[LT] Išradimas skirtas funkcionalaus maisto produkto gamybos technologijai, konkrečiai - produktui su priešmikrobiniu poveikiu prieš Helicobacter pylori. Pasiūlytasis maisto produktas - desertas susideda iš medžiagų kompozicijos, kuri slopina žarnyno patogeninę mikroflorą, saugo virškinimo organų gleivinę nuo agresyvių faktorių poveikio, neišeinant iš fiziologinių procesų reguliavimo rėmų. Minėtąją medžiagų kompoziciją ruošia iš cidonijų sulčių, aronijų sulčių koncentrato (geriausiai - 5x stiprumo) ir spanguolių sulčių, į kurias prideda žaliosios arbatos ekstrakto ir vitamino C, natrio benzoato ir cukraus. Toliau minėtą mišinį šildo, pridedant į jį kukurūzų krakmolo obuolių išspaudų vandens ekstrakte ir ajero šaknies vandens ekstrakto, produktą maišo iki želės pavidalo konsistencijos ir atšaldo. Taip gauna funkcionalų maistinį produktą (desertą), pasižymintį priešmikrobiniu poveikiu prieš Helicobacter pylori. Pagal kitą išradimo realizavimo variantą vaisių ir uogų sulčių mišinio ruošimo etape į pašildytą aronijų sulčių koncentratą prideda kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte ir, susiformavus želei, į mišinį prideda cidonijų sulčių, spanguolių sulčių, žaliosios arbatos ekstrakto, ajero šaknies vandens ekstrakto, vitamino C, natrio benzoato ir cukraus.
[EN] The present invention relates to the production technology of functional alimentary product, in particular, to the production of the product with antimicrobial activity against H. pylori. The product claimed is a dessert and has a composition that suppress pathogenic gut microflora, protects mucous of gastro-intestinal tract against impact of aggressive factors. The composition mentioned above is prepared from quince juice, the concentrate of chokeberry juice (preferably, 5-fold concentrated) and cranberry juice with green tea extract, vitamin C, sodium benzoate and sugar added. The mixture prepared is heated, supplemented with corn starch suspension in aqueous extract of pomace, extract of calamus roots, agitated till gel formation and cooled down. The functional alimentary product (dessert) thus obtained has antimicrobial activity against H. pylori. Another variant of invention implementation comprises addition of corn starch suspension in aqueous extract of pomace to pre-heated concentrate of chokeberry juice and supplement of gel formed with quince juice, cranberry juice, green tea extract, vitamin C, sodium benzoate and sugar.
[0001] Išradimo sritis
[0002] Išradimas skirtas funkcionalių maisto produktų gamybai, o būtent - produktui su priešmikrobiniu poveikiu prieš Helicobacter pylori.
[0003] Išradimo lygis
[0004] H. pylori iššaukia įvairius skrandžio ir dvylikapirštės žarnos zonų pažeidimus. Tai sukelia chroniškus uždegiminius gleivinės procesus, kurie sukelia dvylikapirštės žarnos. ir skrandžio opaligę, o taip pat padidina susirgimo skrandžio vėžiu riziką (Schreiber S., Konradt M., Groll e., Scheid P., Hanauer G., Werling H-O., Josenhans e., Suerbaum S. The spatial orientation of Helicobacter pylori in the gastric mucus. PNAS. 2004; 101(14): 5024-5029). H pylori - tai vienintelis žinomas mikroorganizmas, kuris kolonizuoja tokią agresyvią aplinką kaip skrandžio sekretas. Kad apsisaugotų nuo druskos rūgšties, H. pylori dideliais kiekiais sintetina ureazę, kuri suskaido šlapalą i anglies oksidą ir amoniaką, kurie, savo ruožtu, sudaro šarmini amonio hidroksidą ir neutralizuoja druskos rūgštį, Su H. pylori infekcija susiduria maždaug 50% planetos gyventojų (Perry S. et al. Gastroenteritis and transmission of Helicobacter pylori infection in households. Emerg. Infect. Dis. 2006; 12(11): 1701-1708). Paprastai infekcija pasireiškia jau ankstyvoje vaikystėje (Sabbi T. et al. Helicobacter pylori infection in children:management and pharmacotherapy. Expert Opin. Pharmacother. 2008; 9(4): 577-585) ir išlieka visą gyvenimą,
[0005] H pylori sukeltos paprastos pepsiriės opos gydymą pradeda nuo kombinuotos trikomponentės terapijos: protoninių siurblių inhibitoriais ir kombinuotu antibakteriniu gydymu amoksicilinu ir klaritromicinu. Išsivysčius atsparumui antibiotikams, naudoja bismuto preparatus (Fischbach L., Evans E.L. Meta-analysis: the effect of antibiotic resistance status on the efficacy of triple and quadruple first-line therapies for Helicobacter pylori. Aliment, Pharmacol. Ther.2007; 26(3): 343-357). Pastaraisiais metais labai padidėjo H . pylori atsparumas minėtiems dažniausiai terapijoje naudojamiems antibakteriniams preparatams (Qasim A., O'Morain e.A. Review article: treatment of Helicobacter pylori infection and factors influencing eradication. Alinment.Pharmacol. Ther. 2002; 16(1): 24-30).
