LT4368B

MAŽOS MOLEKULINĖS MASĖS BICIKLINIAI TROMBINO INHIBITORIAI

LOW MOLECULAR WEIGHT BICYCLIC THROMBIN INHIBITORS

Referatas

[LT] Šis išradimas yra susijęs su fermento trombino heterociklinių konkuruojančių inhibitorių atradimu, jų pagaminimu ir jo farmacinėmis kompozicijomis. Šis išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių ir kompozicijų, kaip antikoaguliantų panaudojimu in vitro, bei kaip agentų, skirtų trombozinių sutrikimų, tokių kaip veninė trombozė, plautinės arterijos užsikimšimas embolu ir arterinė trombozė, atsirandančių ūmiais išeminiais atvejais, tokiais kaip miokardo infarktas arba cerebralinis infarktas panaudojimu gydymo ir profilaktikos tikslais in vivo. Be to, šiuos junginius ir kompozicijas galima naudoti koagulopatijos, susijusios su koronarinio šuntavimo operacijomis, bei liekamosiomis komplikacijomis po transliuminalinės angioplastikos, gydymui ir profilaktikai.

[EN] This invention relates to the discovery of heterocyclic competitive inhibitors of the enzyme thrombin having formula (I), their preparation, and pharmaceutical compositions thereof. As well, this invention relates to the use of such compounds and compositions in vitro as anticoagulants and in vivo as agents for the treatment and prophylaxis of thrombotic disorders such as venous thrombosis, pulmonary embolism and arterial thrombosis resulting in acute ischemic events such as myocardial infarction or cerebral infaction. Moreover, these compounds and compositions have therapeutic utility for the prevention and treatment of coagulopathies associated with coronary bypass operations as well as restenotic events following transluminal angioplasty.

Aprašymas

[0001] Šis išradimas yra susijęs su junginiais, kurie tinka trombozinių sutrikimų gydymui, o tiksliau su naujais heterocikliniais fermento trombino inhibitoriais.

[0002] Išradimo kilmė

[0003] Bereikalingas trombų susidarymas ant kraujagyslių sienelių pagreitina ūmias širdies-kraujagyslių ligų būsenas, kurios yra pagrindinė mirties priežastis ekonomiškai išsivysčiusiose visuomenėse. Plazmos baltymai, tokie kaip fibrinogenas, proteazės ir ląstelių receptoriai, dalyvaujantys hemostazėje, yra svarbūs faktoriai, kurie vaidina vaidmenj ūmiose ir chroniškose koronarinėse ligose, bei smegenų arterijų ligose; jie dalyvauja trombo arba kraujo krešulių susidaryme, kurie žymiai sumažina normalų kraujo tekėjimą ir tiekimą. Kraujagyslių nenormalumai, atsirandantys dėl pirminių patologinių būsenų, tokių kaip hipertenzija, aterosklerotinių plokštelių sutrūkinėjimai arba atplėštas endotelis, aktyvuoja biochemines kaskadas, kurios tarnauja kaip atsakas j pažeidimą ir pažeistos vietos atstatymui. Koaguliacijos kaskadoje trombinas yra pagrindinis reguliavimo fermentas; jis vaidina pliuralistini vaidmenj ir kaip teigiamo, ir kaip neigiamo grjžtamojo ryšio reguliatorius. Tačiau patologinėse būsenose pastarasis ryšys yra .sustiprinamas per kofaktorių katalitinj aktyvavimą, kurio reikia trombino generacijai, o taip pat ir faktoriaus XIII, reikalingo fibrino -susisiuvimui ir stabilizacijai, aktyvavimui,

[0004] Be tiesioginio poveikio j hemostazę, trombinas turi tiesiogini poveiki j įvairius ląstelių tipus, kurie palaiko ir didina arterinės trombinės ligos patogenezę. Šis fermentas yra stipriausias trombocitų aktyvatorius, sukeliantis jų agregaciją ir išsilaisvinimą medžiagų (pvz., ADP TXA₂ NE), kurios toliau skatina trombotinį ciklą. Trombocitai, esantys fibrino tinkle, sudaro pagrindini baltojo trombo karkasą. Trombinas taip pat turi tiesiogini poveikį į endotelines ląsteles, sukeldamas vazokonstriktorinių medžiagų išsilaisvinimą ir adhezinių molekulių translokaciją, kurios tampa imuninių ląstelių pririšimo vietomis. Be to, šis fermentas sukelia lygiųjų raumenų ląstelių mitogenezę ir fibroblastų proliferaciją. Išeinant iš šios analizės, darosi aišku, kad trombino aktyvumo inhibavimas yra veiksmingas terapinis priėjimas prie proliferacijos, susijusios su tromboze, slopinimo.

[0005] Pagrindinis endogeninis trombino aktyvumą neutralizuojantis faktorius žinduolių organizme yra antitrombinas III (ATIII) - plazmoje cirkuliuojantis makroglobulinas, kuris turi mažą giminingumą šiam fermentui. Heparinas pasižymi klinikiniu efektyvumu veninėje trombozėje, stiprindamas ATIII/trombino susirišimą dėl katalitinio efekto. Tačiau heparinas katalizuoja ir kitų koaguliacijos kaskados proteazių inhibavimą, ir jo efektyvumas nuo trombocitų priklausančioje trombozėje yra labai sumažintas arba panaikintas dėl to, kad jis neprieina prie su trombu sujungto fermento. Ilgą laiką gydant heparinu, pastebimi nepageidaujami pašaliniai poveikiai, tokie kaip trombocitopenija, osteoporozė ir trigliceridemija.

[0006] Hirudinas, gautas iš dėlių hirido medicinalis liaukų išskyrų, yra vienas iš didelės molekulinės masės gamtinių trombino aktyvumo antikoaguliantinių baltymų inhibitorių (Markwardt F. Cardiovascular Drug Reviews, 10, 211, 1992). Jis yra farmacinis biopreparatas, kuris pasižymi veiksmingumu eksperimentinės ir klinikinės trombozės atvejais. Svarbiausias hirudino, kaip terapinio agento, panaudojimo trūkumas yra jo antigeniškumas ir efektyvių neutralizacijos metodų nebuvimas, ypač jo labai išreikštų susirišimo su trombinu charakteristikų požiūriu. Nepaprastai didelė jo trauka trombinui yra unikali ir yra priskiriama vienalaikei sąveikai su katalitine vieta, bei su tolimesne fermento "anijoną rišančia egzovieta".

[0007] Trombino aktyvumą taip pat galima panaikinti panašiomis j hirudiną molekulėmis, tokiomis kaip hirulogas (Maraganore, J.M. et al.t Biochemistry, 29, 7095, 1990) arba hirutonino peptidai (DiMaio, J. et al., J. Med. Chem., 35, 3331, 1992).

[0008] Trombino aktyvumą taip pat galima inhibuoti mažos molekulinės masės junginiais, kurie konkuruoja su fibrinogenu dėl trombino katalitinės vietos, inhibuodami šio baltymo arba kitų baltyminių substratų, tokių kaip trombino receptorius, proteolizę. Bendra fermentą inhibuojančių junginių modeliavimo strategija remiasi specifiškumo, būdingo gamtinio fermento substrato pirminei ir antrinei struktūrai, imitavimu. Tokiu būdu, Blomback et al. pirmieji sukūrė trombino inhibitorių, kuris buvo sumodeliuotas pagal dalinę fibrinogeno A(_LBi)a grandinės seką, apimančią jo proteolitiškai prieinamą sritj (Blomback, et al., J. Clin. Lab. Invest., 24, 59, 1969). Ši fibrinogeno sritis apima bent jau liekanas, prasidedančias fenilalaninu:

[0009] Sisteminis aminorūgščių pakeitimas šioje srityje leido optimizuoti tripeptidinę inhibitoriaus seką, kurio pavyzdys yra (D)Phe-Pro-Arg peptidas, atitinkantis sąveikas P₃-P₂-P₁ lokalinėse trombino susirišimo vietose (Bajusz S. et al. in Peptides: Chemistry, Structure and Biology: Proceedings of the Fourth American Peptide Symposium, VValter R., Meienhofer J. Eds. Ann Arbor Science Publishers Inc., Ann Arbor Ml, 1975, p.603).

[0010] Bajusz et al. taip pat aprašė giminingus junginius, tokius kaip (D)Phe-Pro-Arg-(CO)H (GYKI-14166) ir (D)MePhe-Pro-Arg-(CO)H (GYKI-14766)

[0011] (Peptides-Synthesis, Structure and Function: Proceedings of the Seventh American Peptide Symposium, Rich, D.H. &Gross, E. eds., Pierce Chemical Company, 1981, pp.417). Šie tripeptidil-aldehidai yra efektyvūs trombino inhibitoriai tiek in vitro, tiek ir in vivo. Abiejų GYKI-14166 ir GYKI-14766 atveju laikoma, kad aldehido grupė labai stipriai dalyvauja inhibitoriniame aktyvume dėl jos cheminio reaktingumo trombino katalitinės Ser_ig₅ liekanos atžvilgiu, susidarant pusiauacetalio intermediatui.

[0012] Giminingame darbe trombino inhibitorinio aktyvumo srityje buvo panaudotas pagrindinis atpažinimo ryšio motyvas, kurį sukelia (D)Phe-Pro-Arg tripeptidas, jeigu įvedamos įvairios funkcinės arba reaktingos grupės į vietą, atitinkančią visuotinai pripažintą skylančią jungtį (t.y. PrPi').

[0013] US patente 4318904 Shaw aprašo chlormetilketonus (PPACK), kurie yra reaktingi Seri95 ir His₅₇ atžvilgiu. Šios dvi liekanos apima dalį trombino katalitinės triados (Bode, W. et al., EMBO Journal, 8, 3467,1989).

[0014] Kitais trombino inhibitorių, turinčių (D)-Phe-Pro-Arg pagrindinį fragmentą, pavyzdžiais yra tokie inhibitoriai, kuriuose yra COOH-galiniai borarginino variantai, tokie kaip boro rūgštys arba boratai (Kettner, C. et al., J. Biol. Chem., 268, 4734,1993).

[0015] Dar kitos giminingos šiam fragmentui medžiagos yra tokios, kuriose yra fosfonatų grupės (Wang, C-L. J., Tetrahedron Letters, 33, 7667, 1992) ir a-ketoesteriai (lwanowicz, E.J. et al., Bioorganic and Medicinai Chemistry Letters, 12, 1607, 1992).

[0016] Neises, B. et al. aprašė trichlormetilketono tipo trombino inhibitorių

[0017] (MDL-73756), o Attenburger, J.M. et al. aprašė giminingą difluoraliklamido ketoną (Tetrahedron Letters, 32, 7255, 1991).

[0018] Maraganore et al. (EP 0333356; WO 91/02750; US 5196404) aprašo keletą trombino inhibitorių, kuriuose yra D-Phe-Pro- liekana ir daro prielaidą, kad ši tinkama struktūra gerai tinka į "griovelį", esantį greta trombino aktyviosios vietos. Tokių inhibitorių įvairiais pavyzdžiais yra pagrindinai linijiniai arba cikliniai peptidai, sukonstruoti remiantis D-Phe-Pro liekanos pagrindu.

[0019] Kita patentų ir patentinių paraiškų serija aprašo mėginimus gauti įvairius inhibitorius prieš trombozę, panaudojant alfa-ketoamidus ir peptidinių aldehidų analogus (EP 0333356; WO 93/15756; WO 93/22344; WO 94/08941; WO 94/17817).

[0020] Dar kiti sukoncentravo savo dėmesį į peptidus, peptidinius darinius, peptidinius alkoholius arba ciklinius peptidus, kaip prieštrombinius agentus (WO 93/22344, EP 0276014; EP 0341607; EP 0291982). Kiti autoriai tyrė amidinsulforūgščių liekanas, norėdami gauti tą patį efektą (US 4781866), o dar kiti tyrė para- arba meta-pakeistus tenilalanino darinius (WO 92/08709; WO 92/6549).

[0021] Eilėje Mitsubishi patentų ir patentinių paraiškų aprašomi aiškiai efektyvūs argininamido junginiai, skirti panaudoti kaip antitrombiniai agentai. Šiuose dokumentuose aprašytos cheminės struktūros atstovauja argininamido junginio šoninių grupių variacijas (US 4173630; US 4097591; CA 1131621; US 4096255; US 4046876; US 4097472; CA 2114153).

[0022] Paraiškose Kanados patentui 2076311 ir 2055850 aprašomi cikliniai

[0023] imino dariniai, kurie pasižymi inhibiciniais efektais j ląstelių agregaciją.

[0024] Dauguma iš aukščiau pacituotų pavyzdžių susiveda galų gale j išlaikymą linijinio aciklinio tripeptidinio fragmento, turinčio arginilo liekaną, kurios bazinė šoninė grandinė yra reikalinga sąveikai su karboksilato grupe, esančia trombino Pi specifiškumo "plyšio" apačioje. Dvi gretimos hidrofobinės grupės dalyvauja papildomo ryšio sudaryme dėl naudingos Van der Valso sąveikos gretimame hidrofobiniame "plyšyje" ant fermento paviršiaus, pažymėtame P₃-P₂ vieta.

[0025] Šio išradimo tikslas yra pateikti trombino inhibitorius, kurie turėtų inhibitorinj aktyvumą tiksliniam fermentui -trombinui.

[0026] Kitas šio išradimo tikslas yra pateikti trombino inhibitorius, kurie turėtų inhibitorinj aktyvumą tiksliniam fermentui trombinui ir pateikti juos farmakologiškai tinkamamoje būsenoje.

[0027] Dar kitas šio išradimo tikslas yra pateikti panaudojimui heterociklinius trombino inhibitorius ir jų, kaip antikoaguliantinių ir inhibuojančių trombiną agentų, receptūras.

[0028] Ir dar kitas šio išradimo tikslas yra pateikti panaudojimui heterociklinius trombino inhibitorius ir jų receptūras, skirtas jvairių trombozinių susirgimų gydymui.

[0029] Dar vienas šio išradimo tikslas yra šių mažos molekulinės masės trombino inhibitorių sintezės būdas. Šio išradimo fermento inhibitorių struktūrą vaizduoja bendroji formulė I.

[0030] Šiame išradime pateikiami nauji junginiai, pasižymintys trombiną inhibuojančiu aktyvumu, kurių bendroji formulė yra I:

[0031]

[0032] A yra pasirinktas iš (CH-R_eJo-i. S, SO, S0₂, O ir NR₀, kur R_s yra vandenilis, C_i.₆-alkilas, kuris, esant reikalui, gali būti pertrauktas 1 arba 2 heteroatomais; C₆-₁₆ -arilas, C₃.₇ -cikloalkilas arba heterociklinis žiedas, arba hidrofobinė grupė; B yra pasirinktas iš S, S0₂, O, -N = , NH, -CH= ir CR₆R₇, kur R₆ ir R₇, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš vandenilio ir C_^-alkilo, su sąlyga, kad kai A yra S, SO, S02, O arba NR₈, B yra CR₆R₇; D yra pasirinktas iš (CH-Rg)o- 2, kur Rg yra vandenilis, C_i.₆-alkilas arba 0(0^; o CH su dviguba jungtimi sujungta su B, kai B yra -N= arba -CH=;

[0033] E yra pasirinktas iš CH₂ ir CH, turinčio -0(0^ pakaitą, su sąlyga, kad tik vienas iš D ir E turi -C(0)R_i pakaitą;

[0034] X yra pasirinktas iš O, N-R₅ arba CH-R₅;

[0035] Y yra pasirinktas iš O, S, SO, SO , N-R₅ ir CH-R₈, su sąlyga, kad kai X yra N- R5, tada Y yra CH-Re arba O, o kai X yra O, tada Y yra CH-R₈;

[0036] Z yra pasirinktas iš O, S ir H₂;

[0037] R_i yra polinės aminorūgšties liekana, arginilo liekana arba jų analogas arba darinys, kuriuose gali būti kaip pakaitai aminorūgštis, peptidas arba heterociklas;

[0038] R₂ yra pasirinktas iš H ir C_i.₆-alkilo, kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip Ce-arilas, 6-naris heterociklas arba C 3- 7-cikloaliko žiedas;

[0039] R₄ ir R₅, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H; NReRz; Ce-ie-arilo arba C 3- 7-cikloalkilo, kuriame kaip pakaitas gali būti C_i.₆-alkilas; Ci-ie-alkilo, kuris gali būti pertrauktas vienu arba daugiau heteroatomų arba karbonilo grupe, ir gali turėti pakaitus, tokius kaip OH, SH, NR₆R₇ arba C 6- i6-arilas, heterociklas arba C 3- 7-cikloalkilo grupė, kurioje gali būti pakaitai, tokie kaip halogenas, hidroksilas, C^-alkilas; aminorūgšties šoninės grandinės; ir hidrofobinės grupės.

