[LT] Pateikiamas aP2 inhibitorius arba aP2 inhibitoriaus ir kito priešdiabetinio agento, tokio kaip metforminas, gliburidas, troglitazonas ir/arba insulinas, derinys, skirtas panaudoti diabeto ir giminingų ligų, ypatingai II tipo diabeto, gydymui.
[EN] The present invention relates an aP2 inhibitor or a combination of an aP2 inhibitor and another antidiabetic agent such as metformin, glyburide, troglitazone and/or insulin for use in treating diabetes and related diseases, especially Type II diabetes.
[0001] Šis išradimas yra susijęs su vieno aP2 inhibitoriaus arba derinyje su kito tipo priešdiabetiniu agentu ir su kitu tinkančiu deriniu panaudojimu diabeto, ypatingai II tipo diabeto, o taip pat hiperglikemijos, hiperinsulinemijos, nutukimo, hipergliceridemijos ir giminingų ligų gydymui.
[0002] Riebalų rūgštis rišantys baltymai (FABP) yra maži citoplazminiai baltymai, kurie suriša riebalų rūgštis, tokias kaip oleino rūgštis, kurios yra svarbūs metaboliniai degalai ir ląstelių reguliatoriai. Riebalų rūgščių metabolizmo reguliacijos sutrikimas riebaliniame audinyje yra labai svarbus insulininio rezistentiškumo ir perėjimo iš nutukimo į nepriklausantį nuo insulino cukrinį diabetą (NIDDM arba II tipo diabetą) požymis.
[0003] aP2 - gausiai adipocituose randamas 14,6 kDa citozolinis baltymas ir vienas iš homologinių viduląstelinių riebalų rūgštis rišančių baltymų (FABP) šeimos - dalyvauja riebalų rūgščių judėjimo adipocituose reguliavime ir yra riebalų rūgščių kaitos riebaliniame audinyje tarpininkas. G.S. Hotamisligil et al. "Uncoupling of Obesity from Insulin Resistance through a Targeted Mutation in aP2, the Adipocyte Fatty Acid Binding Protein", Science, Vol. 274, Nov. 22, 1996, pp. 1377-1379 aprašo, kad aP2 deficitą turinčioms pelėms, kurioms keletą savaičių buvo duodamas daug riebalų turintis maistas, atsirado maistinis nutukimas, bet, priešingai nuo panašų maistą gavusių kontrolinių pelių, neatsirado insulininio rezistentiškumo arba diabeto. Hotamisligil et al. daro išvadą kad uaP2 yra pagrindinis faktorius mechanizme, kuris sieja nutukimą ir insulininį rezistentiškumą" (Abstract, p. 1377).
[0004] DIALOG ALERT DBDR928, datuotas 1997 m. sausio 2 d., Pharmaprojects No. 5149 (Knight-Ridder Information) aprašoma, kad pagrindinė vaistų kompanija "naudoja galimas atrinkimo metodikas potencialiems naujiems priešdiabetiniams junginiams identifikuoti". Pranešama, kad "kompanija vykdo atranką naudodama aP2 - baltymą susijusį su adipocitų riebalų rūgštis surišančiu baltymu".
[0005] Pagal šį išradimą yra pateikiamas aP2 inhibitorius, skirtas panaudoti diabeto, ypatingai II tipo diabeto, ir giminingų ligų, tokių kaip insulininis rezistentiškumas, hiperglikemija, hiperinsulinemija, padidinti riebalų rūgščių arba glicerolio kiekiai kraujyje, nutukimas ir hipertrigliceridemija, gydymui.
[0006] Be to, pagal šį išradimą yra pateikiamas pateikiamas derinys, sudarytas iš aP2 inhibitoriaus ir kito tipo priešdiabetinio agento, skirtas panaudoti diabeto ir aukščiau ir toliau apibūdinamų giminingų ligų gydymui.
[0007] Be to, pagal šį išradimą yra pateikiamas naujas priešdiabetinis derinys, kuris yra sudarytas iš vaisto, kuris inhibuoja aP2, ir kito tipo priešdiabetinio agento, kuris veikia pagal mechanizmą kitokį nei aP2 inhibavimas. aP2 inhibitorius bus naudojamas imant jo santykį su priešdiabetiniu agentu (priklausomai nuo jo veikimo būdo) nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,5:1 iki maždaug 10:1.
[0008] Šio išradimo būdui tinkami naudoti aP2 inhibitoriai yra junginiai, kurie rišasi su aP2 baltymu ir inhibuoja jo funkciją ir/arba jo gebą surišti laisvas riebalų rūgštis. Pageidautina, kad junginiai turėtų mažiau nei 60 anglies atomų, dar geriau - mažiau nei 45 anglies atomus, ir turėtų mažiau nei 20 heteroatomų, dar geriau - mažiau nei 12 heteroatomų. Juose yra vandenilinio ryšio donorinė arba akceptorinė grupė, geriau rūgštinės prigimties, kuri apima (bet neapsiriboja) CO2H, tetrazolą SO3H, PO3H, P(R)(0)0H (kur R yra žemesnysis alkilas arba žemesnioji alkoksigrupė), OH, NHSChR' arba CONHSO2R' (kur R' yra žemesnysis alkilas) ir tiazolidinoną ir sąveikauja (tiesiogiai arba per įsiterpusią vandens molekulę) su aP2 baltymu arba per joninio, arba per vandenilinio ryšio susidarymą su viena, dviem arba trimis iš trijų aminorūgščių liekanų, žmogaus aP2 pažymėtų Arg 106, Arg126 ir Tyr128.
[0009] Pageidautina, kad junginiai, kurie yra tinkami naudoti šiame būde, turėtų papildomą pakaitą geriausia hidrofobinės prigimties, kuris apima tokias grupes: alkilą cikloalkilą arilą heteroarilą cikloheteroalkilą benzokondensuotą arilą ir heteroarilą ir jų pakaitų turinčius atitikmenis. Ypatingai tinkamos yra arilo ir pakaitų turinčios arilo grupės. Dar tinkamesnis yra fenilas ir fenilas su halogenų arba metilo pakaitais.
[0010] Hidrofobinis pakaitas rišasi prie ir/arba sąveikauja su atskira aP2 baltymo kišene, kuri, grubiai imant, žmogaus aP2 yra apspręsta aminorūgščių liekanų Phe16, Tyr19, Met20, Val23, Val25, Ala33, Phe57, Thr74, Ala75, Asp76, Arg78. Erdvinis atstumas tarp vandenilinio ryšio donorinės/akceptorinės grupės ir papildomo pakaito grupės yra nuo maždaug 7 iki maždaug 15 angstremų.
[0011] Aukščiau minėti junginiai gali būti naudojami jų farmaciškai priimtinų druskų formoje ir jų provaistinių esterių formoje.
[0012] Pridedama figūra yra kompiuteriu sukurtas XVIA junginio (aprašytas toliau), prijungto prie žmogaus aP2, dalinės Rentgeno spinduliais nustatytos struktūros atvaizdas.
