[0264] H, N.

[0265] Etil- 3-(( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- a-( t- butil- Gly)- L-( 4- F- Phe)- L- G// 7)-E- propenoato gavimas

[0266] Etil-3-[(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//7)]-E-propenoatas buvo deblokuotas, naudojant metodiką analogišką aukščiau aprašytai etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-G// 7)-E-propenoatui gauti, ir gautas etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-G/n)-E-propenoatas (80 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm"¹) 1653, 1543, 1223; ¹H BMR (DMSO-c/6) 5 0,88 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J = 7,4), 1,59-1,75 (m, 2H), 2,01-2,06 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,75-2,82 (m, 2H), 2,89-2,96 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,33-4,36 (m, 1 H), 4,44 (d, 1 H, J = 9,6), 4,50-4,58 (m, 1 H), 5,47 (d, 1 H. J = 15,8), 6,59 (s, 1H), 6,64 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 6,75 (s, pl., 1H), 6,94-7,00 (m, 2H), 7,16 (s, pl., 1H), 7,18-7,23 (m, 2H), 7,69 (d, 1H, J = 9,6), 8,16 (d, 1H, J = 8,1), 8,44 (d, 1H, J = 8,1); analizė (C₂₉H₃₈N₅O₇F) C, H, N.

[0267] 6 pavyzdys: Junginio A- 5 - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val- L-( 4- F- Phe)- L-((, Sj- p/ roM/ ai)}- E- propenoato - gavimas

[0268]

[0269] Į (4S)-4-(2-metoksikarboniletil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksi-rūgšties fref-butilo esterio (pagaminto pagal Chida et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1992, 1064 aprašymą) (10,5 g, 36,5 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₃OH (150 ml) pridedama natrio hidroksido (27 ml 4,0 M tirpalo H₂O, 108 mmol, 3,0 ekv.), ir gautas su "debesėliais" reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 3,5 vai. Mišinys sukoncentruojamas sumažintame slėgyje iki _~30 ml tūrio, po to paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150

[0270] ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami MgSC_U ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir išdžiovinus liekaną vakuume, gaunamas (4S)-4-(2'-karboksietil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (10,0 g, 100 % negrynintos medžiagos

[0271] išeiga). Ši medžiaga buvo naudojama negryninta. ¹H BMR (CDCI₃, rotamerų mišinys) 5 1,49 (s), 1,57 (s), 1,60 (s), 1,84-2,05 (m), 2,39-2,41 (m), 3,71-3,74 (m), 3,91-4,05 (m).

[0272] Tarpinio ( 4S, 4" S)- 4-{ 3,-( 4,,- benzil- 2"- okso- oksazolidin- 3"- il)- 3,-oksopropil>- 2, 2- dimetiloksazolidin- 3- karboksirūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0273] l (4S)-4-(2'-karboksietil)-2,2-dimetiIoksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (5,80 g, 21,2 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (450 m]) 0,°-C temperatūroje pridedama trietilamino (8,87 ml, 63,6 mmol, 3,0 ekv.) ir po to pivaloilo chlorido (2,61 ml, 21,2 mmol, 1,0 ekv.). Šiek tiek neskaidrus reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 3,5 vai., tada pridedama ličio chlorido (0,988 g, 23,3 mmol, 1,1 ekv.) ir po to (S)-(-)-4-benzil-2-oksazolidinono (3,57

[0274] g, 20,1 mmol, 0,95 ekv.). Sušildžius iki 23 °C ir pamaišius 19 vai., reakcijos mišinys paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu Na2CC>3 (150 ml), džiovinami MgS0₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (30 % EtOAc heksanuose) gaunamas

[0275] (4S,4"S)-4-{3'-(4"-benzil-2"-₀kso-₀ksaz₀lidin-3"-il)-3'-₀ksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (7,17 g, 83 %), kuris yra bespalvė alyva: IR (cm'¹) 2978, 1783, 1694; ¹H BMR (CDCb, rotamerų mišinys) 5 1,49 (s), 1,59 (s), 1,63 (s), 2,01-2,10 (m), 2,76 (dd, J = 13,5, 9,8), 2,82-3,13 (m), 3,30-3,41 (m), 3,76-3,82 (m), 3,90 (s, pi ), 3,97 (dd, J = 9,0, 5,6), 4,10-4,19 (m), 4,63-4,71 (m), 7,22-7,36 (m); analizė (C₂₃H₃₂N₂O₆) C, H,

[0276] N. , •

[0277] Tarpinio ( 2' S, 4S, 4" S)- 4-{ 2'-( 4"- benzil- 2"- okso- oksazolidin- 3"- karbonil)-pent- 4'- enil}- 2, 2- dimetiloksazolidin- 3- karboksirūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0278] Į natrio bis(trimetilsi!il)amido (16,6 mI1,0 M tirpalo THF, 16,6 mmol, '1,0 ekv.) tirpalą THF -78 °C temperatūroje (150 ml) supilamas (4S,4"S)-4-{3'-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-il)-3'-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (7,17 g, 16,6 mmol, 1 ekv.) tirpalas tame pačiame tirpiklyje (50 ml). Reakcijos mišinys maišomas 20 min. -78 °C temperatūroje, po to pridedama alilo jodido (4,55 ml, 49,8 mmol, 3,0 ekv.). Pamaišius dar 3 vai. -78 °C temperatūroje, reakcijos mišinys palaikomas -45 °C temperatūroje 2 vai., po to paskirstomas tarp 2:1 pusiau sotaus NH₄CI ir 5 % Na₂S₂Ū₃ mišinio (300 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami H₂O (200 ml), džiovinami MgSŪ₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (15 % EtOAc heksanuose), gaunamas (2'S,4S,4"S)-4-{2_,-(4"-b₉nzii-2"-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-pent-4'-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (4,29 g, 55 %), kuris yra bespalvė alyva: IR (cm"¹) 2978, 1780, 1695; 1H BMR (CDCI₃, rotamerų mišinys) 5 1,45 (s), 1,49 (s), 1,68-1,80 (m), 2,13-2,47 (m), 2,49-2,67 (m), 3,32 (dd, J = 13,4, 3,1), 3,69-3,97 (m), 4,11-4,21 (m), 4,66-4,74 (m), 5,06-5,13 (m), 5,74-5,88 (m), 7,20-7,36 (m); analizė (C₂₆H₃₆N₂O₆) C, H, N.

[0279] Tarpinio ( 1S, 3S)-{ 3-( 1'-( 2", 4"- dimetoksibenzil)- 2'- okso- pirolidin- 3,- il)- 1-hidroksimetilpropilj- karbamo rūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0280] Per (2'S,4S,4"S)-4-{2'-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-pent-4'-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (4,29 g, 9,08 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH2CI2 (200 ml) ir CH₃OH (0,735 ml, 18,1 mmol, 2,0 ekv.) -78 °C temperatūroje burbuliukais leidžiamas ozonas tol, kol laikosi mėlyna spalva. Po to reakcijos mišinys valomas argonu, kol jis tampa bespalvis. Pridedama metilsulfido (6,67 ml, 90,8 mmol, 10 ekv.), mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 3,5 vai., po to palaikomas 0 ^?C temperatūroje dar 1 vai. Paskirsčius reakcijos mišinį tarp H₂O (200 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio ( 2 x 200 ml), sumaišyti organiniai sluoksniai_^džiovinami MgSŪ₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir negryninta liekana tuoj pat naudojama.

[0281] Ši liekana ištirpinama 2:1 TFH ir EtOH mišinyje (240 ml) 23 °C temperatūroje ir pridedama iš eilės 2,4-dimetoksibenzilamino hidrochlorido (7,40 g, 36,3 mmol, 4,0 ekv.), natrio acetato (2,98 g, 36,2 mmol, 4,0 ekv.) ir natrio cianborhidrido (1,14 g, 18,1 mmol, 2,0 ekv.). Gauta suspensija maišoma 18 vai. 23 °C temperatūroje, po to paskirstoma tarp 0,5 M HCI (400 ml) ir EtOAc (2 x 200 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu NaHC0₃ (300 ml), džiovinami Na2SC>4 ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Liekana perleidžiama per trumpą silikagelio kolonėlę

[0282] (eliuuojant 50 % EtOAc heksanuose) ir gaunamas (3'S,4S)-4-{1'-(2",4"-dimetoksibenzil)-2'-okso-pirolidin-3'-ilmetil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris, turintis (S)-(-)-4-benzil-2-oksazolidinono priemaišų.

[0283] Ši medžiaga ištirpinama CH₃OH (100 ml) ir pridedama TsOHh_hO (0,345 g, 1,81 mmol, 0,20 ekv.). Reakcijos mišinys pašildomas iki 50 °C ir šioje temperatūroje palaikomas 2,5 vai. Atšaldžius iki 23 °C, reakcijos mišinys sukoncentruojamas sumažintame slėgyje iki -20 ml tūrio ir paskirstomas tarp pusiau sotaus NaHCŪ₃ (150 ml) ir 9:1 CH₂CI₂ ir CH₃OH mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SŪ₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (3 % CH₃OH Ch_feC_h), gaunamas (1 S,3'S)-{2-(1 (2",4"-dimetoksibenzil)-2'-okso-pirolidin-3'-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo

[0284] rūgšties fref-butilo esteris (1,62 g, 44 %), kuris yra putų pavidalo medžiaga: IR

[0285] (cm"¹) 3328, 1669; 1H BMR (CDCI3) 6 1,44 (s, 9H), 1,50-1,75 (m, 2H), 1,90-2,00 (m, 1H), 2,17-2,27 (m, 1H), 2,52-2,62 (m, 1H), 3,14-3,24 (m, 2H), 3,51-3,65 (m, 3H), 3,70-3,78 (m, 1H), 3,80 (s, 6H), 4,35 (d, 1H, J = 14,3), 4,48 (d, 1H, J = 14,3), 5,51-5,54 (m, 1H), 6,42-6,46 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 1H); analizė (C₂₁H₃₂N₂O₆) C, H, N.

[0286] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L-((/V- 2, 4- dimetoksibenzil)- fS>p/ roM/ a})- E-propenoato gavimas

[0287] Į-78 °C temperatūros oksalilo chlorido (0,166 ml, 1,90 mmol, 1,5 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (14 ml) įlašinama DMSO (0,270 ml, 3,80 mmol, 3 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 20 min., po to per kanulę, esančią prie reakcijos indo sienelės, supilamas (1S,3,S)-{2-(1,-(2",4"-dimetoksibenzil)-2'-oksopirolidin-3'-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esterio (0,518 g, 1,27 mmol, 1 ekv.) tirpalas CH₂CI₂ (13 ml). Pamaišius 20 min., sulašinamas trietilaminas (1,06 ml, 7,60 mmol, 6 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas 1,5 vai. Pridedama acto rūgšties (0,479 ml, 8,37 mmol, 6,6 ekv.), reakcijos mišinys sušildomas iki 0 °C ir palaikomas 5 min., po to praskiedžiamas MTBE (200 ml) ir plaunamas vandeniu, sočiu NaHCC>3 ir sočiu NaCI tirpalu (po 25 ml). Organinė fazė džiovinama Na2SC>4 ir sukoncentravus gaunamas negrynintas aldehidas, kuris yra putų pavidalo medžiaga (0,516 g, kiekybinė išeiga); jis naudojamas negrynintas.

[0288] I trietilfosfonacetato (0,244 ml, 1,23 mmol, 1 ekv.) tirpaląTHF (15 ml) - 78 °C temperatūroje pridedama natrio bis(trimetilsilil)amido (1,23 ml 1,0 M tirpalo THF, 1,23 mmol, 1 ekv.), ir gautas tirpalas maišomas 20 min. šioje temperatūroje. Per kanulę, esančią prie reakcijos indo sienelės, supilamas negrynintas aldehidas (pagamintas kaip aprašyta aukščiau, 0,500 g, 1,23 mmol, 1 ekv.) THF (13 ml), ir reakcijos mišinys maišomas 45 min. -78 °C temperatūroje, sušildomas iki 0 °C, palaikomas 7 min. ir paskirstomas tarp 0,5 M HCl (20 ml) ir MTBE (2 x 50 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami MgSC>4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (60 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-fSJ-p/ro//M/a})-E-propenoatas (0,356 g, 61 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: Rf = 0,43 (60 % EtOAc heksanuose); IR

[0289] (cm'¹) 3307, 1708, 1678; ¹H BMR (CDCb) 8 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,43 (s, 9H), 1,52-1,70 (m, 2H), 1,98-2,09 (m, 1H), 2,21-2,34 (m, 1H), 2,48-2,59 (m, 1H), 3,16-3,24 (m, 2H), 3,80 (s, 6H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,27-4,40 (m, 1H), 4,41 (s, 2H), 5,40 (d, 1 H, J = 8,1), 5,95 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,6), 6,41 -6,48 (m, 2H), 6,86 (dd, 1H, J= 15,6, 5,3), 7,08-7,13 (m, 1H); analizė (C_2sH₃₆N₂0₇-0,25 H₂0)

[0290] i Tarpinio etil- 3-{ Boc- L-( 4- F- Phe)- L-(/ V- 2l4- dimetoksibenzil)-(, S>p/ roM/ a»-E- propenoato gavimas

[0291] Ši medžiaga buvo pagaminta iš etil-3-{Boc-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-( S)- pirol- Ala))-E-propęnoato ir Boc-L-(4-F-Phe)-OH naudojant metodiką panašią į aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G//7)-E-propenoatui gauti (4 pavyzdys): Rf = 0,34 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm" ¹) 3258, 1705, 1666; ¹H BMR (CDCI₃) 6 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H),

[0292] 1,51-1,55 (m, 2H), 1,78-1,90 (m, 1H), 2,06-2,23 (m, 2H), 2,99 (dd, 1H, J = ⁵13,7, 6,2), 3,11 (dd, 1H, J = 13,7, 5,3), 3,17-3,23 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,81 ¹(s, 3H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,35 (s, 2H), 4,38-4,51 (m, 2H), 5,29-5,37 (m, ¹1H), 5,76 (d, 1H, J = 15,8), 6,43-6,47 (m, 2H), 6,72 (dd, 1H, J = 15,8, 5,3), ¹6,83-6,91 (m, 2H), 7,09-7,17 (m, 3H), 7,92 (pl„ 1H); analizė (C34H44N3FO8) C, ^

[0293] H, N.

[0294] Tarpinio eti\- 3-{ Boc- L-\/ a\- L-{ 4- F- Phe)- L-{ N- 2, 4- dimetoksibenzi\)-( S)- pirol-A/ a})- E- propenoato gavimas

[0295] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzilHSJ-p/roM/alJ-E-propenoato ir Boc-L-Val-OH naudojant metodiką panašią į aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui gauti (2 pavyzdys): Rf = 0,24 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm"¹) 3284, 1713, 1678 pl„ 1643; ¹H BMR (CDCI₃) 6 0,91 (d, 3H, J = 6,8),

[0296] 0,97 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H), 1,50-1,62 (m, 2H), I,66-1,82 (m, 1H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,08-2,21 (m, 2H), 2,94 (dd, 1H, J = 13,5, 5,8), 3,17-3,27 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,97-4,05 (m, 1H),

[0297] 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,27 (d, 1H, J = 14,3), 4,29-4,38 (m, 1H), 4,40 (d, 1H, J

[0298] = 14,3), 4,86-4,93 (m, 1H), 5,10 (d, 1H, J = 8,7), 5,76 (dd, 1H, J = 15,6, 1,2),

[0299] 6,45-6,52 (m, 2H), 6,70 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,79-6,88 (m, 3H), 7,12-7,22 (m, 3H), 8,30 (d, 1H, J = 5,9); analizė (C39H53 FN4O9) C, H, N.

[0300] Tarpinio etil- S- flS'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L- Val- L-^- F- PheJ- L- fA/^-dimetoksibenzil) <S>p/ ro/-/\/ a»- E- propenoato gavimas

[0301] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(A/-2,4-dimetokoibenzilHSJ-p/roM/a})-E-propenoato ir izoksazol-5-karboniIchlorido naudojant aukščiau aprašytą metodiką (2 pavyzdys) etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E propenoatui gauti: Rf = 0,36 (5 % CH₃OH CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3284, 1717, 1650; 1H BMR (CDCi₃) 6 0,97 (d, 3H, J = 6,8), 1,01 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,64 (m, 2H), 1,72-1,84 (m, 1 H), 1,95-2,05 (m, 1H), 2,11-2,33 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,98 (dd, 1H, J = 13,7, 5,6), 3,16-3,24 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,23 (d, 1H, J= 14,3), 4,31-4,42 (m, 1H), 4,40 (d, 1H, J= 14,3), 4,44-4,50 (m, 1H), 4,88-4,96 (m, 1H), 5,79 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,43-6,49 (m, 3H), 6,71 (dd, 1H, J = 15,6, 5,3), 6,80-6,88 (m, 2H), 6,94 (d, 1H, J = 9,3), 7,11-7,17 (m, 3H), 7,29 (d, 1 H, J = 8,7), 8,33 (d, 1 H, J = 6,2); analizė (C_agH_^FN_sOgO^H_zO)

[0302] Produkto - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val- L-( 4- F- Phe)- L-(( SJ-pirol - Ala )}- E - propenoato - gavimas

[0303] Etil-3-{(5,-metilizoksazol-3,-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(A/-2,4-dimetoksibenzil)-fSj-p/roM/a})-E-propenoato (0,263 g, 0,351 mmol, 1 ekv.), vandens (2 lašai) ir DDQ (0,104 g, 0,458 mmol, 1,3 ekv.) suspensija virinama su grįžtamu šaldytuvu 9 vai., po to leidžiama atšalti iki kambario temperatūros per 8 vai. Reakcijos mišinys praskiedžiamas CH₂CI₂ (200 ml) ir plaunamas 2:1 sotaus NaHC0₃ ir 1 N NaOH mišiniu (20 ml). Organinė fazė džiovinama MgSŪ₄ ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 2-»3 % CH₃OH CH₂CI₂), gaunamas etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(('S_>)-p/ro/- >4/aJ}-E-propenoatas (0,117 g, 56 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 219-220 °C; Rf = 0,23 (5 % CH₃OH CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3401 pl., 3295, 1655 pl.; 1H BMR (CDCI₃) 5 0,94 (d, 3H, J = 6,8), 0,97 (d, 3H, J = 6,5), 1,29 (t,

[0304] I

[0305] 3H, J = 7,2), 1,54-1,65 (m, 1 H), 1,72-1,91 (m, 2H), 2,07-2,26 (m, 2H), 2,28-2,39 (m, 1H), 2,49 (d, 3H, J = 0,9), 3,01 (dd, 1 H, J = 13,8, 6,1), 3,12 (dd, 1H, J = 13,8, 6,4), 3,26-3,38 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,34 (dd, 1H, J = 8,7, 7,2), 4,43-4,54 (m, 1H), 4,90 (dt, 1H, J = 9,0, 6,2), 5,76 ((dd, 1H, J = 15,6, 1,6), 6,00 (s, 1H), 6,42 (kv, 1H, J = 0,9), 6,72 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,86-6,94 (m, 2H), 7,01 (d, 1H, J = 9,0), 7,11-7,18 (m, 2H), 7,21 (d, 1H, J = 8,7), 7,76 (d, 1 H, J = 7,2); analizė (C₃₀H₃₈FN₅O₇) C, -H, N.

[0306] 7 pavyzdys: Junginio A- 6 - etil- 3-[( 5'- metilizoksazQl- 3'- karbonil)- L- Val- L-( 4- F- Phe)- L- G/ n]- E- propenoato - gavimas

[0307]

[0308] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-(Boc-L-(Tr-G//7)-E-propenoato ir Boc-L-(4-F)-Phe-OH naudojant metodiką panašią į aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/_/?)-E-propenoatui gauti: IR (cm_"¹) 3328, 1707, 1506, i 168; ¹H BMR (CDCb) 5 1,29 (t, 3Hf. J = .7,2), <1,37 (s, 9H), 1,66-1,78 (m, 1H), 1,88-1,98 (m, 1H), 2,32 (t, 2H, J = 6,6), 2,85-2,92 (m, 1 H), 2,97-3,04 (m, 1 H), 4,15 (kv, 2H, J = 7,2), 4,52 (m, 1 H), 4,96 (m, 1 H), 5,60 (d, 1 H, J = 15,6), 6,56 (d, 1 H, J = 8,1), 6,66 (dd, 2H, J= 15,6, 5,1), 6,80 (s, pl„ 1H), 6,92-6,98 (m, 2H), 7,08-7,12 (m, 2H), 7,17-7,23 (m, 6H), 7,24-7,33 (m, 10H); analizė (C₄₂H₄₆FN₃O₆) C, H, N.

[0309] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L- Val- L-( 4- F)- Phe- L-( Tr- G/ n)- E- propenoato gavimas

[0310] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-G//7)-E-propenoato ir Boc-L-Val-OH aukščiau aprašytu (2 pavyzdys) būdu etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G//7)-E-propenoatui gauti: IR (cm"¹) 3319, 1657, 1511, 1172; ¹H BMR (CDCI3) 5 0,78 (d, 3H, J = 6,9), 0,87 (d, 3H, J = 6,9), 1,29 (t,

[0311] 3H, J = 7,2), 1,37 (s, 9H), 1,69-1,79 (m, 1 H), 1,93-2,06 (m, 2H), 2,33 (t, 2H, J = 7,2), 2,97-3,04 (m, 1H), 3,73-3,77 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,42-4,54 (m, 2H), 4,80 (d, 1H, J = 6,9), 5,61 (dd, 1H, J= 15,6, 1,5), 6,44 (d, 1 H. J = 7,8), 6,69 (dd, 2H, J = 15,9, 5,4), 6,71 (s, pl., 1H), 6,92-6,98 (m, 2H), 7,07-7,13 (m, 2H), 7,18-7,31 (m, 16H), 8,02 (s, 1H); analizė (C₄₇H₅₅FN₄O₇) C, H, N.