[0040] Kaip paaiškės iš toliau duodamo aprašymo, šio išradimo molekulės, kompozicijos ir metodai yra naudingi kaip antikoaguliantai, arba jie tinka jvairių ligų, susijusių su nepageidautinais trombino poveikiais, gydymui ir profilaktikai, o taip pat ir diagnostikos tikslams.

[0041] Šis išradimas yra susijęs su molekulėmis, kurios inhibuoja fermentą trombiną. Šioms molekulėms būdinga heterobiciklinė liekana, kuri parodyta I formulėje:

[0042]

[0043] kurioje X, Y, Z, A, B, D, E ir R_i - R₄ yra tokie, kaip aprašyta aukščiau.

[0044] Terminas "hidrofobinė grupė" (HG), panaudotas čia ir toliau, reiškia bet kokią grupę, kuri nėra gimininga vandeniui, arba išstumia vandenj. Hidrofobinės grupės yra (bet jomis neapsiribojama) Ci. 2o-alkilas, C₂-₂₀-alkenilas (pvz., vinilas, alilas) arba C₂-₂o-alkinilas (pvz. propargilas), kurios gali būti pertrauktos karbonilo grupe (pvz. susidarant acilo grupei); C₆-_i6-arilas, C₃-₇-cikloalkilas, Ce-₂₀-aralkilas, C₆-₂o-cikloalikilas, kuriose kaip pakaitas gali būti C_i._2o-alkilas, kurio alifatinė dalis gali būti pertraukta karbonilo grupe (pvz., susidarant alkilui), o žiedo dalyje gali būti pakaitas, toks kaip Ci.₂₀-alkilas, pavyzdžiui, metilas, etilas arba t-butilas; arba hidrofobinės aminorūgšties šoninė grandinė. Tinkamiausios hidrofobinės grupės yra cikloheksilas, benzilas, benzoilas, fenilmetilas, fenetilas ir para-t-butilfenilmetilas.

[0045] Terminas "arginilo liekana" reiškia arginino aminorūgšties liekaną, jos analogą arba darinj. Pavyzdžiui, gamtinės liekanos analoge arba darinyje gali būti ilgesnė arba trumpesnė metileno grandinė prie alfa-anglies (t.y. etileno arba butileno grandinė); guanidino grupės pakeitimas vandenilinio ryšio donoro arba akceptoriaus grupe (t.y. amino-, amidino- arba metoksi-grupe); metileno grandinės pakeitimas nejudria grupe (t.y. arilo, cikloalkilo arba heterocikliniu žiedu); galinio karboksilo eliminavimas (t.y. dekarboksilinimas) arba hidroksilo eliminavimas (t.y. aldehido grupė); arba šių pakeitimų kombinacija.

[0046] Terminas "alkilas" reiškia tiesią arba šakotą, sočią arba nesočią grandinę, kurioje yra nurodytas bendras anglies atomų skaičius.

[0047] Terminas "aromatinis" arba "arilas" reiškia nesotų karbociklinį žiedą(us) iš 6-16 anglies atomų, kuriame gali būti vienas arba du pakaitai, tokie kaip OH, SH, aminogrupė (t.y. NR₆R₇), halogenas arba C_^-alkilas. Aromatiniai žiedai apima benzeną, naftaleną, fenantreną ir antraceną. Tinkamiausi aromatiniai žiedai yra benzenas ir naftalenas.

[0048] Terminas "cikloalkilas" reiškia sotų karbociklinį žiedą iš 3-7 anglies atomų, kuriame gali būti vienas arba du pakaitai, tokie kaip OH, SH, aminogrupė (t.y. NR₆R₇), halogenas arba C_i.₆-alkilas. Cikloalkilo grupės apima ciklopropilą, ciklobutilą, ciklopentilą, cikloheksilą ir cikloheptilą. Tinkamiausia cikloalkilo grupė yra cikloheksilas.

[0049] Terminas "aralkilas" reiškia pakaitą, turintj arilo liekaną prijungtą per alkilo grandinę (pvz., benzilas, fenetilas), kuriame bendras arilo liekanos ir alkilo grandinės anglies atomų skaičius yra toks, koks nurodytas. Arilo liekanoje arba grandinėje gali būti vienas arba du pakaitai, tokie kaip OH, SH, aminogrupė (t.y. NR₆R₇), halogenas arba Ci.₆-alkilas.

[0050] Čia naudojamas terminas "heteroatomas" reiškia deguonį, azotą arba sierą (O, N arba S), o taip pat ir sulfoksilą arba sulfonilą (SO arba S0₂), jeigu nenurodyta kitaip. Suprantama, kad alkilo grandinės, pertrauktos vienu arba daugiau heteroatomų, reiškia, kad grandinės anglies atomas yra pakeistas heteroatomu, turinčiu tinkamą valentingumą. Pageidautina, • kad alkilo grandinės būtų pertrauktos 0-4 heteroatomais ir kad du gretimi anglies atomai nebūtų pakeisti.

[0051] Terminas "heterociklas" reiškia sotų arba nesotų mono- arba policiklinį

[0052] (t.y. biciklinį) žiedą, kuriame yra vienas arba daugiau (t.y. 1-4) heteroatomai, pasirinkti iš N, O ir S. Suprantama, kad heterocikle gali būti vienas arba du pakaitai, tokie kaip tokie kaip OH, SH, aminogrupė (t.y. NR₆R₇), halogenas, CF₃, oksogrupė arba C_i.₆-alkilas. Tinkamų monociklinių heterociklų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) piridinas, piperidinas, pirazinas,

[0053] piperazinas, pirimidinas, imidazolas, tiazolas, oksazoias, furanas, piranas ir tiofenas. Tinkamų biciklinių heterociklų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) indolas, chinolinas, izochinolinas, purinas ir karbazolas.

[0054] Terminas "hidrofobinė aminorūgštis" reiškia aminorūgšties liekaną, kurioje yra alkilo arba arilo grupė, prijungta prie a-anglies atomo. Taigi glicinas, kuris neturi tokios grupės, prijungtos prie a-anglies atomo, nėra hidrofobinė aminorūgštis. Alkilo arba arilo grupėje gali būti pakaitų, su sąlyga, kad šis pakaitas arba pakaitai nesumažina aminorūgšties bendro hidrofobinio charakterio. Hidrofobinių aminorūgščių pavyzdžais yra gamtinės aminorūgštys, tokios kaip alaninas, izoleucinas, leucinas, fenilalaninas, ir negamtinės aminorūgštys, tokios kaip aprašytos "The Peptides", Vol. 5, 1983, Academic Press, Chapter 6 by D.C. Roberts and F. Vellaccio. Tinkamos negamtinės aminorūgštys yra cikloheksilalaninas ir 1-aminocikloheksankarboksirūgštis.

[0055] Terminas "aminorūgšties šoninė grandinė" reiškia pakaitą, prijungtą prie anglies, kuri yra a-padėtyje aminogrupės atžvilgiu. Pavyzdžiui, aminorūgšties alanino šoninė grandinė yra metilo grupė, o fenilalanino šoninė grandinė yra benzilas.

[0056] Pageidautina, kad R₂ būtų H arba C_i.₆-alkilas. Dar geriau, kai R₂ yra H, metilas arba etilas, o geriausia, kai R₂ yra H.

[0057] Pageidautina, kad R₃ būtų H arba Ci-e-alkilas. Dar geriau, kai R₃ yra H, metilas arba etilas, o geriausia, kai R₃ yra H.

[0058] Pageidautina, kad vienas iš R₄ arba R5 būtų hidrofobinė grupė, tokia kaip 5- arba 6-naris sotus arba nesotus karbociklas, kuris gali būti sulietas su kita karbocikline grupe, o antrasis būtų H, Ci-₆-alkilas, kuriame gali būti pakaitas, toks kaip NR_eR_z arba karboksigrupė. Hidrofobinė liekana gali būti prijungta per tiltelj, tokj kaip Ci.-ie-alkilo grandinė, kuri gali būti pertraukta 1 arba daugiau (t.y. 1-4) heteroatomais, karbonilo arba sulfonilo (S0₂) grupėmis. Geriau, kai vienas iš R₄ ir R₅ yra fenilas, cikloheksilas, indolas, tienilas, chinolinas, tetrahidroizochinolinas, naftilas arba benzodioksolanas, prijungtas per Ci.ie-alkilą, kuris gali būti pertrauktas heteroatomu arba karbonilu, o antrasis yra H, karboksimetilas arba karboksietilas.

[0059] Pageidautina, kad E būtų CH, pakeistas -C(0)Ri, kur R₁ yra toks, kaip

[0060] Tinkamiausiame šio išradimo realizavimo variante R₁ yra atvaizduotas viena iš Vla-Vld formulių:

[0061] R11 yra vandenilis arba C_i.₆-alkilas; K yra jungtis arba -NH-; G yra C^-alkoksigrupė; cianogrupė, -NH₂; -CH₂NH₂; -C(NH)-NH₂; -NH-C(NH)-NH₂; -CH₂-NH-C(NH)-NH₂; C₆-cikloalkilas arba arilas, kuriuose yra pakaitai, tokie kaip cianogrupė, -NH₂; -CH₂NH₂; -C(NH)-NH₂; -NH-C(NH)-NH₂ . arba -CH₂-NH-C(NH)-NH₂; arba 5- arba 6-naris sotus arba nesotus heterociklas, kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip cianogrupė, NH₂; - CH₂NH₂; -C(NH)-NH₂; -NH-C(NH)-NH2 arba -CH2-NH-C(NH)-NH2;

[0062] U yra cianogrupė,-NH₂, -C(NH)-NH₂ arba-NH-C(NH)-NH₂;

[0063]

[0064] J yra C_i.₆-alkilenas, kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip OH, NH₂ ir Ci-₆-alkilas, ir jis gali būti pertrauktas heteroatomu, pasirinktu iš O, S ir N;

[0065] T yra H, OH, aminogrupė, peptido grandinė, Ci. ie-alkilas, C m6-alkoksigrupė, C₆-₂o-aralkilas arba heterociklas, kuriame gali būti pakaitų.

[0066] Pageidautina, kad G būtų -NH-C(NH)-NH₂, prijungta per 3-7 anglies atomų metileno grandinę, arba fenilas, turintis -C(NH)-NH₂ pakaitą, prijungtą per 0-3 anglies atomų grandinę. Dar geriau, kad G būtų -NH-C(NH)-NH₂, prijungta per 3 anglies atomų grandinę.

[0067] Pageidautina, kad J būtų pasirinktas iš -CH₂-S-CH₂-CH₂-; -CH₂-O-CH₂-CH₂-; -CH₂-NH-CH₂-CH₂-; ir būtų jungtis, kai n yra 0.

[0068] iš toliau duodamų aminorūgščių darinių, pagaminamų pagal Bioorg. Med. Chem., 1995, 3:1145 aprašytas metodikas:

[0069]

[0070] kuriose n=1-6, n1 = 1-2, n2=₀-7, o T yra toks, kaip aprašyta anksčiau.

[0071] Pageidautiname išradimo realizavimo variante T yra 1-4 aminorūgščių liekanų ilgio peptidas, geriausia fibrinogeno A arba B grandinė, jos fragmentas arba darinys. Kitame pageidautiname variante T yra heterociklas, pasirinktas iš grupės, kurią sudaro:

[0072] Xs, Xio, Xn ir Xi₂, nepriklausomai vienas nuo kito,-yra-pasirinkti iš grupės, susidedančios iš N arba C-X₇ , kur X₇ yra vandenilis, Ci.₄-alkilas arba C₆-₁₆-arilas;

[0073] X_e ir X_i3, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš C, O, N, S, N-X? arba CH-X₇;

[0074] R' yra vandenilis; Ci-i₆-alkilas, kuriame gali būti pakaitas, toks kaip karboksilas; karboksilas; - Co- i6-alkilas- C02- Ci. i6-alkilas; C^ o-aralkilas C3. 7-cikloalkilas, arilas arba aromatinis heterociklas.

[0075]

[0076] Dar geriau T pasirinkti iš grupės, susidedančios iš:

[0077] Dar geriau T pasirinkti iš grupės, susidedančios iš:

[0078] kur R' yra toks, kaip aprašyta aukščiau.

[0079]

[0080] kur R' yra H arba CM-alkilas, toks kaip metilas, etilas, propilas arba butilas, o geriausia, kai R' yra vandenilis. Kitame realizavimo variante T yra 1,2-tiazolas, kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip R' ir/arba yra prijungtas prie J 2-, 3-, 4-arba 5-je žiedo padėtyje.

[0081] Tam tikruose realizavimo variantuose šio išradimo junginiai yra atvaizduoti II, III, IV ir V formulėmis, kuriose X, Y, B, R₁-R₄ ir R₈ yra tokie, kaip aprašyta anksčiau.

[0082] Ypatingai tinkamame realizavimo variante, šio išradimo junginiai yra atvaizduoti viena iš VII, VIII, IX ia X formulių:

[0083] B yra O, S, -CH₂- arba -NH-;

[0084] Y yra pasirinktas iš O, S, SO, SO₂, N-R₅ ir CH-Re;

[0085] Ri yra arginilo liekana arba jos analogas arba darinys, kuriuose kaip pakaitas gali būti aminorūgštis, peptidas arba heterociklas;

[0086] R₂ yra H arba Ci.₆-alkilas;

[0087] R₄ ir R_s, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H; NR₆R₇; C 6- i6-arilo arba C₃-₇-cikloalkilo, kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip C^-alkilas; Cm6-alkilo, kuris gali būti pertrauktas vienu arba daugiau heteroatomų arba karbonilo grupe, ir gali turėti pakaitus, tokius kaip OH, SH, NR₆R₇ arba C₆-₁₆-arilas, heterociklas arba C₃.₇-cikloalkilo grupė, kurioje gali būti pakaitai, tokie kaip halogenas, hidroksilas, Ci-₆-alkilas; aminorūgšties šoninės grandinės; ir hidrofobinės grupės;

[0088] Ra yra vandenilis, Ci-₆-alkilas, kuris gali būti pertrauktas 1 arba 2 heteroatomais; C₆-_i6-arilas, C₃-₇-cikloalkįlas arba heterociklinis žiedas arba hidrofobinė grupė; ir

[0089] n yra 1 arba 2.

[0090]

[0091] Tinkamesni VII formulės junginiai yra:

[0092] Pageidautini VIII formulės junginiai yra:

[0093]

[0094] Tinkami VIII formulės junginiai yra:

[0095]

[0096] Pageidautini IX formulės junginiai yra:

[0097] Tinkamiausi X formulės junginiai yra:

[0098] VII formulės junginiams gauti gali būti naudojami įvairūs metodai, priklausomai nuo pradinių medžiagų ir/arba susidarančių tarpinių medžiagų. Vienas konkretus metodas yra parodytas toliau duodamoje schemoje:

[0099]

[0100] b junginys, atlikus hidroborinimą ir oksidaciją literatūroje nurodytomis sąlygomis (Synthesis, 1980, 151), duoda aldehidą c.

[0101] Adukto e sintezė iš aldehido c ir junginio d atliekama, maišant reagentus aromatiniuose tirpikliuose, pvz., benzene arba toluene, esant katalitiniam kiekiui tinkamos rūgšties, pvz., p-toluensulforūgšties.

[0102] Aldehido c pavertimas j aldehidą g lengvai pasiekiamas pagal atitinkamas blokavimo-deblokavimo metodikas, kurias galima rasti T. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (John VViley & Sons, 1981).

[0103] Adukto e ciklizacija j junginj f gali būti lengvai jvykdoma, panaudojant atitinkamas Liuiso rūgštis, pvz., trimetilaliuminį, tinkamuose tirpikliuose, pvz., dichlormetane; metodiką galima rasti T. Greene, supra.

[0104] Kitu būdu, junginj f galima gauti, veikiant aldehidą g junginiu d, esant tinkamiems aromatiniams tirpikliams, pvz., benzenui.

[0105] Tada hidrolizuojama biciklinio tarpinio formulės f junginio esterinė grupė (-C-(0)0-R₂o), panaudojant atitinkamą agentą, tokj kaip HCI atitinkamame tirpiklyje, tokiame kaip etilo, eteris, ir- gaunama laisva karboksirūgštis. Po to, gautas junginys jungiamas su R_iH, panaudojant peptidų kopuliavimo agentą, tokj kaip BOP tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip DMF, ir gaunamas biciklinis VII formulės junginys. Tinkamos peptidinio ryšio sudarymo sąlygos yra gerai žinomos peptidų chemijoje. Pavyzdžiui, žr. Principles of Peptide Synthesis, Bodanszky M., Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo 1984; ir The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol.1, edited by Gross E., and Meienhofer J., Academic Press, New York, San Francisco, London, 1979.

[0106] VIII formulės junginiams gauti gali būti naudojami jvairūs metodai, priklausomai nuo pradinių medžiagų ir/arba susidarančių tarpinių medžiagų. Vienas konkretus metodas yra parodytas toliau duodamoje schemoje:

[0107] Pg yra azoto apsauginė grupė;

[0108] R₂₀ ir R2 i, nepriklausomai vienas nuo kito, yra C_i.₆-alkilas; o X, Ri, R₃, R₄ ir R₅ yra tokie, kaip aprašyta anksčiau.

