[LT] Šis išradimas yra pagrindinai susijęs su nauju, lipazės katalizuojamu peresterinimu, skirtu labai didelio optinio grynumo pakeistai izoksazolin-5-ilacto rūgščiai gauti iš esterinto pakeisto izoksazol-5-ilacetato stereoizomerų mišinio. Šie produktai yra tinkami vaistinių junginių, ypatingai junginių, sirtų trombolitiniams sutrikimams gydyti, sintezėje ir agrokultūrinių produktų sintezėje.
[EN] The present invention relates generally to a novel lipase catalysed transesterification for preparation of substituted isoxazolin-5-yl acetic acid in high optical purity from a stereoisomeric mixture of an esterified substituted isoxazolin-5-yl acetate. The products are useful in the synthesis of compounds for pharmaceuticals, especially the treatment of thrombolytic disorders, and agricultural products.
[0001] Šis išradimas iš esmės yra susijęs su labai didelio optinio grynumo pakeistos izoksazolin-5-ilacto rūgšties nauju gavimo būdu iš esterinto pakeisto izoksazolin-5-ilacetato stereoizomerų mišinio. Šie produktai yra tinkami vaistinių junginių, ypatingai junginių skirtų trombolitiniaims sutrikimams gydyti, sintezėje ir agrokultūrinių produktų sintezėje.
[0002] Prochiralinių ir raceminių junginių fermentinis perskyrimas tapo reikšminga ir plačiai paplitusia metodika (C.H. Wong, G. M. VVhitesides, Enzymes in Synthetic Organic Chemistiy, 1994, Pergamon Press, New York), Yra daugybė būdų, tinkančių molekulių raceminių arba diastereomerinių mišinių perskyrimui, kurie apima esterinimą, deesterinimą, acilinimą, deacilinimą, hidrolizę ir redukciją. Cheminis virsmas gali vykti arba norimame, arba nepageidaujamame izomere tiek, kiek ši reakcija yra selektyvi tam izomerui. Paprastai chiralinė molekulė gali būti gaunama, paverčiant vieną iš mišinyje esančių enantiomerų arba diastereomerų, panaudojant tinkamą fermentą. Tačiau paprasti fermentiniai perskyrimai yra apribojami tuo, kad gaunama daugiausiai 50 % optiškai gryno produkto išeiga, skaičiuojant pagal raceminę pradinę medžiagą. -Čia reikia arba atmesti nereikalingą izomerą, arba ji racemizuoti vėl j mišinj, panašų j pradinį mišinj. Tada vėl galima vykdyti fermentini šio racemizuoto mišinio skirstymą tomis pačiomis sąlygomis. Priimant, kad virsmo ir išgavimo išeiga yra 100 %, pradinis mišinys gali būti paverčiamas i norimą izomerą per laiką, nusakomą iteraciniu būdu, kai kiekvienoje stadijoje paverčiama 50 % šios stadijos pradinės medžiagos. Bendra išeiga asimptotiškai artės prie 100 %, jeigu procesas bus tęsiamas be galo ilgai. Tačiau praktikoje tai yra retai galima dėl varginančio operacijų kartojimo ir išskyrimo metu patiriamų nuostolių.
[0003] Izoksazolinai yra svarbūs farmaciškai aktyvių ir žemės ūkiui tinkamų aktyvių medžiagų komponentai. Publikuotais aktyvių izoksazolinų arba izoksazolinų gavimo būdų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) US 4,970,297 (transgli'utaminazės inhibitoriai), US 5,489,562 (herbicidai), US 4,256,898 (priešvėžinės ir priešmikrobinės medžiagos), US 4,933,464, US 4,952,700, PCT tarptautinė publikacija WO 95/14681 (priešuždegiminiai agentai), PCT tarptautinė publikacija WO 95/14680 (priešuždegiminiai agentai) ir PCT tarptautinė publikacija WO 95/24398 (TNF išlaisvinimo inhibitoriai).
[0004] Junginys (X) yra geras trombocitų glikoproteino llb/llla fibrinogeno receptoriaus komplekso antagonistas.
[0005] Junginys (X) yra tinkamas trombocitų agregacijos inhibavimui, kaip trombolitikas, ir/arba trombolitinių sutrikimų gydymui. Junginio (X) gavimas buvo aprašytas tokiuose šaltiniuose: U.S. patentas 5,446,056, čia duodamas kaip literatūros šaltinis, PCT tarptautinė publikacija WO 95/14683, PCT tarptautinė publikacija WO 96/38426 ir Zhang et al. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 4455-4458. Šiuose dokumentuose rašoma, kad junginys (R)-(lla) vaidina pagrindinį vaidmenį, kaip tarpinis junginys bendroje junginio (X) sintezėje.