[0006] Plati H pylori išplitimo geografija, visaapimantis pacientų amžiaus diapazonas, dažnai pasireiškiantis atsparumas antibiotikams, jų netoleravimas, didelė rizika užsikrėsti buityje, patologijos recidyvai labai apsunkina minėtos infekcijos farmakoterapiją. Gydymas yra ilgas ir varginantis, ypač - vaikams, ir pasižymi ne visišku pasiryžimu pildyti visas gydymo rekomendacijas. Aukščiau išvardinta patvirtina nuomonę, kad būtina ieškoti naujų alternatyvių antibiotikams terapijos galimybių (Carson C.F., Riley T.V. Non-antibiotic therapies for infectious diseases. Commun. Dis. Intell. 2003; 27(1): 143-146) daliniam arba pilnam jų pakeitimui arba efektyvumo padidinimui. Pats faktas, kad H pylori kolonizuoja virškinamąjį traktą, perša mintį apie galimą ryšį tarp atitinkamos ligos vystymosi ir gydymo bei maisto. Per pastaruosius 10 metų įrodyta, kad H pylori infekcijos farmakoterapijos efektyvumo padidinimui didelį vaidmenį vaidina funkciniai maisto produktai.
[0007] Funkcinių priešmikrobinio poveikio maisto produktų gamybai naudoja įvairias biologiškai aktyvias medžiagas ir kompozicijas: probiotines bakterijas, augalų ekstraktus ir pan.
[0008] Yra gerai žinoma rūgpienio bakterijų geba efektyviai veikti prieš Helicobacter pylori. Lactococcus lactis, Lactobacillus acidophilus pasižymi aukštu priešmikrobiniu aktyvumu prieš R pylori (patentinė paraiška KR20040044300, publ. 2004.05.28; patentas RU2253672, publ, 2005.06.10).
[0009] Žinomi augalai, turintys eterinių aliejų, pasižymintis priešmikrobiniu poveikiu prieš H pylori: Bulgarijos rožė (patentas BG62354, publ, 1999.09.30), Alpinae Katsumadai Semer (patentinė paraiška JPII001429, publ. 1999.01.06), o taip pat imbieras (patentinė paraiška KS20091 04293, publ. 2009.04.23).
[0010] Kinų medicinos augalų kompozicijose (patentinė paraiška CNI01284069, publ. 2008.10.15; patentinė paraiška KR20040003200, publ. 2004.01.13) kaip vieną iš populiariausių komponentų naudoja žaliąją arbatą, kurią dažnai naudoja ir atskirai, grynu pavidalu. Arbatos poveikis pasireiškia antioksidantinėmis savybėmis, gebėjimu inhibuoti patogeninių mikrobų ląstelių proliferaciją ir adheziją prie šeimininko organizmo gleivinės. Toki aktyvumą sukelia katechinai, polifenoliai. Priimta manyti, kad reguliarus žaliosios arbatos vartojimas pusryčiams efektyviai naikina H pylori, pagrinde - dėl polifenolių, kurie veikia kaip protoninio siurblio inhibitorius (patentinė paraiška JP2002068992, publ. 2002.03.08). Žaliosios arbatos ekstraktas gali inhibuoti ureazės aktyvumą (patentinė paraiška KR200601,22439, publ, 2006.11.30).
[0011] Paskiriant sergantiems H pylori infekcija priešmikrobinio poveikio funkcinių maisto produktų, būtina atsižvelgti į maitinimosi tradicijas, paruošto produkto išvaizdą ir formą, organoleptines savybes. Priešingu atveju yra sunku užtikrinti pacientų, ypač - vaikų, pasiryžimą vykdyti visus gydymo nurodymus. Yra pagrindas manyti, kad specifinis maisto produktų aktyvumas priklauso nuo farmakogenetinių faktorių. Genetiško variabilumo požiūriu H pylori skirstomas į septynias populiacijas ir subpopuliacijas su aiškiai išreiškiamu geografiniu pasiskirstymu. Mikroorganizmo paplitimo pasauliniu mastu keliai pastaruosius dešimt tūkstančių metų sutampa su žmogaus migravimo keliais (Falush D. et al. Traces of human migrations in Helicobacter pylori infections. Science, 2003; 299(5612): 1582-1585).
[0012] Yra logiška antibakterinių preparatų gamybai naudoti vietinės floros augalus.