[0109] Nesotaus a formulės junginio amino- ir karboksigrupės blokuojamos atitinkamomis apsauginėmis grupėmis. Daug jvairių apsauginių grupių, tinkamų apsaugoti reaktingoms funkcinėms grupėms, ir tinkamas jų blokavimo ir deblokavimo metodikas galima rasti T. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (John VViley & Sons, 1981). Konkreti apsauginė grupė, naudojama tam tikroje sintezės schemoje, priklauso nuo daugelio faktorių, jskaitant kitų reaktingų funkcinių grupių buvimą ir jos atskėlimo reakcijos sąlygas. Nesotų a formulės junginį galima lengvai gauti, panaudojant patyrusiam šios srities chemikui žinomus metodus ir metodikas. Nesotus blokuotas a formulės junginys atitinkamomis sąlygomis ciklinamas, panaudojant tinkamą reagentą, tokj kaip gyvsidabrio acetatas, inertiniame tirpiklyje, tokiame kaip tetrahidrofuranas (THF), ir gaunamas blokuotas aminoalkoholis, kurio formulė b.

[0110] Blokuotas b formulės aminoalkoholis oksidinamas, panaudojant tinkamą oksidinimo agentą, tokj kaip sieros trioksido-piridino kompleksas, tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip dichlormetanas arba dimetilformamidas, ir gaunamas blokuotas aminoaldehidas, kurio formulė c. Kitu būdu, tarpinė medžiaga c gali būti pagaminta, panaudojant a' formulės junginio, pagaminto pagal Collado et al., J. Org. Chem., 1995, 60, 5011, ozonolizę.

[0111] Blokuotas c formulės aminoaldehidas sujungiamas su d formulės aminorūgšties alkilo esteriu, iš pradžių susidarant iminui, kurj po to veikiant atitinkamu reagentu, tokiu kaip natrio triacetoksiborhidridas NaBH(OAc)₃, gaunamas ciklinis e formulės tarpinis junginys.

[0112] Cikliniame e formulės tarpiniame junginyje įvedama aminofunkcinė grupė, ir gaunamas aminopakeistas ciklinis f formulės tarpinis junginys. Tokioms reakcijoms tinkamos sąlygos yra gerai žinomos specialistams ir jos priklauso nuo R₅ pakaito prigimties.

[0113] Tinkamomis sąlygomis pašalinama f formulės ciklinio tarpinio junginio amino-apsauginė grupė, ir tada gautas junginys atitinkamomis sąlygomis, tokiomis kaip silpnai šildant inertiniame tirpiklyje, ciklinamas kaip nevalyta medžiaga, ir gaunamas biciklinis g formulės tarpinis junginys. Šis biciklinis g formulės tarpinis junginys taip pat gali būti gaunamas, hidrolizuojant ciklinio f formulės tarpinio junginio esterinę grupę (-C(0)0-R₂o) iki laisvos karboksirūgšties, o po to panaudojant standartini peptidinj sujungimą, esant tinkamam kopuliavimo reagentui, tokiam kaip benzotriazol-1-iloksi-tris(dimetilamino)fosfonio heksafluorfosfatui (BOP) inertiniame tirpiklyje, tokiame kaip dimetilformamidas (DMF).

[0114] Tada biciklinio g formulės tarpinio junginio esterinė grupė (-C(O)O-R₂₁) hidrolizuojama, panaudojant atitinkamą agentą, tokj kaip HCI tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip etilo eteris, ir gaunama laisva karboksirūgštis. Gautasis junginys tada sujungiamas su R₁H, panaudojant peptidinio kopuliavimo agentą, tokj kaip BOP, tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip DMF, ir gaunamas biciklinis VIII formulės junginys. Tinkamos peptidinės jungties sudarymo sąlygos yra gerai žinomos peptidų chemijos specialistams. Pavyzdžiui, žr. Principles of Peptide Synthesis, Bodanszky M., Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo 1984; ir The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol.1, edited by Gross E., and Meienhofer J., Academic Press, New York, San Francisco, London, 1979.

[0115] IX formulės junginiams gauti gali būti naudojami jvairūs metodai, priklausomai nuo pradinių medžiagų ir/arba susidarančių tarpinių medžiagų. Vienas konkretus metodas yra parodytas toliau duodamoje schemoje:

[0116] Pg yra sieros arba aminogrupės apsauginė grupė;

[0117] L yra atskylanti grupė;

[0118] R₂₀ ir R₂₁, nepriklausomai vienas nuo kito, yra C_i.₆-alkilas; o R₁, R3, R4 ir R5 yra tokie, kaip aprašyta anksčiau.

[0119] Karboksirūgštis, kurios formulė a, sujungiama su cikliniu amino junginiu b, panaudojant peptidų kopuliavimo agentą, tokj kaip benzotriazol-1-iloksi-tris(dimetilamino)fosfonio heksafluorfosfatą (BOP reagentą), esant bazei, tokiai kaip n-metilmorfolinui, tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip dimetilformamidas (DMF) arba dichlormetanas (DCM), ir gaunamas c formulės amidojunginys. Tinkamos peptidinės jungties sudarymo sąlygos yra gerai žinomos peptidų chemijos specialistams. Pavyzdžiui, žr. Principles of Peptide Synthesis, Bodanszky M., Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo 1984; ir The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol.1, edited by Gross E., and Meienhofer J., Academic Press, New York, San Francisco, London, 1979.

[0120] Tinkamomis sąlygomis vykdoma c junginio vidinė ciklizacija, ir gaunamas biciklinis tarpinis d formulės junginys. Pavyzdžiui, gali būti vykdoma rūgščių skatinama ciklizacija, panaudojant p-toluensulforūgštj arba TFA tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip dichlormetanas.

[0121] Tada biciklinio d formulės tarpinio junginio esterinė grupė (-C(0)0-R_2o) hidrolizuojama, panaudojant atitinkamą agentą, tokj kaip ličio hidroksidas (LiOH) tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip tetrahidrofuranas (THF), ir gaunama laisva karboksirūgštis. Gautasis junginys tada sujungiamas su R_iH, panaudojant peptidinio kopuliavimo agentą, tokj kaip BOP, tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip DMF, ir gaunamas junginys e. Tinkamos peptidinės jungties sudarymo sąlygos yra gerai žinomos peptidų chemijos specialistams. Pavyzdžiui, žr. Principles of Peptide Synthesis, Bodanszky M., Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo 1984: ir The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol.1, edited by Gross E., and Meienhofer J., Academic Press, NevvYork, San Francisco, London, 1979.

[0122] X formulės junginiams gauti gali būti naudojami jvairūs metodai, priklausomai nuo pradinių medžiagų ir/arba susidarančių tarpinių medžiagų. Vienas konkretus metodas yra parodytas toliau duodamoje 4 schemoje:

[0123] R20 ir R₂₁, nepriklausomai vienas nuo kito, yra C_i.₆-alkilas; o B, R_1t R₃, R₄ ir R_s yra tokie, kaip aprašyta anksčiau.

[0124] Halogenintas a formulės junginys yra paverčiamas b formulės halometilketonu, panaudojant tinkamą reagentą, tokj kaip diazometanas, inertiniame tirpiklyje, tokiame kaip dietilo eteris, maždaug -25-0 °C temperatūroje. Gautas mišinys apdorojamas rūgštinėse sąlygose, ir gaunamas b formulės halometilketonas.

[0125] b formulės halometilketonas sujungiamas su c formulės aminorūgšties alkilo esteriu, panaudojant atitinkamą bazę, tokią kaip natrio cianborhidridas, organiniame tirpiklyje, tokiame kaip metanolis (MeOH), ir gaunamas d formulės ciklinis tarpinis junginys.

[0126] Ciklinis d formulės tarpinis junginys apdorojamas rūgštinėse sąlygose, panaudojant atitinkamą rūgštj, tokią kaip kamparo sulforūgštis, tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip toluenas, ir gaunamas biciklinis e formulės tarpinis junginys.

[0127] Tada biciklinio e formulės tarpinio junginio esterinė grupė (-C(0)0-R_2o) hidrolizuojama, panaudojant atitinkamą agentą, tokj kaip ličio hidroksidas (LiOH), ir gaunama laisva karboksirūgštis. Gautasis junginys tada sujungiamas su R_iH, panaudojant peptidinio kopuliavimo agentą, tokj kaip BOP, tinkamame tirpiklyje, tokiame kaip DMF, ir gaunamas junginys, kurio formulė X. Tinkamos peptidinės jungties sudarymo sąlygos yra gerai žinomos peptidų chemijos specialistams. Pavyzdžiui, žr. Principles of Peptide Synthesis, Bodanszky M., Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo 1984; ir The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol,1, edited by Gross E., and Meienhofer J., Academic Press, New York, San Francisco, London, 1979. Toliau šio išradimo junginiai yra apibūdinami jų sugebėjimu inhibuoti trombino katalitini aktyvumą, kuris yra nustatomas toliau aprašytame bandyme. Šiam bandymui pagaminami šio išradimo junginių tirpalai buferyje, . kurių koncentracijos yra 1-100 mM ribose. Nustatant konkretaus jungini_? inhibicinę disociacijos konstantą Kj, j tiriamojo junginio tirpalą reikia pridėti trombino chromogeninio arba fluorogeninio substrato ir trombino ir nustatyti gaunamą fermento katalitinj aktyvumą spektrofotometriniu būdu. Tokio tipo bandymas yra gerai žinomas šios srities specialistams.

[0128] Šio išradimo junginiai gali būti panaudoti kaip antikoaguliantai in vitro arba ex vivo kontaktinės aktyvacijos su svetimais trombogeniniais paviršiais,

[0129] tokiais kaip paviršiai, sutinkami vamzdeliuose, naudojamuose ekstrakorporaliniuose šuntuose, atveju. Šio išradimo junginiai taip pat gali būti panaudoti tokių trombogeninių vamzdelių paviršiams padengti. Šiam tikslui šio išradimo junginiai pagaminami liofilizuotų miltelių pavidalu, vėl ištirpinami izotoniniame natrio chlorido tirpale, ir pridedamas toks kiekis, kad jo pakaktų išlaikyti kraują antikoaguliacinėje būsenoje.

[0130] Šio išradimo terapiniai agentai gali būti vartojami vieni arba kartu su farmaciškai tinkamais nešikliais. Kiekvieno nešiklio dalj apsprendžia junginio tirpumas ir cheminė prigimtis, vartojimo būdas ir jprasta farmacijos praktika. Pavyzdžiui, junginiai gali būti suleidžiami parenteriniu būdu, t.y. j raumenis, j veną arba po oda. Parenteriniam vartojimui skirti junginiai turi būti paruošti sterilių tirpalų, kuriuose yra ir kitų ištirpintų medžiagų, pavyzdžiui, pakankamas natrio chlorido arba gliukozės kiekis, kad tirpalas būtų izotoninis, formoje. Junginiai gali būti vartojami peroraliniu būdu tablečių, kapsulių arba granulių, kuriose yra tinkamos pagalbinės medžiagos, tokios kaip krakmolas, laktozė, baltasis cukrus ir pan., formoje. Šie junginiai taip pat gali būti vartojami sublingualiniu būdu tablečių arba paplotėlių formoje, kuriuose kiekvienas veiklusis ingredientas sumaišomas su cukrumi arba grūdų sirupais, skonj suteikiančiais agentais ir dažais, o tada pakankamai dehidratuojami, kad mišinj būtų galima supresuoti j kietą formą. Junginiai gali būti vartojami peroraliniu būdu ir tirpalų formoje, kuriuose gali būti spalvą ir/arba skonj suteikiančių agentų.

[0131] Tinkamiausias šio išradimo terapinių agentų dozes nustatys terapeutai. Dozės gali kisti priklausomai nuo vartojimo būdo ir konkretaus pasirinkto junginio. Be to, dozės gali būti skirtingos skirtingiems gydomiems pacientams.

[0132] Paprastai, jeigu kompozicija yra vartojama peroraliniu būdu, norint pasiekti tą patj efektą, reikia didesnio veikliojo agento kiekio, nei vartojant parenteriniu būdu.

[0133] Norint padėti geriau suprasti išradimą, toliau duodami tokių trombiną inhibuojančių junginių pavyzdžiai. Aišku, kad toliau duodami pavyzdžiai neturi būti laikomi apribojančiais šj išradimą; yra galimos įvairios dabar žinomos arba vėliau išaiškėsiančios jo variacijos, kurias šios srities specialistai turi suprasti, kad jos jeina j šio išradimo sferą, kaip čia aprašyta. Tinkamiausi šio išradimo junginiai sintezuoti, panaudojant įprastas preparatyvines stadijas ir išskyrimo metodus, žinomus organinės ir bioorganinės sintezės specialistams, pateikiant naują unikalią bendros kiekvieno junginio sintezės kombinaciją. Toliau duodami tinkamiausi tarpinių medžiagų, dalyvaujančių sintezėje, bei gaunamų šio išradimo prieštrombinių junginių sintezės būdai.

[0134]

[0135] Tret-butiloksikarboniljodalanin-N,0-dimetilamido (2,68 g, 7,5 mmol) (J. Org. Chem., 1992, 57, 3397-3404) tirpalas sausame benzene (30 ml) ir sausame N,N-dimetilacetamide (2,0 ml) supilamas j sausu azotu prapučiamą apvaliadugnę kolbą, kurioje yra cinko-vario lydinio (0,90 g). Mišinys veikiamas ultragarsu, leidžiant azotą tol, kol nelieka pradinės medžiagos (pagal TLC). Pridedama bis(tri-o-tolilfosfin)paladžio dichlorido (0,35 g, 0,40 mmol), o po to 4-jodbe'nzonitrilo (1,72 g, 7,5 mmol). Gautas mišinys maišomas azoto atmosferoje šildant, leidžiama atšalti, pridedama etilacetato (100 ml), ir mišinys nufiltruojamas j dalinamąjį piltuvą. Perplovus iš eilės vandeniniu HCI (50 ml; 0,1 N), distiliuotu H₂0 (3 x 50 ml), išdžiovinus Na₂S0_4l nufiltravus ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas nevalytas produktas. Po ekspres-chromatografijos per silikagelį (lengvojo petrolio eterio ir etilacetato gradientas) gaunamas išvalytas produktas.

[0136] Tret-butiloksikarboniljodalanin-N.O-dimetilamido (2,68 g, 7,5 mmol) (J. Org. Chem., 1992, 5Z, 3397-3404) tirpalas sausame benzene (30 ml) ir sausame N,N-dimetilacetamide (2,0 ml) supilamas j sausu azotu prapučiamą apvaliadugnę kolbą, kurioje yra cinko-vario lydinio (0,90 g). Mišinys veikiamas ultragarsu, leidžiant azotą tol, kol nelieka pradinės medžiagos (pagal TLC). Pridedama bis(tri-o-tolilfosfin)paladžio dichlorido (0,35 g, 0,40 mmol), o po to 3-jodbenzonitrilo (1,72 g, 7,5 mmol). Gautas mišinys maišomas azoto atmosferoje šildant, leidžiama atšalti, pridedama etilacetato (100 ml), ir mišinys nufiltruojamas j dalinamąjį piltuvą. Perplovus iš eilės vandeniniu HCI (50 ml; 0,1 N), distiliuotu H₂0 (3 x 50 ml), išdžiovinus Na₂S04, nufiltravus ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas nevalytas produktas. Po ekspres-chromatografijos per silikagelį (lengvojo petrolio eterio ir etilacetato gradientas) gaunamas išvalytas produktas.

[0137] Tret-butiloksikarboniljodalanin-N.O-dimetilamido (2,68 g, 7,5 mmol) (J. Org. Chem., 1992, 57, 3397-3404) tirpalas sausame benzene (30 ml) ir sausame N,N-dimetilacetamide (2,0 ml) supilamas j sausu azotu prapučiamą apvaliadugnę kolbą, kurioje yra cinko-vario lydinio (0,90 g). Mišinys veikiamas ultragarsu, leidžiant azotą tol, kol nelieka pradinės medžiagos (pagal TLC). Pridedama bis(tri-o-tolilfosfin)paladžio dichlorido (0,35 g, 0,40 mmol), o po to 2-jodbenzonitrilo (1,72 g, 7,5 mmol). Gautas mišinys maišomas azoto atmosferoje šildant, leidžiama atšalti, pridedama etilacetato (100 ml), ir mišinys nufiltruojamas j dalinamąjj piltuvą. Perplovus iš eilės vandeniniu HCI (50 ml; 0,1 N), distiliuotu H₂O (3 x 50 ml), išdžiovinus Na₂S0₄, nufiltravus ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas nevalytas produktas. Po ekspres-chromatografijos per silikagelį (lengvojo petrolio eterio ir etilacetato gradientas) gaunamas išvalytas produktas.

