[LT] Piridilftalazindionai, turintys formulę (I), kurioje R1 ir R2 yra parinkti iš grupės, susidedančios iš vandenilio, halogeno ir metoksigrupės, arba kurioje R1 ir R2 kartu sudaro metilendioksigrupę, irjų farmaciškai priimtinos druskos, ir farmacinės kompozicijos, turinčios savyje efektyvų glicinui-B antagonistinį jų kiekį, skirti neurologinių susirgimų, susijusių su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės neurotransmisijos sutrikimais gyvūnuose, įskaitant žmogų, gydymui.
[EN] Pyridyl-phtalazin diones having formula (I), wherein R1 and R2 are selected from the `group` consisting of hydrogen, halogen, and methoxy or wherein R1 and R2 together form methylenedioxy, and pharmaceutically acceptable salts thereof, and pharmaceutical compositions containing an effective glycineB antagonistic amount thereof, are useful in combatting neurological disorders associated with excitotoxicity and malfunctioning of glutamatergic neurotransmission in a living animal, including a human, in need thereof.
[0001] Išradimas apima naujus cheminius junginius, kurie yra piridoftalazindionai, juos turinčias farmacines kompozicijas ir jų panaudojimą prieš neurologinius susirgimus, susijusius su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės neurotransmisijos sutrikimais.
[0002] Glutamatas yra, tikriausiai, pagrindinis dirgiklių mediatorius centrinėje nervų sistemoje, bet jis taip pat dalyvauja daugelyje patologinių ir ekscitotoksinių procesų. Šiuo požiūriu yra labai svarbu surasti glutamato antagonistus terapiniam naudojimui (žiūr. apžvalgą Dansyz W., Parsons C.G., Bresik I., Quack G. (1995): Drug News & Perspectives 8, p. 261-277). Glutamatas aktyvuoja tris pagrindinius jonotropinių receptorių tipus, būtent, a-•amino-3-hidroksi-5-metil-4-izoksazolpropano rūgštį (AMPA), kainatą ir N-metil-D-aspartatą (NMDA) ir keletą metabotropinių receptorių tipų. Antagonistai NMDA receptoriams potencialiai gali turėti platų terapinį pritaikymą. Funkcinis NMDA receptorių inhibavimas gali būti įgyvendintas veikiant įvairius atpažinimo
[0003] sritis, tokias kaip pirminio pernešėjo sritį, strichninui nejautrią glicino sritį
[0004] (glicinas-B), poliamino sritį, ir fenilciklidino sritį, esančią katijonų kanalo viduje.
[0005] Receptorių desensebilizacija gali būti fiziologinis procesas, įgyvendinantis endogeninės kontrolės mechanizmą, siekiant užkirsti kelią ilgalaikiam glutamato receptorių neurotoksiniam aktyvavimui, bet leidžiant jų trumpalaikį fiziologinį aktyvavimą. NMDA receptorių atveju ko-agonistas glicinas yra endogeninis ligandas, inhibuojantis tokią desensibilizaciją per glicino-B srities aktyvavimą. įdomu, kad išemija padidina ne tik ekstraląstelinio glutamato koncentraciją, bet ir glicino, ir, nors pastarasis efektas yra mažiau išreikštas, jis faktiškai ilgiau išlieka. Taigi, kai kurie visiški glicino-B antagonistai tokiose sąlygose galėtų atstatyti normalų sinaptinį perdavimą, padidinant NMDA receptoriaus desensibilizaciją iki fiziologinio lygio. Iš tikrųjų, įvedimo į laboratorinių gyvuliukų centrinę nervų sistemą pagrindu pateikta mintis, kad glicino-B antagonistai galėtų pasiūlyti geresnę terapinę nišą, negu agentai, veikiantys kitose NMDA receptorių komplekso atpažinimo vietose. Deja, daugumos glicino-B antagonistų prastos farmakokinetinės savybės iki pastarojo meto nepatvirtino šio spėjimo, įvedant į organizmą. Tačiau pranešta, kad keletas glicino-B antagonistų, įvedus juos į organizmą, turi gerus terapinius indeksus hiperalgezijos modeliuose ir kaip anksiolitikai.
[0006] Mes išradome triciklinių piridoftalazindionų serijas. I klasės junginiai yra panašios struktūros kaip Zeneca užpatentuoti glicino-B antagonistai (ICI, EP 0516297 A1,1992.12.02). II klasės junginiai yra tų junginių N-oksidai, ir nėra nei aprašyti, nei pasiūlyti Zeneca patente. II klasės junginai taip pat yra stiprūs glicino-B antagonistai in vitro, ir rodo daug geresnį in vivo sisteminį prieinamumą ir/arba prasiskverbimą per hemato-encefalinį barjerą, negu I klasės junginiai. Be to, šių junginių druskos, gautos, pavyzdžiui, prijungiant choliną ir tetrametilamonį ( 4-NH3), turi dar geresnį bioprieinamumą.
[0007] Nauji šio išradimo junginiai turi spėjamą tinkamumą, gydant tokius sutrikimus: 1. Ūmus ekscitotoksiškumas, toks kaip išemija insulto, traumos, hipoksijos, hipoglikemijos ir encefalopatijos atvejais. 2. Chroniški neurodegeneraciniai susirgimai, tokie kaip Alcheimerio liga, vaskuliarinė demencija, Parkinsono liga, Hantigtono liga, išsėtinė sklerozė, šoninė amiotrofinė sklerozė, AIDS-neurodegeneracija, smegenėlių atrofija, Ture sindromas, motorinių neuronų susirgimas, mitochondrinė disfunkcija, Korsakovo sindromas ir Kroisfeldo-Jakobo susirgimas. 3. Kiti sutrikimai, susiję su ilgalaikiais plastiniais centrinės nervų sistemos pakitimais, tokiais kaip chroniškas skausmas, vaistų toleravimas, priklausomybė nuo jų ir įpratimas (pvz., opioidų, kokaino, benzodiazepinų ir alkoholio) ir vėlyva diskinezija. 4. Epilepsija (išplitusi ir daliniai traukuliai), šizofrenija, nerimas, depresija, raumenų spazmai ir ūžesys ausyse.