[0013] Remiantis aukščiau minėtais faktais galima manyti, kad vaisiai ir uogos galėtų būti geriausi komponentai, kuriuos būtų galima panaudoti funkcinių maisto produktų su priešmikrobiniu poveikiu prieš H Pylori gamybai. Mokslinės literatūros ir patentinių dokumentų duomenys patvirtina galimybę pagaminti tokius produktus. Kalbant apie Europos šiaurės ir vakarų regionų augalus, daugiausia informacijos yra apie spanguoles, mėlynes, braškes, juoduosius serbentus, bruknes. Yra gerai žinoma produktų, pagamintų iš abrikosų (Prunus mume Sieb et Zucc.), geba mažinti skrandžio vėžio riziką, kuri paaiškinama aktyvumu prieš H pylori (atsuka T. et al. Suppresive effects of fruit-juice concentrate of Prunus Mume sieb. Et Zucc. (Japanese apricot, Ume) on Helicobacter pylori-induced glandular stomach lesions in mongolian gerbils. Asian Pacific 1. Cancer Prevent., 2005; 6: 337-341). Šiuo atžvilgiu kaip auksinis standartas laikoma spanguolė, kurią galima naudoti ivairiais pavidalais (Shmuely H. et al. Effect of cranberry juice on eradication of Helicobacter pylori in patients treated with antibiotics and a proton pump inhibitor. 1. Nutr. Food Res." , 2007; 51(6): '746-751). Tyrimai, atlikti Kinijoje, parodė, kad, reguliariai vartojant spanguolių sultis, tris kartus sumažėjo H pylori infekcijos lygis (Zhang L. et al. Efficacy of cranberry juice on Helicobacter pylori infection: randomised placebo-controlled trial. Helicobacter., 2005; 10(2): 139-145).
[0014] Yra žinoma, kad priešmikrobinis vaisių ir uogų poveikis susijęs su keliais jų komponentais, pirmiausia - su organinėmis rūgštimis. Organinės rūgštys, užtikrinančios žemą maisto pH,panašiai kaip ir skrandžio išskiriama druskos rūgštis, slopina H pylori.H. pylori infekcijos profilaktikai ir gydymui taip pat galima naudoti kai kuriuos citratus (tarptautinė patentinė paraiška W09809652, publ. 1998.03.12). Vienok, yra pagrindas manyti, kad nors ir jonų H+ koncentracija savaime yra svarbi, ji. nėra svarbiausias faktorius. Nežiūrint i tai, kad spanguolėse yra daug benzoinės rūgšties, baktericidinis šių uogų poveikis siejamas su stambiamolekuline sulčių frakcija, į kurią rūgštys neįeina (Burger O. et al. Inhibition of Helicobacter pylori adhesion to human gastric mucus by a high-molecular-weight constituent of cranberry juice. Crit. Rev. Food Sci. Nutr., 2002; 42(3): 279-284). Iš to galima daryti išvadą, kad spanguolių organines rūgštis negalima priskirti prie pagrindinių komponentų, kurie apsprendžia šių uogų poveiki prieš H pylori.
[0015] Askorbo rūgštis - daugelio maistui naudojamų augalų sudėtinė dalis - teoriškai galėtų pretenduoti į svarbaus agento, slopinančio H pylori, vaidmenį, Gali būti, kad adekvatus vitamino C, esančių vaisiuose ir daržovėse, vartojimas paaiškina. santykinai žemą negatyvių H pylori infekcijos pasekmių lygį pietinėse Europos šalyse (Koletzko S. et al. Prospective multicentre study on antibiotic resistance of Helicobacter pylori strains obtained from children living in Europe. Gut, 2006; 55(12): 1711-1716). Zhang H.M. ir bendraautorių tyrimuose (Zhang H.M. et. al. Vitamin C inhibits the growth of a bacterial risk factor for gastric carcinoma: Helicobacter pylori. Cancer, 1997; 80(10): 1897-1903) buvo pademonstruota, kad didelės 128-2048 mkg/ml koncentracijos askorbo rūgštis inhibuoja 90% iš 64 žinomų H pylori štamų augimą ant agaro, nepriklausomai nuo maistinės terpės pR, ir kad jos didelė dozė (10 mg gyvūnui į dieną) slopina H pylori kolonizaciją H pylori infekciją turinčiam bandyminiam graužikui Meriones unguiculatus.