[0138] | tret-butiloksikarbonil-meta-cianofenilalanin-N.O-dimetilamido (1,33 g, 4,0 mmol) tirpalą sausame etanolyje (20 ml) pridedama hidroksilamino hidrochlorido (0,416 g, 6,0 mmol) ir diizopropiletilamino (1,02 ml, 6,0 mmol). Mišinys virinamas su grjžtamu šaldytuvu, o po to atšaldomas. Nuosėdos

[0139] ui tooo nufiltruojamos, plaunamos šaltu etanoliu, diizopropileteriu, tirpalas džiovinamas MgS0₄, koncentruojamas sumažintame slėgyje ir naudojamas tolesnėje stadijoje. Pusiau kieta medžiaga suspenduojama acto rūgšties (20 ml) ir sauso etanolio (40 ml) mišinyje šildant. Po to pridedama Pd/C katalizatoriaus (0,30 g, 10 % Pd), ir šildant per mišinį burbuliukais leidžiamas vandenilis. Hidrinimas tęsiamas tol, kol nebegalima pastebėti pradinės medžiagos pagal TLC. Katalizatorius nufiltruojamas, tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje (50 ml), pridedama HCI (50 ml, 1N), ir mišinys vėl koncentruojamas iki 50 ml. Šis tirpalas šaldomas per naktj, ir gaunamas norimas junginys.

[0140] J tret-butiloksikarbonil-orto-cianofenilalanin-N.O-dimetilamido (1,33 g, 4,0 mmol) tirpalą sausame etanolyje (20 ml) pridedama hidroksilamino hidrochlorido (0,416 g, 6,0 mmol) ir diizopropiletilamino (1,02 ml, 6,0 mmol). Mišinys virinamas su grjžtamu šaldytuvu, o po to atšaldomas. Nuosėdos nufiltruojamos, plaunamos šaltu etanoliu, diizopropileteriu, tirpalas džiovinamas MgS0₄, koncentruojamas sumažintame slėgyje ir naudojamas tolesnėje stadijoje. Pusiau kieta medžiaga suspenduojama acto rūgšties (20' ml) ir sauso etanolio (40 ml) mišinyje šildant. Po to pridedama Pd/C katalizatoriaus (0,30 g, 10 % Pd), ir šildant per mišinj burbuliukais leidžiamas vandenilis. Hidrinimas tęsiamas tol, kol nebegalima pastebėti pradinės medžiagos pagal TLC.. Katalizatorius nufiltruojamas, tirpalas_' koncentruojamas sumažintame slėgyje (50 ml), pridedama HCI (50 ml, 1N), ir mišinys vėl koncentruojamas iki 50 ml. Šis tirpalas šaldomas per naktj, ir gaunamas norimas junginys.

[0141] J tiazolo (1,28 g, 15,0 mmol) tirpalą bevandeniame THF (30 ml) sulašinama n-BuLi (1,6 m/heksane, 8,9 ml, 13,9 mmol) -78 °C temperatūroje, ir tirpalas maišomas. Tada sulašinamas tret-butiloksikarbonil-para-amidinfenilalanin-N.O-dimetilamido (1,15 g, 3,3 mmol) tirpalas THF (15 ml), ir gautas mišinys maišomas. Reakcija sustabdoma sočiu vandeniniu amonio chlorido tirpalu. Mišinys praskiedžiamas etilacetatu (150 ml), organinis sluoksnis plaunamas sočiu vandeniniu amonio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), sočiu natrio chlorido tirpalu (50 ml), džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir koncentruojamas sumažintame slėgyje. Negryna medžiaga valoma, chromatografuojant per silikagelj (etilacetatas/heksanas), ir nugarinant sumažintame slėgyje.

[0142]

[0143] Tret-butiloksikarbonil-para-cianfenilalanin-N.O-dimetilamidas (1,33 g, 4,0 mmol) ištirpinamas etanolyje, prisotintame amoniaku (30 ml), ir pridedama akyto Renėjaus nikelio (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ (slėgis 40 psi) atmosferoje kambario temperatūroje. Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama skaidri liekana. Ši liekana ištirpinama etilacetate (250 ml), plaunama 1N NaOH (2 x 50 ml) ir koncentruotu natrio chlorido tirpalu (2 x 50 ml). Tirpalas džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentruojamas sumažintame slėgyje.

[0144] Tret-butiloksikarbonil-meta-cianfenilalanin-N.O-dimetilamidas (1,33 g, 4,0 mmol) ištirpinamas etanolyje, prisotintame amoniaku (30 ml), ir pridedama akyto Renėjaus nikelio (100 mg). Tirpalas purtomas hfe (slėgis 40 psi) atmosferoje kambario temperatūroje. Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama skaidri liekana. Ši liekana ištirpinama etilacetate (250 ml), plaunama 1N NaOH (2 x 50 ml) ir koncentruotu natrio chlorido tirpalu (2 x 50 ml). Tirpalas džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentruojamas sumažintame slėgyje.

[0145] Tret-butiloksikarbonil-orto-cianfenilalanin-N.O-dimetilamidas (1,33 g, 4,0 mmol) ištirpinamas etanolyje, prisotintame amoniaku (30 ml), ir pridedama akyto Renėjaus nikelio (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ (slėgis 40 psi) atmosferoje kambario temperatūroje. Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama skaidri liekana. Ši liekana ištirpinama etilacetate (250 ml), plaunama 1N NaOH (2 x 50 ml) ir koncentruotu natrio chlorido tirpalu (2 x 50 ml). Tirpalas džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentruojamas sumažintame slėgyje.

[0146] _I_ I tuuo Tret-butiloksikarbonil-para-aminometilfenilalanin-N.O-dimetilamidas (1,00 g, 3,1 mmol) ištirpinamas sausame THF (10 ml) azoto atmosferoje, maišant. Tirpalas atšaldomas ir pridedama N,N'-bis(benziloksikarbonil)-S-metilizotiokarbamido (1,14 g, 3,2 mmol) ir HgCI₂ (0,95 g, 3,5 mmol). Tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje, likusi liekana suspenduojama etilacetate (200 ml) ir nufiltruojama per ceolitą. Filtratas koncentruojamas sumažintame slėgyje. Po ekspres-chromatografijos per silikagelj (heksano/etilacetato gradientas) gaunamas grynas junginys.

[0147] Tret-butiloksikarbonil-meta-aminometilfenilalanin-N.O-dimetilamidas (1,00 g, 3,1 mmol) ištirpinamas sausame THF (10 ml) azoto atmosferoje, maišant. Tirpalas atšaldomas ir pridedama N,N'-bis(benziloksikarbonil)-S-metilizotiokarbamido (1,14 g, 3,2 mmol) ir HgCI₂ (0,95 g, 3,5 mmol). Tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje, likusi liekana suspenduojama etilacetate (200 ml) ir nufiltruojama per ceolitą. Filtratas koncentruojamas sumažintame slėgyje. Po ekspres-chromatografijos per silikagelj (heksano/etilacetato gradientas) gaunamas grynas junginys.

[0148] Tret-butiloksikarbonil-orto-aminometilfenilalanin-N.O-dimetilamidas (1,00 g, 3,1 mmol) ištirpinamas sausame THF (10 ml) azoto atmosferoje, maišant. Tirpalas atšaldomas ir pridedama N,N'-bis(benziloksikarbonil)-S-metilizotiokarbamido (1,14 g, 3,2 mmol) ir HgCI₂ (0,95 g, 3,5 mmol). Tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje, likusi liekana suspenduojama fa- ■ "TVWW I

[0149] etilacetate (200 ml) ir nufiltruojama per ceolitą. Filtratas koncentruojamas sumažintame slėgyje. Po ekspres-chromatografijos per silikagelį

[0150]

[0151] J tiazolo (1,28 g, 15,0 mmol) tirpalą bevandeniame THF (30 ml) -78 °C temperatūroje sulašinamas n-BuLi (1,6 M/heksane, 8,9 ml, 13,9 mmol), ir tirpalas maišomas. Tada sulašinamas blokuotos aminorūgšties (1,36 g, 3,3 mmol) tirpalas THF (15 ml), ir gautas mišinys maišomas. Reakcija sustabdoma prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu. Mišinys praskiedžiamas etilacetatu (150 ml), organinis sluoksnis plaunamas prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), prisotintu natrio chlorido tirpalu (50 ml), džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir koncentruojamas sumažintame slėgyje. Negryna medžiaga valoma, chromatografuojant per silikagelį (etilacetatas/heksanas) ir sukoncentruojant sumažintame slėgyje.

[0152] . j tiazolo (1,28 g, 15,0 mmol) tirpalą bevandeniame THF (30 ml) -78 °C temperatūroje sulašinamas n-BuLi (1,6 M/heksane, 8,9 ml, 13,9 mmol), ir tirpalas maišomas, Tada sulašinamas blokuotos aminorūgšties (1,36 g, 3,3 mmol) tirpalas THF (15 ml), ir gautas mišinys maišomas. Reakcija sustabdoma prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu. Mišinys praskiedžiamas etilacetatu (150 ml), organinis sluoksnis plaunamas prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), prisotintu natrio chlorido

[0153] ■ www tirpalu (50 ml), džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir koncentruojamas sumažintame slėgyje. Negryna medžiaga valoma, chromatografuojant per silikagelj (etilacetatas/heksanas) ir sukoncentruojant sumažintame slėgyje.

[0154] Tret-butiloksikarboniljodalanin-N.O-dimetilamido (2,68 g, 7,5 mmol) (J.

[0155] Org. Chem., 1992, 57, 3397-3404) tirpalas sausame benzene (30 ml) ir sausame N,N-dimetilacetamide (2,0 ml) supilamas j sausu azotu prapučiamą

[0156] apvaliadugnę kolbą, kurioje yra cinko-vario lydinio (0,90 g). Mišinys veikiamas ultragarsu, leidžiant azotą tol, kol nelieka pradinės medžiagos (pagal TLC). Pridedama bis(tri-o-tolilfosfin)paladžio dichlorido (0,35 g, 0,40 mmol), o po to 2-amino-5-brompiridino (1,72 g, 7,5 mmol). Gautas mišinys maišomas azoto atmosferoje šildant, leidžiama atšalti, pridedama etilacetato (100 ml), ir mišinys nufiltruojamas j dalinamąjj piltuvą. Perplovus iš eilės

[0157] _m— m m vandeniniu HCI (50 ml; 0,1 N), distiliuotu H₂0 (3 x 50 ml). išdžiovinus Na₂S0₄, nufiltravus ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas nevalytas produktas. Po ekspres-chromatografijos per silikagelį (lengvojo petrolio eterio ir etilacetato gradientas) gaunamas išvalytas produktas.

[0158] J tiazolo (1,28 g, 15,0 mmol) tirpalą bevandeniame THF (30 ml) -78 °C temperatūroje sulašinamas n-BuLi (1,6 M/heksane, 8,9 ml, 13,9 mmol), ir tirpalas maišomas. Tada sulašinamas aminorūgšties N,0-dimetilamido (1,07 g, 3,3 mmol) tirpalas bevandeniame THF (15 ml), ir gautas mišinys maišomas. Reakcija sustabdoma prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu. Mišinys praskiedžiamas etilacetatu (150 ml), organinis sluoksnis plaunamas prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), prisotintu natrio chlorido tirpalu (50 ml), džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir koncentruojamas sumažintame slėgyje. Negryna medžiaga valoma, chromatografuojant per silikagelj (etilacetatas/heksanas), ir koncentruojama sumažintame slėgyje.

[0159] Tret-butiloksikarboniljodalanin-N.O_-dimetilamido (2,68 g, 7,5 mmol) (J. Org. Chem., 1992, 57, 3397-3404) tirpalas sausame benzene (30 ml) ir sausame N,N-dimetilacetamide (2,0 ml) supilamas j sausu azotu prapučiamą apvaliadugnę kolbą, kurioje yra cinko-vario lydinio (0,90 g). Mišinys veikiamas ultragarsu, leidžiant azotą tol, kol nelieka pradinės medžiagos (pagal TLC). Pridedama bis(tri-o-tolilfosfin)paladžio dichlorido (0,35 g, 0,40 mmol), o po to 2-ciano-5-brompiridino (1,72 g, 7,5 mmol). Gautas mišinys maišomas azoto atmosferoje šildant, leidžiama atšalti, pridedama etilacetato

[0160] L. i tguo

[0161] (100 ml), ir mišinys nufiltruojamas į dalinamąjj piltuvą. Perplovus iš eilės vandeniniu HCI (50 ml; 0,1 N), distiliuotu H₂0 (3 x 50 ml), išdžiovinus Na₂S0_4l nufiltravus ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas nevalytas produktas. Po ekspres-chromatografijos per silikagelį (lengvojo petrolio eterio ir etilacetato gradientas) gaunamas išvalytas produktas.

[0162]

[0163] I tret-butiloksikarbonil-(4-ciano)3-piridilalanin-N,0-dimetilamido (1,34 g, 4,0 mmol) tirpalą sausame etanolyje (20 ml) pridedama N,0-hidroksilamino hidrochlorido (0,416 g, 6,0 mmol) ir diizopropiletilamino (1,02 ml, 6,0 mmol). Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu, o po to atšaldomas. Nuosėdos nufiltruojamos, plaunamos šaltu etanoliu, diizopropileteriu, tirpalas džiovinamas MgS0₄, koncentruojamas sumažintame slėgyje, ir gauta medžiaga naudojama tolesnėje stadijoje. Pusiau kieta medžiaga suspenduojama acto rūgšties (20 ml) ir sauso etanolio (40 ml) mišinyje šildant. Po to pridedama Pd/C katalizatoriaus (0,30 g, 10 % Pd), ir šildant per mišinj burbuliukais leidžiamas vandenilis. Hidrinimas tęsiamas tol, kol nebegalima pastebėti pradinės medžiagos pagal TLC. Katalizatorius nufiltruojamas, tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje (50 ml), pridedama HCI (50 ml, 1N), ir mišinys vėl koncentruojamas iki 50 ml. Šis tirpalas šaldomas per naktį, ir gaunamas norimas junginys.

[0164] J tiazolo (1,28 g, 15,0 mmol) tirpalą bevandeniame THF (30 ml) -78 °C temperatūroje sulašinamas n-BuLi (1,6 M/heksane, 8,9 ml, 13,9 mmol), ir tirpalas maišomas. Tada sulašinamas aminorūgšties N,0-dimetilamido (1,16 g, 3,3 mmol) tirpalas bevandeniame THF (15 ml), ir gautas mišinys maišomas. Reakcija sustabdoma prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu. Mišinys praskiedžiamas etilacetatu (150 ml), organinis sluoksnis plaunamas prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), prisotintu natrio chlorido tirpalu (50 ml), džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir koncentruojamas sumažintame slėgyje. Negryna medžiaga valoma, chromatografuojant per silikagelj (etilacetatas/heksanas), ir koncentruojama sumažintame slėgyje.

[0165] Tret-butiloksikarbonil-3-(4-piridil)alanin-N,0-dimetilamidas (4,50 g, 14,4 mmol) ištirpinamas acto rūgštyje (100 ml) ir pridedama Pt0₂ (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ atmosferoje, kol sustoja dujų sugėrimas. Nufiltravus tirpalą per ceolitą ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas tret-butiloksikarbonil-3-(4-piperidil)alanin-N,0-dimetilamidas. Liekana ištirpinama etilacetate (250 ml), plaunama 1N NaOH (2 x 50 ml), koncentruotu natrio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), džiovinama MgS0₄, nufiltruojama ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama norima medžiaga.

[0166] Tret-butiloksikarbonil-3-(3-piridil)alanin-N,0-dimetilamidas (4,50 g, 14,4 mmol) ištirpinamas acto rūgštyje (100 ml) ir pridedama Pt0₂ (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ atmosferoje, kol sustoja dujų sugėrimas. Nufiltravus tirpalą per ceolitą ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas tret-butiloksikarbonil-3-(3-piperidil)alanin-N,0-dimetilamidas. Liekana ištirpinama etilacetate (250 ml), plaunama 1N NaOH (2 x 50 ml), koncentruotu natrio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), džiovinama MgS0_4l nufiltruojama ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama norima medžiaga.

[0167] Tret-butiloksikarbonil-3-(2-piridil)alanin-N,0-dimetilamidas (4,50 g, 14,4 mmol) ištirpinamas acto rūgštyje (100 ml) ir pridedama Pt0₂ (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ atmosferoje, kol sustoja dujų sugėrimas. Nufiltravus tirpalą per ceolitą ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunamas tret-butiloksikarbonil-3-(2-piperidil)alanin-N,0-dimetilamidas. Liekana ištirpinama etilacetate (250 ml), plaunama 1N NaOH (2 x 50 ml), koncentruotu natrio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), džiovinama MgS0₄, nufiltruojama ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama norima medžiaga.