[0312] Tarpinio etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val- L-( 4- F)- Phe- L-( Tr-G/ n)- E- propenoato gavimas

[0313] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-G/_/?)-E-propenoato ir 5-metiiizoksazol-3-karbonilchlorido aukščiau aprašytu (2 pavyzdys) būdu etil-S-^S'-metilizoksazol-S'-karbonilJ-L-Leu-L-Phe-L-O"r- Gln)-E-propenoatui gauti: IR (cm"¹) 3319, 1657, 1511, 1172; ¹H BMR (CDCh) 8 0,84 (d, 3H, J = 6,9), 0,89 (d, 3H, J= 6,9), 1,30 (t, 3H, J = 7, 2), 1,68-1,80 (m, 1H), 1,95-2,06 (m, 1H), 2,07-2,17 (m, 1H), 2,34 (t, 2H, J = 7,2), 2,44 (s, 3H), 2,87-2,94 (m, 1H), 3,01-3,08 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,48-4,56 (m, 2H), 5,68 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,8), 6,23 (s, 1H), 6,39 (d, 1 H, J = 7,8), 6,70 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,84-6,90 (m, 3H), 7,04-7,08 (m, 4H), 7,17-7,30 (m, 16H); analizė (C₄₇H₅₀N₅O₇) C, H, N.

[0314] Produkto - etil- S- KS'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L- Val- L-^- FJ- Phe- L- G//)]-E- propenoato - gavimas

[0315] Etil-3-{(S'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F)-Piie-L-(Tr-G/_A))-E-propenoatas buvo deblokuotas naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-((5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n}-E-propenoatui gauti: IR (cm'¹) 3284, 1652, 1542; 1H BMR (DMSO-cfe) 5 0,76 (d, 3H, J = 6,9), 0,79 (d, 3H, J = 6,9), 1,20 (t, 3H, J = 7,2), 1,57-1,76 (m, 2H), 1,96-2,06 (3H), 2,46 (s, 3H), 2,75-2,83 (m, 1H), 2,89-2,96 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,2), 4,13-4,25 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,49-4,56 (m, 1 H), 5,53 (d, 1H, J = 15,6), 6,57 (s, 1H), 6,66 (dd, 1H, J= 15,6, 5,4), 6,75 (s, pl., 1H), 6,97-7,03 (m, 2H), 7,17-7,24 (m, 3H), 8,15 (d, 1 H, J = 7,8), 8,24 (d, 1 H, J = 8,1), 8,32 (d, 1 H, J = 8,1); analizė (C₂₈H₃₆N₅O₇) C, H, N.

[0316] 8 pavyzdys: Junginio A- 7 — etil- S-^ S'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L- a- ft-butil- Gly)- L-( 4- F- Phe)- L-(( S;- p/ roM/ a}- E- propenoato - gavimas

[0317]

[0318] Į Boc-L-(4-F-Phe)-OH (1,0 g, 3,53 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (15 ml) ' pridedama iš eilės DCC (0,765 g, 3,71 mmol, 1,05 ekv.), benzilo alkoholio (0,347 ml, 3,35 mmol, 0,95 ekv.) ir DMAP (0,022 g, 0,18 mmol, 0,05 ekv.). Pamaišius 18 valandų, nuosėdos nufiltruojamos, o filtratas praskiedžiamas MTBE (75 ml), plaunamas 10 % KHSO₄ ir sočiu NaCI tirpalu (po 10 ml), džiovinamas Na₂SŪ₄ ir nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (12 % EtOAc heksanuose), gaunamas Boc-L-(4-F-Phe)-OBn (0,992 g, 79 %), kuris yra balta kieta medžiaga. ¹H BMR spektrų duomenys sutampa su literatūriniais (žr. Jackson et al., J. Org. Chem. 1992, vol. 57, 3397).

[0319] Tarpinio Boc- L- a-( t- butil- Gly)- L-{ 4- F- Phe)- OBn gavimas

[0320] Boc-L-(4-F-Phe)-OBn (2,0 g, 5,36 mmol, 1 ekv.) maišomas 1 vai. CH₂CI₂ (20 ml) ir TFA (10 ml) mišinyje, po to pridedama daugiau TFA (10 ml) ir reakcijos tirpalas maišomas dar vieną valandą. Lakios medžiagos nugarinamos, o liekana ištirpinama DMF (30 ml). Pridedama Boc-L-a-(t-butil-Gly)-OH (1,24 g, 5,36 mmol, 1 ekv.) ir tirpalas atšaldomas iki 0 °C. Pridedama N,N-diizopropiletilamino (2,80 ml, 15,1 mmol, 3 ekv.), o po to HATU (2,04 g, 5,37 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 20 min., reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros per 1 valandą, po to praskiedžiama MTBE (500 ml) ir plaunama 5 % KHSO₄ (100 ml), sočiu NaHCŪ₃ (50 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (50 ml). Organinė fazė išdžiovinama ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (20 % EtOAc heksanuose), gaunamas Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn (2,04 g, 78 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: Rf = 0,49 (25 % EtOAc heksanuose); IR (cm"¹) 3307, 1737, 1655 pl.; ¹H BMR (CDCh) 6 0,94 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 3,04 (dd, 1H, J= 14,2, 5,8), 3,11 (dd, 1H, J= 14,2, 6,1), 3,79 (d, 1 H, J = 9,3), 4,88 (dt, 1H, J = 7,8, 5,8), 5,08 (d, 1H, J = 12,0), 5,16-5,23 (m, 1H), 5,19 (d, 1H, J = 12,0), 6,08 (d, 1 H, J = 7,8), 6,83-6,97 (m, 4H), 7,28-7,40 (m, 5H); analizė

[0321] (C₂₇H₃₅FN₂O₅) C, H, N. '

[0322] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L- a-( t- butil- Gly)- L-{ 4- F- Phe)- L-(( A/- 2>4- dimetoksi-benzil)-( S>p/ roM/ a)}- E- propenoato gavimas

[0323] Į -• etil-S^Boc-L-^/V^^-dimetoksi-benzilHSJ-p_/'roM/aJJ-E-pcopenoato (0,309 g, 0,648 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (8 ml) pridedama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 8 ml). Pamaišius 1,5 vai., lakios medžiagos nugarinamos ir gaunama putų pavidalo negryninta amino druska.

[0324] Į Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn (2,04 g, 4,19 mmol) tirpalą EtOAc (200 ml) pridedama paladžio ant anglies (10 %, 200 mg). Atmosfera pakeičiama vandeniliu iš baliono. Pamaišius 3 vai., atmosfera pakeičiama argonu, ir reakcijos mišinys nufiltruojamas per #3 ir #5 VVhatman'o filtro popierių. Nugarinus filtratą gaunama balta putų pavidalo medžiaga.

[0325] Šios putos sumaišomos su negryninta amino druska (pagaminta aukščiau aprašytu būdu) DMF (5 ml) ir atšaldoma iki 0 °C. Pridedama N,N-diizopropiletilamino (0,339 ml, 1,95 mmol, 3 ekv.), o po to HATU (0,247 g, 0,650 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 20 min., reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir palaikoma 1 vai., po to praskiedžiama MTBE (100 ml) ir plaunama 5 % KHSO₄, sočiu NaHC0₃ ir sočiu NaCI tirpalu (po 15 ml). Organinė fazė išdžiovinama ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (60 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-('SJ-p/raM/a)}-E-propenoatas (0,364 g, 74 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga. Rf = 0,34 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3284, 1713, 1655; 1H BMR (CDCI3) 8 1,01 (s, 9H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,46 (s, 9H), 1,50-1,63 (m, 2H), 1,68-1,81 (m, 1H), 1,85-1,99 (m, 1H), 2,09-2,20 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H, J = 13,5, 5,4), 3,15-3,26 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,97 (d, 1H, J = 9,3), 4,17 (kv,

[0326] 2H, J = 7,2), 4,27-4,38 (m, 1H), 4,29 (d, 1H, J =14,3), 4,42 (d, 1 H, J = 14,3), 4,84-4,92 (m, 1H), 5,22 (d, 1H, J= 9,6), 5,74 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,6), 6,45-6,53

[0327] (m, 2H), 6,69 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,76-6,87 (m, 3H), 7,10-7,28 (m, 3H), 8,26 (d, 1H, J = 5,9); analizė (C₄₀H₅₅FN₄O₉) C, H, N.

[0328] Tarpinio etii- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-a-( t- butil- Gly)- L-( 4- F-Phe)- L-(( W- 2, 4- dimetoksibenzil)- fS;- p/ roM/ a)}- E- propenoato gavimas

[0329] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzilHSJ-p/roM/a)}-E-propenoato ir izoksazol-5-karbonilchlorido, naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-{(5_,-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L(Tr-G/n)-E-propenoatui gauti: Rf = 0,60 (10 % CH₃OH CHCI₃); IR (cm"¹) 3295, 1713, 1666; 1H BMR (CDCI3) ₆1,07 (s, 9H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,51 -1,64 (m, 2H), 1,71 -1,83 (m, 1 H), 1,96-2,07 (m, 1H), 2,11-2,21 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,99 (dd, 1H, J = 13,7, 5,9), 3,13-3,26 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,18 (kv, 2H, J= 7,2), 4,23-4,48

[0330] (m, 4H), 4,85-4,93 (m, 1H), 5,76 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,40-6,52 (m, 3H), 6,71 (dd, 1H, J =15,6, 5,3), 6,79-6,88 (m, 2H), 6,92 (d, 1 H, J = 9,0), 7,09-7,22 ³(m, 3H), 7,37 (d, 1H, J = 9,0), 8,27 (d, 1 H, J = 6,2); analizė *

[0331] (C₄oH5oFN509-0,25H20) C, H, N.

[0332] Produkto - etii- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- a-( t- butil- Gly)- L-( 4- F-Phe)- L-(( S)- p/ roM/ a}- E- propenoato - gavimas

[0333] Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/roM/a)}-E-

[0334] propenoato, naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(('Sy)-p/ra/-/\/a)}-E-propenoatui gauti: Rf = 0,30 (5 % CH₃OH CHCI₃); IR (cm'¹) 3307 pl., 1684, 1660; 1H BMR (CDCI3) 5 1,02 (s, 9H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,61 (m, 1H), 1,75-1,97 (m,

[0335] 2H), 2,14-2,25 (m, 1H), 2,28-2,40 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 3,03 (d, 2H, J = 6,5), 3.27-3,42 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,36 (d, 1H, J = 9,8), 4,52-4,63 (m,

[0336] 1H), 4,86-4,95 (m, 1H), 5,71 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,44 (s, 1H), 6,57-6,64

[0337] (m, 1H), 6,73 (dd, 1H, J = 15,6, 5,3), 6,83-6,91 (m, 2H), 7,09-7,15 (m, 2H), 7.28-7,36 (m, 2H), 7,59 (d, 1H, J = 8,1); analizė (C_3iH_4oFN₅0₇) C, H, N.

[0338] 9 pavyzdys: Junginio A- 8 - etil- S- flS'- metilizoksazoI- S'- karbonilJ- L- Val- L-( 4- F- Phe)- L-(( SJ- p/ per- yUa}- E- propenoato - gavimas

[0339]

[0340] Tarpinio ( 2' S, 4S, 4" S)- 4-{ 2'-( 4"- benzil- 2"- okso- oksazolidin- 3"- karbonil)-5'- hidroksipentil}- 2, 2- dimetiloksazolidin- 3- karboksirūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0341] [ 0 °C temperatūros (2'S,4S,4"S)-4-{2'-(4"-benzil-2,,-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-pent-4'-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (pagamintas pagal 6 pavyzdyje aprašytą metodiką 0,455 g, 0,963 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (3 ml) pridedama borano-tetrahidrofurano komplekso (0,96 mM,0 M tirpalo THF, 0,96 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 30 min. pridedama vandens (3 ml), ir natrio perborato tetrahidrato (0,148 g, 0,962 mmol, 1 ekv.), ir ledo vonia nuimama. Palaikius dar valandą reakcijos mišinys praskiedžiamas MTBE (125 ml), plaunamas vandeniu (15 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (2 x 15 ml), džiovinamas Na2SC >4 ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (50 % EtOAc heksanuose), gaunamas (2'S,4S,4"S)-4-{2'-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-5'-hidroksipentil}-2,2-dimetil-oksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (0,339 g, 72 %), kuris yra bespalvė stiklo pavidalo medžiaga: Rf = 0,41 (50 % EtOAc heksanuose); IR (cm"¹) 3486, 1780, 1693; ¹H BMR (CDCI₃) 8 1,42-1,85 (m, 21 H), 2,13-2,24 (m, 1H), 2,70 (dd, 1 H, J = 13,1,10,0), 3,29-3,38 (m, 1H), 3,61-4,22 (m, 8H), 4,63-4,76 (m, 1H), 7,19-7,38 (m, 5H); analizė

[0342] (C₂₆H₃₈N₂0₇-0,5H₂0) C, H, N.

[0343] Tarpinio ( 1SJ3' S)-{ 2-( 1'-( 2", 4"- dimetoksibenzil)- 2'- okso- piperidin- 3'- il)- 1-hidroksimetiletilj- karbamo rūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0344] (2'S,4S,4"S)-4-{2'-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-5'-hidroksipentil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties tret- butilo esteris (3,88 g, 7,92 mmol, 1 ekv.) ištirpinamas Et_aN (3,97 ml, 28,51 mmol, 3,6 ekv.). Mišinys atšaldomas iki -12 °C ir dedamas sieros trioksido-piridino kompleksas (5,04 g, 31,67 mmol, 4 ekv.) DMSO (150 ml) tokiu greičiu, kad temperatūra būtų tarp 8-17 °C. Tirpalas maišomas 23 °C temperatūroje 3 vai. Reakcijos mišinys'atšaldomas ledinio vandens vonioje ir skaldomas pridedant H₂O (150 ml). Gautas tirpalas ekstrahuojamas EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami 5 % citrinos rūgštimi (100 ml), sočiu NaCI tirpalu (100 ml), džiovinami Na₂SŪ₄ ir nufiltruojami. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir vakuume išdžiovinus liekaną gaunama balta putų pavidalo medžiaga (3,53 9)-

[0345] [ šios medžiagos (3,53 g, 7,22 mmol, 1 ekv.) tirpalą 2:1 THF ir EtOH mišinyje (120 ml) pridedama 2,4-dimetoksibenzilamino hidrochlorido (5,88 g, 28,89 mmol, 4 ekv.), NaOAc (2,37 g, 28,89 mmol, 4 ekv.) ir NaBh_hCN (0,908 g, 14,45 mmol, 2 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas per naktį (20 vai.), po to praskiedžiamas MTBE (200 ml). Organinis sluoksnis plaunamas 10 % KHSO₄(100 ml), sočiu NaHC0₃ (100 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (100 ml), džiovinamas Na₂S0₄ ir sukoncentravus gaunama gelsva putų pavidalo medžiaga.

[0346] Į šios putų pavidalo medžiagos (3,34 g, 7,22 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₃OH (50 ml) pridedama p-toluensulfonrūgšties (0,275 g, 1,44 mmol, 0,2 • ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 50 °C temperatūroje 2,5 vai. ir po to praskiedžiamas CH₂CI₂ (100 ml). Organinis sluoksnis, plaunamas sočiu NaHC0₃ (100 ml), džiovinamas Na₂S0₄ ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (3 % CH₃OH CH₂CI₂), gaunamas (1S,3'S)-{2-(1'-(2",4"-dimetoksibenzil)-2'-okso-piperidin-3_,-il)-1-hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties fref-butilo esteris, kuris yra balta putų pavidalo medžiaga (1,33 g, 44 % per tris stadijas): 1H BMR (CDCI3) 5 1,44 (s, 9H), 1,71-1,85 (m, 2H), 1,92-1,98 (m, 2H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,71-2,78 (m, 1H), 3,19-3,32 (m, 2H), 3,45-3,69 (m, 4H), 4,11-4,20 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 5,47 (m, 1H), 6,44 (s, 1H), 7,20-7,33 (m, 2H).

[0347] Produkto - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3,- karbonil)- L- Val- L-( 4- F- Phe)- L-(( rS> p/ per- vA/ a}- E- propenoato - gavimas

[0348] (1 S,3'S)-{2-(1 ,-(2"l4"-dimetoksibenzil)-2'-okso-piperidin-3'-il)-1 - hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris paverčiamas į produktą - etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(('SJ-p/per->A/a}-E-propenoatą - analogišku būdu kaip ir aprašytas aukščiau duotame 6 pavyzdyje (1 S,3_,S)-{2-(1_,-(2"_l4"-dimetoksibenzil)-2'-okso-piperidin-3'-il)-1-hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties tret-butilo esteris paverčiamas į produktą etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(CSj-p/roM/a}-E-propenoatą: Rf = 0,24 (5 % CH₃OH CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3284 pl., 1713, 1655. 1637 pl.; 1H BMR(CDCI3) 5 0,94 (d, 3H, J= 6,8), 0,98 (d, 3H, J = 6,8), 1,29 (t 3H, J = 7,2), 1,43-1,56 (m, 2H), 1,66-1,78 (.t,, 1H), *!,83-2,05 (m, 4H), 2,16-2.28 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H, J = 13,7, 6,2), 3,13 (dd, 1H, J = 13,7, 5,9), 3,21-3,37 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,36-4,45 (m, 2H), 4,80-4,88 (m, 1 H), 5,76 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,6), 5,96 (s, 1 H), 6,43 (s, 1 H), 6,70 (dd, 1 H, J

[0349] = 15,6, 5,3), 6,81 (d, 1H, J = 8,7), 6,86-6,98 (m, 2H), 7,09-7,19 (m, 2H), 7,22-7.29 (m, 1 H), 8,07 (d, 1 H, J = 6,5).

[0350] 10 pavyzdys: Junginio B- 1 - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-ValvF( COCH2)- L-( 4- F- Phe)- L- G/ n}- E- propenoato - gavimas

[0351]

[0352] Įvinilmagnio bromido (133 ml 1,0 M tirpalo THF, 133 mmol, 1,0 ekv.) tirpalą THF (300 ml) 0 °C temperatūroje per lašinimo piltuvėlį sulašinamas izobutiraldehido (9,59 g, 133 mmol, 1 ekv.) tirpalas THF (50 ml). Pabaigus lašinti, reakcijos mišinys maišomas 30 min. 0 °C temperatūroje, po to pridedama etilmalonilchlorido (17,0 ml, 133 mmol, 1,0 ekv.) Pamaišius 1 vai.

[0353] ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną nufiltruojant per siiikagelį (eliuuojama 5 % EtOAc heksanuose), gaunamas tarpinis malono rūgšties esteris (11,5 g, 40 % išeiga). Ši medžiaga charakterizuota nebuvo, bet buvo sumaišyta (gryna) su Ti(OEt) 4 (1,13 ml, 5,3& mmol, 0,10 ekv.) ir kaitinama 190 °C temperatūroje 4 vai., po to atšaldoma iki 60 °C. Pridedama EtOH (50 ml), po to 6,0 M KOH (50 ml) ir rudas reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 4 vai. Atšaldžius iki 23 °C, reakcijos mišinys nufiltruojamas per vidutinio tankumo sukepinto stiklo filtrą ir filtratas paskirstojnas tarp vandens (150 ml) ir Et₂0 (2 x 150 ml). Po to vandeninis sluoksnis parūgštinamas iki pH = 2 (pagal pH popierėlį) koncentruota HCI ir ekstrahuojama 1:1 EtOAc ir heksanų mišiniu (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, koncentruojami ir liekaną nudistiliavus sumažintame slėgyje, gaunama trans-6-metilhept-4-eno rūgštis

[0354] (3,58 g, 47 %), kuri yra bespalvis skystis: vir. temp. 107-112 °C (1 toras); IR (cm'¹) 2960, 1711; 1H BMR (CDCb) 6 0,96 (d, 6H, J = 6,5), 2,18-2,45 (m, 5H), 5,31-5,50 (m, 2H); analizė (C₈H_i40₂) C, H.

[0355] Tarpinio trans- 6- metilhept- 4- eno rūgšties ( 2/ ?- hidroksi- 1/ ?- metil- 2-feniletil) metilamido gavimas

[0356] į trans-6-metilhept-4-eno rūgšties (3,50 g, 24,6 mmol, 1 ekv.) ir N,N-dimetilformamido (0,03 ml, 0,39 mmol, 0,016 ekv.) tirpalą benzene (60 ml) 23

[0357] °C temperatūroje pridedama oksalilo chlorido (2,25 ml, 25,8 mmol, 1,05 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 2 vai., po to sukoncentruojamas sumažintame slėgyje. Gauta alyva ištirpinama THF (20

[0358] ml) ir 0 °C temperatūroje supilama per kanulę į (1R,2R)-(-)pseudoefedrino (3,87 g, 23,4 mmol, 1 ekv.) ir trietilamino (3,92 ml, 28,1 mmol, 1,2 ekv.) tirpalą THF (150 ml). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstomas tarp pusiau sotaus NH₄CI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, sukoncentruojama ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 40->50 % EtOAc heksanuose), gaunamas trans-6-metilhept-4-eno

[0359] rūgšties (2R-hidroksi-1R-metil-2-feniletil)metilamidas (6,31 g, 93 %), kuris yra klampi alyva: Rf = 0,35 (50 % EtOAc heksanuose); IR (cm^*1) 3382, 1622; ¹H BMR (CDCI₃, rotamerų mišinys) 8 0,96 (d, J = 6,8), 0,97 (d, J = 6,5), 1,11 (d, J = 6,9), 2,18-2,59 (m), 2,82 (s), 2,92 (s), 3,99-4,04 (m), 4,32-4,42 (m), 4,44-4,49 (m), 4,55-4,62 (m), 5,32-5,49 (m), 7,24-7,42 (m); analizė (C_i8H₂₇N0₂) C,

[0360] H.