[0006] Paplitęs junginio (R)-(lla) sintezės kelias susideda iš izoksazolino izobutilo oksoesterių fermentinio perskyrimo. Po to nehidrolizuotas esteris racemizuojamas antroje atskiroje stadijoje ir vėl atliekama jo fermentinė hidrolizė. Šias dvi nepriklausomas reakcijas pakartojus keletą kartų, pagaliau pasiekiamas didelis virsmo į junginj (R)-(lla) laipsnis, bet čia reikalinga daug kartų išskirti produktus ir įvykdyti atskiras reakcijas (A schema).
[0007]
[0008] Išradime sujungiami du procesai: chiralinio centro prie beta-anglies atomo racemizacija į tioesterj ir tioesterio fermentinė hidrolizė. Šis sujungimas j dinaminio perskyrimo procesą sudaro išradimo vertingumą. Šiame išradime atskleidžiamas karboksirūgščių, kaip pakaitą beta-padėtyje turinčių izoksazolino žiedą, perskyrimo būdas. Tiksliau, šiame išradime pateikiamas geresnis būdas junginiui (R)-(lla) - svarbiam tarpiniam produktui junginio (X) sintezės sekoje - pagaminti.
[0009] Galimybė atlikti raceminių molekulių fermentini perskyrimą ir gauti didesnę nei 51 % išeigos konversiją Į optiškai gryną produktą be būtinybės atlikti atskirą racemizacijos stadiją yra labai svarbi. Šis būdas taupo laiką ir pinigus, nes jis sumažina skaičių reakcijų, kurias reikėtų atlikti, norint gauti chiralinj produktą. Šis būdas sumažina pagaminimo laiką, produkto kainą, minimizuojant manipuliacijų skaičių bei naudojamų reagentų/tirpiklių kiekį ir padidina išeigą.
[0010] Šiame išradime pateikiami nauji pakeistos izoksazolin-5-ilacto rūgšties, blokuotos kaip tioesteris ir turinčios chiralinį centrą beta-padėtyje nuo karboksigrupės, kuris yra izoksazolino žiedo dalis, stereoizomerinių mišinių perskyrimo būdai. Šiame išradime atskleidžiamas pranašesnis (II) formulės junginių gavimo būdas, kuriame (I) formulės junginių stereoizomerinio mišinio fermentinė hidrolizė yra sujungta su (I) formulės junginių racemizacija prie
[0011] I— ■ -TU I -t U beta-anglies tioesterio grupės atžvilgiu, tokiu būdu gaunant didesnę nei 80 % chiralinių izomerų, tokių kaip junginiai (I), mišinio konversiją j produktą (II), kurio optinis grynumas yra didesnis nei 90 %. Konkrečiau, šiame išradime aprašomas pranašesnis junginio (R)-(lla) - svarbaus tarpinio junginio junginiui (X) sintetinti - gavimo būdas, kuriame (la) junginio enantiomerų mišinio fermentinė hidrolizė yra sujungta su (la) junginio racemizacija, tokiu būdu gaunant didesnę nei 85 % (la) junginio chiralinių izomerų mišinio konversiją i produktą (R)-(lla), kurio optinis grynumas yra didesnis nei 90 %.
[0012] Šiame išradime pateikiami labai didelio optinio grynumo pakeistų izoksazolin-5-ilacto rūgščių, kurių formulė (R)-(ll) arba (S)-(ll), gavimo būdai iš pakeisto izoksazolin-5-ilacetato tioesterio stereoizomerų mišinio. Tokie junginiai yra tinkami vaistinių junginių, ypatingai junginio (X), ir junginių, skirtų trombolitiniaims sutrikimams gydyti, sintezėje, bei agrokultūrinių produktų sintezėje.