[0008] Šio išradimo tikslas yra pateikti naujus ir efektyvesnius junginius - piridoftalazindionus, jų farmacines kompozicijas ir neurologinių sutrikimų, susijusių su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės neurotransmisijos sutrikimais, gydymo šiais junginiais būdus. Dar vienas išradimo tikslas yra pateikti tokius naujus junginius, kompozicijas ir būdus, kurie patenkintų aukščiau pateiktus teorinius reikalavimus. Papildomi tikslai bus aiškūs toliau, o dar kiti tikslai bus aiškūs šios srities specialistams.
[0009] Taigi, išradimas tarp kitų, pavieniui ar derinyje, apima šiuos aspektus:
[0010] Junginį, parinktą iš piridilftalazindionų, turintį formulę
[0011] kurioje R1 ir R2 yra parinkti iš grupės, susidedančios iš vandenilio, halogeno ir metoksigrupės, arba kurioje R1 ir R2 kartu sudaro metilendioksigrupę, ir jo farmaciškai priimtinas druskas;
[0012] jo druskų;
[0013] tokj junginj, kuris yra parinktas iš grupės, susidedančios iš 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,
[0014] 8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,
[0015] 8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,
[0016] 8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,
[0017] 7,8-dichlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,
[0018] 7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir
[0019] 7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktų farmaciškai priimtinos druskos; ir
[0020] tokį junginį, parinktą iš grupės, susidedančios iš
[0021] do cholino druskos,
[0022] 8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,
[0023] 8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihtdropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,
[0024] 7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,
[0025] 7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir
[0026] 7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos;
[0027] be to, apima farmacinę kompoziciją, turinčią savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą tokio junginio efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį;
[0028] tokią farmacinę kompoziciją, turinčią savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą tokio junginio efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį to junginio cholino druskos pavidale;
[0029] tokią farmacinę kompoziciją, turinčią savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį junginio, parinkto iš grupės, susidedančios iš
[0030] 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,
[0031] 8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,
[0032] 8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,
[0033] 8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,
[0034] 7,8-dichlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,
[0035] 7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir
[0036] 7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okšo-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, arba iš bet kurio iš jų farmaciškai priimtinos druskos;
[0037] tokią farmacinę kompoziciją, turinčią savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį junginio, parinkto iš grupės, susidedančios iš
[0038] 4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,
[0039] do cholino druskos,
[0040] do cholino druskos, - 8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,
[0041] 7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1)2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,
[0042] 7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir
[0043] 7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos;
[0044] be to, apima tokio junginio - glicino-B antagonisto ar farmacinės kompozicijos efektyvaus kiekio taikymą neurologinių susirgimų, susijusių su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės transmisijos sutrikimais gyvūnuose, gydymui;
[0045] tokį taikymą, kuriame junginys yra jo cholino druskos pavidale;
[0046] tokį taikymą, kuriame junginys yra parinktas iš grupės, susidedančios iš 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,
[0047] do,
[0048] do,
[0049] do,
[0050] 7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,
[0051] 7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir
[0052] 7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, arba iš bet kurio iš jų farmaciškai priimtinos druskos;
[0053] be to, apima tokio junginio - g!icino-B antagonisto ar farmacinės kompozicijos efektyvaus kiekio taikymą neurologinių susirgimų, susijusių su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės transmisijos sutrikimais gyvūnuose, gydymui, kai junginys yra parinktas iš grupės, susidedančios iš: 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,
[0054] 8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,
[0055] 8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,
[0056] 8-fiuor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,
[0057] 7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,
[0058] 7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir
[0059] 7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos.
[0060] Toliau pateikiami aptarimas, pavyzdžiai ir farmakologinė dalis siekia iliustruoti šj išradimą, bet jo neapriboja.
[0061]
[0062] R1/R2 = H ir/arba halogenas;
[0063] R1/R2 = H ir/arba 0-CH3;
[0064] R1/R2 = H ir/arba metilendioksigrupė;
[0065] Bendra chinolin- 2, 3- dimetildikarboksilatų 1- oksidų ( 3) gavimo metodika.
[0066] Atšaldytas ledo vonioje 2-nitrobenzaldehido 1 (25 mM) ir natrio (27 mM) tirpalas sausame metanolyje: (40 m!) per 30 min. paveikiamas dimetil(dietoksifosfinil)sukcinatu 2 (30 mM, pagamintas pagal metodiką, aprašytą S.Linkę et al., Lieb . Ann . Chem ., 1980(4), 542) sausame metanolyje (10 ml). Susidaręs tamsus tirpalas 1,5 vai. maišomas 0-5 °C temperatūroje, tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana paskirstoma tarp etilo acetato ir vandens. Etilo acetatas išdžiovinamas natrio sulfatu, po to nugarinamas vakuume. Liekana perkristalinama iš izopropanolio ir gauna chinolin-2,3-dimetildikarboksilato 1-oksidą nevisai baltų ( arba šviesiai geltonų) miltelių pavidale.
[0067] Junginių 3 fizikinės savybės ir 1H-BMR spektrų duomenys pateikti 1 ir 2 lentelėse.
[0068] j sulfato rūgšties (40 ml) ir natrio nitrato (2,66 g, 31,3 mM) mišinį 0-5 °C temperetūroje sudedamas 3-brom-4-chlorbenzaldehidas (6,25 g, 28,5 mM). Susidaręs mišinys 7 vai. maišomas kambario temperatūroje, po to praskiedžiamas lediniu vandeniu (300 ml), Iškritusios nuosėdos nufiltruojamos, praplaunamos vandeniu ir išdžiovinus gauna miltelius. Šią medžiagą perkristalinus iš izopropanolio ir vandens (2:1), gauna antraštėje nurodytą 2-nitrobenzaldehidą 1f (3,6 g, 51,5 %) šviesiai gelsvų miltelių pavidale; I. temp. 81-82 °C.