[0361] <

[0362] Tarpinio trans- 6- metil- 2S-( 4- fluorbenzil)- hept- 4- eno rūgšties ( 2 R - hidroksi- 1/ ?- metil- 2- feniletil) metilamido gavimas

[0363] Į bevandenio ličio chlorido (7,18 g, 169 mmol, 10 ekv.) ir diizopropilamino (7,80 ml, 55,7 mmol, 3,3 ekv.) suspensiją THF (250 ml) -78 °C temperatūroje pridedama n-butilličio (32,5 ml 1,6 M tirpalo heksanuose, 52,0 mmol, 3,1 ekv.).Reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 30 min., palaikomas 5 min. 0 °C temperatūroje ir po to vėl atšaldomas iki -78 °C temperatūros. Per kanulę pridedama trans-6-metilhept-4-eno rūgšties (2R-hidroksi-1R-metil-2-feniletil)metilamido (4,91 g, 17,0 mmol, 1 ekv.) THF (50 ml) ir gautas tirpalas maišomas -78 "C temperatūroje 1,75 vai., palaikomas 0 °C temperatūroje 20 min., maišomas 23 °C temperatūroje 5 min., po to vėl atšaldomas iki 0 °C temperatūros. Supilamas 4-fluorbenzilbromido (6,34 ml, 50,9 mmol, 3 ekv.) tirpalas THF (15 ml) ir reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstomas tarp pusiau sotaus NH₄CI (230 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (200 ml, 2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na2SC >4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 20-_^40 % EtOAc heksanuose), gaunamas trans-6-metil-2S-(4-fluorbenzil)-hept-4-eno rūgšties (2R-hidroksi-1R-metil-2-feniletil)metilamidas (6,33 g, 94 %), kuris yra klampi alyva: Rf = 0,38 (40 % EtOAc heksanuose); IR (cm^*1) 3378, 1614; ¹H BMR (CDCI₃, rotamerų mišinys) 5 0,85-0,95 (m), 0,96 (d, J = 6,8), 2,10-2,32 (m), 2,34-2,46 (m), 2,58 (s), 2,67-2,79 (m), 2,82-2,94 (m), 3,00-3,18 (m), 3,94 (pl.), 4,37-4,52 (m), 5,24-5,42 (m), 5,44-5,56 (m), 6,89-7,01 (m), 7,08-7,14 (m), 7,19-7,38 (m); analizė (C₂₅H₃₂FN0₂) C, H, N.

[0364] Tarpinio 5S-( 1R- brom- 2- metilpropil)- 3R-( 4- fluorbenzil) dihidrofuran- 2- ono gavimas

[0365] [ trans-6-metil-2S-(4-fluorbenzil)-hept-4-eno rūgšties (2ft-hidroksi-1ft-metil-2-feniletil)metilamido (6,24 g, 15,7 mmol, 1 ekv.) ir ledinės acto rūgšties (4,49 ml, 78,4 mmol, 5 ekv.) tirpalą 4:1 THF ir H₂O mišinyje (165 ml) O °C temperatūroje per 10 minučių mažomis dalimis pridedama N-bromsukcinimido (2,93 g, 16,5 mmol, 1,05 ekv.). Gautas geltonas tirpalas maišomas 15 min. 0

[0366] °C temperatūroje, po to sušildomas iki 23 °C, o po to virinamas su grįžtamu šaldytuvu 45 min. Atvėsinus iki 23 °C, reakcijos mišinys paskirstomas tarp pusiau sotaus NaHC0₃ (200 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml, 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 4-»10% EtOAc heksanuose), gaunamas 5S-(1R-brom-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-onas (4,14 g, 80%), kuris yra gelsva alyva (pagal ¹H BMR turinti maždaug 5-10 % neidentifikuotų

[0367] priemaišų): R_r = 0,56 (25 % EtOAc heksanuose); IR (cm^*1) 1772; ¹H BMR (CDCb, pagrindinis izomeras) 5 0,94 (d, 3H, J = 6,5), 1,00 (d, 3H, J = 6,8), 2,05-2,35 (m, 3H), 2,83 (dd, 1 H, J = 13,6, 8,4), 2,92-3,03 (m, 1H), 3,11 (dd, 1 H, J = 13,6, 4,7), 3,90 (dd, 1 H, J = 9,0, 3,7), 4,33-4,40 (m, 1 H), 6,98-7,06 (m, 2H), 7,14-7,20 (m, 2H); analizė (C_i5H₁₈BrF0₂) C, H.

[0368] Tarpinio 5S-( 1S- azido- 2- metilpropil)- 3R-( 4- fiuorbenzil) dihidrofuran- 2- ono gavimas

[0369] Natrio azido 1,90 g, 29,2 mmol, 2,5 ekv.) ir 5S-(1R-brom-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-ono (3,85 g, 11,7 mmol, 1 ekv.) suspensija N,N-dimetilformamide (40 ml) šildoma 50 °C temperatūroje 67 valandas. Reakcijos mišinys atvėsinamas iki 23 °C ir paskirstomas tarp pusiau sotaus NaCI (200 ml) ir 1:1:1 EtOAc, heksanų ir acetono mišinio (2 x 200 ml, 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, sukoncentruojami, ir išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 9-»17% EtOAc heksanuose), gaunamas 5S-(1S-azido-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)-dihidrofuran-2-onas (2,10 g, 62%), kuris yra balta kieta medžiaga (pagal ¹H BMR turinti maždaug 5-10 % neidentifikuotų priemaišų): lyd. temp. 91-96 °C; Rf = 0,44 (25 % EtOAc heksanuose); IR (cm" ¹) 2097, 1772; ¹H BMR (CDCI₃, pagrindinis izomeras) 5 0,99 (d, 3H, J = 6,5), 1,02 (d, 3H, J = 6,8), 1,95-2,20 (m, 3H), 2,78-2,88 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H, J = 7,0, 4,2), 3,03-3,17 (m, 2H), 4,37-4,43 (m, 1H), 6,97-7,09 (m, 2H), 7,14-7,21 (m, 2H).

[0370] Tarpinio { 2- metil- 1S-( 4R-( 4- fluorbenzil)- 5- oksotetrahidrofuran- 2S-il) propil}- karbamo rūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0371] 5S-(1S-azido-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-ono (2,02 g, 6,93 mmol, 1 ekv.), di-fref-butildikarbonato (2,12 g, 9,71 mmol, 1,4 ekv.) ir Pd/C (10 %, 0,20 g) suspensja CH₃OH (100 ml) maišoma vandenilio atmosferoje (iš baliono) 16 valandų. Reakcijos mišinys nufiltruojamas su vakuumu per VVhatman'o #3 popierių ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (15 % EtOAc heksanuose), gaunamas {2-metil-1 S-(4R-(4-fluorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2S-il)propil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris (1,58 g, 62 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: Rf = 0,80 (5 % MeOH CH₂CI₂); IR (cm"¹) 3331, 1766, 1702; ¹H BMR (CDCI3) 5 0,93 (d, 3H, J = 6,8), 0,95 (d, 3H, J = 6,5), 1,41 (s, 9H), 1,71-1,83 (m, 1H), 1,95-2,06 (m, 1H), 2,16-2,27 (m, 1H), 2,80 (dd, 1H, J = 13,5, 8,6), 2,88-2,99 (m, 1H), 3,09 (dd, 1H, J = 13,5, 4,4), 3,32-3,40 (m, 1H), 4,42-4,48 (m, 2H), 6,95-7,03 (m, 2H), 7,11-7,18 (m, 2H); analizė

[0372] (C₂₀H₂₈FNO₄) C, H, N.

[0373] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L- Val<F( COCH2)- L-( 4- F- Phe)- L-( Tr- G/ n)}- E- propenoato gavimas

[0374] Į {2-metil-1S-(4R-(4-fluorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2S-il)propil}-karbamo rūgšties fref-butilo esterio (0,703 g, 1,92 mmol, 1 ekv.) tirpalą DME (25 ml) 23 °C temperatūroje pridedama ličio hidroksido (9,62 ml 1M vandeninio tirpalo, 9,62 mmol, 5 ekv.). Gauta suspensija maišoma 23 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstoma tarp 10 % KHSO₄ (50 ml) ir CH₂CI₂(3 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, sukoncentruojami ir liekana ištirpinama CH₂CI₂ (30 ml). Pridedama iš eilės miltelių pavidalo 4A molekulinių tinklelių (0,70 g), 4-metilmorfolino N-oksido

[0375] (0,451 g, 3,85 mmol, 2 ekv.) ir tetrapropilamonio perrutenato (0,068 g, 0,19 mmol, 0,10 ekv.). Gautas tamsus reakcijos mišinys maišomas 1,33 vai. 23 °C temperatūroje, po to nufiltruojamas su vakuumu per VVhatman'o #3 popierių, o po to per VVhatman'o #5 popierių. Sukoncentravus filtratą sumažintame slėgyje, gaunama tamsi liekana, kuri ištirpinama CH₂CI₂ (30 ml). Pridedama iš eilės negryninto etil-3-(H₂N-L-(Tr-G/n)-E-propenoato-HCI (2,30 mmol, 1,2 ekv., pagaminto pagal 2 pavyzdyje aprašytą metodiką ėtil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G//?}-E-propenoatui gauti), 4-metilmorfolino (0,846

[0376] ml, 7,69 mmol, 4 ekv.), HOBt (0,390 g, 2,89 mmol, 1,5 ekv.) ir EDC (0,553 g, 2,88 mmol, 1,5 ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas 19 valandų 23 °C temperatūroje, po to paskirstomas tarp sotaus NaCI tirpalo (100 ml) ir CH₂CI₂

[0377] (3 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 35-»40 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-Val^Y(COCH2)-L-(4-Phe)-L-(Tr-G/A_?)}-E-propenoatas (0,820 g, 53 %), kuris yra gelsvai ruda putų pavidalo medžiaga: Rf = 0,50 (50 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3307, 1708, 1666; 1H BMR (CDCI₃) 5 0,67 (d, 3H, J = 6,8), 0,92 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,40 (s, 9H), 1,53-1,67 (m, 1H), 1,91-2,04 (m, 2H), 2,32-2,41 (m, 2H), 2',46-2,55 (m. 'IH), 2,63 (dd, 1H, J = 12,1,5,9), 2,69-2,80 (m, 1H), 2,83 (dd, 1 H, J = 12,1, 8,2), 3,03 (dd, 1H, J = 17,7, 10,0), 4,05-4,11 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,40-4,50 (m, 1H), 4,84

[0378] (d, 1 H, J = 8,4), 5,38 (d, 1 H, J = 15,7), 6,01 (d, 1 H, J = 8,4), 6,60 (dd, 1 H, J = 15,7, 5,0), 6,92-6,99 (m, 2H), 7,03-7,12 (m, 3H), 7,17-7,30 (m, 15H); analizė

[0379] Produkto - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- ValxF( COCH2)- L-( 4- F-Phe)- L- G/ n}- E- propenoato - gavimas

[0380] Etil-3-{Boc-L-ValY(COCH₂)-L-(4-Phe)-L-(Tr-G/rt)}-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-ValvF(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoatą analogišku aprašytam 2 pavyzdyje būdu etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G//7)}-E-propenoatui paversti į produktą - etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/rt}-E-propenoatą lyd. temp. = 220 °C (skyla); Rf = 0,35 (10 % CH₃OH CH₂CI₂); IR

[0381] (_cm"¹) ₃₂77, ₁715, 1643; 1H BMR (DMSO-cfe) 6 0,81 (d, 3H, J = 6,2), 0,87 (d, 3H, J = 6,9), 1,21 (t, 3H, J = 6,5), 1,59-1,67 (m, 2H), 2,03 (s, pl„ 2H), 2,21-2,24 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,57-2,68 (m, 3H), 2,80-2,95 (m, 2H), 4,09 (kv, 2H, J =6,5), 4,30-4,34 (m, 2H), 5,41 (d, 1 H, J = 15,5), 6,55 (s, 1H), 6,61 (dd, 1H, J = 15,5, 5,5), 6,61 (dd, 1H, J = 15,5, 5,5), 6,73 (s, 1H), 6,99-7,16 (m, 5H), 8,01 (d, 1H, J = 7,8), 8,69 (d, 1H, J = 8,7); analizė (C₂₉H₃₇FN₄O₇) C, H, N.

[0382] 11 pavyzdys: Junginio A-10 - etil-S-^S'-metilizoksazol-S'-karbonil)-!.-Leu-NCH3-L-Phe-L-G//)}-E-propenoato - gavimas

[0383]

[0384] NCH₃-L-Phe-OCH₃ HCI (1,4 g) ištirpinamas CH₂Cl₂(50 ml) ir supilamas į vandeninio (vand.) 1N NaOH (7 ml) ir sotaus vandeninio NaHC0₃ (25 ml) mišinį. Sumaišius, organinė fazė atskiriama, o vandeninė fazė plaunama CH₂CI₂ (3 x 50 ml). Sumaišytos organinės fazės džiovinamos Na₂SŪ₄ ir nugarinus gaunamas laisvas aminas, kuris yra skaidri bespalvė alyva (1,14 g, 5,90 mmol). Šio amino ir (iPr)₂NEt (1,13 ml, 6,49 mmol) tirpalas DMF (10 ml) sulašinamas į 0 °C temperatūros Boc-L-Leu-OH (1,50 g, 6,49 mmol) ir HOBt (0,877 g, 6,49 mmol) tirpalą DMF (10 ml). Pridedama DCC (1,47 g, 7,12 mmol). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 1 vai., po to 23 °C temperatūroje - 48 vai. Mišinys nufiltruojamas nuosėdoms pašalinti, o filtratas nugarinamas. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (200 ml), plaunama sočiu vandeniniu NaHCŪ₃ (40 ml), džiovinama Na₂S0₄ ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (25 % EtOAc heksanuose), gaunamas Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe-OCH₃, kuris yra balta kieta medžiaga (2,04 g, 85 %): lyd. temp. = 126-127 °C; IR (cm^*1) 3401, 3319, 1743, 1708, 1649; ¹H BMR (CDCI3, pagrindinis izomeras) 8 0,92 (d, 3H J = 6,8), 0,95 (d, 3H, J= 6,5), 1,32-1,48 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,61-1,77 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H, J = 14,5, 10,5), 3,37 (dd, 1H, J = 14,5, 5,5), 3,72 (s, 3H), 4,48-4,57 (m, 1H), 4,98-5,04 (m, 1H), 5,20 (dd, 1H, J = 10,5, 5,5), 7,16-7,32 (m, 5H); analizė (C₂₂H₃₄N₂O₅) C, H, N.

[0385] Tarpinio Boc- L- Leu- NCH3- L- Phe- OH gavimas

[0386] Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe-OCH₃ (0,625 g, . 1,54 mmol) ištirpinamas CH₃OH (20 ml) ir atšaldomas iki 0 °C. Įlašinama vandeninio NaOH (6,15 ml 2N tirpalo, 12,3 mmol). Reakcijos mišinys maišomas 3 vai. 23 °C temperatūroje, po to supilamas į 10 % vandeninį KHSO₄ (150 ml). Šis mišinys ekstrahuojamas CH₂CI₂ (3 x 100 ml), sumaišytos organinės fazės džiovinamos. Na₂S0₄ ir nugarinus gaunamas Boc-L-Leu-NCH_s-L-Phe-OH, kuris yra balta putų pavidalo medžiaga (0,617 g, kiekybinė išeiga), kuris naudojamas negrynintas.

[0387] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L- Leu- NCH3- L- Phe- L-( Tr- G// i)- E- propenoato gavimas

[0388] Šis tarpinis junginys buvo pagamintas iš Boc-L-Leu-NCh_h-L-Phe-OH ir etil-3-(H₂N-L-(Tr-6/n)}-E-propenoato-HCI (pagamintas kaip aprašyta 2 pavyzdyje) pagal analogišką metodiką kaip ir aukščiau esančiame 2 pavyzdyje aprašytas etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/_/7)-E-propenoatas: IR (cm"¹) 3295, 1713, 1672,1649; *H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) 5 0,65 (d, J = 6,2), 0,66 (d, J = 6,5), 0,84 (d, J = 6,5), 0,88 (d, J = 6,5), 1,02-1,22 (m), 1,23-1,38 (m), 1,33 (s), 1,41 (s), 1,55-1,82 (m), 1,89-2,07 (m), 2,23-2,30 (m), 2,90 (s), 2,94 (s), 3,01 (dd, J = 14,6, 10,9), 3,03-3,13 (m), 3,26-3,37 (m), 3,27 (dd, J= 14,6, 3,4), 3,42-3,54 (m), 4,00-4,22 (m), 4,37-4,73 (m), 4,82-4,89 (m), 5,63-5,70 (m), 5,95 (dd, J = 15,9, 1,2), 6,23-6,28 (m), 6,66-6,75 (m), 6,79-6,89 (m), 7,09-7,34 (m), 8,14 (d, J = 8,7); analizė (C49H60N4O7) C, H, N.

[0389] Produkto- etil- S- KS'- metilizoksazol- a'- karboniO- L- Leu- NCIVL- Phe- L-G/ f?}- E- propenoato - gavimas

[0390] Etil-3-{Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe)-L-(Tr-G/_/i)}-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-S-^S'-metilizoksazol-S'-karboniO-L-Leu-NCHs-L-Phe)-L-G/n}-E-propenoatą analogišku aprašytam 2 pavyzdyje būdu etil-3-

[0391] {Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatui paversti į produktą - etil-3-{(5'-meti'lizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n}-E-propenoatą Rf = 0,23 (5 % CH₃OH CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3295, 1713, 1666, 1637; 1H BMR (CDCI₃) (izomerų mišinys) 0,65 (d, J = 6,2), 0,71 (d, J = 6,5), 0,93 (d, J = 6,5), 0,94 (d, J = 6,5), 1,30 (t, J= 7,2), 1,24-1,73 (m), 1,81-2,22 (m), 2,45 (s), 2,48 (s), 2,86-2,93 (m), 2,96 (s), 2,97 (s), 3,03-3,14 (m), 3,21-3,31 (m), 3,48 (dd, J = 14,0, 5,9), 4,19 (kv, J = 7,2), 4,38-4,45 (m), 4,52-4,70 (m), 4,74-4,81 (m), 5,62-5,67'(m), 5,73-5,79 (m), 5,81 (dd, J = 15,6, 1,6), 5,99 (dd, J = 15,6, 1,6), 6,03-6,09 (m), 6,35 (s), 6,40-6,45 (m), 6,77-6,94 (m), 7,42 (d, J= 7,2), 8,13 (d, J = 7,8).

[0392] 12. pavyzdys: Junginio C- 1 - etil- 3^( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val-0- L-( 4- F- Phe)- L- Gfn}- E- propenoato - gavimas

[0393]

[0394] Kolboje su termometru ir grįžtamu šaldytuvu ištirpinamas metilo (S)-1-hidroksi-3-(4-fluorfenil)propionatas (pagamintas iš L-H₂N-(4-F-Phe)-OCH₃pagal Hoffman et al., Tetrahedron 1992, vol. 48, 3007 aprašytą metodą) (0,99 g, 5,0 mmol) alilo alkoholyje (50 ml). Pridedama titano tetraizopropoksido (1,53 ml, 5,0 mmol) ir reakcijos mišinys šildomas 90 °C temperatūroje 3,5 vai. Reakcijos mišinys atvėsinamas iki kambario temperatūros ir supilamas į 250 ml 1:1 EtOAc/sotaus NH₄CI tirpalo. Organinė fazė atskiriama ir plaunama vandeniu (100 ml), sočiu NaCI tirpalu (100 ml), džiovinama (MgSC>4) ir nugarinamas tirpiklis. Liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 5-10 % EtOAc/heksanų gradientu ir gaunama 0,77 g (68 %) alilo (S)-1-hidroksi-3-(4-fluorfenil)propionato, kuris yra skaidrus skystis: Rf = 0,21 (15 % EtOAc/heksanuose); IR (gryna medžiaga) 3470 (pi ), 1734, 1510, 1221 cm'1; 1H BMR (DMSO-cfe) 6 1,24-1,27 (m, 1H), 2,92-2,99 (m, 1H), 3,09-3,15 (m, 1 H), 4,43-4,47 (m, 1 H), 4,65 (d, 2H, J = 5,9), 5,28-5,37 (m, 2H), 5,86-8,95 (m, 1H), 6,95-7,01 (m, 2H), 7,16-7,21 (m, 2H).

[0395] Alilo (S)-1-hidroksi-3-(4-fluorfenil)propionatas (0,070 g, 0,31 mmol) ištirpinamas CH₂CI₂ (20 ml). Pridedama Boc-L-Val-OH (0,068 g, 0,31 mmol),

[0396] o po to DMAP (0,004 g, 0,03 mmol) ir DCC (0,067 g, 0,33 mmol). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį ir tirpiklis nugarinamas vakuume. I.iekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 3-5 % EtOAc/heksanų gradientu. Boc-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-0-CH₂CH=CH₂ gaunamas kaip. 0,12 g (90 %) skaidrios alyvos: Rf = 0,18 (10 % EtOAc/heksanuose); IR (gryna medžiaga) 1752, 1717, 1510 cm_'¹; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,80-0,85 (m, 6H), 1,36 (s, 9H), 1,97-2,04 (m, 1H), 3,07-3,15 (m, 2H), 3,89-3,94 (m, 1H), 4,51-4,55 (m, 1H), 5,17-5,30 (m, 3H), 5,75-5,84 (m, 1H), 7,06-7,17 (m, 3H), 7,27-7,32 (m, 2H); analizė

[0397] (C₂₂H₃₀NO₆F) C, H, N.