[0013] [1] Šiame išradime pateikiamas optiškai aktyvių junginių, kurių formulės (R)-(ll) arba (S)-(ll):
[0014] R2 yra -H, halogenas, -CF3, -CN, -N02, -OH, CrC3-alkoksigrupė, C1-C10-alkilkarbonilas, -N(R12)R13, -CHO, -C02H, -C(=0)R5a, -CONR5R5a,
[0015] 5-10-naris heterociklinis žiedas, turintis 1 -4 N, O arba S heteroatomus;
[0016] šis heterociklinis žiedas gali būti sotus, dalinai sotus arba pilnai nesotus, kuriame yra 0-2 pakaitai R4,
[0017] peptidas;
[0018] R3 yra vandenilis, Ci-C4-alkilas, turintis 0-3 pakaitus R4, arba fenilas,
[0019] turintis 0-3 pakaitus R4;
[0020] R4 yra pasirinktas iš H, Ci-C10-alkilo, -OH, CrCio-alkoksigrupės, -N02,
[0021] Ci-C10-alkilkarbonilo, -N(R,2)R13, -CN, halogeno, -CF3, -CHO, -C02H,
[0022] -C(=0)R5a, -CONR5R5a, -C(=NH)NR5R5a, -0C(=0)R5a, -OR5a, -0C(=0)NR5RSa, -0CH2C02H, -CO2CH2CO2H, -NR5aC(=0)R5a, -NR5aC(=0)0H, -NR5aC(=0)NR5R5a, -NR5aS02NR5R5a, -NR5aS02R5, -SR5a, -S02R5a, -S02NR5R5a, C2-C6-alkenilo, C3-Circikloalkilo, C4-Cir cikloalkilmetilo arba C6-C10-arilo, kuriame pakaitais gali būti 1-3 grupės, pasirinktos iš halogeno, CrC4-alkoksigrupės, CrC4-alkilo, -CF3, -S(0)2Me arba -NMe2;
[0023] R5 yra pasirinktas iš H, CrCs-alkilo, C2-C6-alkenilo, C3-Cn-cikloalkilo,
[0024] C4-Cn-cikloalkilmetilo, Cs-Ci0-arilo, C7-Cn-arilalkilo arba CrCi0-alkilo,
[0025] kuriame yra 0-2 pakaitai R6;
[0026] R5a yra pasirinktas iš H, CrCs-alkilo, C2-C6-alkenilo, C3-Circikloalkilo,
[0027] C4-Ci 1-cikloalkilmetilo. C6-Cio-anlo, C7-Cn-arilalkilo arba Ci-C,0-alkilo,
[0028] kuriame yra 0-2 pakaitai R6;
[0029] kitu atveju, R5 ir R5a kartu paimti gali būti 3-azabiciklononilas, 1-piperidinilas,
[0030] 1-morfolinilas arba 1-piperazinilas, ir kiekviename iš jų, kaip pakaitai,
[0031] • gali būti CrC6-alkilas, C6-Cio-arilas, C7-Cn-arilalkilas, Ci-C6-alkilkarbonilas, C3-C7-cikloalkilkarbonilas, Ci-C6-alkilsulfonilas arba
[0032] C6-Ci0-arilsulfonilas;
[0033] R6 yra pasirinktas iš H, Ci-C10-aIkilo, hidroksilo, CrCio-alkoksigrupės,
[0034] nitrogrupės, CrCio-alkilkarbonilo arba -N(R12)R13;
[0035] R12 ir R13 yra nepriklausomai pasirinkti iš H, metilo arba etilo; arba jų druskų gavimo būdas,
[0036]
[0037] -C(R10)2-C(Rl0b)2(R1Qc),
[0038] -C(R1°)2-C(Rl0b)2-C(R10c)3,
[0039] -C(R10)2-C=C(R10c),
[0040] -ChC(R10c),
[0041] R10 yra H arba F;
[0042] R10a yra pasirinktas iš H, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CF3, -CF2CF3, -OCH3, -OCH2CH3i -OCH2CH2CH3, -SCH3t -SCH2CH3i -SCH2CH2CH3 ir ciklopropilo;
[0043] R,0c bet kuriuo atveju yra nepriklausomai pasirinktas iš H, halogeno, Cr C3- halogenalkilo, -OH, CrC4-alkoksigrupės, -CF3l -SCH3i -SCH2CH3i
[0044] C6-C10-arilo su 0-3 pakaitais R11 arba
[0045] R1' yra pasirinktas iš H, halogeno, CrC4-alkilo, Ci-C3-halogena[kilo, Cr C4- alkoksigrupės, fenilo, -OH, -N02, -CN, -CF3, -S(0)2Me ir -NMe2; stereoizomerų mišinio sąveiką tinkamame tirpiklyje su tinkama lipaze, pridėjus racemizacijos agento, palaikant tinkamą bazinj pH, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė (R)-(ll) arba (S)-(ll) didesne nei 51 % išeiga ir didesnio nei 80 % optinio grynumo.