[0168] Tret-butiloksikarbonil-3-(4-piperidil)alanin-N,0-dimetilamidas (1,00 g, 3,2 mmęl) ištirpinamas sausame THF (10 ml) azoto atmosferoje, maišant. Tirpalas atšaldomas ir pridedamą N,N'-bis(benziloksikarbonil)-S-metilizotiokarbamido (1,14 g, 3,2 mmol) ir HgCI₂ (0,95 g, 3,5 mmol). Tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje, likusi liekana suspenduojama 'etilacetate (200 ml) ir nufiltruojama per-ceolitą. Filtratas koncentruojamas sumažintame slėgyje. Po ekspres-chromatografijos per silikagelj (heksano/etilacetato gradientas) gaunamas norimas junginys.

[0169] Tret-butiloksikarbonil-3-(3-piperidil)alanin-N,0-dimetilamidas (1,00 g, 3,2 mmol) ištirpinamas sausame THF (10 mI) azoto atmosferoje, maišant. Tirpalas atšaldomas ir pridedama N,N'-bis(benziloksikarbonil)-S-metilizotiokarbamido (1,14 g, 3,2 mmol) ir HgCI₂ (0,95 g, 3,5 mmol). Tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje, likusi liekana suspenduojama etilacetate (200 ml) ir nufiltruojama per ceolitą. Filtratas koncentruojamas sumažintame slėgyje. Po ekspres-chromatografijos per silikagelj (heksano/etilacetato gradientas) gaunamas norimas junginys.

[0170] Tret-butiloksikarbonil-3-(2-piperidil)alanin-N,0-dimetilamidas (1,00 g, 3,2 mmol) ištirpinamas sausame THF (10 ml) azoto atmosferoje, maišant. Tirpalas atšaldomas ir pridedama N,N'-bis(benziloksikarbonil)-S-metilizotiokarbamido (1,14 g, 3,2 mmol) ir HgCI2 (0,95 g, 3,5 mmol). Tirpalas koncentruojamas sumažintame slėgyje, likusi liekana suspenduojama etilacetate (200 ml) ir nufiltruojama per ceolitą. Filtratas koncentruojamas sumažintame slėgyje. Po ekspres-chromatografijos per silikagelj (heksano/etilacetato gradientas) gaunamas norimas junginys.

[0171]

[0172] j tiazolo (1,23 g, 14,4 mmol) tirpalą bevandeniame THF -78 °C temperatūroje sulašinamas n-BuLi (1,6 M/heksane, 8,4 ml, 13,4 mmol), ir tirpalas maišomas. Tada sulašinamas guanidilinto 2-piperidilalanino darinio

[0173] (2,00 g, 3,2 mmol) tirpalas bevandeniame THF (15 ml), ir gautas mišinys maišomas. Reakcija sustabdoma prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu. Mišinys praskiedžiamas etilacetatu (150 ml), organinis sluoksnis plaunamas prisotintu vandeniniu amonio chlorido tirpalu (2 x 50 ml), prisotintu natrio chlorido tirpalu (50 ml), džiovinamas MgS04, nufiltruojamas ir koncentruojamas sumažintame slėgyje.

[0174] Tret-butiloksikarbonil-para-nitrofenilalanin-N.O-dimetilamidas (13,88 g, 39,3 mmol) ištirpinamas acto rūgštyje (100 ml) ir pridedama Pt0₂ (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ atmosferoje, kol sustoja dujų sugėrimas, Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, koncentuojamas sumažintame slėgyje, gauta medžiaga ištirpinama H₂O (150 ml) ir liofilizuojama. Pusiau kieta medžiaga ištirpinama etilacetate (350ml), plaunama 1N NaOH (3 x 50 ml) ir koncentruotu natrio chlorido tirpalu (3 x 50 ml). Tirpalas džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama norimas junginys.

[0175] Tret-butiloksikarbonil-meta-nitrofenilalanin-N,0-dimetilamidas-(13,88 g, 39,3 mmol) ištirpinamas acto rūgštyje (100 ml) ir pridedama Pt0₂ (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ atmosferoje, kol sustoja dujų sugėrimas. Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, koncentuojamas sumažintame slėgyje, gauta medžiaga ištirpinama H₂0 (150 ml) ir liofilizuojama. Pusiau kieta medžiaga ištirpinama etilacetate (350 ml), plaunama 1N NaOH (3 x 50 ml) ir koncentruotu natrio chlorido tirpalu (3 x 50 ml). Tirpalas džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama norimas junginys.

[0176] Tret-butiloksikarbonil-orto-nitrofenilalanin-N.O-dimetilamidas (13,88 g, 39,3 mmol) ištirpinamas acto rūgštyje (100 ml) ir pridedama Pt0₂ (100 mg). Tirpalas purtomas H₂ atmosferoje, kol sustoja dujų sugėrimas. Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, koncentuojamas sumažintame slėgyje, gauta medžiaga ištirpinama H₂0 (150 ml) ir liofilizuojama. Pusiau kieta medžiaga ištirpinama etilacetate (350 ml), plaunama 1N NaOH (3 x 50 ml) ir koncentruotu natrio chlorido tirpalu (3 x 50 ml). Tirpalas džiovinamas MgS0₄, nufiltruojamas ir sukoncentravus sumažintame slėgyje, gaunama norimas junginys.

[0177]

[0178] Tarpinių junginių sintezė

[0179]

[0180] (4S,5R)-3-(1-okso-3-fenilpropil)-4-(fenil)-5-(metil)-2-oksazolidonas (2). | 10,0 g (1 ekv., 56,4 mmol) (4S,5R)-4-fenil-5-metil-2-oksazolidono (1) tirpalą 250 ml sauso THF, maišomą -78 °C temperatūroje argono atmosferoje, sulašinamas n-butillitis (1,6M heksane, 1,1 ekv., 38,8 ml). Pamaišius 30 min.,

[0181] ■— ■ _TVVU I

[0182] per 10 minučių sulašinama 8,4 ml (1,0 ekv., 56,4 mmol) hidrocinamoilchlorido. Gautas mišinys sušildomas iki 0 °C, maišomas dar vieną valandą ir skaldomas sočiu amonio chlorido tirpalu. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o gauta balta kieta medžiaga ištirpinama etilacetate ir ddhfeO. Atskiriama vandeninė fazė ir ekstrahuojama dar dviem etilacetato porcijomis. Ekstraktai sumaišomi, plaunami sočiu natrio chlorido tirpalu, džiovinami natrio sulfatu, ir vakuume nugarinus tirpiklį, gaunama kieta balta kristalinė medžiaga (2). Išeiga 91 %.

[0183] Lyd. temp.: 95-96,6; [a]_d =-3₅,₈ (c =1, CH₂CI₂); [a]ū =-26,6 (c =1,018 CH2CI2);

[0184] ¹H-BMR (CDCI₃) d 0,89 (d, 3H, Cjjs, J = 6,6 Hz), 3,00-3,05 (m, 2H), 3,26-3,34 (m, 2H) 4,73-4,78 (m, 1H), 5,64 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 7,22-7,46 (m, 10H).

[0185]

[0186] 5,0 g (1,00 ekv., 16,2 mmol) (2) tirpalas 100 ml sauso THF atšaldomas iki -78 °C. Enolizacija vykdoma 17,8 ml (1,1 ekv., 17,8 mmol) ličio bis-trimetilsililamido, kuris sulašinamas švirkštu. Tirpalas pamaišomas 30 minučių, po to pridedama 4,45 ml (3,0 ekv., 48,5 mmol) alilo jodido, ir mišinys sušildomas iki -15 °C. Po vienos valandos, reakcija sustabdoma sočiu amonio chlorido tirpalu ir ekstrahuojama etilacetatu (3x). Organinė fazė plaunama natrio metabisulfitu, džiovinama natrio sulfatu, ir vakuume nugarinus tirpiklj, gaunama bespalvė alyva. Valoma ekspres-chromatografijos būdu per silikagelj, naudojant laipsnišką gradientą (15:1, 12:1, 10:1), ir gaunama bespalvė alyva (95 %).

[0187] [a]_D = 47,5 (c =3,12, CH₂CI₂);

[0188] ¹H-BMR (CDCI₃) d 0,82 (d, 3H, CH₃, J = 6,6 Hz), 2,31-2,40 (m, 1H, RCH=CHCH₂), 2,49-2,57 (m, 1H, RCH = CHCH2), 2,84-3,00 (m, 2H, Ph-CHg), 4,32-4,37 (m, 1H, CH-(N)CO), 4,53-4,58 (m, 1H, CH₃-CH-), 5,03-5,13 (m, 2H,

[0189] ■— I TUUU

[0190] ABX, CH=CH₂), 5,21 (d, 1H, Ph-CH, J = 7,1 Hz), 5,81-5,89 (m, 1H, CH=CH₂), 7,20-7,42 (m, 10H, ArH);

[0191] ¹³C-BMR (CDCI s) d 14,4, 36,2, 38,2, 43,9, 54,7, 78,7, 117,1, 125,4,

[0192] 126,3, 128,2,128,5, 129,0, 133,1, 134,8, 138,9, 152,4, 174,9.

[0193]

[0194] Alil-junginio ( 3) mėginys (4,75 g, 13,6 mmol) THF (100 ml) veikiamas 13,6 ml (1,0 ekv., 13,6 mmol) 1,0M boro-tetrahidrofurano komplekso, 0 °C temperatūroje maišant 2 valandas. Nugarinamas tirpiklis ir švirkštu suleidžiamas chloroformas (100 ml). Bororganinio junginio oksidacija jvykdoma, pridedant 4,7 g (2,0 ekv., 27,8 mmol) 3-chlorperoksibenzoinės rūgšties 0 °C temperatūroje, sušildant iki kambario temperatūros ir maišant dar vieną valandą. Organinė fazė plaunama 5 % Na₂C0₃, ddH₂0 ir džiovinama natrio sulfatu. Dėl alkoholio nestabilumo greitai chromatografuojama per kolonėlę, norint pašalinti papildomas polines ir nepolines medžiagas, kurios atsiranda iš 3-chlorperoksibenzoinės rūgšties. Gaunamas alkoholis ( 4), kurio išeiga yra 65 %.

[0195] [a]_D = 39,3 (c =1,038, CH₂CI₂);

[0196] ¹H-BMR (CDCIs) d 1,07 (d, 3H, CH_a-CH, J = 6,5 Hz), 1,81-1,93 (m, 3H, CH_a-CH-H), 2,10-2,19 (m, 1H, CH₂-CH-H), 3,10-3,17 (m, 2H, Ph-CjH_s), 3,87-3,90 (m, 2H, Cįįj-OH), 4,43-4,49 (m, 1H, Cjd-CO), 4,70-4,75 (m, 1H, CH_s-CH), 5,36 (d, 1H, Ph-Cįį J = 7,1 Hz), 7,41-7,63 (m, 10H, ArH).

[0197]

[0198] Į alkoholio ( 4) (1,0 g, 2,7 mmol) tirpalą dichlormetane (27 ml), pridedama 876 mg (1,5 ekv,, 4,1 mmol) piridinio chlorchromato ir 1,0 g 4 angstremų molekulinių tinklelių; mišinio spalva pasikeičia iš ryškiai oranžinės j

[0199] ha I TWVW L

[0200] juodą. Reakcija kontroliuojama TLC būdu, ir po 30 min., jeigu dar yra pradinės medžiagos, vėl pridedama molekulinių tinklelių. Tirpalas nufiltruojamas per ceolitą, ir nugarinamas tirpiklis. Liekana ištirpinama etilacetate ir plaunama sočiu natrio chlorido tirpalu. Jeigu organinėje fazėje vis dar laikosi oranžinė spalva, dar kartą filtruojama per ceolito sluoksnj. Kiekybine išeiga gaunamas aldehidas (5), kuris yra skaidri bespalvė alyva.

[0201] ¹H-BMR (CDCI_s) d 0,84 (d, 3H, CJHą-CH, J = 6,6 Hz), 1,87-1,94 (m, 1H,

[0202] CH₂-CH(H)-CHO), 2,04-2,13 (m, 1H, CH₂-CH(H)-CHO), 2,45-2,50 (m, 2H, Ph-CH₂), 2,79-2,85 (dd, 1H, Ct_h-CHO, J=13,3 & J=6,6), 2,92-2,99 (dd, 1H, CĮįrCHO, J=₁3,2 & J=₈.₈). 4,19-4,22 (m, 1H, CH-CO), 4,46-4,51 (m, 1H, CH₃-CH), 5,13-5,25 (m, 1H, Ph-CH), 7,20-7,39 (m, 10H, ArH), 9,69 (s, 1H,

[0203] CHO);

[0204] ¹³C-BMR (CDCIs) d 14,2, 23,8. 39,0, 41,2, 43,8, 54,9, 78,6, 125,3, 126,4, 128,2, 128,4, 128,5, 128,9, 132,8, 138,4, 152,4, 174,9, 201,1.

[0205]

[0206] Aldehidas (5) (2,6 g, 7,10 mmol) ištirpinamas benzene (70 ml) ir pridedamas katalitinis kiekis p-toluensulforūgšties, o po to 1,58 g (1,2 ekv., _'8,52 mmol) L-cisteino etilo esterio ir 4 angstremų molekulinių tinklelių. Reakcijos mišinys maišomas per naktį kambario temperatūroje, o po to vakuume nugarinamas tirpiklis. Liekana ištirpinama chloroforme, plaunama sočiu natrio chlorido tirpalu, bidistiliuotu vandeniu ir džiovinama natrio sulfatu. Vakuume nugarinus tirpiklj, gaunama lipni kieta medžiaga (6).

[0207]

[0208] J pradinę medžiagą (7) (240 mg, 0,76 mmol), ištirpintą 10 ml dioksano, pridedama Li0H.H₂0 (48 mg, 1,12 mmol) 10 ml vandens. Po 1 vai. TLC (1:1 heksanas:EtAc) nerodo pradinės medžiagos. Reakcija stabdoma 10 % citrinos rūgštimi, po to du kartus ekstrahuojama dichlormetanu. Išdžiovinus ir nugarinus sumaišytus organinius sluoksnius, gaunama 354 mg negryno produkto! Šis produktas ištirpinamas dichlormetane ir nusodinamas, pridedant heksano perteklių. Produktas nufiltruojamas, ir gaunama 200 mg (0,68 mmol, išeiga 90 %) nelabai baltos medžiagos (8), kuris yra 6S-benzilheksahidro-5-okso-5H-tiazolo[3,2-a]piridin-3R-karboksirūgštis.

[0209] ¹H-BMR (CD₃OD) d 1,71-1,82 (m, 3H), 2,12-2,17 (m, 1H), 2,67 (dd, 1 H, J=14 ir 11 Hz), 2,77-2,81 (m, 1H), 3,30-3,40 (m, 3H), 4,81 (dd, 1H, J = 8,5 ir 4,9 Hz), 5,16 (t, 1H, J=₇,₅ Hz), 7,18-7,31 (m, 5H).

[0210]

[0211] Oksalilchloridas (9) (25 g, 0,197 mol) atšaldomas iki 0 °C ir pridedama cikloheksanpropiono rūgšties (20 ml, 0,14 mol). Maišoma per naktj. Gautas mišinys nudistiliuojamas ir gaunamas bespalvis skystis (10) - cikloheksilpropiono rūgšties chloridas (išeiga 84 %).

[0212] Chiralinė pagalbinė medžiaga ( 11) (13,6 g, 76,7 mmol, 1 ekv.) ištirpinama sausame THF ir atšaldoma iki -78 °C. Tada pridedama n-BuLi (52,8 ml, 84,4 mmol, 1,2 ekv) ir paliekama 30 min. (tamsiai oranžinis tirpalas). Po to pridedama rūgšties chlorido ( 10) (13,4 g, 76,6 mmol, 1 ekv.) ir maišoma per naktj. Apdorojama skaldant sočiu NH₄CI, ekstrahuojant etilacetatu, plaunant ekstraktus vandeniu ir sočiu natrio chlorido tirpalu, džiovinant natrio sulfatu ir sukoncentruojant. Produkto valymui panaudojama greitai pratekanti, sausai užpildyta kolonėlė (6:1 heksanas:etilacetatas). Gaunama balta kieta medžiaga (12), kuri perkristalinama iš eterio ir heksano. Gaunamas norimas junginys, kurio išeiga 78 %.

[0213] Lyd. temp.: 90,5-91,5 °C; [a]_D = -20,1 (c=1, EtOH);

[0214] ¹H-BMR (CDCI_s) d 0,86-1,10 (m, 5H), 1,18-1,30 (m, 4H,), 1,54-1,75 (m, 7H), 2,86-2.97 (m, 2H), 4,70-4,76 (m, 1H), 5,65 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,28-7,42 (m, 5H).