[0398] Boc-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-0-CH₂CH=CH₂ (0,65 g, 1,52 mmol) ištirpinamas THF (15 ml). Pridedama tetrakis(trifenilfosfin)paladžio(0) (0,035

[0399] g, 0,03 mmol) ir reakcijos mišinys maišomas 5 min. 23 °C temperatūroje, [lašinama monoiino (0,16 ml, 1,83 mmol) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 2 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana ištirpinama 50 ml 4:1 heksanų/Et₂0. Produktas išekstrahuojamas į sotų NaHCŪ₃ tirpalą (50 ml), o organinė fazė išpilama. Vandeninė fazė parūgštinama iki pH = 1-2 kietu KHSO₄ ir produktas išekstrahuojamas į EtOAc (50 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgS0₄) ir sukoncentravus gaunama 0,50 g (86 %) laisvos rūgšties, kuri yra skaidri alyva. Ši medžiaga ištirpinama DMF (6 ml). Pridedama diizopropiletilamino (0,43 ml, 2,50 mmol), o po to etil-3-{H₂N-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato-HCI (pagaminto kaip aprašyta aukščiau duotame 2 pavyzdyje, 0,55 g, 1,25 mmol). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C. Pridedama HATU

[0400] (0,48 g, 1,25 mmol), ir reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. Vakuume nugarinamas DMF. Liekana ištirpinama EtOAc (30 ml), organinė fazė plaunama iš eilės 10 % HCI tirpalu (25 ml), sočiu NaHC0₃tirpalu (25 ml), H₂0 (25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas (MgSC_U), nufiltruojamas, sukoncentruojamas ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (0-»1,0 MeOH/ChfeCfe) gaunama 0,40 g (39 %) etil-3-{Boc-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/rt)}-E-propenoato, kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: Rf = 0,25 (3% _MeOH/CHCI₃); IR (KBr) 1691, 1512, 1159 cm-¹; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,78-0,83 (m, 6H), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,35 (s, 9H), 1.58-1,63 (,ii, 2H), 1,96-2,02 (m, 1H), 2,19-2,33 (m, 2H), 2,93-3,02 (m, 2H), 3,82-3,87 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,33-4,37 (m, 1H), 5,03-5,08 (m, 1 H), 5,60 (d, 1H, J = .15.8), 6,67 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 7,02-7,08 (m, 2H), 7,14-7,28 (m, 18H), 8,12 (d, 1H, J = 8,1), 8,59 (s, 1H); analizė (C₄₇H₅₄N₃O₈F) C, H, N.

[0401] Produkto - etil- S-^ S'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L- Val- O- L^- F- Phe)^-G//)}- E- propenoato - gavimas

[0402] Etil-3-{Boc-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//i)}-E-propenoatas paverčiamas etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoatu būdu, kuris yra analogiškas aukščiau duotame 2 pavyzdyje aprašytam būdui etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatui paversti į etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n}-E-propenoatą: Rf = 0,05 (3% MeOH/CHCh); IR (KBr) 1746, 1719, 1661, 1549 cm_"¹; ¹H _BMR(DMSO-cfe) 8 0,87 (d, 3H, J = 6,6), 0,92 (d, 3H, J = 6,6), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,61-1,74 (m, 2H), 1,96-2,01 (m, 1H), 2,15-2,22 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 3,00-3,03 (m, 2H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,0), 4,27-4,32 (m, 1H), 4,33-4,38 (m, 1H), 5,06-5,11 (m, 1H), 5,63 (d, 1H, J= 15,6), 6,54 (s, 1H), 6,68 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,5), 6,78 (s, pl., 1H), 6,95-7,00 (m, 2H), 7,20-7,24 (m, 3H), 8,06 (d, 1H, J = 8,1), 8,87 (d, 1H, J = 7,7); analizė (C₂₈H₃₅N₄O₈F) C, H, N.

[0403] 13 pavyzdys: Junginio A- 11 - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-( 2-Naft)- NCH3- L-( 4- F- Phe)- L- G/ n}- E- propenoato - gavimas

[0404]

[0405] Tarpinio etil- 3-{ Boc- NCH3- L-( 4- F- Phe)- L-{ Tr- G/ n)- E- propenoato gavimas

[0406] Boc-(4-F-Phe)-0H (4,46 g 15,75 mmol, 1 ekv.) ir CH₃I (7,84 ml, 126 mmoi, 8 ekv.) ištirpinami sausame THF (100 ml) ir atšaldoma iki 0°C. Įsį tirpalą intensyviai maišant, pridedama NaH (1,89 g, 47,25 mmol, 3 ekv.). Pamaišius 23 °C temperatūroje 24 vai., į mišinį atsargiai pridedama EtOAc (3 ml) ir H₂O (3 ml), ir gauta suspensija nugarinama iki sausos liekanos. Ištirpinus H₂O (100 ml), reakcijos mišinys plaunamas Et₂Ū (2 x 100 ml). Vandeninis sluoksnis parūgštinamas iki pH = 3 10 % citrinų rūgšties tirpalu, ir po to ekstrahuojamas EtOAc (2 x 100 ml). Sumaišyti EtOAc ekstraktai plaunami iš eilės pusiau sočiu NaHC0₃ (150 ml), 5 % Na₂S₂Ū₃ (150 ml) ir

[0407] H₂O (150 ml), džiovinami Na₂S0₄ ir sukoncentravus gaunamas Boc-NCH₃-(4-F-Phe)-OH, kuri yra gelsva putų pavidalo medžiaga (4,37 g, 80 %), ir ji naudojama negryninta. ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) 5 1,35 (s), 1,40 (s), 2,69 (s), 2,75 (s), 2,96-3,13 (m), 3,23-3,33 (m), 4,54-4,58 (m), 4,76-4,81 (m), 6,96-7,01 (m), 7,15-7,17 (m).

[0408] HCI tirpalas 1,4-dioksne (4,0 M, 15 ml) supilamas į etil-3-(Boc-L-(Tr-G/_/7))-E-propenoato (pagaminto pagal aukščiau duotame 2 pavyzdyje aprašytą metodiką 3,57 g, 6,73 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (15 ml) 23 °C temperatūroje. Po 2 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (50 ml) ir iš eilės pridedama Boc-NCH₃-(4-F-Phe)-OH (pagamintos pagal prieš tai esančiame paragrafe aprašytą metodiką 2,0 g, 6,73 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (1,23 g, 9,09 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolino (2,0 ml, 18,19 mmol, 3 ekv.) ir EDC (1,74 g, 9,09 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄, koncentruojami, ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (30 % EtOAc heksane), gaunamas etil-3-{Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/r_?)-E-propenoatas (4,07 g, 84 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 1666, 1510, 1167; ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) 5 1,29 (t, J = 7,2), 1,37 (s), 1,65-1,75 (m), 1,95-2,06 (m), 2,29-2,33 (m), 2,66 (s), 2,91-2,99 (m), 3,22-3,29 (m), 4,18 (kv, J =7, 2), 4,52-4,58 (m), 5,68 (d, J = 15,9), 6,45 (d, J = 8, 4), 6,74 (dd, J = 15,6, 5,4), 6,91-6,99 (m), 7,11-7,33 (m); analizė (C₄₃H₄₈FN₃O₆) C, H, N.

[0409] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L-( 2- Naft)- NCH3- L-( 4- F- Phe)- L-( Tr- 6// 7)- E- propenoato gavimas

[0410] HCI tirpalas 1,4-dioksnė (4,0 M, 3 m!) supilamas į etil-3-(Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (0,388 g, 0,54 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (3 ml) 23 °C temperatūroje. Po 2 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama DMF (10 ml), atšaldoma iki 0 °C ir iš eilės pridedama DIEA (0,188 ml, 1,08 mmol, 2 ekv.), Boc-L-(2-Naft)-OH (0,170 g, 0,54 mmol, 1,0 ekv.) ir HATU (0,205, 0,54 mmol, 1 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 1 vai. Lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje, o liekana ištirpinama EtOAc (50 m) ir plaunama 0,5 N HCI (50 ml), sočiu NaHCŪ₃ (50 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (50 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas Na2SC>4, koncentruojamas ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksane), gaunamas etil-3-{Boc-L-(2-Naft)-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (0,437 g, 88 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm_"¹) 1656, 1509, 1162, ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) 8 0,88 (t, J = 7, 2), 1,27 (s), 1,30 (s), 1,48-1,58 (m), 1,64-1,67 (m), 1,97-2,11 (m), 2,23-2,28 (m), 2,42-2,50 (m), 2,62-2,69 (m), 2,80 (s), 2,90 (s), 3,00-3,07 (m), 3,15-3,20 (m), 3,25-3,32 (m), 4,18 (kv, J = 7,2), 4,42-4,46 (m), 4,53-4,56 (m), 4,61-4,66 (m), 4,72-4,82 (m), 5,94-5,00 (m) 5,63 (d, J = 15,6), 6,12 (d, J = 15,6), 6,60 (dd, J= 15,6, 5,4), 6,75-6,89 (m), 6,70-7,08 (m), 7,19-7,30 (m), 7,41-7,50 (m), 7,70-7,82 (m), 8,80 (d, J = 8,4); analizė (C₅₆H₅₉FN₄O₇) C, H, N.

[0411] Produkto - etil- 3-{( 5,- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-( 2- Naft)- NCH3- L-( 4- F-Phe)- L- G// ?}- E- propenoato - gavimas

[0412] Etil-3-{Boc-L-(2-Naft)-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-(2-Naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-G//7}-E-propenoatą analogišku būdu, kaip aprašytas aukščiau duotame 2 pavyzdyje etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G//i)-E-propenoatui paversti į produktą - etil-S-^S'-metilizoksazol-S'-karbonilJ-L-Leu-L- ¹Phe)-L-G/n}-E-propenoatą: IR (cm"¹) 3296, 1654, 1510; ¹H BMR (DMSO-d₃, izomerų mišinys) 6 1,17-1,24 (m), 1,62-1,78 (m), 2,04-2,15 (m), 2,38 (s), 2,42 (s), 2,71-2,79 (m), 2,84 (s), 2,87-2,92 (m), 3,03 (s), 3,15 (d, J = 7,5), 3,98-4,06 (m), 4,08-4,12 .(m), 4,38-4,42 (m), 4,94 (m), 5,03-5,07 (m), 5,09-5,18 (m), 5,66-5,82 (m), 6,42 (s), 6,43 (s), 6,66-6,81 (m), 6,88-6,94 (m), 7,01-7,06 (m), 7,13-7,17 (m), 7,24-7,34 (m), 7,43-7,46 (m), 7,56 (s), 7,76-7,84 (m), 8,08 (d, J = 7,8), 8,60 (d, J = 8,4), 9,01 (d, J = 7,2); analizė (C₃₇H_4oFN₅0₇-0,75H₂0) C,

[0413] 14 pavyzdys: Junginio A- 9 - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- His-NCH3- L-( 4- F- Phe)- L- G// i}- E- propenoato - gavimas

[0414]

[0415] Etil-3-{Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-His-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatą analogišku būdu, kaip ir etil-3-{(5_,-metilizoksazol-3_,-karbonil)-L-(2-Naft)-NCH₃-L-Phe)-L-G/rt}-E-propenoatas, aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje (naudojant Boc-L-(Tr-His)-OH vietoj Boc-L-(2-Naft)-OH: IR (cm'¹) 3302, 1655, 1202; 1H BMR (DMSO-d₃, izomerų mišinys) 5 1,21 (t, J = 7,2), 1,70-1,78 (m), 2,05-2,09 (m), 2,41 (s), 2,44 (s), 2,69-3,26 (m), 4,11 (kv, J = 7,2), 4,38-4,53 (m), 5,07-5,19 (m), 5,51-5,84 (m), 6,44 (s), 6,48 (s), 6,63-6,86 (m), 6,89-7,01

[0416] (m), 7,09-7,19 (m), 7,23-7,42 (m), 8,02 (d, J = 8,7), 8,15 (d, J = 8,1), 8,59 (d, J = 8,7); 8,94 (s), 9,04 (s), 9,14 ( d, J = 6,9); analizė (C30H36FN7O7 TFA H2O)

[0417] 15 pavyzdys: Junginio A- 12 - etil- S^ S'- metilizoksazol- S'- karbonilJ- L-Leu- NCHj- L-( 4- F- Phe)- L- G/ n}- E- propenoato - gavimas

[0418]

[0419] Etil-3-{Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etii-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-l^_eu-NC_H3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G_/n)-E_-^pro^penoat_ąanalogišku būdu, kaip ir etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-(2-Naft)-NCH₃-L-Phe)-L-G/n}-E-propenoatas, aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje (naudojant Boc-L-Leu-OH vietoj Boc-L-(2-Naft)-OH): IR (cm"¹) 3325, 1663, 1171; ¹H BMR (DMSO-cfe, izomerų mišinys) 6 0,64-0,67 (m), 0,86-0,88 (m), 1,17-1,23 (m), 1,32-1,40 (m), 1,59-1,75 (m), 1,98-2,07 (m), 2,42 (s), 2,45 (s), 2,08 (s), 2,86-2,93 (m), 2,99 (s), 3,12-3,20 (m), 4,05-4,15 (m), 4,41-4,50 (m), 4,82-5,07 (m), 5,62 (d, J = 15,9), 5,86 (d, J = 15,9), 6,51 (s), 6,53 (s), 6,68-6,73 (m), 6,93-6,99 (m), 7,09-7,21 (m), 7,26-7,31 (m), 8,03 (d, J = 7,8), 8,08 (d, J = 7,8), 8,41 (d, J = 8,1); 8,94 (d, J = 7,2); analizė (C3oH4oFN507-1,25 CH₂CI₂) C, H, N.

[0420] 16 pavyzdys: Junginio A- 13 - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-( 1-Naft)- NCH3- L-( 4- F- Phe)- L- G// 7>- E- propenoato - gavimas

[0421]

[0422] Etil-3-{Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/rt)-E-propenoatas (aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{(5'-.metili20ksazol-3'-karbonil)-L-(1-Naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//7)-E-propeno-atą analogišku būdu, kaip ir etil-3-{(5'-metilizoksazol-3_,-karbonii)-L-(2-Naft)-NCH₃-L-Phe)-L-G/n}-E-propenoatas, aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje (naudojant Boc-L-(1-Naft)-OH vietoj Boc-L-(2-Naft)-OH: IR (cm"¹) 3308, 1659, 1169; ¹H BMR (DMSO-cf_e, izomerų mišinys) 8 1,16-1,23 (m), 1,61-1,78 (m), 1,98-2,02 (m), 2,07-2,12 (m), 2,41 (s), 2,43 (s), 2,77 (s), 2,78 (s), 2,84-2,87 (m), 2,93-3,03 (m), 3,08-3,14 (m), 3,31-3,38 (m), 4,00-4,15 (m), 4,27-4,32 (m), 4,40-4,46 (m), 4,58-4,64 (m), 5,07-5,17 (m), 5,57-5,73 (m), 6,45 (s), 6,57-6,61 (m), 6,71-6,88 (m), 6,89-6,91 (m), 7,11-7,19 (m), 7,31-7,38 (m), 7,50-7,58 (m), 7,73-7,78 (m), 7,83-7,94 (m), 8,08 (d, J = 8,1), 8,13 (d, J = 8,7), 8,62 (d, J = 8,1), 9,14 (d, J = 8,1); analizė (C37H40FN5O7) C, H, N.

[0423] 17 pavyzdys: Junginio B- 2 - etil- S- ftS'- metilizoksazol- S'- karbonil)-!.-Val¥( COCH2)- L-( 4- F- Phe)- L-( fS>p/ roM/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0424]

[0425] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L- Val^( COCH2)- L-( 4- F- Phe)-L-{(/ V- 2, 4- climetoksi-benzil)-( S>p/ roM/ a)- E- propenoato gavimas

[0426] Šis tarpinis junginys buvo pagamintas iš {2-metil-1S-(4R-(4-fluorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2S-il)propil}-karbamo rūgšties fref-butilo esterio (aprašyto 10 pavyzdyje) ir etil-3-{Boc-L-((W-2,4-dimetoksibenzil)-('S_/)-pirol- Ala)}-E-propenoato (aprašytas 6 pavyzdyje) analogišku būdu kaip ir aukščiau aprašytas etil-3-{Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas (4 pavyzdys): Rf = 0,24 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3293, 1717, 1668; ¹H BMR (CDCI_s) 8 0,82 (d, 3H, J = 6,8), 1,01 (d, 3H, J = 6,8), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,65 (m, 2H), 1,84-1,96 (m, 1H), 2,16-2,37 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,49-2,55 (m, 3H), 2,85-3,01 (m, 2H), 3,12-3,25 (m, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,31 -4,49 (m, 3H), 4,65-4,70 (m. 1 H), S *3 (dd, 1 H, J = 15,7, 1,4), 6,39-6,44 (m, 3H), 6.63 (dd, 1H, J = 15,7, 5,4), 6,93-7,01 (m, 2H), 7,05-7,10 (m, 1H), 7,12-7,18 (m, 2H), 7,24 (d, 1H, J- 8,7), 7,47 (d, 1H, J = 6,5); analizė (C_^H_^FN^g-O.SH_aO) C, H, N.

[0427] Produkto - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3I- karbonil)- L- ValvF( COCH2)- L-( 4- F-Phe)- L-( fSj- p/ roM/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0428] Etil-3-{Boc-L-ValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-{(A/-2_I4-dimetoksibenzil)-CSj-pirol- Ala)-E-propenoatas paveraamas į produktą - etil-3-{(5_,-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val^vF(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-(('SJ-p_/roM/a)}-E-propenoatą analogišku būdu kaip ir etil-3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-{(/V-2,4-dimetoksibenzil)-(SJ-p/roM/a)-E-propenoatas paverčiamas į aukščiau duotame 6 pavyzdyje aprašytą etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-p/"roM/a)}-E- propenoatą: lyd. temp. = 178-181 °C; Rf = 0,49 (10 % CH₃OH CHCI₃); IR (cm"¹) 3295, 1678 pl.; ¹H BMR (CDCI₃) 8 0,85 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J = 6,5), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,62 (m, 1H), 1,71-1,93 (m, 2H), 2,27-2,40 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,51-2,75 (m, 3H), 2,82-2,98 (m, 2H), 3,11-3,24 (m, 1H), 3,26-3,42 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,41-4,53 (m, 1 H), 4,63-4,72 (m, 1H), 5,50 (d, 1H, J= 15,4), 5,88 (s, 1H), 6,39 (s, 1H), 6,63 (dd, 1H, J = 15,4, 5,3), 6,92-7,03 (m, 2H), 7,08-7,31 (m, 4H); analizė (C₃₁H₃₉FN₄O₇) C, H, N.

[0429] 18 pavyzdys: Junginio C- 2 - etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val-0- L-( 4- F- Phe)- L-(( 5>p/ roM/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0430]

[0431] Tarpinio ( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val- 0- L-( 4- F- Phe)- OCH2CH=CH2 gavimas

[0432] Boc-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-OCH₂CH=CH₂ (pagamintas pagal 12 pavyzdyje duotą aprašymą, 0,91 g, 2,15 mmol) ištirpinamas 1,4-dioksane (28 ml) ir pridedama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 14 ml). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 14 vai. Tirpiklis nugarinamas, ir liekana ištirpinama EtOAc (50 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaHCŪ3 tirpalu (50 ml), po to sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgSO_-O ir nugarinus tirpiklį gaunama 0,66 g (kiekybinė išeiga) skaidrios alyvos.

[0433] Ši medžiaga ištirpinama CH₂CI₂ (20 ml). Pridedama piridino (0,17 ml, 2,08 mmol), ir reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C temperatūros. Pridedama 5-metilizoksazol-3-karbonilchlorido (0,33 g, 2,27 mmol), ištirpinto 2 ml Ch_feC_h, reakcijos mišinys sušildomas iki kambario temperatūros ir laikoma 1 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 5-»10 % EtOAc/heksanų gradientu. Produktas - (5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2 - yra 0,70 g (82 %) baltos kristalinės kietos medžiagos: R_r = 0,20 (30 % EtOAc/heksanuose); IR (cm"¹) 1745, 1661, 1553, 1186; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,85-0,92 (m, 6H), 2,14-2,21 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 3,05-3,19 (m, 2H), 4,32-4,37 (m, 1H), 4,53-4,60 (m, 2H), 5,16-5,28 (m, 3H), 5,74-5,85 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 7,01-7,07 (m, 2H), 7,26-7,29 (m, 2H), 8,76 (d, 1H, J = 8,1); analizė

[0434] Tarpinio etil- 3-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- Val- 0- L-( 4- F- Phe)- L-(( A/-2, 4- dimetoksibenzil)-( S>p/ roM/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0435] (5'-Metilizoksazo!-3'-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2 (0,67 g, 1,55 mmol) ištirpinamas THF (15 ml). [lašinama tetrakis(trifenilfosfin)-paladžio(O) (0,036 g, 0,03 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas 5 minutes. Įlašinama morfolino (0,16 ml, 1,86 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 6 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana ištirpinama 50 ml Et₂0. Produktas ekstrahuojamas du kartus sočiu NaHC0₃tirpalu (50 ml), ir organinė fazė išpilama. Vandeninė fazė parūgštinama iki pH = 1-2 10 % HCI, ir produktas ekstrahuojamas du kartus EtOAc (40 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgS0₄) ir sukoncentravus gaunama 0,57 g (95 %) alyvos, kuri išsikristalina stovėdama.