[0046] [2] Tinkamame šio išradimo įgyvendinimo variante pateikiamas junginių, kurių formulė (R)-(ll):
[0047] R2 yra fenilas su 0-3 pakaitais R4; R3 yra vandenilis; R4 yra pasirinktas iš H, CrC10-alkilo, -OH, CrC^-alkoksigrupės, -N02, CrC,o-alkilkarbonilo, -N(R12)R13, -CN, halogeno, -CF3, -CHO, -C02H, -C(=0)R5a, -C0NR5R5a -C(=NH)NR5R5a, -0C(=0)R5a, -0R5a, -0C(=0)NR5R5a, -0CH2C02H, -C02CH2C02H, -NR5aC(=0)R5a, -NR5aC( = 0)0H, -NR5aC(=0)NR5R5a, -NR5aS02NR5R5a, -NR5aS02R5, -S02R5a, -S02NR3R5a, C2-C6-alkenilo, C3-Cn-cikloalkilo, C4-Cn-cikloalkilmetilo arba C6-Ci0-arilo, kuriame kaip pakaitai gali būti 1-3 grupės, pasirinktos iš halogeno, CrC4-alkoksigrupės, C1-C4-alkilo, -CF3l -S(0)2Mearba -NMe2;
[0048] R5 yra pasirinktas iš H, CrC8-alkilo, C2-Cs-alkenilo, C3-C,,-cikloalkilo,
[0049] C4-C1rcikloalkilmetilo, C6-C10-arilo, C7-Cn-arilalkilo arba CrCio-alkilo,
[0050] kuriame yra 0-2 pakaitai R6;
[0051] R5a yra pasirinktas iš H, CrC8-alkilo, C2-Cs-alkenilo, C3-C,rcikloalkilo,
[0052] C4-Cn-cikloalkilmetilo, C6- Cio-arilo, Cr-Cn-arilalkilo arba CrCio-alkilo,
[0053] kuriame yra 0-2 pakaitai R6;
[0054] kitu atveju, R5 ir R5a kartu paimti gali būti 3-azabiciklononilas, 1-piperidinilas,
[0055] 1-morfolinilas arba 1-piperazinilas, ir kiekviename iš jų, kaip pakaitai, gali būti Ci-Ce-alkilas, C6-C10-arilas, Cj- Cn-arilalkilas, Ci- C6-alkilkarbonilas, C3-C7-cikloalkilkarbonilas, Ci-C6-alkilsulfonilas arba
[0056] C6-Oi0-arilsulfonilas;
[0057] R6 yra pasirinktas iš H, Ci-Ci0-alkilo, hidroksilo, CrC10-alkoksigrupės,
[0058] nitrogrupės, CrCio-alkilkarbonilo arba -N(R12)R13;
[0059] R12 ir R13 yra nepriklausomai pasirinkti iš H, metilo arba etilo;
[0060]
[0061] Y yra S; R1 yra -C(R1ū)2(R,0a), -C(R10)2-C(R,0b)2(R10c), -C(R10)2-C(Rl0b)2-C(R10c)3, -C(R10)2-C(R10b) = C(R10c)2, -C(R10)2-ChC(R10c), -C(R10) = C(R10b)( R10c), -C(R10) = C(R10b)-C(R10c)3l -CsC(R10c),
[0062] R10 yra H arba F;
[0063] R10a yra pasirinktas iš H, F, Cl, Br, -CH3i -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CF3, -CF2CF3, -OCH3i -OCH2CH3, -OCH2CH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3, -SCH2CH2CH3 ir ciklopropilo;
[0064] R10b yra H, F, Cl arba Br;
[0065] R10c bet kuriuo atveju yra nepriklausomai pasirinktas iš H, halogeno, Cr C3- halogenalkilo, - OH, CrC4-alkoksigrupės, - CF3, - SCH3, - SCH2CH3,
[0066] R11 yra pasirinktas iš H, halogeno, CrC4-alkilo, CrC3-halogenalkilo, C1-C4- alkoksigrupės, fenilo, -OH, -N02, -CN, -CF3, -S(0)2Me ir -NMe2; stereoizomerų mišinio sąveiką tinkamame tirpiklyje su tinkama lipaze, pridėjus racemizacijos agento, palaikant tinkamą bazinj pH, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė (R)-(ll) didesne nei 51 % išeiga ir didesnio nei 80 % optinio grynumo,
[0067] [3] Tinkamesniame šio išradimo įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla):
[0068]
[0069] -CH2-CH2-C(R10c)3,
[0070] -CH2-CsC(R10c), R10a yra pasirinktas iš H, -CH3, -CH2CH3 ir -CH2CH2CH3;
[0071] R10c bet kuriuo atveju yra nepriklausomai pasirinktas iš H, -OH, CrC4-alkoksigrupės, -NMe2l
[0072] R11 yra pasirinktas iš H, halogeno, Ci-C4-alkilo, CrC3-halogenalkilo, Ci-C4- alkoksigrupės, -OH, -N02, -CN, -CF3, -S(0)2Me ir -NMe2; stereoizomerų mišinio sąveiką tinkamame tirpiklyje su tinkama lipaze, pridėjus racemizacijos agento, palaikant tinkamą bazini pH, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė (R)-(lla) didesne nei 51 % išeiga ir didesnio nei 80 % optinio grynumo.