[0215]

[0216] Pradinė medžiaga ( 12) (9,13 g, 29 mmol, 1 ekv.) ištirpinama sausame THF ir atšaldoma iki -78 °C, po to per 40 min. sulašinama LiHMDS (31,9 ml, 31,9 mmol, 1,1 ekv.). Po 30 min., lėtai pridedama alilo bromido (7,5 ml, 86,9 mmol, 3 ekv.) per 10 minučių. Mišinys paliekamas sušilti per naktį. Apdorojimas apima reakcijos sustabdymą sočiu amonio chlorido tirpalu, ekstrakciją etilacetatu, plovimą 10 % natrio tiosulfatu, spalvos pašalinimą aktyvuota anglimi, džiovinimą natrio sulfatu ir nugarinimą vakuume. Gaunamas geltonos alyvos pavidalo produktas ( 13), kurio išeiga 96 %.

[0217] [a]D = +9,5 (c= 1, EtOH);

[0218] ¹H-BMR (CDCI_s) d 0,92-1,10 (m, 5H), 1,10-1,39 (m, 5H,), 1,63-1,75 (m, 6H), 2,27-2,42 (m, 2H), 4,01-4,14 (m, 1H), 4,76-4,85 (m, 1H), 5,00-5,07 (m, 2H), 5,65 (d, 1H, J = 7 Hz), 5,64-5,88 (m, 1H), 7,27-7,46 (m, 5H).

[0219]

[0220] 2-Metil-2-butenas sulašinamas j bordimetilsulfido kompleksą -12 °C temperatūroje. Reakcijos mišinys išlaikomas šioje temperatūroje 15 minučių, po to sušildomas iki 0 °C ir maišoma 2 valandas. Tada j pradinės medžiagos ( 13) tirpalą THF, naudojant adatą su dviem galais, 0 °C temperatūroje pridedamas disiamilboranas. Mišinys pamaišomas 2 valandas, po to nugarinami tirpikliai ir liekana ištirpinama dichlormetane. Ši liekana atsargiai sudedama j piridinio chlorchromato suspensiją dichlormetane, esančią kolboje su prijungtu grjžtamu šaldytuvu. Kai atslūgsta pradinė egzoterminė reakcija, mišinys virinamas su grjžtamu šaldytuvu 50 °C temperatūroje 1 valandą. Tamsiai rudas skystis ištirpinamas etilacetate ir nufiltruojamas per-FlorisiTą. Juoda PCC liekana ekstrahuojama etilacetatu ir vėl filtruojama per tą patj Florisil'o sluoksnį. Nugarinus filtratus, gaunama geltonas lipnus produktas ( 14), kurio išeiga 78 %.

[0221] [a]D = -17,8 (c= 1,245, EtOH);

[0222] _L._I tOOO ¹H-BMR (CDCI₃) d 0,89-1,18 (m, 5H). 1,20-1,47 (m, 8H), 1,60-1,74 (m, 6H), 1,83-2,00 (m, 1H), 2,48-2.53 (m, 2H), 3,90-4,10 (m, 1H), 4,12-4,16 (m, 1 H), 4,76-4,80 (m, 1H), 5,67 (d, 1H, J = 7 Hz), 7,27-7,46 (m, 5H), 9,77 (s, 1H).

[0223]

[0224] Pradinė medžiaga ( 15) (1,97, 3,9 mmol, 1 ekv.) ištirpinama 20 ml sauso dichlormetano ir atšaldoma iki 0 °C. Sulašinamas trimetilaliuminis (5,9 ml, 11,8 mmol, 3 ekv.) ir mišinys maišomas per naktj. Pasibaigus reakcijai (pagal HPLC), pilamas metanolis, kol susidaro kieta geltona masė. Kietai medžiagai ištirpinti pripilama dichlormetano, mišinys pamaišomas 15-30 minučių ir nufiltruojamas. Sukoncentravus vakuume, liekana chromatografuojama per greitai praleidžiančią kolonėlę (6:1 heksanas:etilacetatas), norint pašalinti pagalbines medžiagas ir kiek galima mrnt » ■ W ww

[0225] daugiau polinių skilimo produktų, ir gaunama geltona alyva (16), kurios išeiga yra 50 %.

[0226] ¹H-BMR (CDCIa) d 0,83-0,98 (m, 2H), 1,09-1,38 (m, 10H), 1,57-2,00 (m, 11 H), 1,83-2,00 (m, 1H), 2,12-2,18 (m, 1H), 2,49-2,54 (m, 1H), 3,10 (dd, 1H, J =₁₁ ir 6 Hz), 3,27 (dd, 1H, J =11,5 ir 8,0 Hz), 4,11-4,25 (m, 2H), 4,88 (dd, 1H, J =₁₁,₀ ir 5,0 Hz), 5,14 (dd, 1H, J= 10 ir 6 Hz).

[0227]

[0228] Pradinė medžiaga ( 16) (0,95 g, 2,9 mmol, 1 ekv.) ištirpinama 10 ml dioksano. Tirpalas atšaldomas iki 10 °C ir į jj pridedama Li0H.H₂0 (0,123 g, 2,9 mmol, 1 ekv.)> ištirpinto 10 ml vandens. Šaldymo vonia nuimama, ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 1 valandą. TLC rodo, kad reakcija pilnai įvyko; tada vakuume nugarinamas tirpiklis. Likęs vandeninis sluoksnis plaunamas eteriu (2 x), parūgštinamas 10 % citrinos rūgštimi ir ekstrahuojamas dichlormetanu (3x). Sumaišyti ekstraktai džiovinami natrio sulfatu ir nugarinus tirpiklj, gaunama balta kieta medžiaga, kuri perkristalinama iš eterio. Sukoncentravus filtratą ir išvalius chromatografuojant per silikagelio kolonėlę (2:1 heksanas:etilacetatas), dar gaunama produkto ( 17).

[0229] Lyd. temp.: 198,2-199 °C;

[0230] ¹H-BMR (DMSO-d₆) d 0,78-0,93 (m, 2H), 1,11-1,27 (m, 5H), 1,34-1,36 (m, 1H), 1,51-1,56 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H), 1,82-1,87 (m, 1H), 2,15-2,18 (m, 1H), 2,37-2,41 (m, 1H), 3,03 (dd, 1H, J =11,₅ ir 5,5 Hz), 3,35-3,38 (m, 2H), 4,83 (dd, 1H, J =9 ir 4 Hz), 4,95 (dd, 1 H, J = 8 ir 5,5 Hz).

[0231]

[0232] BOC-DiCbz-Arg ( 18) (7,6 g, 14,0 mmol) ištirpinamas bevandeniame THF (40 ml) ir atšaldoma iki 0 °C. Pridedama trietilamino (2,2 ml), o po to švirkštu suleidžiama 14,5 mmol 1M izopropilchloroformato tirpalo toluene. Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 minučių, o po to greitai nufiltruojamas. Atskiriama balta kieta medžiaga, j filtratą burbuliukais leidžiamas šviežiai pagamintas diazometanas, kol tirpalo spalva pasidaro geltona. Reakcijos mišinys paliekamas per naktj gerai ventiliuojamoje traukoje, kas palengvina diazometano pertekliaus pašalinimą. Norint nusodinti diazoketoną, pridedama sauso eterio. Produktas nufiltruojamas ir išdžiovinus vakuume, gaunama šiek tiek gelsva, pūkelių pavidalo kieta medžiaga (4,6 g, 58 %). Diazoketonas ( 19) (1 g, 1,77 mmol) ištirpinamas THF (20 ml), ir j šj tirpalą pridedama 1M HCI eteryje (20 ml) 0 °C temperatūroje. Reakcijos mišinys maišomas per naktj kambario temperatūroje; per šj laiką susidaro baltos nuosėdos. Daugiau nuosėdų gaunama, pridėjus eterio. Nufiltravus ir išdžiovinus kietą medžiagą, gaunamas produktas ( 20). (1,02 g, 100%).

[0233] ¹H-BMR (DMSO-d_s) d 1,65-1,77 (m, 3H), 2,06-2,50 (m, 1H), 3,86-3,90 (m, 2H), 4,29 (m, 1H), 4,76 (d, 1H, J=18 Hz), 4,95 (d, 1H, J =₁₈ Hz), 7,35 (s, 2H), 7,36 (s, 2H), 7,35-7,41 (m, 10H), 8,71 (pl.s,'3H), 10,1 (pl.s, 2H).

[0234] ¹³C-BMR (DMSO-d_e) d 23,7, 26,4, 47,2, 47,9, 56,2, 68,0, 69,3, 128,6, 128,7, 128,8, 128,9, 135,2, 135,9, 153,4, 157,4, 198,9.

[0235]

[0236] | imitatorių (17) (0,422 g, 1,42 mmol) THF (50 ml) 0 °C temperatūroje, esant N-metilmorfolinui (0,19 ml), lėtai pridedama 1M izopropilchloroformato tirpalo toluene (1,71 ml). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 minučių, tada veikiamas mažomis porcijomis aminochlormetilketono ( 20). Pabaigus dėti aminochlormetilketoną, reakcijos mišinys maišomas dar 15 minučių, o po to pridedama N-metilmorfolino (0,19 ml). Pamaišius kambario temperatūroje 3 valandas, ekstrahuojama etilacetatu, po to plaunama prisotintu natrio chlorido tirpalu ir 10 % vandenine citrinos rūgštimi. Nugarinus organinj tirpiklj, gaunama baltų putų pavidalo (21) (1,03 g, 96 %), kuris naudojamas be papildomo valymo.

[0237] ¹H-BMR (CDCI_a) d 0,07-0,97 (m, 1H), 1,15-1,41 (m, 7H), 1,62-1,91 (m, 10H), 2,10-2,16 (m, 1H), 2,43-2,48 (m, 1H), 2,74-2,80 (m, 1H), 3,01-3,07 (m, 1H), 3,87-3,94 (m, 1H), 4,11-4,19 (m, 2H), 4,60-4,66 (m, 1H), 4,74-4,86 (m, 2H), 5,09-5,24 (m, 4H), 7,30-7,39 (m, 10H), 7,95 (d, 1H, J =₈ Hz), 9,4 (pl.s, 1H), 9,56 (pl.s, 1H).

[0238]

[0239] (N-t-BOC-N-tozil)butirilketoargininas (240 mg, 0,515 mmol) deblokuojamas, naudojant 30 % TFA dichlormetane. Deblokuoto arginino darinys kopuliuojamas su imitatoriumi (8) (100 mg, 0,343 mmol) DMF

[0240] bazinėmis sąlygomis (Et₃N, pH = 8-9), panaudojant BOP reagentą (228 mg, 0,52 mmol) kaip dehidratuojantį agentą. Paprastai reakcija įvyksta per 2-4 valandas. Išekstrahavus etilacetatu, perplovus prisotintu natrio chlorido tirpalu

[0241] ir 10 % vandenine citrinos rūgštimi, gaunamas negrynas produktas. Šis produktas valomas, panaudojant kolonėlių chromatografiją, ir gaunama 180 mg (76 %) švaraus produkto. Tada šis produktas veikiamas HF, norint pašalinti tozilo grupę. Išvalius išskirtą deblokuotą produktą HPLC būdu, gaunamas BCH-2737.

[0242]

[0243] Chlormetilketonas (21) (0,188 g, 0,245 mmol) ištirpinamas THF (10 ml), veikiamas NMM (0,036 ml), o po to merkaptoacto rūgštimi (0,02 ml, 0,299 mmol). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktj. Išekstrahavus reakcijos mišinj etilacetatu, po to perplovus sočiu natrio chlorido tirpalu ir 10% vandenine citrinos rūgštimi ir nugarinus organinj tirpiklj, gaunamas negrynas produktas, kurj išvalius kolonėlių chromatografijos būdu, gaunamas putų pavidalo kietas produktas (0,125 g, 62 %).

[0244] Šis blokuotas pirmtakas (0,125 g, 0,154 mmol) ištirpinamas DCM (5 ml), ir tirpalas atšaldomas iki -78 °C. Lėtai pridedamas 1M BBr₃ (1,54 ml, 1,54 mmol) tirpalas DCM. Reakcijos mišinys pamaišomas kambario temperatūroje 5 valandas, tada vėl atšaldomas iki -78 °C ir veikiamas bevandeniu metanoliu (2 ml). Reakcijos mišinys sušildomas iki kambario temperatūros ir maišomas dar 2 valandas. Tirpikliai nugarinami sumažintame slėgyje, o liekana paskirstoma tarp eterio ir vandens. Surenkamas vandeninis sluoksnis, liofilizuojama ir gaunamas galutinis produktas (23) kaip miltelių pavidalo medžiaga, išgryninus HPLC būdu ir liofilizavus.

[0245] h- i ■ " TUWU I Aukščiau aprašytos reakcijos produktai gali būti išskirti laisvoje formoje arba druskų formoje. Be to, produktai gali būti gaunami farmaciškai tinkamų adityvinių druskų su rūgštimis formoje, veikiant vieną iš laisvų bazių rūgštimi. Panašiai, produktas gali būti gaunamas farmaciškai tinkamų druskų pavidalu, veikiant vieną iš laisvų karboksirūgščių baze. Taip pat, veikiant druskas baze arba rūgštimi, regeneruojamas laisvas amidas.

[0246]

[0247] J Cul (2,27 g, 5 ekv.) suspensiją sausame THF (20 ml) -78 °C temperatūroje N₂ atmosferoje lėtai supilamas 1,0 M vinilmagnio bromido tirpalas THF (23,4 ml, 9,8 ekv.). Tada tirpalas sušildomas iki -10 °C 30-čiai minučių (pasidaro juodas), po to vėl atšaldomas iki -78 °C. J šj kuprato tirpalą lėtai supilamas jodido (3) (1,00 g, 2,39 mmol) tirpalas sausame THF (3,5 ml).

[0248] k I -TOUO Reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 2,5 valandos. Pridedama sotaus vandeninio NH₄CI (50 ml) ir intensyviai maišant, leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. Tada mišinys supilamas j Et₂0 ir pamaišoma 5 minutes. Tamsi suspensija nufiltruojama per sukepinto stiklo piltuvėlj ir atskiriamos fazės. Vandeninė fazė ekstrahuojama Et₂0 (2x), ir sumaišyti organiniai ekstraktai džiovinami MgS0₄. Kietos medžiagos nufiltruojamos, tirpikliai nugarinami, ir negryna alyva valoma ekspres-chromatografijos būdu (silikgelis, 5 % AcOEt/heksanas), ir gaunama 0,51 g (67 %) gryno alkeno (4).

[0249] ¹H-BMR (CDCI₃, 400 MHz): d 7,37-7,31 (m, 5H, ArH), 5,80 (m, 1H, H-5), 5,33 (d, 1H, J=₇.8, NH), 5,12 (s, 2H, J=12,2, CH₂Ph), 5,05 (d, 1H, J= 17,2, H-6), 5,01 (d, 1H, J=₁₀,₄, H-6), 4,30 (kv, 1H, J = 7,4, H-2), 2,16-2,08 (m, 2H, H-4), 1,92 (m, 1H, H-3), 1,74 (m, 1H, H-3), 1,48 (s, 9H, t-Bu).

[0250] 4 stadija: 1- Benziloksikarbonil- 5- hidroksimetil- 2- pirolidinkarboksirūašties tret-butilesterio sintezė

[0251] | alkeno (4) (50 mg, 0,157 mmol) tirpalą sausame THF (3,1 ml) kambario temperatūroje N₂ atmosferoje pridedama gyvsidabrio acetato (75

[0252] .mg, 1,5 ekv.). Tirpalas maišomas kambario temperatūroj^ 18 vai., po to atšaldomas iki 0 °C. Tada pridedama sotaus vandeninio NaHC0₃ (2 ml), ir mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 minučių. Pridedama KBr (0,11 g, 6 ekv.), ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 2 vai. Tada jis supilamas į H₂0/Et₂0, ir atskiriamos fazės. Vandeninė fazė ekstrahuojama Et₂0 (2x), ir sumaišyti organiniai ekstraktai džiovinami MgS0₄. Kietos medžiagos nufiltruojamos ir nugarinami tirpikliai. J NaBH₄ (3,3 mg, 0,55 ekv.) suspensiją sausame DMF (0,4 ml) 1 valandą burbuliukais leidžiamas deguonis (0₂) ir j ją sulašinamas (švirkštiniu siurbliu, 3 ml/val) gyvsidabrio organinio bromido tirpalas DMF (3,1 ml), visą laiką leidžiant 0₂. Deguonis leidžiamas dar 1 valandą ir pridedama Et₂0 (5 ml). Pilka suspensija nufiltruojama per ceolitą, ir

[0253] filtratas nugarinamas. Liekana chromatografuojama (silikgelis, 6:4 heksanas/EtOAc) ir gaunamas pirolidinolis (5) (30 mg, 57 %), kuris yra skaidri alyva.

[0254] ¹H-BMR (CDCI₃, 400 MHz): d 7,37-7,28 (m, 5H, ArH), 5,22-5,09 (m, 2H, CH₂Ph), 4,30 (dd, 1H, J = 1,4 ir 8,3, H-2), 4,24 (m, 1H, H-5), 3,70-3,57 (m, 3H, CH₂-OH), 2,25 (m, 1H), 2,13 (m, 1H), 1,92 (m, 1H), 1,70 (m, 1H), 1,34 (s, 9H, t-Bu).