[0013] Tinkamų čia naudoti aP2 inhibitorių pavyzdžiais yra junginiai, kurie turi oksazolo arba analogišką žiedą Tokiu būdu, Failli et al., U.S. Patent No. 5,218,124 (j° aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis) aprašo junginius, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai ir tokiu būdu yra tinkami naudoti šiame išradime, kurie apima pakaitų turintį benzoilbenzeną bifenil- ir 2-oksazolalkano rūgšties darinius, turinčius tokią struktūrą:
[0014] A yra grupė, kurios formulė
[0015] R1 yra vandenilis, žemesnysis alkilas arba fenilas;
[0016] R1 ir R2, paimti kartu, sudaro benzeno žiedą su išlyga, kad kai X yra
[0017] -N-, Z nėra
[0018]
[0019] kur
[0020] Y yra OR5 arba N(OH)R8;
[0021] R4 ir R5, nepriklausomai vienas nuo kito, yra vandenilis arba žemesnysis alkilas;
[0022] R6 yra vandenilis, halogenas arba nitrogrupė;
[0023]
[0024] R8 yra žemesnysis alkilas;
[0025] m yra 0-3;
[0026] A grupuotė apima, tarp kitų, ir 5- arba 6-narius nesočius azotą sierą arba deguonį turinčius mono- ir benzokondensuotus heterociklus, kuriuose pakaitais gali būti žemesnysis alkilas arba ferilas. Šis apibrėžimas apima tokias heterociklines liekanas: furilą pirolilą tienilą oksazolilą tiazolilą imidazolilą piridilą, pirazinilą, pirimidinilą benzofuranilą benzotienilą benzotiazolilą, indolilą benzoksazolilą, chinazolinilą benzimidazolilą chinoksalinilą chinazolinilą ir panašias.
[0027] Tinkamiausi yra pavyzdžiai, kuriuose A yra toks, kaip apibūdinta
[0028] aukščiau, B yra
[0029]
[0030] Kitame šio išradimo įgyvendinimo variante junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, aprašyti Barreau et al. U.S. Patent No. 5,403,852 (jo aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis) yra oksazolo dariniai ir turi tokią struktūrą:
[0031] R ir R' yra vienodi arba skirtingi ir reiškia vandenilio atomą arba alkilo radikalą turintį 1 arba 2 anglies atomus,
[0032] Ri ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir reiškia vandenilio arba halogeno atomus arba alkiloksi-radikalus, kurių alkilo dalyje yra nuo 1 iki 4 anglies atomų tiesioje arba šakotoje grandinėje, ir
[0033] o taip pat jų druskos, jų izomerai, kur jie egzistuoja, ir farmacinės kompozicijos, į kurias įeina šie junginiai.
[0034] Be to, kiti junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šio išradimo gydymo būde, yra junginiai, kuriuos aprašė Mattalia U.S.
[0035] Patent No. 4,001,228 (kuris čia pridedamas kaip literatūros šaltinis), yra 2-tiol-4,5-difeniloksazolo S-dariniai, kurie turi tokią struktūrą:
[0036] kurioje m yra 0, 1 arba 2, n yra 1, o R reiškia hidroksilą alkoksigrupę arba aminogrupę. Šis išradimas taip pat apima aukščiau duotos III formulės junginių druskas, ypatingai jų farmaciškai priimtinas adityvines druskas.
[0037] Tinkamiausios yra S-(4,5-difeniloksazol-2-il)-merkaptokarboksirūgštys, kurių formulė:
[0038] kurioje m yra 0, 1 arba 2, ir farmaciškai priimtini jų žemesnieji alkilo esteriai ir jų druskos.
[0039] Kitame šio išradimo įgyvendinimo variante junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, aprašyti Dahm et al. U.S. Patent No. 4,051,250 (jo aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis), yra azolo dariniai, turintys tokią struktūrą:
[0040] kurioje R! yra karboksigrupė, esterinta karboksigrupė arba kita funkciškai modifikuota karboksigrupė; ir R2, ir R3 yra arilas, turintis iki 10 anglies atomų; A yra CnH2n, kurioje n yra sveikas skaičius nuo 1 iki 10 imtinai; o Z yra O arba S, ir jų fiziologiškai priimtinos druskos.
[0041] Dar kitame šio išradimo įgyvendinimo variante junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti Romine et al. U.S. Patent No. 5,380,854 (j° aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis), ir jie yra fenil-heterocikliniai oksazolo dariniai, turintys tokią struktūrą:
[0042]
[0043] Dar viename šio išradimo būdo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti PCT paraiškoje WO 95/17393, ir jie yra diariloksazolo dariniai, turintys tokią struktūrą:
[0044] kurioje R1 yra karboksigrupė arba blokuota karboksigrupė,
[0045] R2 yra arilas, kuriame gali būti tinkamas pakaitas(ai), R3 yra arilas, kuriame gali būti tinkamas pakaitas(ai), A1 yra žemesnysis alkilenas,
[0046]
[0047] yra ciklo(žemesnysis)alkanas arba
[0048] ciklo(žemesnysis)alkenas, ir kiekviename iš jų gali būti tinkamas pakaitas(ai).
[0049] Tinkamiausi yra WO 95/17393 tinkamiausi junginiai, pailiustruoti darbiniais pavyzdžiais.
[0050] Kitame šio išradimo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti Meanwell U.S. Patent No. 5,362,879 (jo aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis), ir jie yra 4,5-difeniloksazolo dariniai, turintys tokias struktūras:
[0051] R1 yra C1-C5 žemesnysis alkilas arba fenilmetilas, ir R2 yra C1-C5 alkilas;
[0052] VIIB
[0053]
[0054] X yra (CH2)n arba para- arba meta-pakeistas fenilas, kuriame pakaitas yra OR2,
[0055] Tinkamiausi yra Meanwell patente nurodyti tinkamiausi junginiai,
[0056] Dar kitame šio išradimo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti Meanvvell U.S. Patent No. 5,187,188 (jo aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis), ir jie yra oksazolkarboksirūgšties dariniai, turintys tokią struktūrą:
[0057] Y ir Z, nepriklausomai vienas nuo kito, yra vandenilis arba kartu sudaro
[0058] ryšį
[0059] X yra CN, C02R1 arba CONR2R3;
[0060] R ir R1 nepriklausomai vienas nuo kito arba kartu yra H, Na arba C1-C5
[0061] žemesnysis alkilas;
[0062] R2 ir R3 nepriklausomai vienas nuo kito arba kartu yra H arba C1-C5 žemesnysis alkilas;
[0063] Tinkamiausi yra aukščiau duotame Meanwell patente nurodyti tinkamiausi junginiai, pailiustruoti darbiniais pavyzdžiais.
[0064] kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti Romine et al. U.S. Patent No. 5,348,969 (jo aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis), ir jie yra feniloksazoliloksazolo dariniai, turintys tokią struktūrą:
[0065]
[0066] Y yra CH3, Ph arba OH, su išlyga, kad kai Y yra OH, junginys egzistuoja keto-enolinės tautomerijos formose:
[0067] R1 yra Ph arba Th;
[0068] R2 yra CH2R3;
[0069] R3 yra C02R4;
[0070] R4 yra H arba C1-C5 žemesnysis alkilas;
[0071] R5 yra H arba CH3;
[0072] R7 yra H arba OH;
[0073] Tinkamiausi yra Romine et al. patente ir jo darbiniuose pavyzdžiuose nurodyti tinkamiausi junginiai, ypatingai tie, kuriuose X yra
[0074] Be to, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, kurie gali būti naudojami šiame išradime, apima junginius, aprašytus Meanvvell U.S. Patent No. 5,262,540 (jo aprašymas pridedamas kaip literatūros šaltinis), kurie yra 2-(4,5-diaril)-2-oksazolilo pakaitą turinčios fenoksialkaninės rūgštys ir esteriai, turintys tokią struktūrą:
[0075] R1 yra fenilas arba tienilas;
[0076] R2 yra vandenilis, žemesnysis alkilas arba kartu su CO2 yra tetrazol-1-ilas;
[0077] X yra dvivalentė jungianti grupė, pasirinkta iš grupės, susidedančios iš CH2CH2, CH=CH ir CH20;
[0078] Y yra dvivalentė jungianti grupė, prijungta prie fenilo 3- arba 4-padėties, pasirinkta iš grupės, susidedančios iš OCH2, CH2CH2 ir CH=CH,
[0079] arba, kai R2 yra vandenilis, jo šarminio metalo druska.