[0073] [23] Dar labiau tinkamame išradimo įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla):
[0074] arba jo druskos gavimo būdas,
[0075] junginio, kurio formulė (la):
[0076] R1 yra etilas, n-propilas arba n-butilas, stereoizomerų mišinio sąveiką vandenyje su lipaze Amano PS30, pridėjus racemizacijos agento trimetilamino, palaikant tinkamą pH maždaug 8,0 - 10,0 intervale, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė
[0077] [8] Antrame šio išradimo įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla) gavimo būdas, toks kaip aprašyta pirmajame Įgyvendinimo variante, bet i ji Įeina dar ir tinkamo buferio pridėjimas i tinkamą tirpikli, kad būtų palengvinamas tinkamo pH palaikymas pridedant bazės.
[0078] [13] Tinkamesniame šio išradimo antrajame Įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla), arba jo druskos gavimo būdas, apimantis junginio, kurio formulė (la):
[0079] stereoizomerų mišinio sąveiką vandenyje, kuriame yra ištirpintas tinkamas buferis, su lipaze Amano PS30, pridėjus racemizacijos agento trimetilamino, palaikant tinkamą pH maždaug 8,0 - 10,0 intervale, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė (R)-(lla), didesne nei 51 % išeiga ir didesnio nei 80 % optinio grynumo.
[0080] [14] Trečiame šio išradimo Įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla) gavimo būdas, toks kaip aprašyta pirmajame Įgyvendinimo variante, bet j ji Įeina dar ir tinkamos nejoninės, katijoninės arba anijoninės paviršinio aktyvumo medžiagos pridėjimas j tinkamą tirpiklį.
[0081] [20] Tinkamesniame šio išradimo trečiajame įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla), arba jo druskos gavimo būdas, apimantis.junginio, kurio formulė (la):
[0082] stereoizomerų mišinio sąveiką vandenyje, kuriame yra ištirpinta tinkama nejoninė, katijoninė arba anijoninė paviršinio aktyvumo medžiaga, su lipaze Amano PS30, pridėjus racemizacijos agento trimetilamino, palaikant tinkamą pH maždaug 8,0 - 10,0 intervale, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė (R)-(lla), didesne nei 51 % išeiga ir didesnio nei 80 % optinio grynumo,
[0083] [24] Ketvirtajame šio išradimo įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla) gavimo būdas, toks kaip aprašyta pirmajame Įgyvendinimo variante, bet j jj jeina dar ir tinkamo buferio pridėjimas i tinkamą tirpikli, kad būtų lengviau palaikyti pH pridedant bazės, ir tinkamos nejoninės, katijoninės arba anijoninės paviršinio aktyvumo medžiagos pridėjimas j tinkamą tirpiklį,
[0084] [25] Tinkamesniame šio išradimo ketvirtajame įgyvendinimo variante pateikiamas junginio, kurio formulė (R)-(lla), arba jo druskos gavimo būdas, apimantis junginio, kurio formulė (la):
[0085] stereoizomerų mišinio sąveiką vandenyje, kuriame yra ištirpintas tinkamas buferis ir tinkama nejoninė, katijoninė arba anijoninė paviršinio aktyvumo medžiaga, su lipaze Amano PS30, pridėjus racemizacijos agento trimetilamino, palaikant tinkamą pH maždaug 8,0 - 10,0 intervale, pridedant bazės arba rūgšties, susidarant junginiui, kurio formulė (R)-(lla), didesne nei 51 % išeiga ir didesnio nei 80 % optinio grynumo.
[0086] Čia aprašyti junginiai gali turėti asimetrinius centrus. Jeigu nenurodyta kitaip, šis išradimas apima visas chiralines, diastereomerines ir racemines formas. Čia aprašytuose junginiuose gali būti daug olefininių, C=N dvigubų ryšių izomerų, ir šis išradimas apima visus tokius stabilius izomerus. Čia aprašyti amidinai gali egzistuoti kaip tautomerinės formos, ir šis išradimas apima visus tokius stabilius tautomerus. Reikia suprasti, kad šio išradimo junginiuose, apart chiralinio centro, esančio beta padėtyje tioesterio atžvilgiu (I) formulės junginiuose, gali būti asimetriškai pakeistų anglies atomų, ir tokie junginiai gali būti išskirti optiškai aktyvių arba raceminių formų pavidalu. Išradimas apima struktūros visas chiralines, diastereomerines, racemines ir visas geometrinių izomerų formas, jeigu konkreti stereochemija arba izomero forma nėra nurodyta.