[0069] apskaičiuota (%): C 31,79 H 1,14 N 5,30 gauta (%): C 31,55 H 0,98 N 5,09
[0070] 1H-BMR (CDCI3), 8: 8,22 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 10,39 (s, 1H).
[0071] Pagal (a) metodiką, bet pradedant nuo 4-brom-3-chlorbenzaldehido (2,97 g, 13,5 mM), gauna antraštėje nurodytą 1g junginj (1,9 g, 53,0 %) šviesiai geltonų miltelių pavidale; I. temp. 95-98 °C.
[0072] apskaičiuota (%): C 31,79 H 1,14 N 5,30 gauta (%): C 31,60 H 1,01 N 5,11
[0073] 1H-BMR (CDCI3), 8: 8,02 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 10,39 (s, 1H).
[0074] Bendra chinolin- 2, 3- dimetildikarboksilatų ( 7) gavimo metodika.
[0075] N-oksido 3 (10 mM) ir fosforo trichlorido (30 mM) tirpalas sausame choroforme (100 ml) virinamas su grįžtamu šaldytuvu 7 vai. Tirpiklis pašalinamas vakuume, o liekana paskirstoma tarp etilo acetato ir vandens. Organinis sluoksnis išdžiovinamas natrio sulfatu, po to nugarinamas vakuume. Liekaną perkristalina iš izopropanolio ir gauna antraštėje nurodytą chinolin-2,3-dimetildikarboksilatą 7 nevisai baltų (arba šviesiai geltonų) miltelių pavidale.
[0076] Junginių 7 fizikinės savybės ir 1H-BMR spektrų duomenys pateikti 3 ir 4 lentelėse.
[0077] Bendra 4- hidroksM- okso- 1, 2- dihidropiridazino-[ 4, 5- b]- chinolinų 5-oksidų ( 5) gavimo metodika.
[0078] { maišomą chinolin-2,3-dimetildikarboksilato 1-oksido 3 (5 mM) tirpalą
[0079] (arba suspensiją) verdančiame etanolyje (25 ml) argono atmosferoje pridedama hidrazinhidrato (15 mM) ir mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 3 vai., kol per tą laiką susidaro tamsios nuosėdos. Atšaldžius iki kambario temperatūros, reakcijos mišinys nufiltruojamas, o atskirta kieta medžiaga praplaunama etanoliu ir eteriu, išdžiovinama ir gauna hidrazino druską 4. Ši medžiaga maišoma acto rūgštyje 70-110 °C temperatūroje 3 vai., atšaldžius iki kambario temperatūros, mišinys praskiedžiamas vandeniu (45 ml) ir nufiltruojamas. Atskirta kieta medžiaga praplaunama etanoliu, išdžiovinama ir gauna tamsiai geltoną kietą medžiagą. Šią medžiagą keletą kartų perkristalinus iš dimetilformamido, gauna antraštėje nurodytą piridazin-[4,5-b]-chinolino 5-oksidą 5 oranžinių miltelių pavidale.
[0080] Junginių 5 fizikinės savybės ir 1H-BMR duomenys pateikti 5 ir 6 lentelėse.
[0081] Bendra 1, 4- diokso- 1 ^. S^- tetrahidropiridazin-^. S- bl- chinolinų ( 9) gavimo metodika.
[0082] J maišomą chinolin-2,3-dimetildikarboksilato 7 (5 mM) tirpalą (arba suspensiją) verdančiame etanolyje (25 ml) pridedama hidrazinhidrato (30 mM) ir mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 8 vai., kol susidaro nuosėdos. Atšaldžius iki kambario temperatūros, reakcijos mišinys nufiltruojamas, o atskirta kieta medžiaga praplaunama etanoliu, eteriu ir išdžiovinama; gauna hidrazino druską 8. Ši medžiaga 3 vai. maišoma acto rūgštyje (15 ml) 70-100 °C temperatūroje, ir, atšaldžius iki kambario temperatūros, mišinys praskiedžiamas vandeniu (45 ml) ir nufiltruojamas. Atskirta kieta medžiaga praplaunama etanoliu ir eteriu, išdžiovinama, ir gauna antraštėje nurodytą piridazin-[4,5-b]-chinoliną 9 geltonų miltelių pavidale.
[0083] Junginių 9 fizikinės savybės ir ^-BMR duomenys pateikti 7 ir 8 lentelėse.
[0084] Bendra 4- hidroksi- 1- okso- 1, 2- dihidropiridazino-[ 4, 5- b]- chinolinų 5-oksidų cholino druskų ( 6) ir M- diokso- I^. S^- tetrahidropiridazin-^. S- b]-chinolinų cholino druskų ( 10) gavimo metodika.
[0085] | maišomą piridazin-[4,5-b]-chinolino 9 arba N-oksido 5 (10 mM) suspensiją metanolyje (50 ml) pridedama cholino hidroksido (10,5 mM, 45 masės % tirpalas metanolyje). Susidaręs tirpalas sukoncentruojamas rotoriniame garintuve, o kieta liekana perkristalinama iš etanolio; gauna antraštėje nurodytą cholino druską 10 arba 6 oranžinių (arba raudonų) higroskopinių miltelių pavidale.
[0086] Junginių 6 ir 10 fizikinės savybės ir 1H-BMR duomenys pateikti 9,10 ir 11,12 lentelėse, atitinkamai.