[0255] 5 stadiia: 1- Benziloksikarbonil- 5- karboksi- 2- Pirolidinkarboksirūašties tret-butilesterio sintezė

[0256] J alkoholio (5) (50 ng, 0,149 mmol) ir Et₃N (62 ml, 3 ekv.) tirpalą sausame CH₂CI₂ (0,8 ml) N₂ atmosferoje 0 °C temperatūroje lėtai supilamas S0₃-piridino kompleksas (71 mg, 3 ekv.) sausame DMSO. Tirpalas maišomas 0 °C temperatūroje 30 minučių ir pridedama 10 % citrinos rūgšties (2 ml). 1M NaOH nustatomas pH = 4, ir vandeninė fazė ekstrahuojama Et₂0 (3x). Sumaišyti organiniai ekstraktai džiovinami MgSŪ₄. Kietos medžiagos nufiltruojamos, ir nugarinus tirpiklius, gaunama negryna alyva, kuri valoma ekspres-chromatografijos būdu (silikagelis, 7:3 heksanas/EtOAc). Gaunamas alyvos pavidalo grynas aldehidas (6) (45 mg, 90 %).

[0257] ¹H-BMR (CDCI₃, 400 MHz): d 9,68 + 9,56 (ds,1H, CHO), 7,36-7,29 (m, 5H, ArH), 5,23-5,11 (m, 2H, CH₂Ph), 4,57-4,39 (m, 2H, H-2, H-5), 2,30-1,97-(m, 4H, H-3, H-4), 1,47 + 1,36 (2s, 9H, t-Bu).

[0258]

[0259] Pirolidin-aldehidas (6) sujungiamas su blokuota diaminoamino-propankarboksirūgštimi (7), pirmiausia susidarant iminui (8) (MgS0₄, CH₂CI₂). Iminas (8) išskiriamas, nufiltravus MgS0₄ ir nugarinus tirpiklj. Tada negrynas iminas veikiamas NaBH(OAc) 3 ir acto rūgštimi (AcOH) THF 15 valandų, ir išekstrahavus ir apdorojus ekstraktą, gaunamas aminas (8).

[0260]

[0261] Amino (8) CB7 (7) apsauginė grupė pašalinama hidrinimo būdu, kaip katalizatorių naudojant 10 % paladj ant aktyvuotos anglies metanolyje (MeOH). Katalizatorius nufiltruojamas ir nugarinus MeOH, gaunamas negrynas diaminas (9), kuris gali būti naudojamas be papildomo valymo.

[0262]

[0263] Ciklinimas atliekamas, šildant 7 stadijos nevalytą alyvą (9) šiek tiek aukščiau metanolio virimo temperatūros. Biciklinis laktamas (10) valomas ekspres-chromatografijos būdu.

[0264] 9 stadiia:

[0265] Biciklinio laktamo (10) antrinė aminogrupė blokuojama, paverčiant ją amidu, panaudojus benzoilo chloridą piridine. Nugarinus piridiną ir atlikus ekstrakcijos procedūras, gaunamas biciklinis laktamamidas (11).

[0266]

[0267] Biciklinio laktamamido (11) BOC ir t-butilesterio apsauginės grupės pašalinamos rūgštinėse sąlygose (HCI etilo eteryje (Et₂Ū)). Iš tirpalo nusėda amino druska (12), kuri surenkama nufiltruojant.

[0268]

[0269] Junginio (12) pirminė aminogrupė blokuojama CBZ grupe, veikiant benzilchloroformatu acetonitrile (CH₃CN) su K₂CO₃, kaip baze. Atlikus ekstrakcijos procedūras, gaunama pilnai blokuota karboksirūgštis (13), kuri gali būti naudojama 12 stadijoje be papildomo valymo.

[0270] 12 stadiia:

[0271] Karboksirūgštis (13) sujungiama su benzotiazolketoargininu (14) DMF, panaudojant BOP, kaip kopuliavimo agentą, esant diizopropiletilaminui (EtNiPr₂ ). Išekstrahavus etilacetatu (EtOAc), gaunamas baltos kietos medžiagos pavidalo junginys (15), kuris valomas chromatografiškai.

[0272]

[0273] Junginio (15) abi CBZ (Z) apsauginės grupės pašalinamos katalitiškai hidrinant su Pd/C 10 %, kaip katalizatoriumi. Nufiltravus katalizatorių ir nugarinus tirpiklj, gaunamas amino-guanidinas (16).

[0274] Junginio ( 10) sintezė

[0275] Kambario temperatūroje j karboksirūgšties (2) (1,7 g, 4,9 mmol, 1,0 ekv.), 4-hidroksiprolino (3) (5,39 mmol, 1,1 ekv.) ir BOP reagento (2,17 g, 4,9 mmol, 1,0 ekv.) tirpalą bevandeniame THF (10 ml) pridedama 4-metilmorfolino (NMM). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktj',"reakcija stabdoma sočiu natrio chlorido tirpalu (50 ml) ir etilacetatu

[0276] (100 ml). Organinis sluoksnis plaunamas vandeniniu citrinos rūgšties tirpalu (10 %, 2x50 ml), natrio bikarbonatu (10 %, 2x50 ml) ir sočiu natrio chlorido tirpalu (50 ml). Gautas organinis sluoksnis džiovinamas bevandeniu magnio sulfatu, nufiltruojama ir nugarinamas tirpiklis. Liekana valoma ekspres-chromatografijos būdu (5:4:1, etilacetatas-heksanas-metanolis), Gaunama 1,1 g švaraus produkto (4), kurio išeiga 48 %.

[0277]

[0278] J 4-hidroksiprolino darinio (4) (115 mg, 240 mm, 1 ekv.) tirpalą dichlormetane (bevandenis, 10 ml) 0 °C temperatūroje pridedama trietilamino (72 mg, 720 mmol, 3,0 ekv.) ir metansulfonilchlorido (28 mg, 240 mmol, 1,0 ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje. Tada reakcija stabdoma vandeniniu amonio chlorido tirpalu ir ekstrahuojama etilacetatu. Organinis sluoksnis plaunamas 10 % citrinos rūgštimi ir sočiu natrio chlorido tirpalu, džiovinamas, nufiltruojamas ir sausai nugarinus tirpiklį, gaunamas junginys (5).

[0279]

[0280] Enaminas (5) (1,0 ekv.) veikiamas gyvsidabrio acetatu (1,1 ekv.) THF. Sausai nugarinamas tirpiklis, o liekana ištirpinama metanolyje. Gautas gyvsidabrio organinis junginys skaldomas redukciniu būdu natrio borhidricju (1,3 ekv.). Gautas negrynas laktamo tioeteris valomas ekspres-chromatografijos būdu per silikagelj, ir gaunamas junginys (6).

[0281]

[0282] J laktamo tioeterio (6) (1,0 ekv.) tirpalą sausame dichlormetane 0 °C temperatūroje pridedama N-chlorsukcinimido (1,0 ekv.). Kai reakcijos mišinyje nebesimato pradinės medžiagos, kieta medžiaga nufiltruojama, o tirpiklis sausai nugarinamas. Negryna medžiaga (7) naudojama 5 stadijoje be papildomo valymo.

[0283]

[0284] J alfa-chlortioeterio (7) (1,0 ekv.) tirpalą THF (bevandenis) žemoje temperatūroje pridedamas fenilkuprato (1,0 ekv.) tirpalas (pagamintas pagal literatūroje aprašytą metodiką). Kai reakcijos mišinyje nebesimato pradinio chlortioeterio, pridedama sotaus natrio chlorido tirpalo ir etilacetato. Organinis sluoksnis išdžiovinamas, nufiltruojama ir sausai nugarinus, gaunamas norimas produktas (8).

[0285]

[0286] Išskirtas biciklinis laktamas (8) hidrolizuojamas vienu ekvivalentu ličio hidroksido THF ir vandens 1:1 mišinyje. Mišinys maišomas kambario temperatūroje 1 valandą. Gautas mišinys ekstrahuojamas eteriu, gautas tirpalas supilamas į 10 % citrinos rūgšties vandenin] tirpalą ir ekstrahuojamas dichlormetanu. Gaunama atitinkama karboksirūgštis (9).

[0287] Nevalyta karboksirūgštis (9) sujungiama su benzotiazolketoargininu DM F, naudojant BOP kaip kopuliavimo reagentą, esant diizopropiletilaminui. Išekstrahavus EtOAc, gaunama kieta medžiaga, kurią išvalius chromatografuojant per silikagelj, gaunamas blokuotas amidas. CBZ apsauginė grupė pašalinama BBr₃ dichlormetane kambario temperatūroje, ir pagaliau gaunamas biciklinis benotiazolketoarginininis inhibitorius (10).

[0288] Toliau duodami junginiai gaminami taip pat, išskyrus tai, kad galutiniams produktams gauti reakcijose naudojami junginiai, turintys atitinkamus pakaitus.

[0289] 11 junginys

[0290]

[0291] Prekybinis glutaro rūgšties monometilo esterio chloridas (1) (20 ml,

[0292] . 0,144 mmol) ištirpinamas 40 ml sauso tetrahidrofurano (THF) ir atšaldomas iki -15 °C. J šj tirpalą per vamzdelj -15 °C temperatūroje pridedamas šviežiai pagaminto diazometano tirpalas 300 ml eterio. Mišinys paliekamas per naktj sušilti iki kambario temperatūros. Argono srove iš kolbos pašalinamas diazometano perteklius. Kad reakcija pilnai jvyktų, 0 °C temperatūroje pridedama 75 ml 1N HCI eteryje, ir mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros per 5 valandas. Sumažinamas tirpiklio tūris, ir tada plaunama

[0293] 2x 5 % NaHC0₃, džiovinama Na₂C0₃ ir nugarinus, gaunama negrynas chlormetilketonas (20,46 g, 79 %), kuris naudojamas tolesnėje stadijoje be papildomo valymo.

[0294] ¹H-BMR (CDCb, 400 MHz): d 1,16-1,2 (t, 1H), 1,83-1,9 (m, 2H), 2,27-2,35 (m, 2H), 2,6-2,64 (t, 1H), 3,6 (s, 3H), 4,04 (s, 2H).

[0295]

[0296] Nevalytas chlormetilketonas (2) (10,04 g, 56,15 mmol) ištirpinamas 300 ml sauso MeOH. Pridedama natrio acetato (2 ekv., 9,21 g, 112,3 mmol), o po to L-cisteino etilo esterio hidrochlorido (1,3 ekv., 13,55 g, 72,98 mmol) ir natrio cianborhidrido 1,4 ekv., 4,9 g, 78,59 mmol). Heterogeninis mišinys maišomas kambario tempertūroje 2,5 vai. Tada pridedama 200 ml metanolio (MeOH) visoms kietoms medžiagoms ištirpinti, ir 1N HCI nustatomas pH = 2. Po to mišinys pašarminamas sočiu NaHC0₃ iki pH = 8. Nugarinamas metanolis, o likęs vandeninis tirpalas plaunamas etilacetatu ir dichlormetanu. Tirpikliai sumaišomi, džiovinami Na₂S0₄ ir nugarinami. Negryna liekana valoma ekspres-chromatografijos būdu per silikagelj, naudojant etilacetato/heksano gradientą tokiais santykiais: 3:7, 5:5, 6:4, 7:3. Gaunamas ciklinis junginys (3). (3) junginio 1H-BMR (CDCI₃, 400 MHz): d 1,21-1,27 (t, 3H, J=₇,₀₆ Hz), 1,41-1,48 (m, 2H), 1,65-1,73 (m, 2H), 2,28-2,39 (m, 4H), 2,57-2,63 (t, 1H, J=10,9 Hz), 2,72-2,76 (dd, 1H, J=₁₀,₇ Hz), 2,8-2,86 (m, 1H), 3,6-3,64 (d, 4H, J=₂,₅₅ Hz), 3,63 (s, 3H), 4,13-4,2 (m, 2H).¹³C-BMR (CDCI₃, 400 MHz): d 13,078, 19,888, 28,326, 31,133, 32,741, 35,277, 50,462, 56,394, 59,149, 60,188, 69,713, 170,182, 172,52. 3 stadija:

[0297] Ciklinis junginys (3) (913 mg, 3,32 mmol) ištirpinamas 50 ml sauso tolueno. Pridedama (1S)-(+)-10-kamparo sulforūgšties (92 mg, 0,39 mmol), ir mišinys virinamas su grjžtamu šaldytuvu 4 dienas. Kai visa pradinė medžiaga susinaudoja (pagal TLC), mišinys apdorojamas nugarinant tirpikl], liekaną ištirpinant etilacetate ir perplaunant 2x 5 % NaHC0₃. Etilacetato sluoksnis džiovinamas Na₂S0₄ ir nugarinamas. Negryna liekana valoma ekspres-chromatografijos būdu per silikagelj, naudojant 60% EtOAc/40% heksano mišinj, o po to 70% EtOAc/30% heksano mišinj. Gaunama 62,5 % biciklinio junginio (4). (4) junginio ¹H-BMR (CDCI₃, 400 MHz): d 1,27-1,31 (t, 3H, J=₇ Hz), 1,5-1,6 (m, 1H), 1,72-1,87 (m, 2H), 2,02-2,1 (m, 1H), 2,33-2,46 (m, 2H), 2,52-2,59 (m, 2H), 2,83-2,88 (dd, 1H, J=₁₄ ir 4 Hz), 3,14-3,18 (d, 1H), 3,78-3,85 (m, 1H), 4,2-4,27 (kv, 2H, J=₃,₉ Hz), 5,92 (t, 1H, J = 3,4 Hz).

[0298]

[0299] Biciklinis junginys (4) (366 mg, 1,5 mmol) ištirpinamas 25 ml THF ir 5 ml H₂O. Supilamas ličio hidroksido monohidrato (1,1 ekv., 7,05 g, 1,68 mmol) tirpalas 2,3 ml H₂0 0 °C temperatūroje, ir mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 1 valandą ir kambario temperatūroje 3 valandas. Tada nugarinamas THF, o likęs vandeninis mišinys parūgštinamas, pridedant citrinos rūgšties, iki pH = 2. Išekstrahavus vandeninį mišinj 2x CH₂CI₂ ir 2x EtOAc, išdžiovinus sumaišytus organinius sluoksnius Na₂S0₄ ir nugarinus, gaunama liekana, kuri valoma ekspres-chromatografijos būdu per silikagelio kolonėlę, naudojant 70% EtOAc/30% heksano mišinį, o po to 4,7% HOAc/etilacetate. Gaunama gryna rūgštis (5), kurios išeiga 54 %. Išskiriama ir 16 % pradinės medžiagos (4). (5) junginio 1H-BMR (MeOD, 400 MHz): d 1,57-1,69 (m, 1H), 1,70-1,80 (m, 1H), 1,81-1,89 (m, 1H), 2,02-2,1 (m, 1H), 2,05-2,12 (m,1H), 2,35-2,5 (m, 2H), 2,51-2,66 (m, 2H), 2,86-2,91 (dd. 1H, J=₁₃,₈ ir 4 Hz), 3,12-3,17 (d, 1H), 3,3-3,32 (m, 1H), 3,78-3,84 (m, 1H), 5,76-5,78 (t, 1H, J=3,₅₃ Hz).

[0300] ¹³C-BMR (MeOD, 400 MHz): d 17,052, 27,07, 28,928, 31,382, 32,096, 51,016,55,138, 170,088, 171,24.

[0301]

[0302] | ličio bis(trimetilsilil)amido (5 ml 1M tirpalo THF, 5 mmol) tirpalo THF (10 ml) -78 °C temperatūroje supilamas karboksirūgšties (5) (500 mg, 2,32 mmol) tirpalas, ir gautas tirpalas mišomas 1 valandą šioje temperatūroje. Tada pridedama benzilo bromido (0,26 ml, 2,22 mmol), mišiniui leidžiama pasiekti kambario temperatūrą ir maišoma 15 valandų. Mišinys supilamas į 10 % HCI (50 ml) ir ekstrahuojamas dichlormetanu (4x60 .ml). Sumaišytos . organinės fazės džiovinamos MgS0₄, ir nugarinus tirpiklį, gaunamas nevalytas alkilintas amidas (6).

[0303]

[0304] Nevalytas alkilintas amidas (6) sujungiamas su benzotiazolketoargininu DMF, naudojant BOP kaip kopuliavimo reagentą, esant diizopropiletilaminui. Išekstrahavus EtOAc, gaunama kieta medžiaga, kurią išvalius chromatografuojant per silikagelj, gaunamas blokuotas amidas. CBZ apsauginė grupė pašalinama BBr₃ dichlormetane kambario temperatūroje, ir pagaliau gaunamas biciklinis benotiazolketoarginininis inhibitorius (7).

[0305] Toliau duodamas junginys gaminamas taip pat, išskyrus tai, kad galutiniam produktui gauti reakcijose naudojami junginiai, turintys atitinkamus pakaitus.

