[LT] Šis išradimas pateikia biologiškai aktyvius junginius, tokius kaip vandenyje tirpios N-propionil-4-hidroksi-3-nitro-L- fenilalanino ir N-propionil -4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino kalio druskos. Sintezuoti aminorūgščių dariniai, būdami mažai toksiški, eksperimente su pelėmis pasižymi aukštu kancerolitiniu aktyvumu. Jie slopina sarkomos 180 augimą 94,5 % ir 89 % atitinkamai, ir prailgina išgyvenimo laiką iki 50 % .
[EN] The present invention concerns the biological active compounds, such as potassium salts of N-propenyl-4-hydroxy-3-nitro-L-phenylalanine and N-propenyl-4-methoxy-3-nitro-DL-phenylalanine. Said compounds are soluble in water, have low toxicity and show high cancerolytic activity in experiments on mouses. They inhibit growth of sarcoma 180 on 94,5 % and 89 % respectively, and increase of life span on 57 %.
[0001] Išradimas yra iš nebaltyminių aminorūgščių chemijos ir yra skirtas N-propionil-4-hidroksi-3-nitro-L-fenilalanino ir N-propionil-4-metoksi-3-nitro-OL-fenilalanino kalio druskoms su ištirtu antinavikiniu veikimu.
[0002] Žinoma, kad kai kurios N-acilintos baltyminės aminorūgštys, turinčios savo sudėtyje alkankarboninių rūgščių liekanas, pasižymi antinavikiniu aktyvumu. Iš tokio tipo junginių kancerolitiniu aktyvumu pasižymi N-propionil-L-valinas, N-lauroil-L-leucinas ir N-miristoil-L-izoleucinas [USA Pats. 3845097, 1974 ir 3919291, 1975], iš kurių aktyviausias buvo N-propionil-L-valinas ( A- 195) [K. Fukushima, S. Toyoshima. Cancer Chemother. Rep. Part 1, Vol. 59, No. 2, pp. 309-318 (1975)]:
[0003]
[0004] Junginys A- 195 buvo tiriamas klinikose [JI.B. l" op6aneBa m np. Xmmmo-tepanmh 3nokahectbehhbix h0b006pa30bahmm. Mioru haykm m tgxhmkm. BMHMTM. OHKonornfl. 1982, t. 12, c. 201]. A- 195 kaip artimiausias struktūri-nis analogas pasirinktas prototipu mūsų patentuojamiems junginiams.
[0005] Šiuo metu klinikose tiriamas N-acetil-L-cisteinas, kuris eksperimente slopina kancerogenezę, t.y. pasižymi vėžio chemoprevencinėmis savybėmis [S. De Flora et al. In: C. loannides and D.F.V. Levvis (eds), Drugs, Diet and Disease, Vol. 1: Mechanistic Approaches to Cancer, Ellis Horvvood, Hemel Hempstead, UK, 1995, pp. 151-203].
[0006] Tokiu būdu aukščiau nurodyti literatūriniai šaltiniai parodo, kad junginiai, gauti modifikuojant aminorūgštis alkankarboninėmis rūgštimis, sudaro prielaidas juos taikyti klinikoje vėžinių susirgimų gydymui.
[0007] Šio išradimo esmė - nauji, mažai toksiški, vandenyje tirpūs antinavikiniai junginiai, gauti įvedant j neproteinogeninių aromatinių aminorūgščių molekules propiono rūgšties liekaną bei modifikuojant gautų darinių karboksilinę grupę, sintezuojant kalio druskas (1c ir 2c) :
[0008]
[0009] Junginių 1c ir 2c sintezė vykdyta pagal žemiau pateiktą schemą:
[0010] Kondensuojant propionilo chloridą atitinkamai su 4-hidroksi-3-nitro-L-fenilalaninu 1a (A būdas) bei 4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino hidrochloridu 2a (B būdas) [K). flery-Tnc, M. CrpayKac. >KypH. o6ių. t.32, No 4, c. 1255-1259 (1962)] vandeniniame natrio šarmų tirpale buvo sintezuoti N-propionil-4-hidroksi-3-nitro-L-fenila!aninas 1b ir N-propionil-4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalaninas 2b (A + B stadijos). N-Propio-nilintus aminorūgščių darinius 1b ir 2b, paveikus spiritiniu kalio šarmų tirpalu buvo gautos vandenyje tirpios N-propionil-4-hidroksi-3-nitro-L-fenilalanino ir N-propionil-4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino kalio druskos 1c ir 2c (C stadija). Sintezuotų aminorūgščių darinių 1b, 2b, 1c ir 2c bruto formulės, lydymosi temperatūros, išeigos ir elementinė analizė pateikta 1 lentelėje. Šių junginių IR spektrai užrašyti prietaisu Specord 71 (Vokietija) tabletėse su KBr. IR spektrų duomenys pateikti 2 lentelėje. 1H BMR spektrai užrašyti spektrometru Hitachi R-22 (Japonija) su darbiniu 90 MHz dažniu,vidinis etalonas - heksametildisiloksanas, temperatūra 35°C. 1H BMR spektrų duomenys pateikti 3 lentelėje.