[0087]
[0088] Audinių preparatai paruošti pagal Fosterio ir Vongo metodiką (Foster A.C., VVong E.H.F. (1987): Brit. J. Pharmacol. 91, p. 403-409). Sprague-Davvley žiurkių patinėliai (200-250 g) buvo dekapituoti, ir jų smegenys iš karto pašalintos. Išpjauta galvos smegenų žievė homogenizuota 20 tūrių ledu atšaldytos 0.32 M sacharozės stiklo-teflono homogenizatoriuje. Homogenatas centrifuguotas 10 min. su 1000 x g. Nuosėdos resuspenduotos 20 tūrių distiliuoto vandens ir centrifuguotos 20 min. su 8000 x g. Po to supematantas ir krešulio šviesusis sluoksnis centrifuguojamas tris kartus (20 min., su 48000 x
[0089] g), esant 5 mM Tris-HCI, pH 7,4.visi centrifugavimai atlikti 4 °C temperatūroje. Resuspendavus 5 tūriuose 5 mM Tris-HCI, pH 7,4, membranos suspensija
[0090] staigiai atšaldyta iki -80 °C ir palikta iki tyrimų dienos. Tyrimų dieną membranos buvo atšildytos ir praplautos keturis kartus, resuspenduojant 5 mM Tris-HCI, pH 7,4 ir centrifuguotos 20 min. su 48000 x g. Galutinės nuosėdos suspenduotos tyrimo buferyje.
[0091] Baltymo kiekis galutiniame membranos preparate nustatytas Louri metodu su kai kuriomis modifikacijomis (Lovvry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randeli R.J. (1951): J. Biol. Chem. 193, p. 265-275; Hartfree E.F. (1972): Analytical Biochemistry 48, p. 422-427). Trys vienodi baltymo pavyzdžiai po 50 jai praskiesti iki 1 ml distiliuotu vandeniu ir paveikti 0,9 ml tirpalo, susidedančio iš 2 g kalio natrio tartrato ir 100 g Na2C03 500 ml 1N NaOH ir 500 ml vandens. Palyginimo ir standartinis (su jaučio serumo albuminu) tirpalai paruošti tokiu pat būdu. Mėgintuvėliai 10 min. palikti 50 °C temperatūros vandens vonioje, po to atšaldyti iki kambario temperatūros. Pridedama 100 |il tirpalo, susidedančio iki iš 2 g kalio natrio tartrato ir 1 g CuS04 x 5H20 90 ml vandens ir 10 mMN NaOH. Pavyzdžiai laikomi kambario temperatūroje mažiausiai 10 min., po to maišant greitai pridedama 3 ml Folin-Ciocalteu reagento (1 ml reagento praskiesto 15 ml vandens). Mėgintuvėliai vėl kaitinami 10 min. 50 °C temperatūroje, po to atšaldomi iki kambario temperatūros. Išmatuojama absorbcija 1 cm kiuvetėse ties 650 nm. Galutinė baltymo koncentracija, naudota mūsų tyrimuose, buvo tarp 100 ir 250 Įig/ml.
[0092] Inkubavimas abiejuose surišimo tyrimuose buvo nutrauktas naudojant Milliporre filtrus. Pavyzdžiai, kiekvienas trijuose egzemplioriuose, praplaunami tris kartus 2,5 ml ledu atšaldyto tyrimo buferio ant stiklo filtro, įsigyto iš Schleicher & Schuell, pastoviame vakuume. Atskyrus ir praplovus, filtrai sumerkiami j scintiliacinj skystį (5 ml; Ultima Gold) ir, naudojant įprastą skysčių scintiliacijos skaitiklį (Hevvlett Packard, Liquid Scintillation Analyser), išmatuojamas ant filtrų likęs radioaktyvumas. "Visas surišimas" buvo absoliutus radioligando kiekis, surištas nesant jokių priedų, tuo tarpu "nespecifinis surišimas" buvo nustatytas esant didelei konkurencinio reagento koncentracijai.
[0093] Eksperimentai atlikti pagal modifikuotą ankstesnių tyrėjų metodiką
[0094] (Canton T., Doble A., Miquet J.M., Jimonet P., Blanchard J.C. (1992): J. Pharm. Pharmacol. 44, p. 812-816). Membranos suspenduotos ir inkubuotos 10 mM Tris-HCI buferyje, pH 7,4. Inkubavimo laikas - 45 min. 4 °C temperatūroje. Nespecifinis [3H]5,7-DCKA surišimas nustatytas pridedant 0,1 mM nežymėto glicino. Sustabdymo tirpalas susideda iš 10 mM Tris-HCI ir 10 mM magnio sulfato, pH 7,4. Filtruojama kaip įmanoma greičiau. Pakeitimo eksperimentai atlikti su pastovia [3H]5,7-DCKA 10 nM koncentracija. Tiriami junginiai praskiesti vandeniu arba DMSO, ir pridedami mažiausiai 5 skirtingų koncentracijų pavidale.
[0095] [3H]glicino surišimo tyrimai atlikti pagal metodiką, aprašytą Kessler ir bendradarbių (Kessler M., Terramani T., Lynch G., Baudry M. (1989): J. Neurochem. 52, p. 1319-1328). Žiurkių kortikalinės membranos paruoštos kaip aprašyta anksčiau, ir galutinės nuosėdos suspenduotos 50 mM Tris-acetate, pH 7,4. Mažiausiai 5 skirtingos tiriamų junginių koncentracijos inkubuotos su 20 nM [3H]glicino 30 min. 4 °C temperatūroje, esant 100 įiM strichnino. Visi junginiai buvo ištirpinti vandenyje arba DMSO, atitinkamai. Nespecifinis surišimas nustatytas įvedant 100 įiM glicino į inkubavimo mišinj. Inkubavimas nutrauktas praskiedžiant pavyzdžius 2 ml stabdymo tirpalo (50 mM Tris-HCI, turintis 10 mM magnio sulfato, pH 7,4, atšaldytas iki 2 °C) ir po to praplaunant 2,5 ml buferio. Filtruota kaip įmanoma greičiau.
[0096] Iš visų tirtų junginių [3H]-DCKA tyrime aštuoni turėjo IC50 < 1 (aM. Šešių parinktų junginių stiprumas [3H]-glicino tyrime iš pirmo žvilgsnio atrodo didesnis, bet tai neatsispindi dideliuose skirtumuose tarp K<j reikšmių
[0097] (neparodyta). Ypač įdomių junginių porų atveju II klasės junginiai pasižymi didesniu afiniškumu, nei I klasės junginiai, [3H]-glicino tyrime.