[0436] Dalis šios medžiagos (0,19 g, 0,50 mmol) ištirpinama DMF (3 ml). Pridedama diizopropiletilamino (0,34 ml, 1,0 mmol), o po to etil-3-{H₂N-L-((A/- 2,4-dimetoksibenzil)-fSj-p/roM/a)}-E-propenoato-HCI (pagaminto kaip aprašyta aukščiau duotuose 4 ir 6 pavyzdžiuose, 0,19 g, 0,50 mmol). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C temperatūros, pridedama HATU (0,19 g, 0,50 mmol), ir reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. DMF nugarinamas vakuume. Liekana ištirpinama EtOAc (30 ml) ir organinė fazė plaunama iš eilės 10 % HCI tirpalu (25 ml), sočiu NaHCŪ₃ tirpalu (25 ml), H₂O (25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml). Tirpiklis džiovinamas (MgSO^, nufiltruojamas ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (0-»1,0 % MeOH/Ch^Ch), gaunamas etil-S-^S'-metilizoksazol-S'-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-(_,S_/)-p_/^yoM/a)}-E-propenoatas (0,27 g, 72 %), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: Rf = 0,18 (3 % MeOH/CHCI₃); IR (KBr) 1671, 1547, 1510, 1209 cm_"¹; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,88 (d, 3H, J = 7,0), 0,93 (3H, J = 7,0), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,41-1,58 (m, 2H), 1,79-1,98 (m, 2H), 2,07-2,24 (m, 2H), 2,44 (s, 3H), 3,01-3,13 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,24 (s, 2H), 4,30 (t, 1H, J = 7,4), 4,45-4,48 (m, 1H), 5,12 (t, 1H, J = 6,3), 5,59 (d, 1H, J = 15,8), 6,45 (dd, 1H, J = 8,5, 2,2), 6,54-6,56 (m, 2H), 6,73 (dd, 1H, J = 15,5, 4,8), 6,89-6,95 (m, 3H), 7,20 (d, 1H, J = 8,5), 7,22 (d, 1H, J = 8,5), 8,08 (d, 1H, J = 8,8), 8,89 (d, 1 H, J = 7,4).

[0437] Produkto — etil- 3-{( 5,- metilizoksazol- 3,- karbonil)- L- Val- 0- L-( 4- F- Phe)- L-(( S )- pirol - Ala )}- E- propenoato - gavimas

[0438] Etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-CSj-p/roM/a)}-E-propenoatas (0,25 g, 0,33 mmol) ištirpinamas CHCI₃ (6 ml). Pridedami du lašai vandens, o po to DDQ (0,10 g, 0,43 mmol). Reakcijos mišinys šildomas 50-55 °C temperatūroje 8 vai. Atšaldžius, reakcijos mišinys supilamas į EtOAc (30 ml). Organinė fazė plaunama 30 ml 2:1 NaHCCVIN NaOH tirpalu, po to sočiu NaCI tirpalu (30 ml), džiovinama (MgSO_-O ir koncentruojama. Liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 0-*2 % MeOH/CH₂CI₂. Etil-3-{(5'-metilizoksazol-3_,-karbonil)-L-VaJ-0-L-(4-F-Phe)-L-(( S)- pirol- Ala)}-E-propenoatas (0,18 g, 90 %) gaunamas baltos amorfinės kietos medžiagos pavidalu: Rf = 0,09 (3 % MeOH/CHCb); IR (KBr) 1680, 1549 cm"1; ¹H BMR (DMSO-cfe) 5 0,91 (d, 3H, J = 6,6), 0,95 (3H, J = 6,6), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,36-1,44 (m, 1H), 1,56-1,61 (m, 1H), 1,74-1,82 (m, 1 H), 1,94-1,99 (m, 2H), 2,18-2,25 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,98-3,18 (m, 4H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0). 4,28-4,32 (m, 1H), 4,43-4,46 (m, 1H), 5,12 (m, 1H), 5,58 (d, 1H, J = 15,8), 6,56 (s, 1H), 6,72 (dd, 1H, J = 15,8, 4,8), 6,91-6,97 (m, 2H), 7,21 (d, 1 H, J = 5,9), 7,23 (d, 1 H, J = 5,9), 7,59 (s, 1 H), 8,06 (d, 1 H, J = 8,8), 8,92 (d,

[0439] 19 pavyzdys: Junginio B- 3 - 2-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L-Val^( COCH2)- L-( 4- F- Phe)- L-(rs ;- p/ roM/ a)}- E-( a- vinil- y- butirolaktono)-gavimas

[0440] Tarpinio ( Boc- L-{{ N- 2, 4- dirr\ etoks\ benzi\)-( S)- pirol- Ala}- E-( a- w\ n\\^-butirolaktono) gavimas

[0441] (1S,3'S)-{2-(1'-(2",4"-dimetoksibenzil)-2_,-okso-pirolidin-3'-il)1-hidroksi-metiletiljkarbamo rūgšties fref-butilo esteris (0,360 g, 0,881 mmol, 1 ekv.) buvo suoksidintas iki atitinkamo aldehido tokiu pačiu būdu kaip ir gaminant etil-3-{Boc-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-(_,S_/)-p_/roM/a)}-E-propenoatą (6 pavyzdys). Šis aldehidas sumaišomas su 3-(trifenil-X^s-fosfaniliden)-dihidrofuran-2-onu (pagamintu tokiu pačiu būdu kaip aprašyta Baldvvin et ai., J. Org. Chem. 1971, vol. 36, 1441) (0,320 g, 0,924 mmol, 1,05 ekv.) etilenglikolio dimetilo eterio (10 ml) ir DMF (2 ml) mišinyje. Re^_^ijos mišinys šildomas 100 °C alyvos vonioje 1,5 vai., paliekamas atšalti iki 23 °C per naktį, po to praskiedžiamas MTBE (200 ml), plaunamas vandeniu (20 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (20 ml), džiovinamas Na₂S0₄ ir nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (2,5 % CH₃OH CH₂CI₂, po to 67 % EtOAc CH₂CI₂), gaunamas (Boc-L-{(A/-2,4-dimetoksibenzil)-('S>)-p/ro/- >4/a}-E-(a-vinil-Y-butirolaktonas), kuris yra alyva (0,250 g, 60 %): Rf = 0,50 (67 % EtOAc CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3307, 1754, 1678; ¹H BMR (CDCI₃) 5 1,42 (s, 9H), 1,46-1,68 (m, 2H), 2,02-2,13 (m, 1H), 2,18-2,30 (m, 1H), 2,44-2,56 (m, 1H), 2,91-3,04 (m, 1H), 3,15-3,27 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 4,34-4,43 (m, 5H), 5,63-5,69 (m, 1 H), 6,42-6,47 (m, 2H), 6,48-6,53 (m, 1H), 7,09-7,13 (m, 1H).

[0442] Produkto - 2-{( 5'- metilizoksazol- 3'- karbonil)- L- ValvF( COCH2)- L-( 4- F- Phe)-L-(( S^- p/ roM/ a)}- E-( a- vinil^- butirolaktono) - gavimas

[0443] (Boc-L-{(A/-2,4-dimetoksibenzil)-('SJ-p_/raM/a}-E-(a-vinil-y-butirolakto-nas) paverčiamas į produktą - 2-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val^vF(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-(fS_/)-p_//'oM/a)}-E-(a-vinil-y-butirolaktoną) - analogišku būdu kaip aukščiau aprašytas būdas etil-S-^S'-metilizoksazol-S'-karbonil)-L-Valx{,(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(('SJ-p/roM/a)}-E-propenoatui gauti (17 pavyzdys): Rf = 0,28 (5 % MeOH/CH₂CI₂); IR (cm-¹) 3378 pl., 1749, 1678; ¹H BMR (CDCI₃) 6 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J = 6,8), 1,45-1,55 (m, 1H), 1,75-2,00 (m, 2H), 2,25-2,43 (m, 2H), 2,46-2,59 (m, 2H),2,48 (s, 3H), 2,63-2,72 (m, 1H), 2,77-2,90 (m, 3H), 3,06-3,26 (m, 2H), 3,29-3,44 (m, 2H), 4,32-4,46 (m, 3H), 4,65-4,71 (m, 1H), 5,72 (s, 1H), 6,14-

[0444] 6,20 (m, 1H), 6,40 (s, 1H), 6,94-7,02 (m, 2H), 7,03-7,11 (m, 2H). 7,24 (d, 1H, J = 9,0), 7,60 (d, 1H, J = 6,2); analizė (C₃₁H₃₇N₄O₇F) C, H, N.

[0445] 20 pavyzdys: Junginio B- 4 — etil- S-^ S'- metilizoksazol- S'- karbonil)-!.-ValT( COCH2)- L-( 4- F- Phe)- L-(( rS>p/ per- JA/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0446]

[0447] Šis produktas buvo pagamintas taip pat kaip ir aukščiau aprašyti etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(('SJ-p/per->A/a)}-E-propenoatas (9 pavyzdys) ir etil-3-{(5'-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-ValvF(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-G//?}-E-propenoatas (10 pavyzdys): lyd. temp. = 161-162 °C; ): Rf = 0,30 (5 % CH₃OH/CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3295, 1713, 1649; ¹H BMR (CDCI₃) 5 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J = 6,8), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,43-1,55 (m, 2H), 1,77-1,90 (m, 2H), 1,95-2,12 (m, 2H), 2,27-2,38 (m, 1H), 2,44-2,58 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,66-2,76 (m, 1H), 2,80-2,93 (m, 2H), 3,12-3,42 (m, 3H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,39-4,49 (m, 1H), 4,65-4,72 (m, 1 H), 5,50 (dd, 1 H, J = 15,9, 1,6), 5,80 (s, 1 H), 6,38-6,41 (m, 1 H), 6,62 (dd, 1 H, J = 15,9, 5,3), 6,94-7,02 (m, 2H), 7,08-7,28 (m, 4H).

[0448] Naudojant sintezės būdus, analogiškus aukščiau aprašytiems I-A formulės junginiams gauti, buvo pagaminti 21 - 30 pavyzdžių junginiai atitinkamai nuo ( A- 14) iki ( A- 23) :

[0449]

31 pavyzdys: Palyginamojo junginio # 2 - etil- 3-( Cbz- L- Leu- L- Phe- L- G// ?)-E- propenoato - gavimas

[0450] Į N-a-Boc-y-tritil-L-glutamino (18,7 g, 36,7 mmol, 1,0 ekv.) ir 4-metilmorfolino (8,08 ml, 73,5 mmol. 2,0 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (250 ml) 0 °C temperatūroje pridedama izobutichlorformiatc (4,77 m¹, 36.8 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 20 min., po to pridedama A/,0-dimetilhidroksilamino hidrochlorido (3,60 g, 36,7 mmol, 1,0 ekv.). Gautas tirpalas maišomas 0 °C temperatūroje 20 min. ir 23 °C temperatūroje 2 vai., po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄ ir koncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 40->20 % heksanai EtOAc), gaunamas {Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me (16,1 g, 82 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm"¹) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; ¹H BMR (CDCI3) 5 1,42 (s, 9H), 1,63-1,77 (m, 1H), 2,06-2,17 (m, 1 H), 2,29-2,43 (m, 2H), 3,17 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,73 (s, pl., 1H), 5,38-5,41 (m, 1 H), 7,20-7,31 (m, 15H); analizė (C₃₁H₃₇N₃O₅) C, H, N.

[0451] Į{Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me (16,1 g, 30,3 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF - 78 °C temperatūroje pridedama diizobutilaliuminio hidrido (50,5 ml 1,5 M

[0452] tirpalo toluene, 75,8 mmol, 2,5 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 4 vai. Pridedama metanolio (4 ml), o po to 1,0 M HCI (10 ml) ir mišinys sušildomas iki 23 °C. Gauta suspensija praskiedžiama Et₂Ū (150 ml) ir plaunama 1,0 M HCI (3 x 100 ml), pusiau sočiu NaHCO_a (100 ml) ir vandeniu (100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentravus gaunamas negrynas {Boc-L-(Tr-Gln)}-H (13,8 g, 97 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 114-116 °C; IR (cm"¹) 3313, 1697, 1494; ¹.H BMR (CDCb) 8 1,44 (s, 9H), 1,65-1,75 (m, 1H), 2,17-2,23 (m, 1H), 2,31-2,54 (m, 2H), 4,11 (s, pl„ 1H), 5,38-5,40 (m, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,16-7,36 (m, 15H), 9,45 (s, 1H).

[0453] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L-( Tr- G// i)}- E- propenoato gavimas

[0454] Į trietilfosfonacetato (5,59 g, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) tirpalą THF (200 ml) -78 °C temperatūroje pridedama natrio bis(trimetilsilil)amido (22,9 ml 1,0 M tirpalo THF, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) ir gautas tirpalas maišomas 20 min. Šioje temperatūroje. Per kanulę pridedama negryninto {Boc-L-(Tr-Gln)}-H (10,8 g, 22,9 mmol, 1 ekv.) THF (50 ml) ir reakcijos mišinys maišomas 2 vai. -78 °C temperatūroje, sušildomas iki 0 °C ir palaikomas 10 min. ir paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų midinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄ ir sukoncentruojami. -Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-(Tr-G//?)}-E-propenoatas (10,9 g, 88 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm"¹) 3321, 1710; ¹H BMR (CDCh) 6 1,27 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,42 (s, 9H), 1,70-1,78 (m, 1H), 1,80-1,96 (m, 1 H), 2,35 (t, 2H, J = 7,0), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,29 (s, pl„ 1 H), 4,82-4,84 (m,

[0455] 1H), 5,88 (dd, 1H, J = 15,7, 1,6), 6,79 (dd, 1H, J = 15,7, 5,3), 6,92 (s, 1H), 7,19-7,34 (m, 15H); analizė (C₃₃H₃₈N₂O₅) C, H, N.

[0456] Į etii-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato (1,00 g, 1,84 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4 dioksane (20 ml) 23 °C temperatūroje supilamas HCI tirpalas tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 20 ml). Po 3 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (50 ml) ir pridedama iš eilės Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,759 g, 1,84 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (0,373 g, 2,76 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolino (0,809 ml, 7,36 mmol, 4,0 ekv.) ir EDC (0,529 g, 2,76 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 18 vai., po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂S0₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (5 % CH₃OH CH₂CI₂), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G//7)}-E-propenoatas (1,25 g, 83 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 192-194 °C; IR (cm_"¹) 3295, 1696, 1678, 1655, 1519; 1H BMR (CDCI₃) 5 0,84 (d, 3H, J = 6,5), 0,86 (d, 3H, J = 6,5), 1,24-1,32 (m, 1H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,43-1,75 (m, 3H), 1,91-2,06 (m, 1H), 2,20-2,38 (m, 1H), 2,93-3,02 (m, 1H), 3,07-3,18 (m, 1H), 3,95-4,02 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,43-4,55 (m, 2H), 5,69 (d, 1H, J = 15,7), 6,46 (d, 1H, J = 7,5), 6,60 (d, 1H, J = 8,1), 6,69 (dd, 1 H, J = 15,7, 5,1), 7,09-7,38 (m, 27H); analizė (C5 iH56N407) C, H, N.

[0457] [ etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato (1,25 g, 1,49 mmol, 1 ekv.) ir triizopropilsilano (1,53 ml, 7,47 mmol, 5,0 ekv.) tirpaląCH₂CI₂ (20 ml)

[0458] 23 °C temperatūroje pridedama trifluoracto rūgšties (20 ml); susidaro ryškiai geltonas tirpalas. Reakcijos mišinys maišomas 20 min. 23 °C temperatūroje ir per šį laiką jis pasidaro bespalvis. Pridedama anglies tetrachlorido (20 ml) ir lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana trinama su Et₂0 (20 ml), gauta kieta medžiaga nufiltruojama su vakuumu, plaunama Et₂0 (3 x 50 ml) ir išdžiovinus ore, gaunamas etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propenoatas (0,717 g, 81 %): lyd. temp. = 219-221 °C; IR (cm"¹) 3300, 1672, 1535; 1H _BMR (DMSO-cfe) ₆ ₀,7₈ (d, 3H, J = 6,8), 0,82 (d, 3H, J = 6,5), 1,21 (t, 3H, J= 7,0 ), 1,25-1,37 (m, 2H), 1,42-1,54 (m, 1H), 1,58-1,80 (m, 2H), 2,02-2,09 (m, 2H), 2,84 (dd, 1H, J = 13,2, 8,9), 2,97 (dd, 1H, J = 13,2, 5,8), 3,93-4,01 (m, 1 H), 4,11 (kv, 2H, J = 7,0), 4,33-4,52 (m, 2H), 4,97 (d, 1 H, J = 12,3), 5,04 (d, 1 H, J =12,3), 5,64 (d, 1 H, J = 15,9), 6,69 (dd, 1 H, J = 15,9, 5,4), 6,76 (s, 1H), 7,13-7,37 (m, 11 H), 7,43 (d, 1H, J = 7,8), 7,99 (d, 1H, J = 8,1), 8,04 (d, 1 H, J = 8,1); analizė (C₃₂H₄₂N₄O₇) C, H, N. 32 pavyzdys: Palyginamojo junginio # 3 - etil- 3-( Cbz- L- Val- L- Phe- L- G/ n)-E- propenoato - gavimas

[0459] Palyginamasis junginys # 3

[0460] isA;

[0461] ■ Į etil-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato (pagaminto kaip aprašyta 31 pavyzdyje, 3,05 g, 5,62 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (20 ml) 23 °C temperatūroje supilamas HCI tirpalas tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 10 ml).Ii Po 3 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ?t'* ištirpinama CH₂CI₂ (50 ml) ir pridedama iš eilės Boc-L-Phe-OH (1,49 g, 5,62

[0462] mmol, 1,0 ekv.), HOBt (0,911 g, 6,74 mmol, 1,2 ekv.), 4-metilmorfolino (1,85 ml, 16,8 mmol, 3,0 ekv.) ir EDC (1,29 g, 6,73 mmol, 1,2 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 18 vai., po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SŪ₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 40-»50 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-G/_/?)}-E-propenoatas (2,77 g,

[0463] 71 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3306, 1706, 1661; ¹H BMR (CDCb) 8 1,29 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,76 (m, 1H), 1,87-

[0464] 1,99 (m, 1 H), 2,25-2,27 (m, 2H), 2,94-3,01 (m, 2H), 4,14-4,26 (m, 3H), 4,48-4,53 (m, 1 H), 4,95 (s, pl, 1 H), 5,64 (d, 1 H, J = 15,8), 6,29 (d, 1 H, J = 8,1), 6,64

[0465] (dd, 1H, J = 15,8, 5,4), 6,80 (s, pl., 1H), 7,14-7,32 (m, 20 H); analizė

[0466] [ etil-3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-G//7)}-E-propenoato (0,296 g, 0,429 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (10 ml) 23 °C temperatūroje supilamas HCI tirpalas tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 8 ml). Po 3 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (10 ml) ir pridedama iš eilės Cbz-L-Val-OH (0,108 g, 0,430 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (0,070 g, 0,518 mmol, 1,2 ekv.), 4-metilmorfolino (0,142 ml, 1,29 mmol, 3,0 ekv.) ir EDC (0,099 g, 0,516 mmol, 1,2 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 4 vai., po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir EtOAc (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SŪ₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (3 % CH₃OH CH2CM. gaunamas etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-G"-)}-E-propenoatas (0,220 g, 62 %), kuris yra balta kieta rredžiaga: lyd. temp. = 195-198 °C; IR (cm"¹) 3284, 1689, 1646; ¹H BMR (CDCI₃) 5 0,69 (d, 3H, J = 6,9), 0,82 (d, 3H, J = 6,5), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,63-1,74 (m, 1H), 1,96-2,02 (m, 2H), 2,22-2,35 (m, 2H), 2,93 (dd, 1 H, J = 14,0, 7,6), 3,10 (dd, 1H, J = 14,0, 6,7), 3,81-3,85 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,48-4,58 (m, 2H), 4,87 (d, 1H, J = 12,0), 5,06 (d, 1H, J = 6,9), 5,67 (d, 1 H, J= 15,6), 6,43 (d, 1H, J = 7,5), 6,63-6,72 (m, 2H), 7,10-7,40 (m, 26H); analizė (C₅₀H₅₄N₄O₇) C, H, N.

[0467] Į etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato (0,188 g, 0,229 mmol, 1 ekv.) ir triizopropilsilano (0,300 ml, 1,46 mmol, 6,4 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (10 ml) 23 °C temperatūroje pridedama tnfiuoracto rūgšties (5 ne-susidaro ryškiai geltonas tirpalas. Reakcijos mišinys maišomas 20 min. 23 °C temperatūroje ir per šį laiką jis pasidaro bespalvis. Pridedama anglies tetrachlorido (10 ml) ir lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana trinama su Et₂0 (20 ml), gauta kieta medžiaga nufiltruojama su vakuumu, plaunama Et₂Ū (3 x 50 ml) ir išdžiovinus ore, gaunamas etil-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-G/n)-E-propenoatas (0,094 g, 71 %): lyd. temp. = 240 °C (skyla); IR (cn^Y1) 3263, 1686, 1640; ¹H BMR (DMSO-d₆) 6 0,73 (d, 6H, J = 6,9), 1,21 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,60-1,75 (m, 2H), 1,83-1,90 (m, 1 H), 2,03-2,08 (m, 2H), 2,83 (dd, 1H, J = 13,6, 8,6), 2,96 (dd, 1H, J = 13,6, 6,2), 3,79-3,84 (m, 1 H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,2), 4,37-4,49 (m, 1H), 4,51-4,56 (m, 1H), 4,99 (d, 1H, J = 12,5), 5,06 (d, 1H, J= 12,5), 5,61 (d, 1 H, J = 15,5), 6,67 (dd, 1H, J= 15,5, 5,5), 6,76 (s, 1H), 7,13-7,36 (m, 12H), 8,06 (d, 2H, J = 8,1); analizė

[0468] 33 pavyzdys: Junginio ( A- 24) - etil- 3-( Cbz- L- Leu- L- Phe- L-( fSj- p/ roM/ a)}-E- propenoato - gavimas

[0469]

[0470] t; Tarpinio etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L-( fN- 2, 4- dimetoksibenzil)-( Sj- p/ ro/-

[0471] :.įsH ^/ a)}- E- propenoato gavimas

[0472] Į etil-3-{Boc-L-(('A/-2t₄-dimeto_ksibenzil)-('S_J-^p//'oM/a)}-E-propenoato.53*'

[0473] (pagaminto kaip aprašyta 6 pavyzdyje) (0,139 g, 0,292 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (4 ml) supilamas HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 4 ml). Pamaišius 1,5 vai., lakios medžiagos nugarinamos, ir gaunama negryna amino druska, kuri naudojama negryninta.