[0016] Vienok, mūsų laikais išaugintose uogose ir vaisiuose negalima identifikuoti kažkokio vieno komponento, kuris būtų "atsakingas" už stebimą priešmikrobinį poveikį, Greičiausiai reikėtų galvoti apie kompleksinį junginių poveikį,
[0017] Uogos turi daug įvairių fenolinių junginių, kurie klasifikuojami į 4 grupes: flavonoidai, fenolinės rūgštys, lignanai ir taninai (Nohynek L.J. et al. Berry phenolic:, antimicrobial properties and mechanisms of action against severe human pathogens. Nutr. Cancer, 2006; 54(1): 18-32). Visos šios medžiagos pasižymi teigiamu poveikiu sveikatai. Ypač aktyvaus flavonoido antocianino yra mėlynėse, raudonuose serbentuose, aronijoje, braškėse, avietėse.
[0018] Su polifenoliais siejamas obuolių sulčių frakcijos priešmikrobinis poveikis
[0019] (patentinė paraiška JP11180888, publ. 1999.07.06), o taip pat Granny Smith rūšies obuolių žievelės vandens ekstrakto geba .inhibuoti ureazės sintezę H pylori ląstelėse in vitre (Pastene E. et al. Association between polymerisation degree of apple peel polyphenols and inhibition of Helicobacter pylori urease. J. Agric. Food Chem., 2009; 57: 416-424). Įdomų tyrimą atliko Italijos kolegos. Buvo pastebėta, kad priešmikrobiniu poveikiu prieš H pylori pasižymi vaisių Cydonia alonga Miller iš spaudų ir žievelės ekstraktai. Fenolinių junginių koncentracija išspaudose ir žievelėje skiriasi ne tik kiekybiškai (37-47 ir 105-157 mg/100 g šviežios masės), bet ir kokybiškai; buvo pastebėtas šių medžiagų sinergizmas priešmikrobinio aktyvumo atžvilgiu (Fattouch S. et al. Antimicrobial activity of Tunisian quince (Cydonia olonga Miller) pulp and peel popyphenolic extracts. J. Agric. Food Chem., 2007; 55(3): 963-969).
[0020] Žinomas spanguolių, tekšės, aviečių, žemuogių ir mėlynių priešmikrobinis poveikis prieš salmoneles ir stafilokoką dėl didelio fenolinių junginių kiekio uogose (Puupponen-Pumia R. et al. Bioactive berry compounds - novel tools against human pathogens (mini-review). Appl. Microbiol. Biotechnol., 2005; 67: 8-18).
[0021] Ne visuomet priešmikrobinio poveikio gavimui galima vartoti šviežias neapdorotas uogas ir vaisius. Pavyzdžiui, ilgalaikis spanguolių vartojimas šlapimtakių infekcijos gydymui didina riziką susirgti akmenlige (Terris M.K. et al. Dietary supplementation with cranberry concentrate tablets may increase the risk of nephrolithiasis. Urology, 2001; 54(1): 26-29).
[0022] Kadangi polifenoliai laikomi pagrindiniais junginiais, nulemiančiais vaisių ir uogų priešmikrobinį poveikį, didelis dėmesys atitinkamų produktų gamyboje skiriamas šių medžiagų išskyrimui (patentinė paraiška JP11l80888, publ. 1999.07.06). Atsižvelgiant į tai, kad polifenolių turinčių produktų (pavyzdžiui, žaliosios arbatos) įtraukimas į racioną neužtikrina būtino priešmikrobinio poveikio, autoriai siūlo išskirti polifenolių junginius iš Rosaceae rūšies augalų vaisių ir jų sulčių. Aktyvių medžiagų kompozicijos gavimui naudoja ekstrahavimą organiniais tirpikliais ir paskesnį džiovinimą. Polifenolių mišinį išskirtą. iš obuolių, kriaušių ir persikų, naudoja tiek vaistų, tiek įvairių maisto produktų gamybai.
[0023] Tais pačiais teoriniais principais paremta patentinė paraiška US2003/0161897, publ. 2003.08.28, kurioje kaip priešmikrobinės priemonės pasiūlyti spanguolių, mėlynių/vaivorų, vynuogių ir aronijos polifenolinių pigmentų (antocianų) koncentratai. Pagal šį išradimą biologiškai aktyvių medžiagų kompleksą ekstrahuoja iš ryškiai pigmentuotų (geltonų-mėlynų-raudonų) augalų ir uogų, naudojant polivinilpirolidoną (PVP) arba vandenyje ištirpintą polivinilo spiritą. Į vaisių sultis ar išspaudas prideda polimero ir, adsorbavus pigmentą, atskiria kompleksą nuo mišinio. Manipuliuojant valgomosios druskos vandens tirpalais ir PVP gauna pigmento/PVPkoncentratą, kuriam būdingas priešvirusinis ir priešmikrobinis poveikis.