[0011] 2,26 g (10 mM) 4-hidroksi-3-nitro-L-fenilalanino ištirpinama 16-je ml (32 mM) 2N natrio šarmų vandeniniame tirpale, pridedama 15-20 g ledo, 10 ml etilo eterio ir intensyviai maišant prilašinama 1ml (12 mM) propionilo chlorido. Po to dar maišoma 1,5 vai. prie temperatūros ne aukštesnės 2 °C, sekant, kad reakcijos turinys visą laiką būtų silpnai šarminis. Eterinis sluoksnis atskiriamas, o van-deninis sluoksnis šaldant lediniu vandeniu parūgštinamas praskiesta druskos rūgštimi iki pH3. Išsiskyręs produktas perkristalinamas iš spirito ir etilacetato mišinio. Gauta medžiaga 1b yra gelsvų kristalų pavidalo. 2 Pavyzdys. N- Propionil- 4- metoksi- 3- nitro- DL- fenilalaninas 2b.
[0012] Analogiškomis sąlygomis kaip ir 1 pavyzdyje iš 2,77 g (10 mM) 4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino hidrochlorido,16 ml (32 mM) 2N vandeninio natrio šarmo ir 1ml (12 mM) propionilo chlorido sintezuotas junginys 2b. Medžiaga 2b, perkristalinta iš spirito ir vandens mišinio, yra baltų kristalų pavidalo. 3 Pavyzdys. N- Propionil- 4- hidroksi- 3- nitro- L- fenilalanino kalio druska 1c. 2,82 g (10 mM) 1b ištirpinama 20-je ml absoliutaus etanolio ir pridedama 5ml (10mM) 2N kalio šarmų spiritinio tirpalo. Po to j reakcijos tirpalą pridedama 75 ml eterio. Išsiskirusios nuosėdos perkristalinamos iš etanolio ir eterio mišinio. Gauta medžiaga 1c yra raudonų kristalų pavidalo, tirpstanti vandenyje, karšta-me spirite. Rf = 0,62 (Silufol UV254, eliuentas: n-butanolis prisotintas vandeniu). 4 Pavyzdys. N- Propionil- 4- metoksi- 3- nitro- DL- fenilalanino kalio druska 2c.
[0013] Analogiškomis sąlygomis kaip ir 3 pavyzdyje iš 2,96 g (10 mM) 2b ir 5 ml (10 mM) 2N spiritinio kalio šarmo gautas junginys 2c. Medžiaga 2c, perkristalinta iš spirito ir eterio mišinio, yra baltų kristalų pavidalo, tirpstanti vandenyje, karš-tame etanolyje. Rf = 0,44 (Silufol UV254, eliuentas: n-butanolis prisotintas vandeniu).
[0014] Junginių 1c ir 2c ūmus toksiškumas buvo nustatytas nelinijinėms bal-toms pelėms, tiriamus preparatus įšvirkščiant j pilvaplėvės ertmę ir stebint ban-domus gyvuliukus 30 parų.
[0015] Antinavikinis aktyvumas buvo tiriamas naudojant tris įskiepytų navikų modelius, būtent, sarkomą 180 (S-180), Erlicho ascitinę karcinomą (EAC) ir limfoleukozę L 1210 (L-1210). Navikai pelėms buvo įskiepyti įprastiniais būdais. Bandymai buvo atliekami su nelinijinėmis ir hibridinėmis BDFt pelėmis, sveria-nčiomis 18-22 g.