[0098] Viršutiniai požievio kalneliai išskirti iš žiurkių embrionų (E20 iki E21) ir patalpinti į atšaldytą ledu buferinį Hank druskos tirpalą, neturintį kalcio ir magnio (Gibco). Ląstelės mechaniškai disocijuojamos 0,05 % DNR-azės/0,3 % ovomukoido tirpale (Sigma), prieš tai 15 minučių inkubavus 0,66 % tripsino/0,1 % DNR-azės tirpale (Sigma). Disocijavusios ląstelės centrifuguojamos su 18 g 10 minučių, resuspenduojamos minimaliame pagrindinės terpės tūryje (Gibco), ir užnešamos ant poli-L-lizinu (Sigma) padengtų plastikinių Petri lėkštelių
[0099] (Falcon) 200000 ląstelių j cm2 tankiu. Ląstelės maitinamos NaHCOa/HEPES ištirpinta pagrindine terpe, papildyta 5 % fetalinio veršelio serumo ir 5 % arklio
[0100]
[0101] serumo (Gibco), ir inkubuojamos 37 °C temperatūroje 5 % CO2 ir 95 % drėgnumo atmosferoje. Neuroglijų mitozė inhibuojama su citozin-p-D-arabinofuranozidu (20 įiM, Sigma) po maždaug 7 dienų in vitro, po to terpė pilnai pakeičiama. Toliau terpė keičiama dukart per savaitę. Viršutinių kalnelių kultūra parinkta šiems eksperimentams, nes ji duoda stabilius atsakus, kas yra būtina sąlyga nuo potencialo priklausančiuose ir kinetiniuose eksperimentuose.
[0102] Be to, santykinai maži neuronai (kūno 0 15-20 fim) idealiai tinka sumažinti su buferio difuzija susijusioms problemoms.
[0103] Ryšio fiksavimo tyrimai šiuose neuronuose atlikti, naudojant poliruotą stiklo elektrodą visos gardelės modelyje kambario temperatūroje (20-22 °C), naudojant EPC-7 stiprintuvą (List). Junginiai tiriami perjungiant kanalus įprastinėje greito supylimo sistemoje su įprastiniu ištekėjimu (pasikeitimo laikas -10-20 ms). Tirpalo gardelės viduje sudėtis buvo tokia (mM): CsCI (120) TEACI (20), EGTA (10), MgCI2 (1), CaCI2 (0,2), gliukozė (10), ATP (2), cAMP (0,25); pH privedamas iki 7,3 su CsOH arba HCI. Tirpalų gardelės išorėje sudėtis buvo tokia (mM): NaCl (140), KCI (3), CaCI2 (0,2), gliukozė (10), HEPES (10), sacharozė (4,5), tetrodoksinas (TTX 3*10"4). Daugelyje eksperimentų tirpaluose buvo 1 jaM glicino. Eksperimentai glicino priklausomybės nuo pirido-ftalazindionų nustatymui atlikti su tolygiai didėjančiomis glicino koncentracijomis (1-10 fiM).
[0104] Penkios poros triciklinių piridoftalazindionų turi IC5o vidinių srovių dėl NMDA (200 |iM) atžvilgiu mažų nM srityje, ir II klasės junginiai paprastai buvo 2-3 kartus stipresni už I klasės junginius (žiūr. 14a lentelę). Stipriausi iš jų buvo Mrz 2/502 ir Mrz 2/514. Šis efektas pasireiškia glicino-B surišimo vietoje, kas parodoma lygiagrečiu pasislinkimu atsako į koncentraciją kreivėse, esant didėjančiai glicino koncentracijai. Tokiu būdu, junginio Mrz 2/502 Kb, įvertintos pagal Čengo-Prusovo priklausomybę, turėjo panašias reikšmes glicinui 1, 3, ir 10 |iM (80, 124 ir 118 nM, atitinkamai. Be to, Mrz 2/501 ir 2/502 įtaka nepriklauso nuo potencialo. Visi tirti junginiai buvo maždaug 3-10 kartų stipresni stacionarios būklės srovių atžvilgiu, negu piko srovių atžvilgiu. Cholino dariniai buvo panašaus stiprumo, kaip ir laisvos rūgštys in vitro sąlygose (14b lentelė).
[0105] Priešingai, trys iš šių stiprių glicino-B antagonistų buvo tik labai silpni antagonistai vidinių srovių dėl AMPA (100 j^M) atžvilgiu. Mrz 2/502, 2/514 ir 2/516 IC50 reikšmės AMPA indukuotų srovių atžvilgiu buvo, atitinkamai, 25, 73 ir 18 jiM, bet jie buvo visiškai neaktyvūs plato srovių atžvilgiu, visos IC50 >100 įiM (14a lentelė). Toks veikimo pobūdis, nors ir labai silpnas, yra tipiškas konkurenciniams AMPA receptorių antagonistams, kurie pirmenybiškai blokuoja piko nedesensibilizuotą būklę, receptoriaus mažo afiniškumo būklę
[0106] (žiūr. Parsons C.G., Gruner R., Rozental J. (1994): Neuropharmacology 33, p. 589-604).
[0107]
[0108] Kortikalinių neuronų išskyrimas vyko panašiai, kaip aprašyta ryšio fiksavimo eksperimentuose, išskyrus tai, kad naudoti žiurkių 17-19 dienų nėštumo embrionai. Neuronai paskleisti 24 duobučių plokštelėje (Greiner), padengtoje poli-L-lizinu, 300000 ląstelių į duobutę tankiu. Ląstelės kultivuojamos modifikuotoje Dulbeko terpėje (DMEM, GIBCO), papildytoje kaitinant inaktyvuotu fetaliniu veršelių serumu (GIBCO). Kultūra laikoma 37 °C temperatūroje ir 5 % C02 atmosferoje. Terpė pirmą kartą pakeičiama po savaitės, o po to kas trys dienos pusė terpės pakeičiama šviežia. Eksperimentams naudota 17 dienų kultūra.