[0087] Čia naudojamas terminas "stereoizomerų mišinys" reiškia optiškai aktyvių junginių mišinį, ir šie optiškai aktyvūs junginiai gali turėti vieną arba daugiau chiralinių centrų, pavyzdžiui, yra enantiomerai arba diastereomerai. Tačiau terminas "stereoizomerų mišinys" reiškia optiškai aktyvių junginių mišinį, turintį lygius (raceminis mišinys) arba nelygius optiškai aktyvių junginių kiekius, susijusius su chiralinių centru prie pakeisto izoksazolin-5-ilacetato tioesterio beta anglies atomo, kaip parodyta (I) formulės junginiuose.
[0088] Jeigu koks nors kintamasis atsiranda daugiau nei vieną kartą kokioje nors dalyje arba kokioje nors formulėje, jo reikšmė kiekvienu atveju yra nepriklausoma nuo jo reikšmės bet kuriuo kitu atveju.
[0089] Pakaitų ir/arba kintamųjų deriniai yra leistini tik tokie, jeigu šie deriniai duoda stabilius junginius. Stabiliu junginiu arba stabilia struktūra čia laikomas junginys, kuris yra pakankamai atsparus išskyrimui iš reakcijos mišinio iki tinkamo grynumo laipsnio ir pavertimui j veiksmingą terapinį agentą.
[0090] Čia naudojamas terminas "pakeistas" reiškia, kad bet koks vienas arba daugiau vandenilių prie nurodyto anglies atomo yra pakeisti kuria nors grupe iš nurodyto grupių rinkinio, su sąlyga, kad nurodyto atomo normalus valentingumas nėra viršytas, ir kad toks pakeitimas duoda stabilų junginį.
[0091] Jeigu pakaitas yra keto grupė (t.y. =0), tada prie tokio atomo yra pakeisti 2 vandeniliai,
[0092] Čia naudojamas terminas "alkilas" apima ir šakotosios, ir tiesiosios grandinės sočiųjų angliavandenilių grupes, turinčias nurodytą anglies atomų skaičių; pavyzdžiui, "Cr08" reiškia alkilą, turinti nuo 1 iki 8 anglies atomų, t.y. metilą, etilą, n-propilą, i-propilą, n-butilą, i-butilą, s-butilą, t-butilą, pentilą, heksilą, heptilą, oktilą ir jų šakotuosius izomerus, Laikoma, kad "halogenalkilas" apima ir šakotosios, ir tiesiosios grandinės sočiųjų afifatinių angliavandenilių grupes, turinčias nurodytą anglies atomų skaičių, kuriose, kaip pakaitas, yra vienas arba daugiau halogenų (pavyzdžiui, -CVFW, kurioje v = nuo 1 iki 3, o w = nuo 1 iki (2v+1)); "alkoksigrupė" reiškia nurodyto anglies atomų skaičiaus alkilo grupę, prijungtą per deguonies tilteli. Laikoma, kad "alkilkarbonilas" apima nurodyto anglies atomų skaičiaus alkilo grupę, prijungtą per karbonilo grupę prie junginio liekanos nurodytoje padėtyje. Laikoma, kad "alkilsulfonilas" apima nurodyto anglies atomų skaičiaus alkilo grupę, prijungtą per sulfonilo grupę (-S02-) prie junginio liekanos nurodytoje padėtyje.
[0093] Laikoma, kad "cikloalkilas" apima sočias žiedines grupes, Įskaitant mono-, bi- arba policiklines žiedines sistemas, tokias kaip ciklopropilas, ciklobutilas, ciklopentilas, cikloheksilas, cikloheptilas, ciklooktilas ir adamantilas; o "bicikloalkilas" apima sočias biciklines žiedines grupes, tokias kaip [3.3.0]biciklooktanas, [4.3.0]biciklononanas, [4.4.0]biciklodekanas (dekalinas), [2.2.2]biciklooktanas ir 1.1. Terminas "cikloalkilalkilas" reiškia cikloalkilo grupę, prijungtą per alkilo tiltelj, pavyzdžiui, ciklopropilmetilas, ciklopropiletilas, ciklobutilmeti-las, ciklopentilmetilas, cikloheksilmetilas ir 1.1. Laikoma, kad ' cikloalkilkarbonilas" apima nurodyto anglies atomų skaičiaus cikloalkilo grupę, prijungtą per karbonilo grupę prie junginio liekanos nurodytoje padėtyje.