[0024] Du paskutinius išradimus vienija bendra koncepcija, susijusi su polifenolių, kaip pagrindinių priešmikrobinio poveikio komponentų, aktyvumu. Vienok, mechanizmai, užtikrinantys vaisių ir uogų komponentų gebą sunaikinti H pylori, vis dar nežinomi. Tai liečia tiek aktyvius prieš H pylori augalus - spanguoles (Burger O. et al. Inhibition of Helicobacter pylori adhesion to human gastrie mucus by a high-molecular-weight constituent of cranberry juice. Crit. Rev. Food Sci. Nutr., 2002; 42(3): 279-284), tiek ir kitus augalus. Tarp faktorių, nulemiančių vaisių ir uogų priešmikrobinį poveiki, ne tik fenolio junginiai. Pavyzdžiui, tam tikrą vaidmenį vaidina organinės rūgštys, nulemiančios atitinkamų sulčių pH.
[0025] Mūsų tyrime in vitro pademonstruota, kad baktericidinis aronijų, spanguolių ir cidonijų sulčių poveikis prieš H pylori mažėja, didėjant pH, kur didėjimas pasiekiamas, pridedant šarminių druskų (Babarikina A. et al. Helicobacter pylori: food compounds antimicrobial activity in vitro. Baltic conference on food science and technology. Kaunas, 2009; 27).
[0026] Uogos turi daug kitų biologiškai aktyvių medžiagų, padedančių gerinti kraują.Spanguolės, braškės turi lignanų - pagrindinio fitoestrogenų augalų klasės junginio (Mazur W.M. et al. Phyto-oestrogen content of berries, and plasma concentrations and urinary excretion of enterolactone after a single strawberry-meal in human subjects. Br. J. Nutr., 2000; 83: 381-387). Mėlynės vartojamos, esant gastrointestinaliniams pažeidimams, spanguolės - gerai žinoma priemonė šlapimtakių infekcijų gydymui.
[0027] Uogų ir vaisų sudėtis įvairi, identifikuoti visas specifinį priešmikrobinį poveiki turinčias medžiagas yra sudėtinga ir brangu. Todėl sveikatinimo tikslais atrodo logiška bandyti ruošti įvairių uogų ir vaisių komponentų kombinacijas. Toks žinomas biologiškai aktyvus maisto papildas kaip OptiBerry (laukinių bruknių, braškių, spanguolių, laukinių mėlynių, šeivamedžio uogų, aviečių ekstraktas) parodė in vitro didesni aktyvumą prieš H. Py/ori, nei atskirų uogų ekstraktai, o taip pat padidino mikroorganizmų jautrumą klaritromicinui (Chatterjee A. et al. Inhibition of Helicobacter pylori in vitro by various berry extracts, with enhanced susceptibility to clarithromycin. Mol. CeH Biochem., 2004; 265(1-2): 19-26).
[0028] Naudojamų botaninių rūšių spektras ir jų geografinė kilmė, veikimo sinergizmas, geba veikti virškinamojo trakto funkcijas, padedanti atsikratyti H py/ori infekcijos, o taip pat pacientų pasiryžimas vykdyti gydymo rekomendacijas užtikrina platų maisto produktų priešmikrobinio poveikio faktorių spektrą.
[0029] Išradimo esmės atskleidimas
[0030] Išradimo tikslas yra funkcionalaus maisto produkto (deserto) su priešrnikrobiniu poveikiu prieš H. pylori sukūrimas iš augalų ir uogų, augančių Baltijos jūros regione.
[0031] Šį tikslą pasiekia, paruošiant medžiagų kompoziciją, kuri slopina žarnyno patogeninę mikroflorą, apsaugo virškinamojo trakto gleivinę nuo agresyvių faktorių poveikio, neišeinant iš fiziologinių procesų reguliavimo ribų. Medžiagų kompoziciją, gautą pagal šį išradimą, naudoja maisto produkto (deserto) gamybai. Minėtą medžiagų kompoziciją ruošia iš cidonijų sulčių, aronijų sulčių koncentrato (pageidautina - 5x stiprumo) ir spanguolių sulčių, į kurias prideda žaliosios arbatos koncentrato ir vitamino C, natrio benzoato ir cukraus. Toliau gautąjį mišinį kaitina, pridedant kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte ir ajero šaknies vandens ekstrakto. Produktą maišo, kol pasiekia želatinos pavidalo konsistenciją, ir atšaldo. Taip gauna funkcionalų maisto produktą (desertą) su priešmikrobiniu poveikiu prieš H pylori.
[0032] Pagal kitą išradimo įgyvendinimo variantą vaisių ir uogų sulčių mišinio ruošimo etape į pašildytą aronijų sulčių koncentratą prideda kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte ir, susiformavus želei, į mišinį prideda cidonijų sulčių, spanguolių sulčių, žaliosios arbatos ekstraktą, ajero šaknies vandens ekstrakto, vitamino C, natrio benzoato ir cukraus.