[0306] Inhibitorių trauka trombinui buvo matuota pagal DiMaio et al., J. Biol. Chem., 1990, 265:21698 aprašytas metodikas. Žmogaus trombino amidolitinio aktyvumo inhibavimas buvo matuojamas fluorimetriškai, panaudojant Tos-Gly-Pro-Arg-AMC kaip fluorogeninj substratą 50 m M Tris-HCI buferyje (pH 7,52, 37 °C), turinčiame 0,1 M NaCI ir 0,1 % polietilenglikolio 8000 kambario temperatūroje (Szevvczuk et al., Biochemistry, 1992, 31:9132).

[0307] Trombino katalizuojama substrato hidrolizė buvo kontroliuojama Varian-Cary 2000™ spektrofotometru jo fluorescencijos variante (l_ex = 383 nm, l_em = 455 nm) arba Hitachi F2000™ fluorescencijos spektrofotometru (l_ex = 383 nm, l_em = 455 nm), o fluorescencijos intensyvumas buvo kalibruojamas naudojant AMC. Po trombino ir substrato sumaišymo su inhibitoriumi, reakcija pasiekia pusiausvyros būseną per 3 minutes. Tada keletą minučių matuojamas pusiausvyrinės būsenos greitis. Šio išradimo junginiai taip pat buvo inkubuojami prieš bandymą su trombinu 20 minučių kambario temperatūroje, prieš pridedant substrato. Pusiausvyros būsena pasiekiama per 3 minutes ir matuojama keletą minučių. Konkurencinės inhibicijos kinetiniai duomenys (pusiausvyros būsenos greitis, esant įvairioms substrato ir inhibitorių koncentracijoms) buvo analizuojami, panaudojant Segei (1975) aprašytus metodus. Kinetinių parametrų (Km, V_max ir K) įvertinimui panaudota netiesinės regresijos programa RNLIN iš IMSL bibliotekos (IMSL, 1987), LMDER iš MINPACK bibliotekos (More et al., 1980) arba Microsoft™ Excell™.

[0308] Fibrino krešėjimo bandymas buvo atliktas 50 mM Tris-HCI buferyje (pH 7,52, 37 °C), turinčiame 0,1 M NaCI ir 0,1 % polietilenglikolio 8000, esant atitinkamai 9,0x10"¹° M (0,1 NIH vieneto/ml) ir 0,03 % (masė/tūris) galutinėms žmogaus trombino ir jaučio fibrinogeno koncentracijoms, kaip aprašyta Szevvczuk et al., supra. Braižomas, krešėjimo laiko priklausomybės nuo inhibitoriaus koncentracijos grafikas, ir nustatoma IC_5o, kaip inhibitoriaus koncentracija, kurios reikia padvigubinti krešėjimo laikui, lyginant su kontrole. Rezultatai duoti 1 ir 2 lentelėse.

[0309] Fibrino krešulio bandymas buvo atliekamas iš esmės taip pat, kaip aprašė Krtenansky et al., FEBS, 1987, 211:10. Buvo pagaminta eilė inhibitoriaus praskiedimų 50 mM Tris-HCI buferyje (pH 7,8, 23 °C), turinčiame 0,1 M NaCI ir 0,1 % (masė/tūris) polietilenglikolio 8000. J mikrotitrų duobutes (mikrotitrų plokštelė, Falcon), kuriose buvo po 100 ml įvairaus praskiedimo inhibitoriaus tirpalo, pridėta žmogaus plazmos (60 ml, surinktos 3,8 % natrio citrate, kraujo/antikoagulianto santykis 9:1). Tirpalas buvo sumaišytas, ir po to pridėta pridėta 50 ml žmogaus trombino (galutinė koncentracija 1 nM) ir vėl maišyta 15 sekundžių. Tuoj pat buvo nustatomas krešulio drumstumas, panaudojant plokštelių automatuoklj (Dynateck MR 5000), esant 405 nm, ir išmatuojamas kas 3 minutės. Maksimalus drumstumas, nesant inhibitoriaus, gautas praėjus 60 min. Išskaičiuotos IC_5o reikšmės, esant 30 min., kurios rodo inhibitoriaus koncentraciją, kuri duoda pusę kontrolinio pavyzdžio optinio tankio reikšmės.

[0310] Buvo surinktas žiurkių kraujas j ACD (6/1 t/t) širdies punkcijos būdu. Pagamintos išplautų trombocitų suspensijos pagal Ardlie et al. (Br. J. Haematol., 1970, 19:7 ir Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1971, 136:1021) aprašytą metodiką. Galutinė suspendavimo terpė buvo modifikuotas Tyrode tirpalas (NaCI 138 mM, KCI 2,9 mM, HEPES 20 mM, NaH₂P0₄ 0,42 mM, NaHC0₃ 12 mM, CaCI₂ 1 mM, MgCk 2 mM, 0,1 % gliukozės, 0,35 % albumino, 1 ml/ml apirazės; pH 7,4). Trombocitų skaičius buvo sureguliuotas, kad būtų 5000000/ml.

[0311] Kad būtų galima išmatuoti tankių granulių kiekio išsilaisvinimo dydj, trombocitai, buvo pažymėti pirmame plovimo tirpale ¹⁴C-serotoninu (5-HT) (1 mCi/10 ml plovimo skysčio) ir buvo nustatomas ¹⁴C-serotonino išsilaisvinimas pagal Holmsen et al. (Enzymology, 1989, 169:206) aprašytą metodiką. Norint pateikti išsilaisvinusio serotonino susinaudojimą, pridėta inipramino (galutinė koncentracija 5 mM).

[0312] Trombocitų agregacija registruota 37 °C temperatūroje agregometru (BioData PAP-4), esant 1100 aps/min. maišymo greičiui, matuojant šviesos pralaidumo pokyčius. Agregacijos procentai nustatyti, praėjus 3 min. po stimuliuojančio agento (žmogaus trombinas, galutinė koncentracija 0,1 lU/ml) pridėjimo. Prieš pridedant stimuliuojanti agentą, inhibitoriai buvo inkubuojami 1 min. 37 °C temperatūroje. IC₅₀ reikšmės parodo koncentraciją, kurios reikia, kad būtų inhibuojama trombocitų agregacija arba sekrecija, sudaranti 50 % nuo kontrolės.

[0313] FeCI_a sukeliamas žiurkių miego arterijos pažeidimas buvo sukeltas pagal Kurtz, K.D., Main, R.VV., Sandusky, G.E., Thromosis Research, 60, 269-280 (1990) ir Schumacher, W.A et a!., J. Pharmacology and Experimental Therapeutics, 267,1237-1242 (1993) aprašytas metodikas.

[0314] Sprague-Davvley žiurkių patinėliai (375-410 g) buvo anestezuojami uretanu (1500 mg/kg i.p.). Gyvuliukai buvo padėti ant šildomo (37 °C) padėklo. Per vidurinį kaklo pjūvį atveriama miego arterija. Kraujagyslė atskiriama nuo miego arterijos apdangalo, panaudojant kruopštų pjūvį buka adata. Naudojant pincetą, arterija buvo pakelta, kad po ja būtų pakankamai vietos įstatyti dviems mažiems gabaliukams polietileninio vamzdelio (PE-205). Tarp vieno iš gabaliukų ir arterijos įstatytas temperatūros matuoklis (Physitemp MT23/3). Pažeidimas sukeliamas, panaudojant Vatmano Nr.1 filtro popieriaus, iš anksto sumirkyto 35 % FeCI₃ tirpalu, mažo disko (3 mm skersmens) vietinę aplikaciją ant miego arterijos virš temperatūros matuoklio. Pjūvio plotas padengiamas aliuminio folija, kad FeCI3 būtų apsaugotas nuo šviesos sukeliamos degradacijos. Kraujagyslės temperatūra stebima 60 minučių po FeCI3 aplikacijos, kaip kraujo cirkuliacijos rodiklis. Kraujagyslės temperatūros pokyčiai registruojami termisteriu (Cole-Palmer Model 08533-41).

[0315] Laikas tarp FeCI₃ aplikacijos ir laiko, kada staigiai sumažėja kraujagyslės temperatūra (> 2,4 °C), priimamas kaip kraujagyslės užsikimšimo laikas. Inhibitoriniai junginiai buvo duodami kaip i.v. porcija, o po to tuoj pat daroma i.v. infuzija (mg/kg/min. per šlaunies veną). Nustatoma inhibitoriaus dozė, reikalinga padvigubinti užsikimšimo laikui, lyginant su kontroliniais gyvuliukais, kuriems pažeidimas buvo sukeltas, nesant inhibitoriaus.

Apibrėžtis

1. Junginys, kurio formulė (I):

2. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₁ yra viena iš grupių, kurių formulės yra Vla-Vld:

3. Junginys pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra heterociklas, pasirinktas iš grupės, kurią sudaro:

4. Junginys pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

5. Junginys pagal 4 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš:

6. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad vienas iš R₄ ir R₅ yra hidrofobinė grupė, pasirinkta iš Ci. 2o-alkilo, C 2- 2o-alkenilo arba C 2. 2o-alkinilo, kurie gali būti pertraukti karbonilo grupe, C 6. i6-arilo, C₃._r-cikloalkilo, C6. 2o-aralkilo, C 6- 2o-cikloalkilu pakeisto Ci-₂₀-alkilo, kurio alifatinė dalis gali būti pertraukta karbonilo grupe, o žiedo dalis, kaip pakaitą, gali turėti C_i.₆-alkilą; ir hidrofobinės aminorūgšties šoninė grandinė.

7. Junginys pagal 6 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₃ yra H.

8. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad Z yra O.

9. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂ yra H.

10. Junginys, kurio formulė (VII):

11. Junginys pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₁ yra viena iš grupių, kurių formulės yra Vla-Vld:

12. Junginys pagal 11 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra heterociklas, pasirinktas iš grupės, kurią sudaro:

13. Junginys pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

14. Junginys pagal 13 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš:

15. Junginys pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂ ir R₃ yra H.

16. Junginys pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad R4 yra Cm6-alkilas, kuris gali būti pertrauktas heteroatomu arba karbonilu ir gali turėti kaip pakaitą Ce-ie-aromatinj, C_^-cikloalkilo arba heterociklinį žiedą, kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip CF₃ arba oksogrupė.

17. Junginys pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₅ yra H.

18. Junginys pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad:R₃ yra H;R4 yra Ci-ie-alkilas, kuris gali būti pertrauktas heteroatomu arba karbonilu ir gali turėti kaip pakaitą C₆-_i6-aromatinj, C₃-₇-cikloalkilo arba heterociklinj žiedą,kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip CF₃ arba oksogrupė; ir R5 yra H.

19. Junginys pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad jj pasirenka iš:0085 6S-cikloheksilmetilheksahidro-5-okso-5H-tiazolo[3,2-a]piridin-3R-karboksamido(propilkarbometoksiketoarginino) ir0105 6S-cikloheksilmetilheksahidro-5-okso-5H-tiazolo[3,2-a]piridin-3R-karboksamido(a-benzotiazolketoarginino).

20. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jo formulė yra (VIII):

21. Junginys pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad R_i yra viena iš grupių, kurių formulės yra Vla-Vld:

22. Junginys pagal 21 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra heterociklas, pasirinktas iš grupės, kurią sudaro:

23. Junginys pagal 22 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

24. Junginys pagal 23 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš:

25. Junginys pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂ ir R₃ yra H.

26. Junginys pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad R4 yra H arba Ci.e-alkilas, kuriame kaip pakaitas yra COOH.

27. Junginys pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂, R₃ ir R₄ yra H,o R₅ yra Ci-ie-alkilas, kuris gali būti pertrauktas vienu arba daugiau heteroatomų arba karbonilo grupe ir kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip OH, SH, NR_eR_r arba C₆-i₆-arilas, heterociklas arba C₃-₇-cikloalkilo grupė, kurioje gali būti pakaitai, tokie kaip haiogenas, hidroksilas arba Ci_^-alkilas.

28. Junginys pagal 22 punktą, besiskiriantis tuo, kad:r₂, r₃ ir r4 yra H; o r₅ yra Ci-i₆-alkilas, kuris gali būti pertrauktas vienu arba daugiau heteroatomg arba karbonilo grupe ir kuriame gali būti pakaitai, tokie kaip OH, SH, nr₆r_/, arba C₆-_i6-arilas, heterociklas arba C₃-₇-cikloalkilo grupė,kurioje gali būti pakaitai, tokie kaip haiogenas, hidroksilas arba C_i.₆-alkilas.

29. Junginys pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad jj pasirenka iš:0345 4-okso-2-(3-fenilpropionil)-oktahidropirolo[1,2-a]pirazin-6-karboksirūgšties[4-guanidino-1-(5-metiltiazol-2-karbonil)butil]amido; ir 0340 4-okso-2-(3-fenilpropionil)-oktahidropirolo[1,2-a]pirazin-6-karboksirūgšties[4-guanidino-1-(tiazol-2-karbonil)butil]amido.

30. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jo formulė yra (IX):

31. Junginys pagal 30 punktą, besiskiriantis tuo, kad R_i yra viena iš grupių, kurių formulės yra Vla-Vld:

32. Junginys pagal 31 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra heterociklas, pasirinktas iš grupės, kurią sudaro:

33. Junginys pagal 32 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

34. Junginys pagal 33 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš-

35. Junginys pagal 30 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂ ir R₃ yra H.

36. Junginys pagal 30 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₄ yra H, NR₆Rr arba C₁.₆-alkilas, kuriame kaip pakaitas yra COOH.

37. Junginys pagal 30 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₅ yra C 6- i6-arilas, C₆-₂o-aralkilas arba Ci.-ie-alkilas, kuriame kaip pakaitas gali būti C₃-₇-cikloalkilas.

38. Junginys pagal 32 punktą, besiskiriantis tuo, kad:n yra 1 ;R2, R3 ir R4yra H; irR₅ yra C6- i6-arilas, C6- 2o-aralkilas arba CM6-alkilas, kuriame kaip pakaitas gali būti C 3- 7-cikloalkilas.

39. Junginys pagal 30 punktą, besiskiriantis tuo, kad jj pasirenka iš:0890 3-amino-4-okso-2-fenil-heksahidropirolo[2,1-b][1,3]tiazin-6-karboksirūgšties[1-(benzotiazol-2-karbonil)-4-guanidinobutil]amido;0895 3-amino-2-benzil-4-okso-heksahidropirolo[2,1-b][1,3]tiazin-6-karboksirūgšties-[1-(benzotiazol-2-karbonil)-4-guanidinobutil]amido; ir 0900 3-amino-2-cikloheksil-4-okso-heksahidropirolo[2,1-b][1,3]tiazin-6-karboksi-rūgšties[1-(benzotiazol-2-karbonil)-4-guanidinobutil]amido.

40. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jo formulė yra (X):

41. Junginys pagal 40 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₁ yra viena iš grupių, kurių formulės yra Vla-Vld:

42. Junginys pagal 41 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yraheterociklas, pasirinktas iš grupės, kurią sudaro:

43. Junginys pagal 42 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

44. Junginys pagal 43 punktą, besiskiriantis tuo, kad T yra pasirinktas iš:

45. Junginys pagal 40 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂ ir R₃ yra H.

46. Junginys pagal 40 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₄ yra Cm6-alkilas, kuriame kaip pakaitas yra C 6- i6-arilas, kuriame kaip pakaitas gali būti C^e-alkilas.

47. Junginys pagal 40 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₅ yra H.

48. Junginys pagal 42 punktą, besiskiriantis tuo, kad:B yra S;R₂, R₃ ir R₅ yra H; irR₄ yra CM6-alkilas, kuriame kaip pakaitas yra Ce-ie-arilas, kuriame kaip pakaitas gali būti C_i._i6-alkilas..

49. Junginys pagal 40 punktą, besiskiriantis tuo, kad jj pasirenka iš:0925 7-benzil-6-okso-oktahidropirido[2,1-c][1,4]tiazin-4-karboksirūgšties[4-guanidino-1-(tiazol-2-karbonil)butil]amido; ir0940 6-okso 7-fenetil-oktahidropirido[2,1-c][1,4]tiazin-4-karboksirūgšties[4-guanidino-1-(tiazol-2-karbonil)butil]amido.

50. Junginio pagal 1 punktą panaudojimas vaisto, skirto žinduolių trombozinių sutrikimų gydymui arba profilaktikai.

51. Panaudojimas pagal 50 punktą, besiskiriantis tuo, kad trombozinis sutrikimas yra veninė trombozė.

52. Panaudojimas pagal 50 punktą, besiskiriantis tuo, kad trombozinis sutrikimas yra plautinės arterijos užsikimšimas embolu.

53. Panaudojimas pagal 50 punktą, besiskiriantis tuo, kad trombozinis sutrikimas yra arterinė trombozė.

54. Panaudojimas pagal 50 punktą, besiskiriantis tuo, kad trombozinis sutrikimas yra miokardo infarktas.

55. Panaudojimas pagal 50 punktą, besiskiriantis tuo, kad trombozinis sutrikimas yra cerebralinis infarktas.

Brėžiniai