[0016] Palyginimui buvo panaudotas srtuktūrinis analogas N-propionil-L-valinas ( A- 195).
[0017] Tiriami junginiai buvo ištirpinti fiziologiniame tirpale, preparatus pelėms kasdien įšvirkščiant į pilvaplėvės ertmę 2-5 dienas. Junginių antinavikinis aktyvumas buvo įvertintas nustatant S-180 naviko ir EAC bei L-1210 ascitinio skysčio vystymosi slopinimą procentais, lyginant su kontrole. Gydymas buvo pradeda-mas praėjus parai po EAC bei L-1210 ir trims paroms po S-180 įskiepijimo. Naviko S-180 augimo slopinimo įvertinimui gyvuliukai buvo dekapituojami praėjus 5 paroms po preparato paskutinio įšvirkštimo. Ascitinio skysčio kiekis buvo nustatytas 10-ją parą po EAC ir 8-ą parą po L-1210 įskiepijimo.
[0018] Biologinio tyrimo duomenys buvo apdoroti Lichfield'o ir Wilcoxon'o varia-cinės statistikos metodu [J.T. Litchfield, F. Wilcoxon. J. Pharmacol. Exp. Therap., vol. 96, pp. 99-113 (1949)].
[0019] Kaip matyti iš 4 lentelės junginiai 1c ir 2c yra mažai toksiški - jų ūmus toksiškumas yra 2,5 karto mažesnis už A- 195 ūmųjį toksiškumą. Junginiai 1c ir 2c sarkomos 180 augimą slopina 94,5 % ir 89,1 % atitinkamai, tuo tarpu kai prototipas A- 195 šj navikų modelį slopina 74,9 %. 1c ir 2c stipriai arba pilnai slopina ascitinio skysčio vystymąsi. Be to, 2c 4 lentelėje nurodyta doze 57,3 % prailgino pelių, įskiepytų EAC, išgyvenimą. Junginiai 1c ir 2c pelių, su įskiepytais navikais, kūno svorį pakeitė nežymiai - tiktai 1c jį sumažino 13,1 % pelėms su EAC, o 2c jį padidino 16,1 % pelėms su sarkoma 180.
[0020] Biologinių tyrimų rezultatų sugretinimas parodo, kad 1c ir 2c pagal eilę parametrų žymiai pralenkia struktūrinį analogą A- 195.
[0021] Plačiai vartojamas vaistas ftorafuras sarkomos 180 naviko augimą slopina 66 % [SKcnepMMeHTanbHafl oųeHKa npoTMBOonyxoneBbix npenapaTOB b CCCP m C UJA. non pen. 3.n. CocpbMHOfi, A.B. CbipKMHa (CCCP) m A. l~on-flMHa, A. KnntiHa (CUJA). M. MefluųMHa, 1980, c. 250], o jo LD50 = 640 mg/kg (pelių patelėms) ir LD50 = 750 mg/kg (pelių patinėliams), įšvirkščiant preparatą į pilvo ertmę [M.M. KpaBneHKO m AP- B kh.: SKcnepMMem-ajibHafl n KnMHMMec-Kaa cpapMaKonea. Pura, 3MHaTHe, 1977, Bbin. 7, c. 100-115].
[0022] Tokiu būdu, vandenyje tirpios N-propionil-4-hidroksi-3-nitro-L-fenilalanino ir N-propionil-4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino kalio druskos ( 1c ir 2c) būdamos mažai toksiškos ir pasižyminčios žymiu antinavikiniu aktyvumu gali būti perspek-tyviais junginiais eksperimentinėje biologijoje ir medicinoje.
[0023]
1. Junginiai N-propionil-4-hidroksi-3-nitro-L-feniIalanino ir N-propionil-4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino kalio druskos bendros struktūrinės formulės:
2. Junginiai pagal 1 punktą, besiskiriantys tuo, kad jie pasižymi antinavikiniu aktyvumu, slopindami sarkomos 180 augimą 94,5 % ir 89,1 % atitinkamai.
3. Junginys N-propionil-4-metoksi-3-nitro-DL-fenilalanino kalio druska pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis 57,3 % prailgino pelių, įskiepytų EAC, išgyvenimą.