[0033] Prieš ruošiant naują produktą,' buvo atlikti eksperimentai tokia tvarka: gamtinių medžiagų patikrinimas in vitro, keturių paruošto produkto variantų specifinio aktyvumo įvertinimas in vitro, dviejų paruošto produkto variantų specifinio aktyvumo patikrinimas pelėms in vitro.
[0034] Per kelis eksperimentus buvo atlikti testai su 99 medžiagomis: vaisių ir uogų . sultimis, organinėmis rūgštimis,' vaistinių augalų ekstraktais, pieno produktais, bičių produktais. Tyrimų eigoje buvo pasirinkti šie komponentai: spanguolių, cidonijų, aronijų sultys, žaliosios arbatos, obuolių išspaudų ir ajero šaknies vandens ekstraktai, askorbo rūgštis, natrio benzoatas, o taip pat cukrus ir kukurūzų krakmolas. Augaliniai ekstraktai, išskyrus žaliosios arbatos, buvo pagaminti iš augalų, augančių Latvijoje (Kurzemės regione). Jų charakteristikos pateiktos 1 lentelėje.
[0035] Eksperimentuose buvo panaudotas standartinis H. pylori štamas - ATCC 43504, kuris išskirtas iš žmogaus 'skrandžio gleivinės izoliato. Bakterijų suspensiją uždėjo ant substrato iš Kolumbijos kraujinio agaro (Columbia blood agar base) ir augino 3 dienas 370C temperatūroje anaerobinėmis sąlygomis. Naujojo produkto pirminių komponentų atranką vykdė pagal difuzijos agare metodo rezultatus. Difuzijos agare metodo principą sudaro tiriamos medžiagos geba difunduoti i agarą ir slopinti mikroorganizmų augimą, sudarant inhibavimo zonas, kurių skersmuo yra matuojamas. Medžiagų testavimo difuzijos agare metodu rezultatai pateikti 1 lentelėje.
[0036]
[0037]
[0038] Aukščiau išvardinti gatavo produkto variantai buvo išanalizuoti minimalios inhibuojančios koncentracijos nustatymo būdu. Į maistinė terpę (maistinis buljonas su defibrinuotu krauju) prideda trijų skirtingų koncentracijų testuojamos medžiagos ir H pylori suspensijos, inkubuoja 24 val. 370C temperatūroje. Gautus po inkubacijos pavyzdžius pasėja Kolumbijos kraujinio agaro maistinėje terpėje, dar kartą inkubuoja 24-48 val., skaičiuoja kolonijas ir apskaičiuoja vienetų, sudarančių kolonijas (KSV), skaičių.
[0039] Pagal priešmikrobinį aktyvumą analizuojamus pavyzdžius galima išrikiuoti šia tvarka (mažėjimo kryptimi):
[0040] B (0,1 x 107 KSV/ml) > D (0,4 X 107 KSV/ml) > C(0,8 x 107 KSV/ml) A (0,9 x 107 KSV/ml). Tokiu būdu, spanguolių sulčių specifinis aktyvumas buvo mažesnis, nei kitų komponentų kombinacijoje.
[0041] Prieš pradedant kitą tyrimo etapą buvo būtina nuspręsti dėl kuriamo produkto konsistencijos, kur klausimas buvo suformuluotas taip: kokius komponentus būtina įtraukti i receptūrą, kad būtų pailgintas produkto buvimo skrandyje laikas ir padidinta deserto adhezijaprie gleivinės. Kaip žinia, maisto energinės vertės padidinimas slopina skrandžio evakuacinę funkciją (Murray R. The effects on consuming carbohydrate - electrolyte beverages on gastrie emptying and f1uid absorption during and following exercise. Sports Med., 1987,4,5,322-51). Šiam tikslui, turint omenyje produkto specifiką (desertas), buvo pasirinktas cukrus.
[0042] Adhezijai pagerinti naudoja kelias želatinizuojančias medžiagas: chitozano išvestines, pektiną, gialurono rūgštį tiomerus ir kitas. Tradiciškai uogų ir (arba) vaisių desertų gamyboje krakmolas yra vienas iš populiariausių želatinizavimo komponentų, konkrečiai - kukurūzų krakmolas, kuris pigesnis nei bulvių. Į naujo produkto sudėtį įtrauktas modifikuotas kukurūzų krakmolas, kurį naudoja uogienių tirštinimui.
[0043] Siekiant įvertinti priešmikrobinį aktyvumą in vivo, buvo pasirinkti produkto, turinčio didžiausią aktyvumą in vitro, variantai (3 lentelė).