[0109] Kontaktas su EAA atliktas MEM-N2 terpėje be serumo (Bottenstein J.E., Sato G.H. (1979): Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, p. 514-517), turinčioje 0,5 mM NMDA/1 nM glicino ir vaisto, kuris tiriamas. Prieš pridedant NMDA, ląstelės 15 min. Inkubuojamos su vaistu ir 1 j.iM glicino. Po 24 vai. citotoksiniai efektai tiriami morfologiškai, naudojant fazių kontrasto mikroskopą, ir kiekybiškai įvertinami biochemiškai pagal LDH emanaciją.
[0110] LDH aktyvumas supernatante po 24 vai. nustatytas Vrublevskio ir La Due metodu (VVroblevski F., La Due J.S. (1955): Soc. Exp. Biol. Med. 90, p. 210). Trumpai, 0,1 ml supernatanto kambario temperatūroje pridedama j natrio fosfatinio buferio 0,9 ml (pH 7,5), turinčio natrio piruvato (22,7 mM) ir NADH (0,8 mg/10 ml). Piruvato virtimas į laktatą užregistruojamas po 10 minučių, matuojant optinį tankį ties 340 nm Kontron spektrofotometru.
[0111] Pilnų atsako priklausomybės nuo kancentracijos kreivių šiuo metu dar neturime. Tačiau, Mrz 2/501 ir Mrz 2/502 žemos įiM koncentracijos veikia kaip efektyvūs neuroprotektoriai in vitro, ir šiuo požiūriu Mrz 2/502 atrodo stipresnis (žiūr. 15 lentelę).
[0112] Tikslas - įvertinti tirtųjų agentų antagonistines savybes NMDA receptorių atžvilgiu, įvertinant antispazminius efektus. Be to, naudojant inhibitorių, probenicidą, dar buvo įvertintas organinių rūgščių transportuojantis vaidmuo, pašalinant iš smegenų tiriamus agentus.
[0113] Baltųjų Šveicarijos pelių patinėliai (19-21 g), patalpinti po 10-15 narvelyje, buvo naudoti NMDA letaliniam testui (Leander J.D., Lavvson R.R., Ornstein P.L., Zimmerman D.M. (1988): Brain Res. 448, p. 115). Pentilentetrazolo (PT2) indukuotoms konvulsijoms naudoti baltųjų Šveicarijos pelių patinėliai (25-34 g), patalpinti po 40 narvelyje (58x38x20 cm), o maksimalaus elektrošoko ir motorinio pakenkimo tyrimuose naudotos NMR pelių patelės (18-28 g), patalpintos po 5 narvelyje. Visi gyvuliukai buvo laikomi ad libitum su vandeniu ir maistu, sudarant 12 vai. šviesos-tamsos ciklą (šviesa įjungiama 6 vai. ryto), kontroliuojamoje temperatūroje (20 ± 0,5 °C). Visi eksperimentai atlikti tarp 10 vai. ryto ir 5 vai. popiet. Tiriami junginiai įvedami intraperitoniškai 15 min. prieš konvulsijų sukėlimą, jei nenurodoma kitaip (žiūr. Žemiau). Mrz 2/502 ištirpintas druskos tirpale, pridėjus NaOH. Dauguma kitų agentų ištirpinti tokiame tirpiklyje: 0,606 g Tris, 5,0 g gliukozės, 0,5 g Tvveen 80, 95 ml vandens. Cholino ir tetrametilamonio druskos ištirpintos distiliuotame vandenyje.
[0114] Tiriant NMDA indukuotas konvulsijas pelėse, dozės - atsako priklausomybė NMDA pirmąsyk atlikta siekiant nustatyti ED97 dozę, kuri po to buvo naudota tiriant antagonistines savybes. Įvedus ED97 NMDA dozę, gyvuliukai patalpinti į mažą narvelį (20x28x14 cm) ir stebimi 20 minučių. Mirtis po kloninių konvulsijų ir toninių priepuolių buvo farmakologinė baigtis.
[0115] Pentilentetrazolas įvestas intraperitoniškai 90 mg/kg doze. Po to 30 minučių vertinamas bendrų tonių konvulsijų buvimas, kadangi šis parametras yra jautresnis NMDA receptorių antagonistams negu kloninės konvulsijos. Farmakologinė baigtis skaičiuojama , kai užpakalinės galūnės nevalingai įsitempia išsitiesdamos.
[0116] MES (100Hz, šoko trukmė 0,5 s, šoko intensyvumas 50 mA, impulso trukmė 0,9 ms, Ugo Basile) taikomas per ragenos elektrodus. Vertinamas toninių konvulsijų buvimas (toninis užpakalinių galūnių ištempimas su minimaliu kampu kūno atžvilgiu 90°). Papildomuose eksperimentuose 30 min. prieš tiriamų junginių jvedimą eksperimentinėms pelėms suleidžiama probenicido (200 mg/kg), siekiant įvertinti organinės rūgšties transporto vaidmenį eliminavime (veikimo trukmė). Tikslas buvo gauti visų parametrų ED50 reikšmes, panaudojant Litčfildo Vilkoksono (Litchfield J.T., Wilcoxon F.
[0117] (1949): J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, p.99) testą kiekybiniam atsako į dozę įvertinimui.
[0118] Iš visų tirtų junginių tik keturi junginiai, visi iš II klasės, buvo efektyvūs MES teste įvedus juos intraperitoniškai (Mrz 2/499, Mrz 2/502, Mrz 2/516 ir Mrz 2/514, žiūr. 16a lentelę). Atitinkami I klasės junginiai buvo neaktyvūs. Panašu,
[0119] kad keturi junginiai turi labai trumpus gyvavimo laikus in vivo. PTZ testas pasirodė kaip jautresnis modelis glicino-B antagonistų, įvestų intraperitoniškai, aktyvumui, ir iš tikrųjų, tie patys II klasės junginiai buvo aktyvūs esant 2-4 kartus mažesnėms dozėms, kai I klasės junginiai liko neaktyvūs (16a lentelė).