[0080] Tinkamiausi yra aukščiau paminėtame Meanvvell et al. patente ir jo darbiniuose pavyzdžiuose nurodyti tinkamiausi junginiai.
[0081] Kitame šio išradimo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti PCT paraiškoje WO 92/04334, ir jie yra pakeisti 4,5-diarilheterociklai, turintys tokią formulę:
[0082] kiekviena Ar grupė yra ta pati arba skirtinga ir yra galintis turėti pakaitų fenilas arba galintis turėti pakaitų heteroarilas;
[0083] X yra azotas arba CR1;
[0084] Y yra azotas, N( CH2) nA arba C( CH2) nA;
[0085] Z yra azotas, deguonis arba N(CH2)nA, o punktyrinė linija reiškia, kad gali būti dvigubasis ryšys, susidarant pilnai nesočiam heterocikliniam žiedui;
[0086] R1 yra vandenilis, C1-4 alkilas, galintis turėti pakaitų fenilas arba galintis turėti pakaitų heteroarilas;
[0087] A yra CO2H arba grupė, kurią galima hidrolizuoti į CO2H, 5-tetrazolilas, SO3H, P(0)(0R) 2, P(0)(0H)2 arba P(0)(R)(0R), kur R yra vandenilis arba C1.4 alkilas, arba jų farmaciškai priimtinos druskos.
[0088] Dar kitame šio išradimo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti Prancūzijos patente 2156486, ir turi tokią struktūrą:
[0089] X yra O arba S,
[0090] Ri yra H, fenilas arba fenilas, kaip pakaitus turintis F, Cl, Br arba
[0091] R2 yra H, alkilas, fenilas arba fenilas, kaip pakaitus turintis F, Cl, Br
[0092] Tinkamiausi yra Prancūzijos patente No. 2156486 nurodyti tinkamiausi junginiai.
[0093] Patys tinkamiausi oksazolai, kaip aP2 inhibitoriai, yra junginiai
[0094]
[0095] kurie gali būti pagaminti kaip aprašyta Romine et al. U.S. Patent No. 5,348,969.
[0096] Kita aP2 inhibitorių klasė, kuri tinka naudoti šio išradimo būde, apima pirimidino darinius. Tokiu būdu, Kubota et al. U.S. Patent No. 5,599,770 (jo aprašymas yra pridedamas kaip literatūros šaltinis) aprašo junginius, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai ir todėl yra tinkami naudoti šiame išradime; jie yra 2-benziloksipirimidino dariniai, turintys tokią struktūrą:
[0097] R1 ir R2, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, halogenas, hidroksilas, C1-C4 alkilas, C1-C4 halogenalkilas, C3-C5 alkenilas, C3-C5 alkinilas, C1-C4 alkoksigrupę, C1-C4 halogenalkoksigrupė, C3-C5 alkeniloksigrupė, C3-C5 alkiniloksigrupė, C1-C4 alkiltiogrupė arba fenilas, su išlyga, kad bent vienas iš R1 ir R2 turi būti hidroksilas;
[0098] kiekvienas iš X, kurie gali būti vienodi arba skirtingi, jei n yra didesnis už 1, yra halogenas, C1-C4 alkilas, C1-C4 halogenalkilas, C1-C4 alkoksigrupė, C1-C4 alkiltiogrupė, C7-C9 aralkiloksigrupė, fenilas, hidroksimetilas, hidroksikarbonilas, C1-C4 alkoksikarbonilas arba nitrogrupė.
[0099] Tinkamiausi yra junginiai, kuriuose arba R1, arba R2 yra hidroksilas, o kitas R1 arba R2 yra C1-C4 alkilas, o X yra halogenas.
[0100] Kitame šio išradimo būdo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti A. Mai et al. "Dihydro(alkylthio)-(naphthylmethyl)oxopirimidines: Novel Non-Nucleoside Reverse Transcriptase Inhibitors of the S-DABO Series", J. Med. Chem., 1997, 40, 1447-1454, kurie turi tokias struktūras:
[0101] R1 = antr.-butilas, ciklopentilas, cikloheksilas;
[0102] XIVA-XIVE struktūros yra pavaizduotos jų keto-formoje. Tačiau specialistai supras, kad jos gali egzistuoti ir jų enolinėje formoje ir turėti tokio tipo struktūras:
[0103] Dar kitame šio išradimo būdo įgyvendinimo variante, junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, tinkami naudoti šiame išradime, yra aprašyti PCT paraiškoje WO 96/35678, ir jie yra a-pakeisti pirimidin-tioalkilo ir alkilo eteriai, turintys tokią struktūrą:
[0104]
[0105] kur n yra 0-3, o R31, R32 ir R33 yra vienodi arba skirtingi ir yra pasirinkti iš
[0106] -H,
[0107] fenilo, kuriame gali būti 1, 2 arba 3 pakaitai, tokie kaip halogenas, C1-C6 alkilas, C1-C6 alkoksigrupė, -CF3, -OH arba -CN,
[0108] arba kur R3i ir R32, paimti kartu su prijungtu azotu, sudaro žiedą pasirinktą iš -pirolidinilo, -piperidinilo, -4-morfolinilo, -4-tiomorfolinilo, -4-piperazinilo, -4-(1 -Ci-Cealkiljpiperazinilo, arba narį, pasirinktą iš: 1-cikloheksenilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 2-benzotiazolilo, 2-benzoksazolilo, 2-benzimidazolilo, 2-oksazolilo, 4-oksazolilo, 2-tiazolilo, 3-izoksazolilo, 5-izoksazolilo, 5-metil-3-izoksazolilo, 5-fenil-3-izoksazolilo, 4-tiazolilo, 3-metil-2-pirazinilo, 5-metil-2-pirazinilo, 6-metil-2-pirazinilo, 5-chlor-2-tienilo, 3-furilo, benzofuran-2-ilo, benzotien-2-ilo, 2H-1-benzopiran-3-ilo, 2,3-
[0109] dihidrobenzopiran-5-ilo, 1 -metilimidazol-2-ilo, chinoksalin-2-ilo, piperon-5-ilo, 4t7-dichlorbenzoksazol-2-ilo, 4,6-dimetilpirimidin-2-ilo, 4-metilpirimidin-2-ilo, 2,4-dimetilpirimidin-6-ilo, 2-metilpirimidin-4-ilo, 4-metilpirimidin-6-ilo, 6-chlorpiperon-5-ilo, 5-chlorimidazol[1,2-a]piridin-2-ilo, 1-H-inden-3-ilo, 1-H-2-metil-inden-2-ilo, 3,4-dihidronaft-1-ilo, S-4-izopropenilcikloheksen-1-ilo arba 4-dihidronaft-2-ilo;
[0110] kur R53 yra pasirinktas iš -H, C1-C6 alkilo, C3-C6 cikloalkilo, fenilo (kuriame gali būti 1, 2 arba 3 pakaitai, tokie kaip halogenas, Ci-C6 alkilas, C1-C6 alkoksigrupė, -CF3, -OH, CN) arba penkianario, arba šešianario nesotaus žiedo, turinčio 0 arba 1 deguonį, azotą arba sierą kur nesotus žiedas gali turėti pakaitų, tokių kaip -H, Ci-Ce alkilas, Ci-Ce alkoksigrupė, -OH, -CH2OH arba-(CH2)n-N(R3i)(R32);