[0094] Laikoma, kad ,;alkenilas" apima tiesiosios arba šakotosios konfigūracijos angliavandenilių grandines ir vieną arba daugiau nesočiųjų jungčių anglis-anglis, kurios gali būti bet kurioje stabilioje grandinės padėtyje, tokias kaip etenilas, propenilas ir pan.; o "alkinilas" apima tiesiosios arba šakotosios konfigūracijos angliavandenilių grandines ir vieną arba daugiau trigubų jungčių anglis-anglis, kurios gali būti bet kurioje stabilioje grandinės padėtyje, tokias kaip etinilas, propinilas ir pan.
[0095] Čia naudojami terminai "hal" arba "halogenas" reiškia fluorą, chlorą, bromą ir jodą; o "priešjonis" reiškia mažas, neigiamai įkrautas daleles, tokias kaip chloridas, bromidas, hidroksidas, acetatas, sulfatas ir pan.
[0096] Čia naudojami terminai "arilas" arba "aromatinė liekana" reiškia fenilą arba naftilą; terminas "arilalkilas" reiškia arilo grupę, prijungtą per alkilo tilteli, pavyzdžiui, benzilą, feniletilą ir fenilpropilą. Laikoma, kad "arilkarbonilas" apima nurodyto anglies atomų skaičiaus arilo grupę, prijungtą per karbonilo grupę prie junginio liekanos nurodytoje padėtyje. Laikoma, kad "arilsulfonilas" apima nurodyto anglies atomų skaičiaus arilo grupę, prijungtą per sulfonilo grupę (-SO2-) prie junginio liekanos nurodytoje padėtyje.
[0097] Čia naudojamas terminas "karbociklas" arba "karbociklinė liekana" reiškia bet kokį stabilų 3-7-narį monociklinį arba biciklinį, arba 7-14-narį biciklinį arba triciklinį, arba iki 26-nario policiklinį anglies atomų žiedą, ir kiekvienas toks žiedas gali būti sotus, dalinai nesotus arba aromatinis. Tokių karbociklų pavyzdžiais yra, bet jais neapsiribojama, ciklopropilas, ciklopentilas, cikloheksilas, fenilas, bifenilas, naftilas, indanilas, adamantilas arba tetrahidronaftilas (tetralinas).
[0098] Čia naudojamas terminas ,;heterociklas" arba ,:heterociklinis" reiškia stabilų 5-7-narį monociklinį arba biciklinį, arba 7-10-narį biciklinį heterociklinį žiedą, kuris yra arba sotus, arba nesotus ir kuris susideda iš anglies atomų ir 1-4 heteroatomų, nepriklausomai.pasirinktų iš grupės, susidedančios iš N, O ir S, ir šie azoto ir sieros atomai gali būti oksiduoti, o azoto atomas gali būti kvaternizuotas, ir apima bet kokią biciklinę grupę, kurioje bet kuris iš aukščiau apibūdintų heterociklinių žiedų gali būti kondensuotas su benzeno žiedu. Šis heterociklinis žiedas gali būti prijungtas per jo galimą prijunti grupę, esančią prie bet kurio heteroatomo arba anglies atomo, kuri duoda stabilią struktūrą. Čia aprašytuose žieduose gali būti pakaitų prie anglies arba azoto atomų, jeigu susidarantis junginys yra stabilus. Tokių heterociklų
[0099] pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) 1H-indazolas, 2-pirolidonilas, 2H.6H-1,5,2-ditiazinilas, 2H-pirolilas, 3H-indolilas, 4-piperidonilas, 4aH-karbazolas, 4H-chinolizinilas, 6H-1,2,5-tiadiazinilas, akridinilas, azociniias, benzofuranilas, benzotiofeniias, karbazolas, chromanilas, chromenilas, cinolinilas, dekahidrochinolinilas, furanilas, furazanilas, imidazolidinilas, imidazolinilas, imidazolilas, indolinilas, indolizinilas, indolilas, izobenzofuranilas, izochromanilas, izoindolinilas, izoindolilas, izochinolinilas (benzimidazolilas), izotiazolilas, izoksazolilas, morfolinilas, naftiridinilas, oktahidroizochinolinilas, oksazolidinilas, oksazolilas, fenantridinilas, fenantrolinilas, fenarsazinilas, fenazinilas, fenotiazinilas, fenoksatiinilas, fenoksazinilas, ftalazinilas, piperaziniias, piperidinilas, pteridinilas, purinilas, piranilas, pirazinilas, pirazolidinilas, pirazolinilas, pirazolilas, piridazinilas, piridinilas, piridilas, pirimidiniias, pirolidinilas, pirolinilas, pirolilas, chinazolinilas, chinolinilas, chinoksalinilas, chinuklidinilas, karbolinilas, tetrahidrofuranilas, tetrahidroizochinolinilas, tetrahidrochinolinilas, tetrazolilas, tiantrenilas, tiazolilas, tienilas, tiofenilas, triazinilas, ksantenilas.