[0044]
[0045] Naujojo produkto variantai B ir D buvo išbandyti in vivo. ICR - nelinijinės pelės buvo randomizuotos į keturias grupes po 10 gyvūnų kiekvienoje:
[0046] 1 grupė - kontrolinė (sveikos),
[0047] 2 grupė - infekuotos H pylori, negydytos, vietoje vandens gavusios 1 % gliukozės tirpalo 7 dienas iki inokuliacijos H pylori, o taip pat 14 dienų po inokuliacijos,
[0048] 3 grupė - infekuotos, gydytos produkto B variantu; inokuliuotos H pylori, po to, praėjus 7 dienoms, 14 dienų gaudavo per os kartą i dieną po 0,5 ml deserto; 1 % gliukozės tirpalu girdytos 21 dieną,
[0049] 4 grupė - infekuotos, gydytos produkto D variantu; kitkas - kaip ir 3 grupei.
[0050] 5 Gyvūnus girdė gliukozės tirpalu tam, kad pailgintų maisto buvimą skrandyje.
[0051] Pelių inokuliavimui buvo panaudota H pylori ląstelių kultūra (174 x 107 KSV/1 ml), kurią po 0,5 ml per os įvesdavo per zondą kiekvienam 2, 3, 4 grupės graužikui. Po 21 dienos pelės buvo eutanizuotos dietilo eteriu. Skrandis ir dvylikapirštė žarna buvo išimti ureazinio testo ("HelPil test") ir morfologinių tyrimų atlikimui.
[0052] Trečiąją eksperimento savaitę 3 pelės pastipo: po vieną iš 2, 3 ir 4 grupės. Jei gyvūnams buvo leidžiama laisvai prieiti prie tiriamo maistinio produkto, praktiškai visos 4 grupės pelės jį noriai suėsdavo (variantas D), tačiau deserto variantu B (3 grupė) "domėjosi" maždaug tik pusė graužikų.
[0053] 4 lentelėje pateikti ureazinio testo rezultatai. Visų infekuotų gyvūnų skrandžio ureazinis testas buvo teigiamas, o dvylikapirštės žarnos - maždaug tik pas 70%. H pylori kolonizacija vienu metu skrandyje ir dvylikapirštėje žarnoje būdinga tik ypač sunkiais atvejais. Infekuotų gyvūnų gydymo rezultatai buvo tokie: vartojant variantą B, sergančių pelių skaičius sumažėjo iki 55%, o vartojant variantą D - 40%. Pas 3 ir 4 grupių gyvūnus H pylori dvylikapirštėje žarnoje aptikta nebuvo.
[0054]
[0055] Audinių histologiniam tyrimui pavyzdžiai buvo fiksuoti 10%· formaline, dehidratuoti ir impregnuoti parafinu. Iš blokų paruošė 4 mkm storio nuopjovas, nudažė hematoksilinu ir eozinu, o taip pat Giemsa metodu. Morfologinių tyrimų rezultatai parodė, kad gyvūnų, infekuotų H pylori (2 grupė), skrandžio gleivinei būdingi gastrito požymiai. O būtent, pagrindinėse skrandžio liaukose aptiktas infiltratas, atsiradęs dėl uždegimo, o taip pat abscesai. Be to, pastebėta paviršinių mukocitų destrukcija ir atsisluoksniavimas. Tarp pažeistų ląstelių matomos rutulinės bakterijos su spiralinių priemaiša. Po putliosiomis gleivinės ląstelėmis konstatuoti degranuliacijos požymiai.
[0056] Morfologinis trečiosios gyvūnų grupės skrandžio gleivinės vaizdas nesiskiria nuo antrosios grupės.
[0057] Ketvirtosios gyvūnų grupės skrandžio gleivinės uždegimo požymiai buvo minimalūs (fokaliniai uždegiminiai infiltratai buvo reti ir nebuvo ryškūs). R pylori mikroorganizmai vizualizavosi skrandyje ir dvylikapirštėje žarnoje gyvūnų su teigiamu ureaziniu testu pagal duomenis, pateiktus 4 lentelėje.
[0058] Remiantis eksperimentų, atliktų in vitro ir in vivo, rezultatais, buvo prieita prie išvados, kad optimali vaisių-uogų deserto su priešmikrobiniu poveikiu prieš H pylori sudėtis yra tokia:
[0059] - cidonijų sultys - 32,0-35,0%
[0060] (geriausiai - 33,7%)
[0061] - 5x stiprumo aronijų sulčių koncentratas - 7,0-8,4%
[0062] (geriausiai - 7,5%)
[0063] - spanguolių sultys - 14,9-10,5%
[0064] (geriausiai - 12,7%)
[0065] - obuolių išspaudų vandens ekstraktas - 18,5-19,5%
[0066] (geriausiai - 19,0%)
[0067] - modifikuotas kukurūzų krakmolas - 6,5-5,5%
[0068] (geriausiai - 6,0%)
[0069] - ajero šaknies vandens ekstraktas - 0,8-1,2%
[0070] (geriausiai - 1,0 %)
[0071] - žaliosios arbatos ekstraktas - 0,8-0,4%
[0072] (geriausiai - 0,6 %)
[0073] - cukrus - 19,5%
[0074] - natrio benzoatas - 150 mgl 1 00 g
[0075] - askorbo rūgštis - 100 mgl 1 00 g
[0076] Maistinio produkto su priešmikrobiniu poveikiu prieš H. pylori paruošimui i indą supila aukščiau išvardintas sultis, prideda žaliosios arbatos ir ajero šaknies ekstraktų, vitamino C, natrio benzoato, cukraus. Gautą mišinį pakai tina iki 80oC, palaipsniui prideda kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte. Produktą maišo, kol jis įgauna želės pavidalo konsistenciją. Atšaldo. Paruoštą produktą saugo kambario temperatūroje.