[0111] kur R54 ir Rss, vienodi arba skirtingi, yra pasirinkti iš iš -H, Ci-Ce alkilo, alilo arba fenilo (kuriame gali būti 1, 2 arba 3 pakaitai, tokie kaip halogenas, C1-C6 alkilas, Ci-C6 alkoksigrupė arba -CF3), arba paimti kartu su prijungtu azotu sudaro žiedą pasirinktą iš —pirolidinilo, -piperidinilo, -4-morfolinilo, -4-tiomorfolinilo, -4-piperazinilo, -4-(1-Ci-C6alkil)piperazinilo;
[0112] R41 ir R42, vienodi arba skirtingi, yra pasirinkti iš -H ir C1-C4 alkilo;
[0113] R12 yra pasirinktas iš -H, C1-C6 alkilo, C3-C6 cikloalkilo, -CN, -C(0)NH2, -C(0)N(Ci-C6alkilas)(Ci-C6alkilas), -C02H, -C02(Ci-C6alkilas), -CH2OH, -CH2NH2 arba -CF3;
[0114] R13 yra pasirinktas iš -H, Ci-C6 alkilo arba -CF3;
[0115] Y yra pasirinktas iš -S-, -S(O)-, -S(0)2- arba -O-;
[0116] R4 yra -OH;
[0117] R5 yra pasirinktas iš -H, -C2H4OH, -C2H4-0-TBDMS, halogeno, C3-C6 cikloalkilo, C1-C3 alkoksigrupės, -CH2CH2CI arba (VC4 alkilo, su išlyga, kad Rs nėra izobutilas;
[0118] arba, kai R6 yra hidroksilas, R4 ir R5 paimti kartu sudaro penkianarį arba šešianarį sotų arba nesotų žiedą kuris kartu su pirimidino žiedu sudaro grupę, susidedančią iš 7H-pirolo[2,3-d]pirimidino, 5,6-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidino, furo[2,3-d]pirimidino, 5,6-dihidro-furo[2,3-d]pirimidino, tieno[2,3-d]pirimidino, 5,6-dihidro-tieno[2,3-d]pirimidino, 1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidino, 1H-purino, pirimido[4,5-d]pirimidino, pteridino, pirido[2,3-d]pirimidino arba chinazolino, kur nesočiajame žiede gali būti 1, 2 arba 3 pakaitai, tokie kaip C1-
[0119] C6 alkilas, Ci-Ce alkoksigrupė, -OH, -CH2OH arba -(CH2)n-N(R3i)(R32), C3-C8 cikloalkilas, -CF3, halogenas, -C02(R3i), -CON(R3i)(R32), -CO(R3i), -
[0120] (CH2)nN(R3i)(CO(R33)), -(CH2)nN(R3i)(S02(R33)), o sočiajame žiede gali būti 1, 2 arba 3 pakaitai, tokie kaip C1-C6 alkilas, C1-C6 alkoksigrupė, -OH, -CH2OH arba -{CH2)n-N(R3i)(R32)1 arba viena okso (=0) grupė; ir
[0121] R6 yra pasirinktas iš -H, -OH, halogeno, -CN, -CF3, -C02(R6i), - C(0)R6i arba -C(0)N(R6i)(Re2), kur R6i ir R62 yra vienodi arba skirtingi ir yra pasirinkti iš
[0122] -H,
[0123] fenilo, kuriame gali būti 1, 2 arba 3 pakaitai, tokie kaip halogenas, Ci-C6 alkilas, CrC6 alkoksigrupė, -CF3, -OH arba -CN,
[0124] arba kur R61 ir R62, paimti kartu su prijungtu azotu, sudaro žiedą pasirinktą iš -pirolidinilo, -piperidinilo, -4-morfolinilo, -4-tiomorfolinilo, -4-piperazinilo arba -4-(CrC6alkil)piperazinilo ; arba
[0125] jų farmaciškai priimtinos druskos, hidratai, N-oksidai ir solvatai.
[0126] Tinkamiausias įgyvendinimo variantas yra pirimidintioalkilo ir alkilo eteriai, kuriuose
[0127] Re yra pasirinktas iš -H, halogeno, -CN, -CF3, -C02(Ri6), -C(0)Rei arba -C(0)(R6i)(R62), geriausia CF3.
[0128] Tinkamiausias įgyvendinimo variantas yra XVI formulės junginiai, kuriuose s yra O arba 1, o Y yra -S- arba -0-; geriausia, kai Y yra -S-.
[0129]
[0130] Kitas šio išradimo būdo įgyvendinimo variantas apima aP2 inhibitorių, kurie yra piridazinono dariniai, panaudojimą. Prancūzijos patente No. 2,647,676 aprašomi junginiai, kurie yra aktyvūs kaip aP2 inhibitoriai, ir tokiu būdu yra tinkami naudoti šiame išradime, turintys tokias struktūras:
[0131] kuriose Ri ir R2 yra H, alkilas, arilas arba arilalkilas, kur alkile gali būti pakaitų, tokių kaip halogenas, CF3, CH3O, CH3S, NO2, arba Rį ir R2 kartu su anglies atomais, prie kurių jie yra prijungti, gali sudaryti rretilendioksigrupę, arba
[0132] R1 ir R2 gali sudaryti C3-C7 nearomatinį žiedą arba heterociklą kuris gali būti piridinas, pirazinas, pirimidinas, piridazinas, indolas arba pirazolas, arba deguonį turintis heterociklas, kuris gali būti piranas arba furanas, arba sierą turintis heterociklas, kuris gali būti tiopiranas arba tiofenas; šiuose heterocikluose, kaip pakaitai, gali būti halogenas arba alkilas,
[0133] R3 ir R4yra H, alkilas, halogenas, CF3, CH30, CH3S arba N02, arba R3 ir R4 su anglies atomais, prie kurių jie yra prijungti, gali sudaryti metilendioksigrupę,
[0134] Z yra heterociklas, kuris gali būti piridinas, tiazolas, benzotiazolas, benzimidazolas arba chinolinas, ir Z grupėje gali būti pakaitų, tokių kaip halogenas arba alkilas.
[0135]
[0136] kuris gali būti pagamintas kaip aprašyta Prancūzijos patente No. 2,647,676.
[0137] Tinkamiausi aP2 inhibitoriai šiam išradimui yra tie, kurie turi oksazolo žiedą.
[0138] Jeigu nenurodyta kitaip, čia naudojamas terminas "žemesnysis alkilas", "alkilas" arba "alk", vienas arba kaip kitos grupės dalis, apima ir tiesiosios, ir šakotosios grandinės angliavandenilius, turinčius 1-40 anglies atomų, geriausia 1-20 anglies atomų, dar geriau - 1-12 anglies atomų, normalioje grandinėje, tokius kaip metilas, etilas, propilas, izopropilas, butilas, t-butilas, izobutilas, pentilas, heksilas, izoheksilas, heptilas, 4,4-dimetilpentilas, oktilas, 2,2,4-trimetilpentilas, nonilas, decilas, undecilas, dodecilas, įvairūs jų šakotosios grandinės izomerai ir panašius, o taip pat tokias grupes, turinčias 1-4 pakaitus, tokius kaip halogenas, pavyzdžiui, F, Br, Cl arba I, arba CF3, alkoksigrupė, arilas, ariloksigrupė, aril(arilas) arba diarilas, arilalkilas, arilalkiloksigrupė, alkenilas, cikloalkilas, cikloalkilalkilas, cikloalkilalikloksi-grupė, aminogrupė, hidroksilas, acilas, hetei oarilas, heteroariloksigrupė, heteroarilalkilas, heteroarilalkoksigrupė, ariloksialkilas, ariloksiarilas, alkilamidogrupė, alkanoilaminogrupė, arilkarbonilaminogrupė, nitrogrupė, cianogrupė, tiolinė grupė, halogenalkilas, trihalogenalkilas ir/arba alkiltiogrupė.