[0120] Tų pačių N-oksidų darinių cholino druskos (II struktūra) pasižymėjo aiškiai išreikštu antikonvulsiniu aktyvumu visuose trujuose modeliuose, tuo tarpu jų ne N-oksidų dariniai buvo arba neaktyvūs, arba silpni (16b lentelė). Be to, atrodo, kad cholino druskos pasižymi ilgesniu veikimo laiku. Probenicido injekcijos žymiai pratęsė visų tirtų agentų antikonvulsinio veikimo trukmę. Pavyzdžiui, 2/514 ir 2/570 gyvavimo puslaikiai, nesant probenicido, buvo atitinkamai apie 40 ir 80 minučių. Įvedus probenicido, gyvavimo puslaikiai pailgėjo atitinkamai iki 180 ir 210 minučių. Tokiu būdu, atrodo, kad organinių rūgščių transportas kraujagysliniame rezginyje iš smegenų vaidina svarbų vaidmenį dėl tirtų junginių trumpos veikimo trukmės. Naudota probenicido dozė (200 mg/kg) neduoda jokio nepriklausomo efekto MES indukuotų konvulsijų per se atžvilgiu.
[0121]
[0122] Keturi II klasės junginiai - Mrz 2/499, 2/501, 2/514 ir 2/516 yra glicino-B antagonistai in vitro ir pasižymi daug geresniu in vivo sisteminiu ir/arba CNS prieinamumu negu atitinkami I klasės junginiai (Mrz 2/585, 2/501, 2/503 ir 2/519). Patekimas į CNS yra pagrindinė beveik visų iki šiol surastų glicino-B antagonistų problema, bet ši nauja junginių klasė apeina tokią pagrindinę kliūtį ir, atitinkamai, yra terapiškai reikšmingi glicino-B antagonistai.
[0123] Pagal metodikas, aprašytas čia aukščiau, pagamintos junginių 5, 6, 7, 8, 9 ir 10 prisijungimo druskos su ketvirtiniais aminais (pavyzdžiui, 4-tetrametilamonio, 4-tetraetilamonio druskos), ketvirtiniais aminoalkoholiais (pavyzdžiui, cholino), arba ketvitinėmis aminorūgštimis (pavyzdžiui, N,N,N-trimetilserino druskos). Cholino ir 4-tetrametilamonio druskos žymiai pagerina bioprieinamumą, ir joms teikiama pirmenybė.
[0124] Šio išradimo junginiai gali būti jtraukti j farmacines kompozicijas, susidedančias iš farmaciškai priimtino nešiklio arba skiediklio ir aktyvaus šio išradimo junginio. Tokios kompozicijos gali būti skiriamos gyvūnui, ypač žmogui, peroraliniu arba parenteraliniu būdu. Pavyzdžiui, kieti preparatai arba farmacinės kompozicijos peroraliniam įvedimui gali būti kapsulių, tablečių, piliulių, miltelių arba granulių pavidale. Tokiose kietose farmacinėse kompozicijose aktyvi medžiaga arba jos provaistas yra sumaišytas su mažiausiai vienu farmaciškai priimtinu skiedikliu arba nešikliu, tokiu kaip cukrašvendrių cukrus, laktozė, krakmolas, talkas arba sintetinė ar natūrali derva, rišikliu, tokiu kaip želatina, lubrikantu, tokiu kaip natrio stearatas ir/arba dezingruojančiu agentu, tokiu kaip natrio bikarbonatas. Kad būtų įgyvendintas sulėtinto atpalaidavimo efektas, į farmacinę kompoziciją gali būti įjungta medžiaga, tokia kaip hidrokoloidas arba kitas polimeras. Gali būti pridėta papildomų medžiagų, tokių kaip lubrikantai arba buferiai, kaip įprasta šioje srityje. Jei norima, tabletės, piliulės arba granulės gali būti padengtos enterine danga. Skysčiai peroraliniam vartojimui gali būti liposomų, emulsijų, tirpalų arba suspensijų, turinčių įprastai vartojamų inertinių skiediklių , tokių kaip vanduo, pavidale. Be to, tokios skystos farmacinės kompozicijos gali turėti drėkinančių, emulsuojančių, disperguojančių arba aplamai paviršinio aktyvumo agentų, taip pat saldinančių, skonį arba aromatą suteikiančių medžiagų.
[0125] Tinkami parenteraliniam įvedimui preparatai, be kitų, gali' būti sterilūs vandeniniai arba nevandeniniai tirpalai, suspensijos, liposomos arba emulsijos.
[0126] Šiai farmacinės kompozicijos pateikimo formai jau žinomos papildomos medžiagos, kurių yra daugybė, gali būti vartojamos kaip farmaciškai priimtinas skiediklis arba nešiklis.
[0127] Priklausomai nuo norimos įvedimo formos ir gydymo trukmės, tiksli aktyvaus junginio dozė šio išradimo preparatuose gali varijuoti, ypač priklausomai nuo to, kaip mano esnt tinkamu gydantis gydytojas ar veterinaras.
[0128] Šio išradimo aktyvus agentas jį skiriant paprastai gali būti derinamas su kitais farmaciškai aktyviais agentais.
[0129] Šio išradimo kompozicijose aktyvaus agento ar agentų dalis gali varijuoti plačiose ribose, reikia tik, kad šio išradimo aktyvus ingredientas ar jo provaistas sudarytų efektyvų kiekj, t.y., kad tinkama efektyvi dozė būtų gauta sutinkamai su naudojama dozavimo forma. Paprastai tuo pat metu ar netgi toje pačioje farmacinėje kompozicijoje ar vaisto formoje skiriamos kelios dozavimo formos , taip pat keli individuoalūs aktyvūs junginiai.