[0474] Ši amino druska ištirpinama CH₂CI₂ (7 ml) ir tada pridedama iš eilės Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,156 g, 0,378 mmol, 1,3 ekv.), 4-metilmorfolino (0,128

[0475] ml, 1,16 mmol, 4 ekv.), HOBt (0,067 g, 0,50 mmol, 1,7 ekv.) ir EDC (0,095 g, 0,50 mmol, 1,7 ekv.). Pamaišius 20 vai., reakcijos mišinys supilamas į sotų NaCI tirpalą (15 ml) ir ekstrahuojamas 10 % CH₃OH/CH₂CI₂ (3 x 25 ml). Sumaišytos organinės fazės džiovinamos Na₂S0₄ ir nugarinamos. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (60 % EtOAc heksanuose), gaunamas putų pavidalo etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((7V-2,4-dimetoksibenzil)-(_'S>^p/roM/a)}-E-propenoatas (0,158 g, 70 %): ¹H BMR (CDCI₃) 5 0,87-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,46-1,68 (m, 5H), 1,74-1,86 (m, 1H), 1,97-2,19 (m, 2H), 3,02 (dd, 1H, J = 13,7, 5,6), 3,11-3,24 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,20-4,30 (m, 2H), 4,35-

[0476] 4,45 (m, 2H), 4,82-4,90 (m, 1H), 5,07 (d, 1 H, J = 12,3), 5,13 (d, 1 H, J = 12,3), 5,36 (d, 1 H, J = 7,8), 5,82 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,2), 6,42-6,46 (m, 2H), 6,72 (dd, 1H, J = 15,6, 5,3), 6,88 (d, 1H, J = 8,7), 7,09 (d, 1H, J = 9,0), 7,13-7,20 (m, 5H), 7,29-7,37 (m, 5H), 8,09 (d, 1 H, J = 6,5).

[0477] Produkto - etil- 3-( Cbz- L- Leu- L- Phe- L-(( SJ- p/ roM/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0478] Etil-S-fCbz-L-Leu-L-Phe-L-CfA/^^-dimetoksibenziO-fSJ-p_/'roM/aJJ-E-propenoatas (0,156 g, 0,202 mmol, 1 ekv.) ir amonio cerio(IV) nitratas (0,277 g, 0,505 mmol, 2,5 ekv.) sumaišomi THF/vandens 2:1 mišinyje (3 ml) ir maišoma 2 vai. Reakcijos mišinys supilamas į sotų NaCI tirpalą (15 ml) ir ekstrahuojamas 10 % CH₃OH/CH₂CI₂ (3 x 25 ml). Sumaišytos organinės fazės džiovinamos Na2SC>4 ir nugarinamos. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 2-»5 % CH₃OH CH₂Cl₂), gaunamas etil-S-fCbz-L-Leu-L-Phe-L-^Sj-p_/roM/a^-E-propenoatas (0,059 g, 47 %), kuris yra nelabai balta kieta medžiaga: 1H BMR (CDCI3) 5 0,85-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,39-1,65 (m, 4H), 1,68-1,93 (m, 2H), 2,08-2,20 (m, 1H), 2,27-2,38 (m, 1H), 3,02-3,13 (m, 2H), 3,24-3,32 (m, 2H), 4,11-4,20 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,47-4,58 (m, 1H), 4,81-4,89 (m, 1H), 5,05 (d, 1H, J = 12,1), 5,12 (d, 1H, J = 12,1), 5,26 (d, 1H, J = 8,1), 5,78 (dd, 1H, J= 15,7, 1,2), 6,23 (s, 1H), 6,72 (dd, 1H, J= 15,7, 5,3), 7,13-7,25 (m, 6H), 7,30-7,37 (m, 5H), 7,54 (d, 1 H, J = 7,2).

[0479] 34 pavyzdys: Junginio ( A- 25) - etil- 3-( Cbz- L- Val- L- Phe- L-(( Sj- p/ roM/ a)}-E- propenoato - gavimas

[0480]

[0481] Tarpinio etil- S^ Cbz- L- Val- L- Phe- L^ fA/^^- dimetoksibenzilMSJ- p/ ro/-A/ a)}- E- propenoato gavimas

[0482] Etil-3-{Boc-L-(('A/-2,4-dimetoksibenzil)-('SJ-p_/roM/a)}-E-propenoatas (pagamintas kaip aprašyta 33 pavyzdyje) buvo kopuliuotas su Cbz-L-Val-L-Phe-OH analogišku būdu kaip etil-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas buvo paverstas į 31 pavyzdyje aprašytą 3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatą ir gautas etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((7\/-2,4-dimetoksibenzilHS)-pirol- Ala)}-E-propenoatas: IR (cm"¹) 3288, 1699, 1652; ¹H BMR (CDCI3) 5 0,87

[0483] (d, 3H, J = 6,8), 0,95 (d, 3H, J = 6,5), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,48-1,60 (m, 2H), 1,70-1,84 (m, 1H), 1,95-2,20 (m, 3H), 3,01 (dd, 1H, J = 13,4, 5,6), 3,09-3,25

[0484] (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,03-4,10 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,24 (d, 1 H, J = 14,2), 4,33-4,44 (m, 1H), 4,38 (d, 1 H, J = 14,2), 4,85-4,94 (m,

[0485] 1 H), 5,08 (d, 1H, J = 12,1), 5,14 (d, 1H, J= 12,1), 5,39 (d, 1H, J = 8,1), 5,80

[0486] (dd, 1 H, J = 15,6, 1,2), 6,42-6,47 (m, 2H), 6,70 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,3), 6,81 (d,

[0487] 1H, J = 9,0), 7,11-7,20 (m, 6H), 7,31-7,39 (m, 5H), 8,11 (d, 1H, J = 6,2); analizė (C₄₂H₅₂N₄O₉) C, H, N.

[0488] Produkto - etil- 3-( Cbz- L- Val- L- Phe- L-( fSJ- p/ roM/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0489] Etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(SJ-p/_/'oM/a)}-E-propenoato (0,215 g, 0,284 mmol, 1 ekv.), DDQ (0,071 g; 0,31 mmol, 1,1 ekv.) ir vandens (3 lašai) suspensija CHCI3 (4 ml) maišoma 1 vai. 23 °C temperatūroje ir po to virinama su grįžtamu šaldytuvu 6 vai. Atšaldžius per naktį, pridedama daugiau DDQ (0,019 g, 0,084 mmol, 0,3 ekv.), mišinys sušildomas iki 67 °C ir laikomas 1 vai., po to nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 2->5

[0490] % CH₃OH CH₂CI₂), gaunama šiek tiek priemaišų turinti medžiaga, kuri ištirpinama CH₂CI₂ (70 ml) ir plaunama sočiu NaHC0₃ (2 x 30 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (30 ml), po to džiovinama Na₂S0₄ ir nugarinama. Liekana maišoma Et₂0 (10 ml) 20 min., kieta medžiaga nufiltruojama ir išdžiovinus vakuume gaunamas etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(('S_>)-p/roM/a)}-E-propenoatas (0,060 g, 35 %), kuris yra nelabai balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 215-217

[0491] °C; IR (cm"¹) 3413, 3295, 1696, 1649; ¹H BMR (CDCI₃) 5 0,83 (d, 3H, J = 6,5), 0,91 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,50-1,59 (m, 1H), 1,70-1,91 (m, 2H), 2,03-2,17 (m, 2H), 2,26-2,38 (m, 1H), 3,03 (dd, 1H, J = 13,5, 6,4), 3,12 (dd, 1 H, J = 13,5, 6,4), 3,21-3,34 (m, 2H), 3,96 (dd, 1 H, J = 8,3, 6,4), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,45-4,56 (m, 1 H), 4,83-4,92 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J =12,1), 5,13 (d, 1H, J = 12,1), 5,29 (d, 1H, J = 8,3), 5,77 (dd, 1H, J = 15,8, 1,2), 5,94 (s, 1H), 6,71 (dd', 1H, J = 15,8, 5,3), 6,95 (d, 1H, J = 9,0), 7,14-7,27 (m, 5H), 7,31-7,38 (m, 5H), 7,57 (d, 1 H, J = 7,2); analizė (C₃₃H₄₂N₄O₇) C, H, N.

[0492] 35 pavyzdys: Junginio ( A- 26) - etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L-(( S )- piper -

[0493] >\/ a)}- E- propenoato - gavjmas

[0494]

[0495] Produkto - etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L-(( SJ- p/ per-^/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0496] (1S,3'SH2-(1'-(2",4"-Dimetoksibenzil)-2'-okso-piperidin3'-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties tret-butilo esteris (pagamintas kaip aprašyta 8 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(fS_J-p_/^peM/a)}-E-propenoatą- analogišku būdu, kaip aprašytas 34 pavyzdyje (1S,3'S)-{2-(1'-(2",4"-dimetoksibenzil)-2'-okso-pirolidin3'-il)-1-hidroksimetil-etil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteriui paversti į etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(( S)- pirol- Ala)}-E-propenoatą: IR (cm"¹) 3422, 3307, 1713, 1649; ¹H BMR (CDCb) 5 0,86-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2, 1-38-1,75 (m, 6H), 1,77-1,89 (m, 1H), 1,96-2,11 (m, 2H), 3,07 (d, 2H, J = 6,2), 3,20-3,27 (m, 2H), 4,13-4,24 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,41-4,53 (m, 1H), 4,76-4,85 (m, 1H), 5,06 (d, 1H, J = 12,1), 5,12 (d, 1H, J = 12,1), 5,34 (d, 1H, J = 7,8), 5,78 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,17 (s, 1H), 6,70 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 7,00 (d, 1H, J = 8,4),

[0497] 7,13-7,27 (m, 6H), 7,30-7,37 (m, 5H), 7,83 (d, 1H, J = 6,8); analizė

[0498] (C₃₅H₄₆N₄0₇-0,5H₂0) C, H, N.

[0499] 36 pavyzdys: Junginio (A-27) - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-{( R )- pirol - Ala )}-E-propenoato - gavimas

[0500]

[0501] Tarpinio (4S,4"R)-4-{3,-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-il)-3,-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties tref-butilo esterio gavimas

[0502] Į (4S)-4-(2'-karboksietil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties tret-butilo esterio (4,20 g, 15,3 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (300 ml) 0 °C temperatūroje pridedama trietilamino (6,43 ml, 46,.1 rnmoU3,0 ekv.) ir po to pivaloilo chlorido (1,89 ml, 15,3 mmol, 1,0 ekv.). Šiek tiek drumstas reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 3,5 vai., tada pridedama ličio chlorido

[0503] g, 14,6 mmol, 0,95 ekv.). Sušildžius iki 23 °C ir pamaišius 19 vai., reakcijos mišinys paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu Na₂C0₃ (150 ml), džiovinami MgSŪ₄ ir nufiltruojama veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje, ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (30 % EtOAc heksanuose), gaunamas (4S,4"R)-4-{3_,-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-il)-3'-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (6,15 g, 97 %), kuris yra bespalvė alyva: IR (cm'¹) 2978, 1784, 1694; ¹H BMR ( CDCI3, izomerų mišinys) 6 1,14 (s), 1,58 (s), 1,63 (s), 2,01-2,05 (m), 2,72-3,13 (m), 3,29-3,33 (m), 3,74-3,79 (m), 3,82-4,09 (m), 4,11-4,25 (m), 4,67-4,70 (m), 7,20-7,37 (m); analizė (C₂₃H₃₂N₂O₆) C, H, N.

[0504] Tarpinio ( 2, R, 4S, 4" R)- 4-{ 2'-( 4"- benzil- 2"- okso- oksazolidin- 3"- karbonil)-pent- 4'- enil}- 2, 2- dimetiloksazolidin- 3- karboksirūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0505] (4S,4"R)-4-{3_,-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-il)-3_,-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (6,15 g, 14,2 mmol, 1 ekv.) tirpalas THF (25 ml) -78 °C temperatūroje supilamas į natrio bis(trimetilsilil)amidą (14,2 ml 1,0 M tirpalo THF, 14,2 mmol, 1,0 ekv.) tame pačiame tirpiklyje (50 ml). Reakcijos mišinys maišomas 15 min. -78 °C temperatūroje, po to pridedama alilo jodido (3,90 ml, 42,6 mmol, 3,0 ekv.). Pamaišius dar 2 vai. -78 °C temperatūroje, reakcijos mišinys palaikomas -45 ^cC temperatūroje 2 vai., po to paskirstomas tarp 2:1 pusiau sotaus NH₄CI ir 5 % Na₂S₂0₃ (200 ml) mišinio ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami H₂O (100 ml), džiovinami MgSŪ₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje, ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (15 % EtOAc heksanuose), gaunamas (2_,R,4S,4"R)-4-{2_,-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-pent-4'-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (3,12 g, 46 %), kuris yra klampi putų pavidalo medžiaga: IR

[0506] (cm'¹) 2978, 1782, 1685; ¹H BMR (CDCb, izomerų mišinys) 6 1,42 (s), 1,49 (s), 1,52 (s), 1,62-1,78 (m), 1,80-2,01 (m), 2,23-2,49 (m), 2,51-2,56 (m), 2,76

[0507] (dd, J = 13,3, 9,7), 3,26 (dd, J = 13,3, 3,6), 3,58-3,64 (m), 3,67 (d, J = 8,7), 3,90-3,98 (m), 4,02-4,15 (m), 4,16-4,30 (m), 4,75-4,82 (m), 5,06-5,11 (m), 5,74-5,88 (m), 7,22-7,36 (m); analizė (CzeHse^Oe) C, H, N.

[0508] Tarpinio ( 1S, 3' R)-{ 2'-( 1'-( 2", 4"- dimetoksibenzil)- 2"- okso- pirolidin- 3'- il)- 1-hidroksimetiletilj- karbamo rūgšties fref- butilo esterio gavimas

[0509] Per (2'R,4S,4"R)-4-{2'-(4"-benzil-2"-okso-oksazolidin-3"-karbonil)-pent-4'-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (3,12 g, 6,60 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH2CI2 (200 ml) ir CH₃OH (0,535 ml, 13,2 mmol, 2,0 ekv.) -78 °C temperatūroje burbuliukais leidžiamas ozonas, kol laikosi mėlyna spalva. Po to reakcijos mišinys valomas argonu, kol jis tampa bespalvis. Pridedama metisulfido (4,85 ml, 66,0 mmol, 10 ekv.) ir mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 3,5 vai., po to laikomas 0 °C temperatūroje dar 1 vai. Paskirsčius reakcijos mišinį tarp H₂O (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 150 ml), sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami MgSC>4 ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir liekana tuoj pat naudojama negryninta.

[0510] Ši liekana ištirpinama 2:1 THF ir EtOH (180 ml) mišinyje ir po to 23 °C temperatūroje pridedama iš eilės 2,4-dimetoksibenzilamino hidrochlorido (5,38 g, 26,4 mmol, 4,0 ekv.), natrio acetato (2,17 g, 26,4 mmol, 4,0 ekv.) ir natrio cianoborhidrido (0,829 g, 13,2 mmol, 2,0 ekv.). Gauta suspensija maišoma 19 vai. 23 °C temperatūroje ir po to paskirstoma tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu NaHCC_b (100 ml), džiovinami Na₂SŪ₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Liekana perleidžiama per trumpą silikagelio kolonėlę

[0511] (eliuuojama 50 % EtOAc heksanuose) ir gaunamas (3'R,4S)-4-{1'-(2",4"-dimetoksibenzil)-2"-okso-pirolidin-3'-ilmetil}-2,2-dimetil-oksazolidin-3-karboksi-rūgšties fref-butilo esteris, turintis (R)-(+)-4-benzil-2-oksazolidinono priemaišų.

[0512] g, 1,32 mmol, 0,20 ekv.). Reakcijos mišinys pašildomas iki 50 °C ir išlaikomas šioje temperatūroje 4 vai. Atšaldžius iki 23 °C, reakcijos mišinys sukoncentruojamas sumažintame slėgyje iki _~20 ml tūrio ir paskirstomas tarp pusiau sotaus NaHCŪ₃ (150 ml) ir 9:1 CH₂CI₂ ir CH₃OH mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SŪ₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (3 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas (1 S,3'R)-{2'-(1 (2",4"-dimetoksibenzil)-2"-okso-pirolidin-3'-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris (0,92 g, 34 %), kuris yra putų pavidalo medžiaga: IR (cm_"¹) 3347 (pl), 2937, 1669; ¹H BMR (CDCI3) 5 1,44 (s,9H), 1,62-1,77 (m, 2H), 1,94-2,04 (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 1H), 2,40-2,50 (m, 1H), 3,13-3,24 (m, 2H), 3,56-3,77 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 3,82-4,16 (m, 1H), 4,37 (d, 1H, J= 14,3), 4,45 (d, 1H, J = 14,3), 5,49 (d, 1H, J = 7,8), 6,42-6,45 (m, 2H), 7,08-7,11 (m, 1 H); analizė (C21 ^2^060,25^0) C, H, N.

[0513] Tarpinio etil- 3-{ Boc- L-((/ V- 2, 4- dimetoksibenzil)-( R)- p/ roM/ a)}- E-propenoato gavimas

[0514] Tokiu pačiu būdu, kaip ir (1S,3'S)-{2'-(1_,-(2",4"-dimetoksibenzil)-2"-okso-pirolidin-3'-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris buvo paverstas į 33 pavyzdyje aprašytą etil-3-{Boc-L-((A/-2f4-dimetoksibenzil)-{ S)- pirol- Ala)}-E-propenoatą (1 S,3'RH2'-(1 '-(2",4"-dimetoksibenzil)-2"-oksopiroiidin-3'-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris buvo , paverstas į etil-3-{Boc-L-((/\/-2,4-dimetoksibenzil)-(Rj-p/foM/a)}-E-propenoatą: IR (cm_"¹) 3307, 1713, 1674; ¹H BMR (CDCI₃) 6 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H), 1,57-1,82 (m, 2H), 2,02-2,19 (m, 2H), 2,42-2,55 (m, 1H), 3,11-3,25 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,19 (kv, 2H, J = 7,2), 4,32-4,50 (m, 3H), 5,97 (dd, 1H, J = 15_*7, 1,4), 6,38 (d, 1H, J= 7,8), 6,42-6,47 (m, 2H), 6,86 (dd, 1H, J = 15,7, 5,1), 7,08-7,13 (m, 1H); analizė (C₂₅H₃₆N₂O₇) C, H, N.

[0515] Tarpinio etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L-((/ V- 2, 4- dimetoksibenzil)-(/ ?>p/ ro/-Ala )}- E- propenoato gavimas

[0516] Į e{\\- 3-{ Boc- L-{( N- 2, 4- di\ metoks\ benz\\)-( R)- pirol- Ala)}- E- propenoaio (0,233 g, 0,489 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (6 ml) supilamas HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 6 ml). Pamaišius 1,5 vai.,-lakios medžiagos nugarinamos, ir gaunama negryna amino druska, kuri naudojama negryninta.

[0517] Ši amino druska ištirpinama DMF (4 ml) ir atšaldoma iki 0 °C.. Pridedama iš eilės Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,202 g, 0,490 mmol, 1 ekv.), DIEA (0,255 ml, 1,46 mmol, 3 ekv.) ir HATU (0,186 g, 0,489 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 1,5 vai., reakcijos mišinys praskiedžiamas MTBE (100 ml), plaunamas 5 % KHSO₄, sočiu NaHCŪ₃ ir sočiu NaCI tirpalu (10 ml), džiovinamas MgSŪ₄ ir nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 60->75 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((7V-2,4-dimetoksibenzil)-( R)- pirol- Ala)}-E-propenoatas (0,208 g, 55 %), kuris yra balta kieta medžiaga (po nugarinimo i<3 Et₂0): lyd. temp. = 174-176 °C; IR (cm'¹) 3287, 1713, 1649; ¹H BMR (CDCI₃) 8 0,84-0,91 (m, 6H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,42-1,66 (m, 4H), 1,67-1,77 (m, 1 H), 1,84-1,95 (m, 1H), 2,20-2,12 (m, 1H), 2,33-2,45 (m, 1H), 3,04-3,23 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,15-4,29 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H,

[0518] m

[0519] J = 7, 2), 4,31 (d, 1 H, J = 14,5), 4,40 (d, 1 H, J =14,5), 4,67-4,84 (m, 2H), 5,05

[0520] (d, 1H, J= 12,1), 5,11 (d, 1H, J = 12,1), 5,35 (d, 1H, J = 8,1). 5,76 (dd, 1H, J = 15,6, 1,6), 6,42-6,46 (m, 2H), 6,74-6,81 (m, 1H), 6,75 (dd, 1H, J = 15,6, 5,0), 7,06-7,10 (m, 1H), 7,15-7,24 (m, 5H), 7,29-7,36 (m, 5H), 8,79 (d, 1H, J = 5,9); analizė (C₄₃H₅₄N₄O₉) C, H, N.