[0139] Jeigu nenurodyta kitaip, čia naudojamas terminas "cikloalkilas", vienas arba kaip kitos grupės dalis, apima sočiųjų arba dalinai nesočiųjų (turinčių 1 arba 2 dvigubuosius ryšius) ciklinių angliavandenilių grupes, turinčias 1-3 žiedus, įskaitant monociklinį alkilą biciklinį alkilą ir triciklinį alkilą turinčius iš viso 3-20 sudarančių žiedus anglies atomų, geriau 4-12 sudarančių žiedą anglies atomų, ir jis gali būti kondensuotas su 1 arba 2 aromatiniais žiedais, aprašytais aprašant arilą šios grupės apima ciklopropilą ciklobutilą ciklopentilą cikloheksilą cikloheptilą ciklooktilą ciklodecilą ir ciklododecilą cikloheksenilą
[0140] ir kiekvienoje iš šių grupių gali būti nuo 1 iki 4 pakaitų, tokių kaip halogenas, alkilas, alkoksigrupė, hidroksilas, arilas, ariloksigrupė, arilalkilas, cikloalkilas, alkilamidogrupė, alkanoilaminogrupė, oksogrupė, acilas, arilkarbonilamino-grupė, aminogrupė, nitrogrupė, cianogrupė, tiolinė grupė ir/arba alkiltiogrupė.
[0141] Jeigu nenurodyta kitaip, čia naudojamas terminas "arilas" arba "Ar", vienas arba kaip kitos grupės dalis, reiškia monociklines arba biciklines aromatines grupes, turinčias žiedo dalyje 6-10 anglies atomų (tokias kaip fenilas arba naftilas) ir jose gali būti nuo vieno iki trijų papildomų žiedų kondensuotų su Ar (tokių kaip arilo, cikloalkilo, heteroarilo arba cikloheteroalkilo žiedai), o juose gali būti 1, 2, 3 arba 4 pakaitai prie prieinamų anglies atomų, pasirinkti iš vandenilio, halogeno, halogenalkilo, alkilo, alkoksigrupės, halogenalkoksigrupės, alkenilo, trifluormetilo, trifluormetoksigrupės, alkinilo, cikloalkilalkilo, cikloheteroalkilo, cikloheteroalkilalkilo, arilo, heteroarilo, arilalkilo, ariloksigrupės, ariloksialkilo, arilalkoksigrupės, ariltiogrupės, arilazogrupės, heteroarilalkilo, heteroarilalkenilo, heteroarilheteroarilo, heteroariloksigrupės, hidroksilo, nitrogrupės, cianogrupės, aminogrupės, pakeistos aminogrupės, turinčios 1 arba 2 pakaitus (kurie yra alkilas, arilas arba bet kuris iš arilinių junginių paminėtų apibrėžime), tiolinės grupės, alkiltiogrupės, ariltiogrupės, heteroariltiogrupės, ariltioalkilo, alkoksiariltiogrupės, alkilkarbonilo, arilkarbonilo, alkilaminokarbonilo, arilaminokarbonilo, alkoksikarbonilo, aminokarbonilo, alkilkarboniloksigrupės, arilkarboniloksigrupės, alkilkarbonil-aminogrupės, arilkarbonilaminogrupės, arilsulfinilo, arilsulfinilalkilo, arilsulfonilaminogrupės arba arilsulfonilaminokarbonilo.
[0142] Jeigu nenurodyta kitaip, čia naudojamas terminas "aralkilas", "aril-alkilas" arba "aril-žemesnysis alkilas", vienas arba kaip kitos grupės dalis reiškia aukščiau aptartas alkilo grupes, turinčias arilo pakaitą tokias kaip benzilo arba fenetilo, arba naftilpropilo, arba arilą kuris yra apibūdintas aukščiau.
[0143] Jeigu nenurodyta kitaip, čia naudojamas terminas "cikloheteroalkilas", vienas arba kaiD kitos aruoės dalis, reiškia 5-. 6- arba 7-nari sotu arba dalinai nesotų žiedą kuriame yra 1 arba 2 heteroatomai, tokie kaip azotas, deguonis ir/arba siera, prijungtą per anglies atomą arba, jeigu galima, per heteroatorną esant reikalui, perjungę (CH2)P (kur p yra 1, 2 arba 3), tokį kaip:
[0144] ir pan. Aukščiau parodytose grupėse gali būti 1-3 pakaitai, tokie kaip bet kuris iš aukščiau apibūdintų alkilo arba arilo pakaitų. Be to, bet kuris iš aukščiau parodytų žiedų gali būti kondensuotas su 1 arba 2 cikloalkilo, arilo, heteroarilo arba cikloheteroalkilo žiedais.
[0145] Jeigu nenurodyta kitaip, čia naudojamas terminas "heteroarilas" (dar vadinamas heteroarilas), vienas arba kaip kitos grupės dalis, reiškia 5- arba 6-narį aromatinį žiedą kuriame yra 1, 2, 3 arba 4 heteroatomai, tokie kaip azotas, deguonis arba siera, ir toks žiedas yra kondensuotas su arilo, cikloalkilo, heteroarilo arba cikloheteroalkilo žiedu (pvz. benzotiofenilas, indolilas), prijungtą per anglies atomą arba, jeigu galima, per heteroatorną esant reikalui, perjungę (CH2)P (kuri apibūdinta aukščiau), tokį kaip:
[0146] Heteroarilo grupėse, įskaitant aukščiau parodytas grupes, gali būti 1-4 pakaitai, tokie kaip bet kuris pakaitas, išvardintas aprašant arilą Be to, bet kuris iš aukščiau parodytų žiedų gali būti kondensuotas su cikloalkilo, arilo, heteroarilo arba cikloheteroarilo žiedu.
[0147] Čia naudojamas terminas "provaistiniiai esteriai" apima žinomus tiek fosforo, tiek ir karboksirūgščių provaistinius esterius, tokius kaip panašius į karboksirūgščių metilo, etilbenzilo esterius ir pan. Kitais pavyzdžiais yra tokios grupės: (l-alkanoiloksi)alkilas, kaip antai
[0148]
[0149] Kitų tinkamų provaistinių esterių pavyzdžiais yra:
[0150] Kai aP2 inhibitorius yra rūgšties formoje, jis gali sudaryti farmaciškai priimtiną druską tokią kaip šarminio metalo, tokio kaip litis, natris arba kalis, druska, žemės šarminio metalo, tokio kaip kalcis arba magnis, druska, o taip pat cinko arba aliuminio ir kitų katijonų, kaip antai amonio, cholino, dietanolamino, etilendiamino, t-butilamino, t-oktilamino, dehidroabietilarnino, druska.