[0077] Siekiant adsorbuoti aronijų pigmentą krakmolo geliu, vaisių-uogų sulčių mišinio ruošimo stadijoje į pašildytą iki 800C aronijų sulčių koncentratą (5x stiprumo) prideda kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte ir, susiformavus želei, o į mišinį prideda cidonijų sulčių, spanguolių. sulčių, žaliosios arbatos ekstrakto, ajero šaknies vandens ekstrakto, vitamino C, natrio benzoato, cukraus, po to atšaldo.
[0078] Remiantis tyrimo rezultatais galima tikėtis, kad pasiūlytasis naujasis funkcionalus produktas slopins patogeninę žarnyno mikro florą, saugos virškinamojo trakto organų gleivinę nuo agresyvių faktorių poveikio (laisvieji radikalai-prooksidantai, uždegimo į mediatoriai ir t.t.), neišeinant už fiziologinių procesų reguliavimo rėmų, kas būdinga maisto komponentams.
[0079] Priimant dėmesin tą faktą, kad i vaisių-uogų deserto sudėti [eina tik komponentai, naudojami maisto produktams ir kurių saugumas jau įrodytas, naująjį produktą galima rekomenduoti ne tik sergantiems H pylori infekcija, bet ir profilaktiškai sveikiems įvairaus amžiaus žmonėms. Produktas gali būti vartojamas ir kaip papildas H pylori infekcijos farmakoterapijai, ir atskirai.
1. Maistinio vaisių-uogų produkto, pasižyminčio priešmikrobiniu poveikiu prieš Helicobacter pylori, gamybos būdas, apimantis vaisių ir uogų sulčių mišinio paruošimą, natrio benzoato ir cukraus pridėjimą į vaisių ir uogų sulčių mišinį, gautojo mišinio pašildymą, kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte pridėjimą į jį, produkto maišymą iki želės pavidalo konsistencijos ir paskesnį jo atšaldymą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad vaisių ir uogų sulčių mišinio paruošimo etape naudoja cidonijų sultis, aronijų sulčių koncentratą, spanguolių sultis, į jas prideda žaliosios arbatos koncentrato ir vitamino C, o kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte pridėjimo etape į mišinį prideda ajero šaknies vandens ekstrakto.
2. Būdas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad vaisių ir uogų sulčių mišinio ruošimo etape į pašildytą aronijų sulčių koncentratą prideda kukurūzų krakmolo suspensijos obuolių išspaudų vandens ekstrakte ir, susiformavus želei, kuri adsorbuoja aronijos pigmentus, neatšaldant į mišinį prideda cidonijų sulčių, spanguolių sulčių, žaliosios arbatos ekstrakto, ajero šaknies vandens ekstrakto, vitamino C, natrio benzoato ir cukraus, produktą maišo, tęsiant gautojo mišinio šildymą, iki želės pavidalo konsistencijos gavimo, po to atšaldo.
3. Būdas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad aronijų sulčių koncentratas - tai 5x stiprumo koncentratas.
4. Maistinis vaisių-uogų produktas, pasižymintis priešmikrobiniu poveikiu prieš Helicobacter pylori, gautas pagal bet kurį 1-3 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad produktą sudaro šie komponentai (masės dalys, %):
cidonijų sultys - 32,0-35,0% (geriausiai - 33,7%),
5x stiprumo aronijų sulčių koncentratas - 7,0-8,4% (geriausiai - 7,5%), spanguolių sultys - 14,9-10,5% (geriausiai - 12,7%),
obuolių išspaudų vandens ekstraktas -18,5-19,5% (geriausiai - 19,0%), modifikuotas kukurūzų krakmolas - 6,5-5,5% (geriausiai - 6,0%),
ajero šaknies vandens ekstraktas - 0,8-1,2% (geriausiai - 1,0 %),
žaliosios arbatos ekstraktas - 0,8-0,4% (geriausiai - 0,6 %), cukrus -19,5%,
natrio benzoatas -150 mg/l00 g,
askorbo rūgštis - 100 mg/l00 g.