[0521] Produkto - etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L-(( 7?>p/ ro/- A/ a)}- E- propenoato - gavimas

[0522] Etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((/V-2,4-dimetoksibenzilHRJ-p_/ro/->4/a)}-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(ff?>)-p/ro/- /\/a)}-E-propenoatą tokiu pačiu .būdu, kaip jr etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((7V-2,4-dimetoksibenzil)-('SJ-p/ro/-/4/a)}-E-propenoatas paverčiamas į 34 pavyzdyje aprašytą etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S_J-^p/roM/a)}-E-propenoatą: IR (cm'¹) 3290, 1702, 1642; ¹H BMR (CDCI3) 5 0,85-0,92 (m, 6H), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,35-1,49 (m, 1H), 1,52-1,71 (m, 3H), 1,73-1,94 (m, 2H), 2,15-2,26 '■* (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 1H), 2,32-2,43 (m, 1H), 3,02-3,18 (m, 2H), 3,19-3,29 r (m, 2H), 4,15-4,27 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,65-4,74 (m, 1H), 4,76- m 4,85 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J = 12,3), 5,12 (d, 1 H, J = 12,3), 5,18-5,25 (m, 1H), 5,76-5,84 (m, 2H), 6,64-6,78 (m, 2H), 7,15-7,40 (m, 10H), 7,91-7,98 (m, 1 H); * analizė (C34H44N4O7) C, H, N. 37 pavyzdys: Junginio ( A- 28) - etil- S- fCbz- L- Leu- L- Phe- L- l-^-imidazolidon) Ala}- E- propenoato - gavimas

[0523] Tarpinio etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L- 6oc- am/ noA/ a}- E- propenoato gavimas

[0524] [ Cbz-L-Leu-L-Phe-L-/V-Boc-aminoalaninalio (pagaminto pagal VVebber et al., J. Med. Chem. 1998, vol. 41, 2786 aprašytą metodiką) (1,60 g, 2,73 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (55 ml) pridedama (karbetoksimetilen)-trifenilfosforano (1,20 g, 3,28 mmol, 1,2 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0—>1,5 % CH_sOH/CH_aCh), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Boc-am/no/VaJ-E-propenoatas (0,968 g, turintis trifenilfosfino oksido priemaišų). Ši medžiaga naudojama daugiau nebegryninta.

[0525] Tarpinio etil- 3-{ Cbz- L- Leu- L- Phe- L-( 2- Boc- a/ T7/ noef/ 7JjA/ a}- E- propenoato gavimas

[0526] Į etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Soc-am/noyA/a}-E-propenoato (0,95 g, 1,46 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (20 ml) 23 °C temperatūroje įpilama HCI tirpalo tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 10 ml). Reakcijos mišinys maišomas šioje temperatūroje 1,5 vai., po to dar pridedama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 10 ml). Pamaišius per naktį, lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir liekana trinama su Et₂0 (20 ml). Gautos kietos medžiagos nufiltruojamos ir plaunamos Et₂Ū (3x10 ml); gaunama negryninta amino druska (0,63 g, 73 %, 1,05 mmol), kuri yra balta kieta medžiaga.

[0527] Ši medžiaga ištirpinama CH₃OH (10 ml), pridedama N-Boc-2-aminoetanalio (pagaminto pagal Bischofberger et al., J. Org. Chem. 1988, vol. 53, 3457 aprašytą metodiką) (0,19 g, 1,16 mmol, 1,1 ekv.) ir po to NaBh_bCN (0,069 g, 1,05 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama EtOAc (25 ml) ir organinis sluoksnis plaunamas vandeniu (25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml), džiovinamas MgSŪ₄ ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0->3 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-a/77/noef//)/A/a}-E-propenoatas (0,32 g, 44 %), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: Rf = 0,20 (5 % CH₃OH/CHCI₃); IR (cm-¹) 1712, 1649, 1537, 1252, 1175; ¹H BMR (DMSO-cf3) 5 0,79 (d, 3H, J = 6,6), 0,82 (d, 3H, J = 6,6), 1,21 (t, 3H, J= 7,2), 1,26-1,37 (m, 13H), 1,46-1,54

[0528] (m, 1 H), 2,56-2,60 (m, 2H), 2,82-2,97 (m, 4H), 3,98-4,04 (m, 1H), 4,10 (kv,

[0529] 2H, J = 7,0), 4,42-4,49 (m, 2H), 4,98 (d, 1H, J = 12,5), 5,04 (d, 1H, J = 12,9), 5,59 (d, 1H, J = 15,8), 6,73-6,75 (m, 1H), 6,77 (dd, 1H, J = 15,8, 4,8), 7,20-7,34 (m, 10H), 7,41 (d, 1H, J = 8,1), 7,97 (d, 1H, J = 7,0), 8,07 (d, 1H, J = 7,0); analizė (C37H53N508 0,50H20) C, H, N.

[0530] g, 0,42 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (8 ml) pridedama TFA (0,8 ml), ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 2 vai. Lakios medžiagos nugarinamos vakuume, liekana ištirpinama EtOAc (25 ml) ir plaunama sočiu NaHCC>3 tirpalu (25 ml), vandeniu (25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgS0₄ ir sukoncentravus gaunamas _*■ negrynintas diaminas (0,23 g, 92 %, 0,39 mmol), kuris yra gelsvai ruda amorfinė kieta medžiaga.

[0531] Ši medžiaga ištirpinama THF (4 ml), pridedama karbonildiimidazolo I (0,06 g, 0,36 mmol, 0,92 ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C t temperatūroje 3,5 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu metodu (gradientinis

[0532] eliuavimas, 0-»2 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-imidazolidon) Ala}- E- propenoalas (0,12 g, 54 %), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: lyd. temp. = 161-164 °C; Rf = 0,21 (5 % CH₃/CHCI₃); IR (cm_"¹) 1701, 1647, 1535, 1277; ¹H BMR (DMSO-d₃) 6 0,79 (d, 3H, J = 6,6), 0,82 (d,

[0533] 3H, J = 6,6), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,27-1,35 (m, 2H), 1,48-1,52 (m, 1H), 2,79-2,86 (m, 1H), 2,92-3,05 (m, 3H), 3,14-3,19 (m, 2H), 3,25-3,30 (m, 2H), 3,98-4,03 (m, 1H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,0), 4,47-4,49 (m, 1H), 4,59-4,63 (m, 1H), 4,97-5,02 (m, 2H), 5,72 (d, 1 H, J = 15,8), 6,37 (s, 1H), 6,71 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 7,15-7,39 (m, 10H), 7,42 (d, 1H, J = 8,1), 8,00 (d, 1H, J = 8,1), 8,18 (d,

[0534] 38 pavyzdys: Tarpinių junginių Q1, Q2 ir Q3 sintezė

[0535] Tarpinio 1 - acetii- 3-( trifenilfosfanilidin) pirolidin- 2- ono gavimas

[0536] 2,4-Dibrombutiridas (pagamintas pagal Ikuta et al., J. Med. Chem., 1987, vol.30, 1995 aprašytą metodiką) (46,1 g, 188,2 mmol) THF (1 I) atšaldomas iki 0 °C ir veikiamas ličio bis(trimetilsililamido) (40,9 g, 244,6 mmol) tirpalu THF (200 ml). Tirpalas laikomas 0 °C temperatūroje 2,5 vai., po to supilamas į sotų NaCI tirpalą (800 ml), ekstrahuojamas etilacetatu (2 I) ir džiovinamas (MgS0₄). Nugarinus gaunama 25,5 g 3-brompirolidin-2-ono, kuris yra ruda alyva. Ši medžiaga veikiama Ac₂0 (76 ml) ir virinama su grįžtamu šaldytuvu 5 vai. Nugarinus ir po to išgryninus (filtruojama per silikagelį, eliuentas - EtOAc), gaunama 28 g 1-acetil-3-brompirolidin-2-ono, kuris yra tamsi alyva. Pridedama THF (272 ml) ir trifenilfosfino (42,8 g, 163,3 mmol), ir gautas tirpalas virinamas su grįžtamu šaldytuvu 8 vai. Atšaldžius iki 23 °C, susidaro 1-acetil-3-(trifenilfosfanil)-pirolidin-2-ono bromido nuosėdos, kurios nufiltruojamos (27,1 g). Sukoncentravus pokristalizacinį tirpalą po to atšaldžius iki 0 °C, gaunama dar 6,6 g. Abi medžiagos frakcijos CH₂CI₂ (1 I) plaunamos 1N NaOH (100 ml). o po to sočiu NaCI tirpalu (2 x 100 ml). Nugarinus organinį sluoksnį, gaunama 26,9 g (37 %, bendras kiekis) 1-acetii-3-(trifenilfosfanilidin)pirolidin-2-ono, kuris yra gelsvai ruda alyva. ¹H BMR (CDCI₃) 6 7,76-7,32 (15H, m), 3,90-3,85 (2H, m), 2,50 (3H, s), 2,56-2,30 (2H, m).

[0537] Tarpinio 2- t- butoksikarbonil- 3-( t- butildimetilsilanoksi) propiono rūgšties metilo esterio gavimas

[0538] Boc-D-serino metilo esteris (20,0 g, 91,2 mmol) DMF (300 ml) veikiamas imidazolu (18,6 g, 273,7 mmol), o po to TBSCI (13,0 g, 86,7 mmol). Tirpalas laikomas kambario temperatūroje 8 vai., po to plaunamas sočiu vandeniniu amonio chloridu (300 ml) ir ekstrahuojamas etilacetatu (800 ml). Organinis sluoksnis plaunamas sočiu NaCI tirpalu (300 ml), po to džiovinamas (MgS0₄) ir gaunama 30,2 g (100 %) 2-t-butoksikarbonil-3-(t-butildimetilsilanoksi)propiono rūgšties metilo esterio, kuris yra bespalvė alyva.

[0539] ¹H BMR (CDCb) 5 5,32 (1H, d, J = 8,3), 4,33 (1H, dt, J = 10,1, 2,6), 3,80 (1H,

[0540] dd, J = 9,8, 3,1), 3,72 (3H, s), 1,43 (9H, s), 0,85 (9H, s), 0,0 (6H, s).

[0541] Tarpinio { 1 -( 1 - acetil- 2- oksopirolidin- 3- ilidenmetil)- 2-( t- butildimetilsilanoksi)- etil}- karbamo rūgšties t- butilo esterio gavimas

[0542] 2-t-Butoksikarbonil-3-(t-butildimetilsilanoksi)propiono rūgšties metilo esteris (12,7 g, 38,0 mmol) toluene (190 ml) atšaldomas iki -78 °C ir veikiamas diizobutilaliuminio hidrido (15,6 ml, 87,4 mmol) tirpalu-toluene (175 .

[0543] ml). Vidinė temperatūra laikoma žemiau -70°C. Tirpalas palaikomas -78 °C temperatūroje dar 90 min., ir po to pridedama metanolio (7,7 ml, 190 mmol). Pridedama 1-acetil-3-(trifenilfosfanilidin)pirolidin-2-ono (11,1 g, 28,6 mmol) CH₂CI₂ (50 ml) -78 °C temperatūroje, gautam tirpalui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir laikoma 30 min. Pridedama natrio kalio tartrato (150

[0544] g) tirpalo vandenyje (600 ml) ir intensyviai maišoma 30 min. Mišinys ekstrahuojamas etilacetatu (4 x 250 ml), džiovinamas (MgS0₄) ir

[0545] nugarinamas. Išgryninus chromatografuojant per silikagelį, gaunama 7,04 g (60 %) {1-(1-acetil-2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)-2-(t-butildimetilsilanoksi)-etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva. ¹H BMR (CDCb) 5 6,59 (1H, dt, J = 8,7, 2,9), 4,98 (1H, d, J = 8,7, 2,9), 4,98 (1H, d, J = 6,8), 4,37-4,25 (1H, m), 3,77 (2H, t, J = 7,3), 3,70-3,58 (2H, m), 2,90-2,80 (1H, m), 2,75-2,60 (1 H, m), 5,53 (3H, s), 1,41 (9H, s), 0,87 (9H, s), 0,04 (6H, s).

[0546] rūgšties t- butilo esterio gavimas

[0547] {1 -(1 -Acetil-2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)-2-(t-butildimetilsilanoksi)-etil}-karbamo rūgšties t-butilo esteris (9,18 g, 22,2 mmol) THF (150 ml) 0 °C temperatūroje veikiamas TBAF (22,2 ml 1M tirpalo THF, 22,2 mmol) ir laikomas 1 vai. Pridedama sotaus vandeninio amonio chlorido tirpalo ir maišoma 10 min., po to tirpalas ekstrahuojamas etilacetatu (2 x 200 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas (MgS0₄), o po to nugarinamas. Išgryninus

[0548] chromatografuojant per silikagelį, gaunama 4,82 g (73 %) bespalvės alyvos. Ši medžiaga ištirpinama metnolyje (160 ml), veikiama kalio karbonatu (223 mg, 1,62 mmol) ir laikoma kambario temperatūroje 1 vai. Po to šis mišinys veikiamas kieta citrinų rūgštimi (311 mg, 1,62 mmol) ir pridedama etilacetato (800 ml). Tirpalas nufiltruojamas per silikagelį. Nugarinus gaunama 4,30 g (73 %, bendras kiekis) {2-hidroksi-1-(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yte bespalvė alyva. 1H BMR (CDCI₃) 5 7,03 (1H, pl. s), 6,35 (1H, dt, J = 8,6, 2,6), 5,37 (1H, d, J = 6,5), 4,40-4,20 (1H, m), 3,66 (pl.s, 3H), 3,4 (2H, t, J = 6,7), 3,10-2,80 (1H, m), 2,80-2,70 (1H, m), 1,41 (9H, s)-

[0549] Tarpinio { 2- hidroksi- 1-( 2- oksopiroIidin- 3- ilmetil) etil}- karbamo rūgšties t-butilo esterio ( diastereomerų mišinio) ( Q1) gavimas

[0550] {2-Hidroksi-1 -(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esteris (4,30 g, 16,8 mmol) etilacetate (168 ml) veikiamas 5 % paladžiu ant anglies (1,78 g) ir hidrinamas atmosferos slėgyje 1 vai. Šis mišinys nufiltruojamas ir nugarinus gaunama 3,92 g (91 %) {2-hidroksi-1 -(2-oksi-pirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva (1,5:1 diastereomerų mišinys): ¹H BMR (CDCI3) 5 6,99 (1H, s), 5,49 (1H, d, J = 8,4), 3,70-3,50 (3H, m), 3,38-3,20 (2H, m), 2,60-2,20 (2H, m), 2,00-1,70 (2H, m), 1,65-1,45 (1 H, m), 1,37 (9H, s).

[0551] Tarpinio { 2- hidroksi- 1 -(/ ?- 2- oksi- pirolidin- 3- ilmetil) etil}- karbamo rūgšties t- butilo esterio ( Q2) gavimas

[0552] {2-Hidroksi-1 -(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esteris (98 mg, 0,39 mmol) metanolyje (5 ml) veikiamas (R)-BINAP-RuCI (19 mg, 0,02 mmol), o po to įdedamas [vandenilio atmosferą (8274 kPa) 50 °C temperatūroje 48 vai. Tirpalas nugarinamas, po to nufiltruojamas per silikagelį (eliuentas -10 % MeOH-EtOAc). Nugarinus gaunama 75 mg (75 %)

[0553] {2-hidroksi-1-(R-2-oksipirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva (9:1 diastereomerų mišinys): 'H BMR (CDCI3) 5 6,32 (1 H, pl.s), 5,40 (1H, d, J = 7,5), 3,82 (1 H, pl.s), 3,71-3,63 (2H, m), 3,34-3,31 (2H, m), 2,45-2,30 (2H, m), 2,09-1,86 (2H, m), 1,70-1,63 (1H, m), 1,42 (9H, s).

[0554] Tarpinio { 2- hidroksi- 1-{ S- 2- oksi- pirolidin- 3- ilmetil) etil}- karbamo rūgšties t- butilo esterio ( Q3) gavimas

[0555] {2-Hidroksi-1 -(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esteris (0,1 g, 0,39 mmol) metanolyje (5 ml) veikiamas (S)-BINAP-RuCI

[0556] °C temperatūroje 48 vai. Tirpalas nugarinamas, po to nufiltruojamas per silikagelį (eliuentas -10 % MeOH-EtOAc). Nugarinus gaunama 74 mg (74 %)

[0557] {2-hidroksi-1-(S-2-oksi-pirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva (9:1 diastereomerų mišinys): ¹H BMR (CDCI3) 5 6,66 (1H. pl s), 5,51 (1H, d, J = 8,2), 3,72-3,57 (3H,.jn), 3,34-3,31 (2H, m), 2,52-2,33 (2H, m), 2,20-1,86 (1H, m), 1,86-1,70 (1H, m), 1,62-1,50 (1H, m), 1,40 (9H, s).

[0558] Toliau aprašomi biocheminių ir biologinių bandymų, atliktų su įvairiais j šio išradimo junginiais, rezultatai

[0559] Buvo pagaminti įvairių junginių pradiniai tirpalai (50 mM, DMS) ir įvairaus praskiedimo tirpalai tame pačiame tirpiklyje. Iš serotipų 14, 16 ir 2 buvo pagamintos rekombinantinės rinovirusinės 3C proteazės (žr. Birch et all., "Purification of recombinant human rhinovirus 14 3C proteaze expressed in Escherichia coli", Protein Expr. Pur. 1995, 6(5), 609-618) pagal tokias standartines chromatografijos metodikas: (1) jonų mainų chromatografiją, naudojant Q Sepharose Fast Flovv iš Pharmacia; (2) giminingumo chromatografiją naudojant Affi-Gel Blue iš Biorad; ir (3) chromatografiją pagal dydį, naudojant Sephadex G-100 iš Pharmacia. Kiekviename testo mėginyje buvo 2 % DMSO, 50 mM tris pH 7,6, 1 mM EDTA ir nurodytos koncentracijos tiriamojo junginio, maždaug 1 įiM substrato ir 50-100 nM proteazės. Iš reakcijos, kuri inicijuojama pridedant fermento, o ne substrato, buvo gaunamos kstet>./l reikšmės. RVP aktyvumas buvo išmatuotas fluorescencijos energijos perdavimo testu. Substratas buvo (N-galinis) DABCYL-(Gly-Arg-Ala-Val-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly)-EDANS. Nesuskaldytame substrate EDANS fluorescenciją slopino gretima DABCYL liekana. Kai peptidas suskaldomas, slopinimas išnyksta, ir aktyvumas išmatuojamas iš padidėjusio fluorescencijos signalo. Duomenys buvo analizuojami, naudojant netiesinio aproksimavimo programas (Enzfit) ir yra pateikiami toliau duodamose 1 ir 2 lentelėse. 1 lentelėje visi duomenys yra gauti su HRV serotipo-14 (gauto iš infekcinio cDNR klono, sukonstruoto Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of VVisconsin, Madison, VViskonsin) rinovirusine 3C proteaze..2 lentelėje parodytas junginių proteazinio inhibavimo aktyvumas prieš proteazes iš kelių serotipo, kitokio nei RVP serotipas-14, rinovirusų. Kolonėlės, pažymėtos k_steb./l, duomenys buvo išmatuoti iš kreivių progresijos, gautos iniciavimo fermentu eksperimentuose.

[0560] Šiame ląstelių apsaugojimo teste junginio geba apsaugoti ląsteles nuo HRV infekcijos buvo matuojama, panaudojant XTT dažo redukcijos metodą kuris yra aprašytas VVeislovv et al., J. Natl. Cancer Inst. 1989, vol. 81, 577-586.

[0561] H1-HeLa ląstelės buvo infekuotos HRV-14, imant 0,13 infekcijos gausą

[0562] (m.o.i.) (virusinės dalelės/ląstelei), arba atliekant fiktyvią infekciją tik terpe. Infekuotos arba fiktyviai infekuotos ląstelės buvo vėl suspenduotos, imant 8 x 10⁵ ląstelių/ ml, ir inkubuotos su įvairiomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Po dviejų dienų į testavimo plokšteles pridedama XTT/PMS ir atsiradusio formazino kiekis nustatomas spektrofotometriškai, esant 450/650 nm bangos ilgiams. EC₅₀ reikšmė buvo apskaičiuojama kaip junginio koncentracija, kuri padidino formazino atsiradimo kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai infekuotose ląstelėse. 50 % citotoksinė dozė (CC₅₀) buvo apskaičiuota kaip junginio koncentracija, kuri sumažino formazino atsiradimo kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai

[0563] I 13

[0564] infekuotose ląstelėse. Terapinis indeksas (Tl) buvo apskaičiuotas padalinant CC₅₀ reikšmę iš EC₅₀ reikšmės.

[0565] Visi panaudoti žmogaus rinovirusų (HRV) kamienai buvo gauti iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC), išskyrus HRV serotipą-14 (pagaminto iš infekuoto cDNR klono, sukonstruoto Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of VVisconsin, Madison, Wiskonsin). HRV pradiniai kiekiai buvo dauginami ir virusiniai testai buvo atliekami H1-HeLa ląstelėse (ATCC). Ląstelės buvo auginamos minimalioje pagrindinėje terpėje su 10 % fetalinio veršiuko serumo, gaunamo iš Life Technologies (Gaithersburg, MD).

[0566] Junginiai buvo tiriami, lyginant su kontroliniais junginiais WIN 51711, Win 52084 ir WIN 54954 (gautais iš Sterling-VVinthrop Pharmaceuticals), pirodaviru (gautu iš Janssen Pharmaceuticals) ir plekonarilu (pagamintu pagal Diana et al., J. Med. Chem. 1995, vol. 38, 1355 aprašytą metodą). Tiriamųjų junginių priešvirusiniai duomenys yra parodyti 1 ir 3 lentelėse, kuriose visi duomenys yra gauti su HRV serotipu-14, jeigu skliausteliuose nenurodyta kitaip. Pažymėjimas "NN" reiškia, kad šiam junginiui reikšmė nebuvo nustatyta.

[0567]

[0568] A-21 (CAV-21) ir B-3 (CVB-3) tipų Koksaki virusai buvo gauti iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC, Rockville, MD). Virusų pradiniai kiekiai buvo dauginami ir priešvirusiniai testai buvo atliekami H1-HeLa ląstelėse (ATCC). Ląstelės buvo auginamos minimalioje pagrindinėje terpėje su 10 % fetalinio veršiuko serumo (Life Technologies, Gaithersburg, MD).