[0151] Jeigu pageidaujama, aP2 inhibitorius gali būti naudojamas derinyje su kitu priešdiabetiniu agentu (taip pat čia vadinamu "kitas antihiperglikeminis agentas"), kuris pagal išradimą gali būti vartojamas peroraliniu būdu ta pačia dozuota forma, atskira peroraline dozuota forma arba injekcijomis.
[0152] Kitas priešdiabetinis agentas gali būti biguanidas, sulfonilkarbamidas, gliukozidazės inhibitorius, tiazolidindionas, insulino sensibilizatorius, panašus į gliukagonąpeptidas-1 (GLP-1), insulinas arba PPAR aJy dvigubasis agonistas ir/arba meglitinidas.
[0153] Manoma, kad aP2 inhibitoriaus naudojimas derinyje su kitu priešdiabetiniu agentu duoda antihiperglikeminius rezultatus, geresnius negu galima gauti su kiekvienu iš šių vaistų atskirai, ir geresnius, nei susumavus šių vaistų duodamus antihiperglikeminius efektus.
[0154] Šis kitas priešdiabetinis agentas gali būti peroralinis antihiperglikeminis agentas, geriausia biguaninas, toks kaip metforminas arba fenforminas, arba jų druskos.
[0155] Kai kitas priešdiabetinis agentas yra biguanidas, aP2 inhibitorius ir biguanidas turėtų būti naudojami masių santykiu nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,5:1 iki maždaug 2:1.
[0156] Kitas iš tinkamiausių priešdiabetiniu agentų gali būti sulfonilkarbamidas, toks kaip gliburidas (taip pat žinomas kaip glibenklamidas), glimepiridas (aprašytas U.S. Patent No. 4,379,785), glipizidas, gliklazidas arba chlorpropamidas, kiti žinomi sulfonilkarbamidai arba kiti antihiperglikeminiai agentai, kurie veikia p-ląstelių nuo ATP priklausomą kanalą; geriausias iš jų yra gliburidas.
[0157] aP2 inhibitorius ir sulfonilkarbamidas turėtų būti naudojami masių santykiu nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,2:1 iki maždaug 10:1.
[0158] Peroralinis priešdiabetinis agentas taip pat gali būti gliukozoksidazės inhibitorius, toks kaip akarbozė (aprašytas U.S. Patent No. 4,904,769) arba miglitolis (aprašytas U.S. Patent No. 4,639,436), kuris gali būti vartojamas atskira peroraline dozuota forma.
[0159] aP2 inhibitorius ir gliukozidazės inhibitorius turėtų būti naudojami masių santykiu nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,5:1 iki maždaug 50:1.
[0160] aP2 inhibitorius gali būti naudojamas derinyje su tiazolidindioniniu peroraliniu priešdiabetiniu agentu arba kitais insulino sensibilizatoriais (kurie NIDDM pacientams turi insuliną sensibilizuojantį poveikį), tokiais kaip troglitazonas (Warner-Labert Rezulin® aprašytas U.S. Patent No. 4,572,912), rosiglitazonas (SKB), pioglitazonas (Takeda), Mitsubishi MCC-555 (aprašytas U.S. Patent No. 5,594,016), Glaxo-Welcome GL-262570, englitazonas (CP-68722, Pfitzer) arba darglitazonas (CP-86325, Pfizer).
[0161] aP2 inhibitorius ir tiazolidindionas turėtų būti naudojami masių santykiu nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,5:1 iki maždaug 5:1.
[0162] Sulfonilkarbamidas ir tiazolidindionas, imant peroralinio priešdiabetinio agento mažesnius nei 150 mg kiekius, gali būti įterpti į vieną tabletę su aP2 inhibitoriumi.
[0163] aP2 inhibitorius taip pat gali būti naudojamas derinyje su neperoraliniu antihiperglikeminiu agentu, tokiu kaip insulinas, arba su panašiu į gliukagoną peptidu-1 (GLP-1), tokiu kaip GLP-1 (1-36) amidas, GLP-1 (7-36) amidas, GLP-1 (7-37) (aprašytas Habener, U.S. Patent No. 5,614,492, kurio aprašymas duodamas kaip literatūros šaltinis), kurie gali būti vartojami injekcijomis, arba transderminiais arba žandiniais įtaisais.
[0164] Jeigu yra, metmorfinas, sulfonilkarbamidai, tokie kaip gliburidas, glimepridas, glipiridas, glipizidas, chlorpropamidas ir gliklazidas, ir gliukozoksidazės inhibitoriai - akarbozė arba miglitolis - arba insulinas gali būti naudojami aukščiau aprašytose vaisto formose ir Physician's Desk Reference nurodytais kiekiais ir dozėmis.
[0165] Jeigu yra, metmorfino arba jo druskos naudojamas kiekis gali būti nuo maždaug 500 iki maždaug 2000 mg per dieną kuris gali būti skiriamas kaip vienkartinė dozė arba padalintos dozės nuo vieno iki keturių kartų per dieną.
[0166] Jeigu yra, tiazolidindioninio priešdiabetinio agento naudojamas kiekis gali būti nuo maždaug 0,01 iki maždaug 2000 mg per dieną kuris gali būti skiriamas kaip vienkartinė dozė arba padalintos dozės nuo vieno iki keturių kartų per dieną.
[0167] Jeigu yra, insulinas gali būti naudojamai, vaisto formomis, kiekiais ir dozėmis, nurodytomis Physician.s Desk Reference.
[0168] Jeigu yra, GLP-1 peptidai gali būti skiriami peroralinėmis žandinėmis vaisto formomis, vartoti per nosį arba parenteriniu būdu, kaip aprašyta U.S.
[0169] Patent Nos. 5,346,701 (TheraTech), 5,614,492 ir 5,631,224, kurie čia duodami kaip literatūros šaltiniai.
[0170] aP2 inhibitorius gali būti naudojamas derinyje su kitu priešdiabetiniu agentu, kuris gali būti PPAR a/y dvigubasis agonistas, toks kaip N-benzildioksotiazolidilbenzamido darinys, aprašytas WO 96/38428, toks kaip 5-(2,4-dioksotiazolidin-5-ilmetil)-2-metoksi-N-[4-(trifluormetil)benzil]-benzamidas (KRP-297), WO 98/05531 (Ligand Pharmaceuticals, Inc.) aprašyta 2-(4-{2,4-difluorfenil]-1 -heptilureido)etil}fenoksi)-2-metilbutan-karboksirūgštis, ir WO 97/25042 bei WO 96/04260 (SKB) aprašytas benzoksazolo ir piridino darinys, kurio struktūra:
[0171]
[0172] arba jo farmaciškai priimtina druska ir/arba jo farmaciškai priimtinas solvatas, kur R° reiškia 3-benzoksazolilą arba 2-piridilą o R1 reiškia CH2OCH3 arba CF3, toks kaip (S)-3-[4-[2-[N-(2-benzoksazolil)-N-metilamino)etoksi]fenil]-2-(2-metoksi-etoksi)propano rūgštis arba (S)-3-[4-[2-[N-(2-benzoksazolil)-N-metilamino]etoksi]fenil]-2-(2,212-trifluoretoksi)propano rūgštis arba jų farmaciškai priimtina druska. Naudojamos dozės yra nurodytos aukščiau duotuose literatūros šaltiniuose.
[0173] aP2 inhibitorius ir PPAR a/y dvigubasis agonistas turėtų būti naudojami masių santykiu nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,5:1 iki maždaug 5:1.