[0130] Kaip nurodyta anksčiau, šio išradimo junginiai tinka, ypač farmacinių kompozicijų ar jų vaisto formų pavidale, peroraliniam arba parenteraliniam įvedimui, o tikslus individualus dozavimas, taip pat paros dozės kiekvienu konkrečiu atveju nustatomos pagal gerai žinomus medicinos ir/arba veterinarijos principus, sutinkamai su gydančiojo gydytojo ar veterinaro nurodymais.
[0131] Be peroralinio ir parenteralinio įvedimo, gali būti vartojamas rektalinis ir/arba intraveninis; paprastai dozės būna žymiai mažesnės, kai naudojamas parenteralinis įvedimas, nors pirmenybė teikiama peroraliniam įvedimui. Tinka maždaug 1-3 gramų kiekis per dieną kartotinių arba padalintų dozių pavidale. Platesnės ribos, maždaug 0,5-10 gramų per dieną, taip pat gali būti naudojamos, priklausomai nuo indivdualaus atvejo aplinkybių. Tačiau nustatyta, kad 500 mg aktyvaus junginio ypač tinka naudoti tabletėse, individuali dozė gali varijuoti nuo maždaug 200 iki 1000 mg, ir 500 mg kiekis, pasiūlytas naudoti tabletėmis, gali būti įvedamas peroraliai, pavyzdžiui, 1-3 kartus per dieną. Nereikia sakyti, kad gali būti įvedama daugiau nei viena tabletė vienoje dozėje, jei to reikia pasiekti aukščiau nurodytą siūlomą dienos peroralinio įvedimo kiekį 1-3 g per dieną.
[0132] Kaip jau minėta, šio išradimo junginys arba jo provaistas gali būti skiriamas gyvūnui, įskaitant žmogų, bet kokiu iš daugelio būdų, pavyzdžiui, peroraliai kapsulių arba tablečių pavidale, parenteraliai sterilių tirpalų arba suspensijų pavidale, arba implantuojant po oda, ir kai kuriais atvejais intraveniniu būdu sterilių tirpalų pavidale. Kiti įprastiniai jvedimo būdai yra per odą, po oda, per gleivinę, į raumenis ir intraperitoniškai, ir konkretus jvedimo būdas kaip įprasta, bus parinktas gydančiojo gydytojo arba veterinaro.
[0133] Suprantama, kad šis išradimas neapsiriboja aprašytais konkrečiais junginiais, kompozicijomis, metodais ar būdais, kadangi daug jų modifikacijų ir pakeitimų bus tuoj pat akivaizdūs šios srities specialistui, susijusiam su šiuo išradimu, dėl to išradimas suprantamas kaip apribotas tik tokia apimtimi, kurią teisiškai apibrėžia pridedama apibrėžtis.
1. Junginys, parinktas iš piridilftalazindionų, turinčių formulę
2. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad druska yra parinkta iš jo cholino ir 4-tetrametilamonio druskų.
3. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis yra parinktas iš grupės, susidedančios iš:4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do, 7,8-dichlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktų farmaciškai priimtinos druskos.
4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do, 7,8-dichlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktų farmaciškai priimtinos druskos.4. Junginys pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis yra parinktas iš grupės, susidedančios iš:4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7,8-dichlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihid ropiridazino-[4,5-b]-chino!ino 5-oksido cholino druskos.
4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7,8-dichlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihid ropiridazino-[4,5-b]-chino!ino 5-oksido cholino druskos.5. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad turi savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį junginio pagal 1 punktą kartu su farmaciškai priimtinu nešikliu arba skiedikliu.
6. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad turi savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį junginio pagal 1 punktą jo cholino druskos pavidale kartu su farmaciškai priimtinu nešikliu arba skiedikliu.
7. Farmacinė kompozicija pagal 5 punktą besiskirianti tuo, kad turi savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį junginio pagal 1 punktą, parinkto iš grupės, susidedančios iš:4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do, 7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktų farmaciškai priimtinos druskos.
4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do, 7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktų farmaciškai priimtinos druskos.8. Farmacinė kompozicija pagal 6 punktą, besiskirianti tuo, kad turi savo sudėtyje kaip aktyvų ingredientą efektyvų glicinui-B antagonistinį kiekį junginio pagal 1 punktą, parinkto iš grupės, susidedančios iš:4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos.
4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,8-chlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos.9. Junginys pagal 1 punktą, skirtas neurologinių susirgimų, susijusių su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės neurotransmisijos sutrikimais, gydymui.
10. Junginio pagal 1 punktą cholino druska, skirta neurologinių susirgimų, susijusių su ekscitotoksiškumu ir glutamaterginės neurotransmisijos sutrikimais, gydymui.
11. Junginys pagal 9 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis yra parinktas iš grupės, susidedančios iš:4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do, 7,8-dichlor-4-hid roksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktųfarmaciškai priimtinos druskos.
4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do,8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do, 7,8-dichlor-4-hid roksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido,ir iš bet kurio iš aukščiau pateiktųfarmaciškai priimtinos druskos.12. Junginys pagal 10.punktą, besiskiriantis tuo, kad jis yra parinktas iš grupės, susidedančios iš:4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos, 8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos.
4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido choli-no druskos,8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos,8-brom-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksi-do cholino druskos, 8-fluor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7,8-dichlor-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos,7-brom-8-chlor-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos, ir7-chlor-8-brom-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-chinolino 5-oksido cholino druskos.13. 4-Hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazin-[4,5-b]-chinolino 5-oksido (5) gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad jis apima chinolin-2,3-dimetildikarboksilato 1-oksido (3) virtimo į hidrazino druską (4) stadiją, reaguojant su hidrazino hidratu, ir hidrolizuojant susidariusią hidrazino druską (4), kad gautų norimą 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazin-[4,5-b]-chinolino 5-oksidą (5).
14. Būdas pagal 13 punktą, besiskiriantis tuo, kad tuo būdu gautą 4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazin-[4,5-b]-chinolino 5-oksidą (5) paverčia į jo cholino druską reakcijoje su cholino hidroksidu.