[0569] Junginių geba apsaugoti ląsteles arba nuo CAV-21, arba nuo CVB-3 infekcijos buvo matuojama, panaudojant XTT dažo redukcijos metodą. Šis metodas yra aprašytas Weislow et al., J. Natl. Cancerlnst. 1989, vol. 81, 577-586. H1-HeLa ląstelės buvo infekuotos CAV-21 arba CVB-3, imant atitinkamai 0,025 arba 0,075 infekcijos gausą (m.o.i), arba atliekant fiktyvią infekciją tik terpe. H1-HeLa ląstelėmis buvo padengtos plokštelės, imant 4 x 10⁴ląstelių/duobutei, ir inkubuotos su atitinkamomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Po vienos (CVB-3) arba po dviejų dienų (CAV-21) į testavimo plokšteles pridedama XTT/PMS ir atsiradusio formazino kiekis nustatomas spektrofotometriškai, esant 450/650 nm bangos ilgiams. EC₅₀reikšmė buvo apskaičiuojama kaip junginio koncentracija, kuri padidino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose, virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose, fiktyviai infekuotose ląstelėse. 50 % citotoksinė dozė (CC₅₀) buvo apskaičiuota kaip junginio koncentracija, kuri sumažino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai infekuotose ląstelėse. Terapinis indeksas (Tl) buvo apskaičiuotas padalinant CC₅₀ reikšmę iš EC₅₀ reikšmės.

[0570] Junginiai buvo tiriami, lyginant su kontroliniais junginiais WIN 54954 (gautas iš Sterling-VVinthrop Pharmaceuticals), pirodaviru (gautu iš Janssen Pharmaceuticals) ir plekonarilu (pagamintu pagal Diana et al., J. Med. Chem. 1995, vol. 38, 1355 aprašytą metodą). Tiriamųjų junginių priešvirusiniai duomenys prieš CAV-21 ir CVB-3 yra parodyti 4 lentelėje.

[0571] Priešechovirusinis ir priešenterovirusinis testas bandyme su ląstelių

[0572] iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC, Rockville, MD). Virusų pradiniai kiekiai buvo dauginami ir priešvirusiniai testai buvo atliekami MRC-5 ląstelėse (ATCC). Ląstelės buvo auginamos minimalioje pagrindinėje terpėje su 10 % fetalinio veršiuko serumo (Life Technologies, Gaithersburg, MD).

[0573] Junginių geba apsaugoti ląsteles arba nuo EV 11, arba nuo EV 70 infekcijos buvo matuojama, panaudojant XTT dažo redukcijos metodą

[0574] (Weislowet al., J. Natl. Cancer Inst. 1989, vol. 81, 577-586). MRC-5 ląstelės buvo infekuotos EV 11 arba EV 70, imant atitinkamai 0,003 arba 0,004 m.o.i., arba atliekant fiktyvią infekciją tik terpe. Infekuotos ir neinfekuotos ląstelės buvo sudedamos į plokštelių duobutes, imant 1 x 10⁴ ląstelių/duobutei, ir

[0575] inkubuojamos su atitinkamomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Po keturių dienų į testavimo plokšteles pridedama XTT/PMS, ir atsiradusio formazino kiekis nustatomas spektrofotometriškai, esant 450/650 nm bangos ilgiams. EC₅₀ reikšmė buvo apskaičiuojama kaip junginio koncentracija, kuri padidino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose, virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose, fiktyviai infekuotose ląstelėse. 50 % citotoksinė dozė (CC₅₀) buvo apskaičiuota kaip junginio koncentracija, kuri sumažino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai infekuotose ląstelėse. Terapinis indeksas (Tl) buvo apskaičiuotas padalinant CC₅₀ reikšmę iš EC₅₀ reikšmės.

[0576] Junginiai buvo tiriami, lyginant su kontroliniais junginiais pircdaviru (gautu iš Janssen Pharmaceuticals) ir plekonarilu (pagamintu pagal Diana et al., J . Med . Chem . 1995, vol. 38, 1355 aprašytą metodą). Tiriamųjų junginių priešvirusiniai duomenys prieš EV 11 ir EV 70 yra parodyti toliau duotoje 5 lentelėje.

[0577] Nors išradimas buvo aprašytas remiantis tinkamiausiais įgyvendinimo variantais ir konkrečiais pavyzdžiais, specialistai turėtų suprasti, kad gali būti padaryti įvairūs pakeitimai ir modifikacijos, nenukrypstant nuo išradimo prasmės ir sferos. Taigi, išradimo nereikėtų suprasti kaip apriboto prieš tai duotu smulkiu aprašymu, bet jis yra nusakomas toliau pridedama apibrėžtimi ir jos punktų ekvivalentais.

Apibrėžtis

1. Junginys, kurio formulė I:

kurioje:Y yra -N(Ry)-, -C(Ry)(Ry)- arba -O- kur kiekvienas iš Ry nepriklausomai vienas nuo kito yra H arba žemesnysis alkilas;R_i yra H, F, alkilo grupė, OH, SH arba O-alkilo grupė;R₂ ir R_3l nepriklausomai vienas nuo -kito, yra H;

kur n yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5, Ai yra CH arba N, A₂ ir kiekvienas A₃, nepriklausomai vienas nuo kito,yra pasirinkti iš C(R_4i)(R_4i), N(R₄i), S, S(O), S(0)₂ ir O, o A_* yra NH arba NR₄₁, kur kiekvienas R₄₁ nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei 2 heteroatomai atsiduria iš eilės žiede, sudarytame iš Ai, A₂, (A₃)_n, A₄ ir C=0, ir su sąlyga, kad bent vienas iš R₂ ir R₃yra

R_s ir R_6l nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė;R₇ ir R_s, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -OR₁₇, -SR₁₇, - NR₁₇R₁₈, -NR₁₉NR₁₇R₁₈ arba -NR₁₇OR₁₈, kur R₁₇) R_is ir R_ig, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė,arilo grupė, heteroarilo grupė arba acilo grupė;R₉ yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S; ir Z irZ_i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -C(0)R_2i, - CO₂R₂₁, -CN, -C(0)NR_2IR₂₂, -C(0)NR₂iOR₂₂, -C(S)R_2I, -C(S)NR₂₁R₂₂, -N0_2i - SOR₂₁, -SO₂R₂₁, -S0₂NR₂₁R₂₂. -SO(NR₂i)(OR₂₂), -SONR₂₁, -SO₃R₂₁, - PO(OR_2I)₂, -PO(R₂i)(R22), -PO(NR₂iR22)(OR2₃), -PO(NR_2IR₂₂)(NR₂₃R₂₄), - C(0)NR_2iNR₂₂R₂₃ arba -C(S)NR2 iNR22R23, kur R2 i, R_22i R₂₃ ir R₂₄, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba kur bet kurie du iš R2 i, R_22i R₂₃ ir R₂₄, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.

Y yra -N(Ry)-, -C(Ry)(Ry)- arba -O- kur kiekvienas iš Ry nepriklausomai vienas nuo kito yra H arba žemesnysis alkilas;R_i yra H, F, alkilo grupė, OH, SH arba O-alkilo grupė;R₂ ir R_3l nepriklausomai vienas nuo -kito, yra H;

kur n yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5, Ai yra CH arba N, A₂ ir kiekvienas A₃, nepriklausomai vienas nuo kito,

2. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad R₂ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H;

arba

3. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo,kad Y yra -N(Ry)-_t kur Ry yra H arba žemesnysis alkilas.

4. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo,kad Z ir Z_i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO₂R₂₁ ir -C(0)NR₂iR₂₂, kur R_2i ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito,yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁, kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z_i, kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę. ■*.

5. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R₁ yra H, F arba metilas.

6. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai _%priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo,kad bent vienas iš R₂arba R₃ yra

arba

7. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 6 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

8. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

9. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas.

10. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą, besiskiriantys tuo, kad R₇ ir R_s, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė.

11. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R_s yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

12. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir Ra yra H, o kitas yra 2-propilas, 2-metil-2-propilas, 2-metil-1-propilas, fenilmetilas arba naftilmetilas.

13. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir vieną deguonies heteroatomą.

14. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra pasirinktas iš turinčio pakaitų ir neturinčio pakaitų 1,2-oksazolilo, 1,3-oksazolilo ir 1,2,4-oksadizolilo.

15. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

16. Junginys pagal 3 punktą kurio formulė I-A":

kurioje R^ R₂, R₆, R₇, R₉, Ry, Z \rZ_\ yra tokie, kaip apibūdinta 3 punkte,arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.

17. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo,kad R₂ yra

18. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kadRy yra H arba metilas;R_i yra H, F arba metilas;Z ir Z_i yra nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš H, F, -CO₂R₂₁,-CN ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;R2 yra

R₆ yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas;R₇ yra alkilas arba arilas; irRg yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

-CN ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;R2 yra

19. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 18 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1-propilo, fenilmetilo ir naftilmetilo..

20. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kad kiekvienas iš Ry, R! ir Z yra H, o:R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z, yraC0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH_2l R₆ yra

R? yra C(CH₃)₃, Zi yraC0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH_2> R₆ yra

R₇ yra C(CH₃)₃, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra

Re yra

R? yra CH(CH 3) 2. Zi yraC0₂CH₂CH_3l o Rg yra '

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra

Re yra

R_r yra C(CH₃)₃, Z_i yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra

R₂ yra

R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra ^H3^C ; arbaR₂ yra

R₆ yra

R₇ yra C(CH₃)₃, Z₁ yraCO₂CH₂CH₃, o Rg yra ¹

21. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą, besiskiriantys tuo, kad Ry yra CH_3l ir R₁, ir Z yra H, o:R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂) Re yra

R7 yra

Z1 yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, Re yra

, R₇ yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, Re yra

R₇ yra CH₂CH(CH₃)_2i o

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂| R₆ yra

R7 yra

o Rg

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z, yraC0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH_2l R₆ yra

R? yra C(CH₃)₃, Zi yraC0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH_2> R₆ yra

R₇ yra C(CH₃)₃, Z_i yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra

Re yra

R? yra CH(CH 3) 2. Zi yraC0₂CH₂CH_3l o Rg yra '

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra

Re yra

R_r yra C(CH₃)₃, Z_i yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra

R₂ yra

R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra ^H3^C ; arbaR₂ yra

R₆ yra

R₇ yra C(CH₃)₃, Z₁ yraCO₂CH₂CH₃, o Rg yra ¹

R7 yra

Z1 yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, Re yra

, R₇ yra

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, Re yra

R₇ yra CH₂CH(CH₃)_2i o

R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂| R₆ yra

R7 yra

o Rg

22. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kad jie yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš:

23. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad Y yra -CH₂-.

24. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad Z ir Z_i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo• alkilo, -CO₂R₂₁, ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R_2i ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę.

• alkilo, -CO₂R₂₁, ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R_2i ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę.

25. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad R_i yra H, F arba metilas.

26. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo,kad bent vienas iš R₂ arba R₃ yra

arba

27. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 26 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

28. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

29. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas.

30. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ ir Rs, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė.

31. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R_s yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

32. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina, druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir Rg yra H, o kitas yra 2-propilas, 2-metil-2-propilas, 2-metil-1-propilas, fenilmetilas arba naftilmetilas.

33. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir vieną deguonies heteroatomą.

34. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 33 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra pasirinktas iš turinčio pakaitų ir neturinčio pakaitų 1,2-oksazolilo, 1,3-oksazolilo ir 1,2,4-oksadizolilo.

35. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 34 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

36. Junginys pagal 23 punktą kurio formulė l-B":

kurioje Ri, R_2r Re, R₇, R₉, Z ir Z₁ yra tokie, kaip apibūdinta 23 punkte,arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.i

37. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 36 punktą besiskiriantys tuo,

kad R₂ yra

38. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 36 punktą besiskiriantys tuo, kad sR₁ yra H, F arba metilas; ^ Z ir Z₁ yra nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš H, F, -CO2R21,$-CN ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R^, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H,alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo 1 grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R_2i ir R^, kartu su atomu(ais),prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R_i kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;R2 yra pasirinktas iš

R₆ yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas;R₇ yra alkilas arba arilas; irRg yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

-CN ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R^, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H,

39. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 38 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1 -propilo, fenilmetilo ir naftilmetilo.

40. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 36 punktą besiskiriantys tuo, kad R₁ yra H, o:R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H, Z₁ yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra

R2 yra

R6 yra

yra C0₂CH₂CH₃, o Rg yra

R2 yra

Rs yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z ir Z₁ kartuyra

kur karbonilo grupė yra cis-padėtyje R₁ vandenilio atžvilgiu ir Rg

R2 yra

Rs yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H, Z_\yra C0₂CH₂CH₃, o R₉ yra

41. Junginys pagal 1 punktą kurio formulė:

arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.

42. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad Y yra -O-.

43. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Z ir Z_i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO₂R₂₁, ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;arba Z₁ ir R₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę.

44. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad R₁ yra H, F arba metilas.

45. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo,kad bent vienas iš R₂arba R₃ yra

arba

46. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 45 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

47. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R_s ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

48. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R_s ir R₆ yra H, o kitas yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas.

49. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ ir Ra, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė.

50. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R_s yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

51. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R₈ yra H, o kitas yra 2-propilas, 2-metil-2-propilas, 2-metil-1-propilas, fenilmetilas arba naftilmetilas.

52. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir vieną deguonies heteroatomą.

53. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra pasirinktas iš turinčio pakaitų ir neturinčio pakaitų 1,2-oksazolilo, 1,3-oksazolilo ir 1,2,4-oksadizolilo.

54. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

55. Junginys pagal 42 punktą kurio formulė l-C":

kurioje R_i, R_2l R₆, R₇, R₉, Z ir Z₁ yra tokie, kaip apibūdinta 42 punkte,arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.

56. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 55 punktą besiskiriantys tuo,kad R₂ yra

57. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 55 punktą besiskiriantys tuo,kad ₂R_i yra H, F arba metilas; Z ir Z₁ yra nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš H, F, -CO₂R₂₁, t-CN ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R2 i ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, r alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais),prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z_i abu kartu nėra H;arba Z_i ir R_i kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;arba Z ir Z₁ kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;R₂ yra pasirinktas iš

R₆ yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas;R₇ yra alkilas arba arilas; irR₉ yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

-CN ir -C(0)NR_2iR₂₂, kur R2 i ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, r alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais),

58. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 57 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1 -propilo, fenilmetilo ir naftilmetilo.

59. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 55 punktą besiskiriantys tuo, kad R₁ yra H, Z yra H, o:R₂ yra CH₂CH₂C(0)NH₂, R₆ yra

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra

R₂ yra

R₆ yra

R₇ yra CH(CH₃)₂, Z₁ yraCO₂CH₂CH₃, o R₉ yra

60. Junginys, pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.

61. Junginys, farmaciškai priimtina druska, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 1-60 punktą besiskiriantis tuo, kad jis pasižymi aktyvumu prieš pikornavirusą atitinkančiu EC₅₀ mažesnę arba lygią 100 įiM H1-Hela ląstelių kultūros teste.

62. Junginys, farmaciškai priimtina druska, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 1 -60 punktą besiskiriantis tuo, kad jis pasižymi aktyvumu prieš rinovirusą atitinkančiu EC₅₀ mažesnę arba lygią 10 ?M H1-HeLa ląstelių kultūros teste.

63. Junginys, turintis formulę, pasirinktą iš grupės, susidedančios iš:

Ri, R₂, Z ir Z1 yra tokie kaip apibūdinta 1 punkte;n yra 1 arba 2;Ry yra H arba žemesnysis alkilas;R₆ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas arba heteroarilas; R₇ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas, -OR₁₇,-SR₁₇, -NR₁₇R₁₈, -NR₁₉NR₁₇R₁₈ arba -NR₁₇OR₁₈, kur R₁₇, R_is ir R₁₉, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas arba acilas; irRg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų pasirinktų iš O, N ir S,arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.

-SR₁₇, -NR₁₇R₁₈, -NR₁₉NR₁₇R₁₈ arba -NR₁₇OR₁₈, kur R₁₇, R_is ir R₁₉, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas arba acilas; ir

64. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 62 punktą besiskiriantys tuo, kadR₁ yra H, F arba alkilas;Ry yra H arba metilas;R₆ yra alkilo grupė, kurioje gali būti vienas arba daugiau pakaitų, pasirinktų iš alkilo ir arilo;R₇ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas arba heteroarilas; Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S, kur bent vienas iš heteroatomų yra azotas, ir kuriame nėra pakaitų arba yra vienas arba daugiau pakaitų pasirinktų iš žemesniųjų alkilo grupių ir halogenų;arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.

65. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 63 punktą besiskiriantys tuo, kad:R_s yra arilmetilas arba ariltiometilas;R₇ yra alkilo grupė;Rg yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų; irZ yra H, o Z_i yra -CO₂R₂₁, -CN arba -C(0)NR₂iR₂₂. kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, arba Z ir Z₁ kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.

R_s yra arilmetilas arba ariltiometilas;R₇ yra alkilo grupė;Rg yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų; irZ yra H, o Z_i yra -CO₂R₂₁, -CN arba -C(0)NR₂iR₂₂. kur R₂₁ ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂₁ ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, arba Z ir Z₁ kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.

66. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 65 punktą, besiskiriantys tuo, kad:R₁ yra H arba F;R₆ yra arilmetilas arba ariltiometilas; irR₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metiI-1 -propilo ir arilmetilo.

R₁ yra H arba F;R₆ yra arilmetilas arba ariltiometilas; irR₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metiI-1 -propilo ir arilmetilo.

67. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 66 punktą besiskiriantys tuo, kad R₆ yra fenilmetilas, kur fenilo liekanoje gali būti nuo vieno iki trijų pakaitų, pasirinktų iš halogeno, žemesniojo alkilo ir žemesniosios alkoksigrupės.

68. Junginys pagal 63 punktą, pasirinktas iš grupės, susidedančios iš: ~

-arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.

69. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad į ją įeina:(a) terapiškai efektyvus kiekis bent vieno priešpikomavirusinio agento, kuris yra 1-60 punktuose apibūdintas junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas; ir(b) farmaciškai priimtinas nešiklis, skiediklis, tirpiklis arba pagalbinė medžiaga.

(a) terapiškai efektyvus kiekis bent vieno priešpikomavirusinio agento, kuris yra 1-60 punktuose apibūdintas junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas; ir(b) farmaciškai priimtinas nešiklis, skiediklis, tirpiklis arba pagalbinė medžiaga.

70. Bent vieno junginio, provaisto, farmaciškai aktyvaus metabolito, farmaciškai priimtinos druskos arba solvato, apibūdintų 1-60 punktuose, terapiškai efektyvaus kiekio panaudojimas vaisto, skirto pikomavirusinės proteazės • aktyvumo tarpininkaujamų žinduolių ligos būklių gydymui, gamyboje.

71. Bent vieno junginio, provaisto, farmaciškai aktyvaus metabolito, farmaciškai priimtinos druskos arba solvato, apibūdintų 1-60 punktuose, terapiškai efektyvaus kiekio panaudojimas vaisto, skirto pikomavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibavimui, gamyboje.

72. Panaudojimas pagal 71 punktą besiskiriantis tuo, kad pikornavirusinė 3C proteazė yra rinovirusinė proteazė.

73. Junginys, kurio formulė:

kuriojep yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5;An yra CH arba N, A₁₂ ir kiekvienas iš A₁₃ yra nepriklausomai pasirinkti iš C(R₆i)(R₆i), N(R6 i), S, S(O), S(0)₂ ir O, o A₁₄ yra NH arba NR₆₁, kur kiekvienas R₆₁ yra nepriklausomai H, alkilas, acilas arba arilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei du heteroatomai būtų iš eilės žiede, sudarytame iš An, A₁₂, (Ai₃)p, Ah ir C=0;kiekvienas iš R14 i yra nepriklausomai H arba žemesnysis alkilas; R_s2, R₅₃ ir R_s4 yra nepriklausomai pasirinkti iš H, hidroksilo, alkilo, acilo ir arilo; arba bet kurie du iš R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ kartu sudaro =0 arba =C(R₅₇)(R_s8), kur R₅₇ ir Rsa yra nepriklausomai pasirinkti iš H, alkilo, C0₂(C_i-C₆)alkilo, C(0)N(Ci- C6)alkilo ir C0₂(arilo); irR₅₅ ir R₅₆, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H arba tinkama azotą blokuojanti grupė;_> ,arba farmaciškai priimtina šio junginio druska.

74. Junginys, kurio formulė:

kuriojep yra sveikas skaičius nuo O iki 5;R₅₁ yra H, alkilas, acilas arba arilas;R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ yra nepriklausomai pasirinkti iš H, hidroksilo, alkilo, acilo ir arilo; arba bet kurie du iš R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ kartu sudaro =0 arba =C(R_s7)(R₅₈), kur R₅₇ ir Rss yra nepriklausomai pasirinkti iš H, alkilo, C0₂(C_i-C₆)alkilo, C(0)N(C_i-C_s)alkilo ir CC>2(arilo); irR₅₅ ir R₅₆, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H arba tinkama azotą blokuojanti grupė;arba šio junginio farmaciškai priimtina druska.

75. Junginys arba farmaciškai priimtina druska pagal 74 punktą be-siskirian.ti tuo, kad p yra 1 arba 2.

-siskirian.ti tuo, kad p yra 1 arba 2.

76. Junginys arba farmaciškai priimtina druska pagal 75 punktą b e- s i s k i r i a n t i tuo, kad kiekvienas iš R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ yra nepriklausomai pasirinktas iš H, alkoksigrupės, hidroksilo ir karbonilo.

- s i s k i r i a n t i tuo, kad kiekvienas iš R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ yra nepriklausomai pasirinktas iš H, alkoksigrupės, hidroksilo ir karbonilo.

77. Junginys pagal 74 punktą pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

kur Pn yra tinkama azotą blokuojanti grupė, o q yra 1 arba 2;arba šio junginio farmaciškai priimtina druska.

78. Junginys pagal 74 punktą pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

kur BOC yra t-butiloksikarbonilas;arba šio junginio farmaciškai priimtina druska.

79. Junginys, kurio formulė:

kurioje BOC yra t-butiloksikarbonilas.

LT4846B