[0174] Kai aP2 inhibitorius yra naudojamas derinyje su PPAR a/y dvigubuoju agonistu, derinys gali būti naudojamas peroraline dozuota forma, tokia kaip
[0175] Jeigu yra, meglitinidas, pavyzdžiui, repaglinidas (Prandin, Novartis) arba nataglinidas (Starlix®, Novartis) gali būti vartojamas vaisto formomis, kiekiais ir dozėmis, nurodytomis Physician's Desk Reference.
[0176] aP2 inhibitorius ir meglitinidas turėtų būti naudojami masių santykiu nuo maždaug 0,01:1 iki maždaug 100:1, geriau nuo maždaug 0,5:1 iki maždaug 50:1.
[0177] Gydant šio išradimo būdu, bus naudojamos farmacinės kompozicijos, turinčios bent vieną aP2 inhibitorių su bent vienu priešdiabetiniu agentu arba be jo kartu su farmaciniu tirpikliu arba skiedikliu. Farmacinė kompozicija gali būti sukomponuota, naudojant įprastus kietus arba skystus tirpiklius arba skiediklius ir farmacinius priedus, tinkančius norimam vartojimo būdui. Junginiai gali būti skiriami žinduoliams, įskaitant žmones, beždžiones, šunis ir t.t. peroraliniu būdu, pavyzdžiui, tablečių, kapsulių, granulių arba miltelių forma, arba jie gali būti skiriami parenteriniu būdu preparatų injekcijoms forma. Tinkamiausia dozė suaugusiems yra tarp 50 ir 2000 mg per dieną kuri gali būti skiriama kaip vienkartinė dozė arba kaip atskiros dozės 1-4 kartus per dieną.
[0178] Tipiškoje kapsulėje peroraliniam vartojimui yra aP2 inhibitoriaus (250 mg), laktozės (75 mg) ir magnio stearato (15 mg). Mišinys perleidžiamas per 60 mešų sietą ir supilamas į Nr.1 želatininę kapsulę.
[0179] Tipiškas preparatas injekcijoms yra pagaminamas aseptiškai įdedant 250 mg aP2 inhibitoriaus į buteliuką aseptiškai liofilizuojant ir sandariai uždarant. Vartojant, buteliuko turinys sumaišomas su 2 ml fiziologinio tirpalo ir gaunamas preparatas injekcijoms.
[0180] Junginių, patenkinančių aukščiau aprašytus struktūros kriterijus, tinkamumas naudoti gali būti įvertintas in vitro testavimo sistemoje, kurioje aP2 inhibavimo veiksmingumas nustatomas pagal inhibitoriaus vykdomą fluorescencinio substrato išstūmimą iš aP2. Žemiau aprašytu būdu galima nustatyti inhibitorių inhibicijos konstantos (K) reikšmės: Išgryninto rekombinantinio žmogaus aP2 baltymo pagaminimas. Rekombinantinis žmogaus aP2 baltymas yra pagaminamas pagal standartinę rekombinantinę DNR technologiją. Būdingu atveju aP2 yra pagaminamas panaudojant heterologinę ekspresiją E. Coli kamiene BL21(D53), transformuotame pET11a vektoriumi, turinčiu pilno ilgio žmogaus aP2 cDNR (Baxa, C.A., Sha, R.S., Buelt, M.K., Smith, A.J., Matarese, V., Chinander, L.I., Boundy, K.L., and Bernlohr, D.A. (1989). Human adipocyte lipid-binding protein: purification of the protein and cloning of its complementary DNA. Biochemistry 28: 8683-8690 ir Xu, Z., Buelt, M. K., Banaszak, L. J., and Bernlohr, D.A. (1991). Expression, purification and crystallization of the adipocyte lipid binding protein. J. Biol. Chem. 266: 14367-14370). aP2 išskiriamas iš E. coli pagal Xu aprašymą gaunant iš esmės homogeninį aP2 baltymą kurio molekulinė masė ~14600 daltonų, ir jame nėra endogeninių riebalų rūgščių. Išgrynintas aP2 gali susirišti su vienu moliu laisvos riebalų rūgšties moliui baltymo. Anksčiau buvo parodyta, kad rekombinantinio aP2 baltymo susirišimas ir struktūrinės savybės yra identiškos aP2 baltymui, išskirtam iš riebalinio audinio.
[0181] aP2 inhibitorių tyrimas in vitro . aP2 inhibitoriai įvertinti homogeniniame fluorescencija paremtame konkurenciniame teste, naudojant rekombinantinį aP2 baltymą ir 1,8-anilinonaftalensulfonrūgštį (1,8-ANS) kaip testo substratą. Šis konkurentinis testas buvo pritaikytas imant anksčiau aprašytas apibendrintas metodikas (Kane, C.D. and Bernlohr, D.A. (1996). A simple assay for intracellular lipid-binding prote:ns using displacement of 1-anilino-8-sulfonic acid, (1996) Anai. Biochem. 233: 197-204 ir Kurian E., Kirk, W. R. and Frendergast, F.G (1996). Affinity of fatty acid for r-rat intestinal fatty acid binding protein. Biochemistry, 35, 3865-3874). Metodas remiasi 1,8-ANS fluorescencijos kvantinės išeigos padidėjimu, susijungus su aP2 riebalų rūgšties surišimo vieta. Bandymas atliekamas naudojant atitinkamas inhibitoriaus, 1,8-ANS ir aP2 baltymo koncentracijas, kad būtų galima apskaičiuoti tiriamųjų junginių inhibitoriaus surišimo konstatntą (K|). Ki skaičiavimai paremti metodika, kurią anksčiau aprašė Kurian disociacijos konstantų skaičiavimui. Mažesnės K| reikšmės rodo didesnį junginių giminingumą aP2.
[0182] Bandyme, atliekamame su čia aprašytais inhibitoriais, eilė aP2 alikvotų
[0183] (5 fiM) 10 mM kalio fosfato buferio tirpale (pH 7,0) sumaišoma su ekvimoline
[0184] tiriamojo junginio koncentracija, po to pridedama eilė didėjančių koncentracijų 1,8-ANS tirpalų (nuo 0 iki 5 jiM). Bandymas paprastai yra atliekamas 96 duobučių plokštelėje, reagentų pridėjimui naudojant roboto tipo prietaisą
[0185] (Packard Multiprobe 104). Fluorescencijos reikšmė kiekvienam testui nustatoma naudojant Cytofluor-4000 daugiaduobelinį fluorescencijos plokštelių skaičiuoklį (Perceptive Biosystems), naudojant 360 nm sužadinimo bangos ilgį ir 460 nm emisijos bangos ilgį, arba naudojant kitą tinkamą spektrofluorimetrą. Pasiruošiant bandymui, iš pradžių pagaminami tiriamųjų junginių 10 mM tirpalai dimetilsulfokside. Visi paskesni praskiedimai ir tirpalų pridėjimai atliekami 10 mM kalio fosfato buferyje, pH 7,0.
[0186] lnhibitoriaus-aP2 komplekso Rentgeno spindulių kristalografinius tyrimus gali atlikti šios srities specialistas, naudodamas šiuolaikines biofizikos metodikas ir komercinius prietaisus. Tokie kristalografiniai duomenys gali būti naudojami, norint galutinai nustatyti, ar šiame išradime naudojamas junginys atitinka struktūrinius reikalavimus, būtinus aP2 inhibuoti. Toliau pateikiamas tokio Rentgeno spindulių kristalografinio nustatymo pavyzdys: Kompleksuoto su inhibitoriais aP2 kristalai paprastai auginami panaudojant kabančio lašo metodą. aP.2, imant jo 8,3 mg/ml, išlaikomas su 1,5 mM inhibitoriaus tirpalu 0,1 M Tris-HCI pH 8, 1 % m/t DMSO 4 valandas, kad pasiektų pusiausvyrą. 2 nl lašai, turintys pusiausvyrą pasiekusio baltymo, ir rezervuaro tirpalas 1:1 santykiu pakabinami ant plastikiniu dangteliu uždengtų juostelių ir laikomi, kad pasiektų pusiausvyrą su 1 ml rezervuare esančiu 2,6-3,0 M amonio sulfatu 0,1 M Tris-HCI, pH 8,0. Kristalai paprastai pasirodo per 2-3 dienas ir pasiekia maksimalų dydį per 2 savaites. Duomenys paprastai gaunami nuo atskiro staigiai užšaldyto kristalo (Oxford Cryosystems), naudojant Rigaku sukamą anodą ir Bruker daugialaidžio ploto detektoriaus R-ašies II vaizdo plokštės detektorių Difrakcija nuo aP2 kristalų buvo puiki. Difrakcija buvo pastoviai stebima esant geresnei nei 2,0 A skiriamajai gebai, dažnai geresnei nei 1,5 A skiriamajai gebai. Duomenys buvo apdorojami arba DENZO/SCALEPACK (R-ašies II duomenys), arba Xengen (Bruker duomenys). Struktūrai suderinti naudojama XPLOR, o modeliavimas buvo vykdomas, naudojant molekulių modeliavimo programinį paketą CHAIN. Po vieno derinimo ciklo F0-Fc žemėlapio nagrinėjimas
[0187] paprastai leidžia lengvai įstatyti inhibitorių į aP2 rišančiąją ertmę. Iteracinis pritaikymas ir derinimas buvo tęsiami tol, kol elektroninio tankio žemėlapyje arba laisvajame R nebesimatė pagerėjimo.
[0188] Pridedamoje figūroje, kuri yra XVIA junginio, surišto su žmogaus aP2, kompiuteriu sukurtas dalinės rentgenografinės struktūros atvaizdas, figūra iš šviesiai pilkų rutuliukų ir strypelių yra XVIA junginys. Arg106, Arg126 ir Tyr128 liekanos pavaizduotos kaip figūros iš tamsiai pilkų rutuliukų ir strypelių. Tamsūs rutuliai vaizduoja atskiros rišančios kišenės, susidedančios iš Phe16, Tyr19, Met20, Val23, Val25, Ala33, Phe57, Thr74, Ala75, Asp76, Arg78 liekanų erdvės užpildymą. XVIA junginio 4-chlorfenilo pakaitas yra parodytas, kaip esantis surištas su šia atskira kišene, o hidroksilo grupė yra prijungta prie Arg-Tyr-Arg liekanų.
1. aP2 inhibitorius, skirtas panaudoti diabeto, rezistentiškumo insulinui, nutukimo, hiperglikemijos, hiperinsulinemijos arba padidinto riebalų rūgščių arba glicerolio kiekio, arba hipertrigliceridemijos gydymui.
2. Inhibitorius pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius jungiasi prie aP2 baltymo ir inhibuoja jo funkciją ir/arba jo sugebėjimą surišti laisvąsias riebalų rūgštis.
3. Inhibitorius pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius turi vandenilinio ryšio donorinę arba akceptorinę grupę ir su aP2 baltymu sąveikauja tiesiogiai arba per įsiterpusią vandens molekulę, susidarant arba joniniam, arba vandeniliniam ryšiui su viena, dviem arba trimis iš trijų aminorūgščių liekanų, žmogaus aP2 pažymėtų Arg106, Arg126 ir Tyr128.
4. Inhibitorius pagal 3 punktą besiskiriantis tuo, kad vandenilinio ryšio donorinė arba akceptorinė grupė yra rūgštinės prigimties.
5. Inhibitorius pagal 3 punktą besiskiriantis tuo, kad minėtas aP2 inhibitorius turi papildomą pakaitą kuris rišasi su ir/arba sąveikauja su atskira kišene aP2 baltyme, kurią žmogaus aP2 apsprendžia apytikriai Phe16, Tyr19, Met20, Val23, Val25, Ala33, Phe57, Thr74, Ala75, Asp76, Arg78 liekanos.
6. Inhibitorius pagal 5 punktą besiskiriantis tuo, kad minėtas papildomas pakaitas minėtame aP2 inhibitoriuje yra hidrofobinės prigimties.
7. Inhibitorius pagal 5 punktą besiskiriantis tuo, kad erdvinis atstumas nuo vandenilinio ryšio donorinės/akceptorinės grupės iki papildomo pakaito minėtame aP2 inhibitoriuje yra nuo 7 iki 15 angstremų.
8. Inhibitorius pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad yra gydomas II tipo diabetas.
9. Inhibitorius pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius yra naudojamas jo farmaciškai priimtinos druskos arba jo provaistinio esterio formoje.
10. Inhibitorius pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius turi oksazolo arba analogišką žiedą yra pirimidino darinys arba piridazinono darinys.
11. Inhibitorius pagal 10 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius yra pakaitų turintis benzoilo arba bifenil-2-oksazolalkano rūgšties darinys, oksazolo darinys, 2-tio-4,5-difeniloksazolo S-darinys, fenil-heterociklinio oksazolo darinys, diariloksazolo darinys, 4,5-difeniloksazolo darinys, oksazolkarboksirūgšties darinys, feniloksazoliloksazolo darinys arba 2-(4,5-diaril)-2-oksazolilo pakaitą turinčios fenoksialkano rūgšties darinys.
12. Inhibitorius pagal 10 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius yra 2-benziloksipirimidino darinys, dihidro(alkiltio)(naftilmetil)-oksipirimidino darinys, tiouracilo darinys arba a-pakeistas pirimidintioalkilo arba alkilo eterio darinys.
13. Inhibitorius pagal 10 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius yra piridazinonacto rūgšties darinys.
14. Inhibitorius pagal 10 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius yra(I) pakaitų turintis benzoilbenzeno arba bifenilalkano rūgšties darinys, turintis struktūrą:
15. Inhibitorius pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitorius turi struktūrą:
16. Farmacinis derinys, besiskiriantis tuo, kad jį sudaro aP2 inhibitorius ir kito tipo priešdiabetinis agentas.
17. Derinys pagal 16 punktą besiskiriantis tuo, kad kitas priešdiabetinis agentas yra biguanidas, sulfonilkarbamidas, gliukozoksidazės inhibitorius, tiazolidindionas, insulino sensibilizatorius, panašus į gliukagoną peptidas-1 (GLP-1), insulinas, PPAR a/y dvigubasis agonistas ir/arba meglitinidas.
18. Derinys pagal 16 punktą besiskiriantis tuo, kad priešdiabetinis agentas yra metforminas, gliburidas, glimepiridas, glipiridas, glipizidas, chlorpropamidas, gliklazidas, akarbozė, miglitolis, troglitazonas, insulinas, KRP-297, repaglinidas ir/arba nataglinidas.
19. Derinys pagal 16 punktą besiskiriantis tuo, kad aP2 inhibitoriaus ir priešdiabetinio agento masių santykis yra nuo 0,01 iki 100:1.
20. Derinys pagal 16 punktą skirtas panaudoti rezistentiškumo insulinui, diabeto, nutukimo, hiperglikemijos, hiperinsulinemijos arba padidinto riebalų rūgščių arba glicerolio kiekio kraujyje, arba hipertrigliceridemijos gydymui.