[0100] Čia apibūdintų sintezės metodų reakcijas geriausia vykdyti esant tinkamai bazei; šia tinkama baze gali būti įvairios bazės, kurių buvimas reakcijos metu palengvina norimo produkto sintezę. Tinkamas bazes gali pasirinkti patyręs organinės sintezės specialistas. Tinkamomis bazėmis yra (bet jomis neapsiribojama) neorganinės bazės, tokios kaip šarminio metalo, žemės šarminio metalo, talio ir amonio hidroksidai, alkoksidai, fosfatai ir karbonatai, kaip antai natrio hidroksidas, kalio hidroksidas, natrio karbonatas, kalio karbonatas, cezio karbonatas, talio hidroksidas, talio karbonatas, tetra-n-butilamonio karbonatas ir amonio hidroksidas. Tinkamomis bazėmis taip pat yra organinės bazės, jskaitant (bet neapsiribojant) alifatinius aminus, tokius kaip trialkilaminai, dialkilaminai ir monoalkilaminai, N,N-diizopropiletilaminas, N,N-dietilcikloheksilaminas, N,N-dimetilcikloheksilaminas, N.N.N'-trietilendiaminas, N,N-dimetiloktilaminas, 1,5-diazabiciklo[4.3.0]non-5-enas (DBN), 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktanas (DABCO), 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-enas (DBU) ir tetrametiletilendiaminas (TMEDA); ir aromatiniai aminai, tokie kaip piridinas ir
[0101] pakeisti piridinai, kaip antai N,N-dimeti!aminopiridinas (DMAP), 4-pirolidinopiridinas, 4-piperidinopiridinas.
[0102] Čia naudojamas terminas "racemizacijos agentas" reiškia bet kokią bazę, kuri yra pakankamai stipri, kad jos sukeliamas chiralinio centro prie pažymėto (I) formulės junginių beta anglies atomo racemizacijos greitis atitiktų arba viršytų fermentinės hidrolizės greiti. Racemizacijos agentų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) trimetilaminas, trietilaminas, tripropilaminas, tributilaminas, trioktilaminas, N,N-diizopropiletilaminas, N,N-dietilcikloheksilaminas, N.N-dimetilcikloheksilaminas, N,N,N'-trietilendiaminas, N,N-dimetiloktilaminas, 1,5-diazabiciklo[4.3.0]non-5-enas (DBN), 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktanas (DABCO), 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-enas (DBU), tetrametiletilendiaminas (TMEDA), piridinas ir pakeisti piridinai, kaip antai N.N-dimeti'aminopiridinas (DMAP), 4-pirolidinopiridinas ir 4-piperidinopiridinas.
[0103] Čia apibūdintų sintezės metodų reakcijos gali būti vykdomos, pridėjus tinkamos rūgšties, norint nustatyti arba palaikyti tinkamą bazinį pH, ypač nesant buferio; tokia tinkama rūgštimi yra įvairios rūgštys, kurioms esant palengvinama norimo produkto sintezė. Tinkamas rūgštis gali pasirinkti patyręs organinės sintezės specialistas. Tinkamomis rūgštimis yra (bet jomis neapsiribojama) organinės rūgštys, kaip antai acto rūgštis, ir neorganinės rūgštys, kaip antai HCf, HBr ir H3P04.
[0104] Čia naudojamas terminas "hidrolazė" arba 'lipazė" reiškia fermentą, galintį hidrolizuoti (I) formulės junginius, kurie yra pakeisto izoksazolin-5-ilacetato tioesteriai, iki atitinkamų pakeistų izoksazolin-5-ilkarboksirūgščių. Be to, "hidrolazė" arba 'lipazė" yra s.elektyvi junginiams, turintiemms chiralinius centrus beta padėtyje tioesterio grupės atžvilgiu, kaip parodyta (!) formulės junginiuose. Laikoma, kad ši lipazė, būdama selektyvi vienam steroizomerų mišinio chiraliniam centrui, gali pasirinkti arba (R) arba (S) enantiomerą beta padėtyje tioesterio grupės atžvilgiu, kaip parodyta (I) formulės junginiuose. Be to, hidrolazė arba lipazė tirpale gali būti homogeninė su (I) formulės junginių substratais arba tirpale ji gali būti heterogeninė, pavyzdžiui, imobilizuota ant inertinės netirpios medžiagos. Ši hidrolazė arba lipazė gali
[0105] būti liofilizato formos, išdžiovinta išpurškiant arba išdžiovinta šildant, o taip pat suspenduotos arba imobilizuotos formos.
[0106] Fermentų, galinčių hidrolizuoti (I) formulės junginius šio išradimo • būde, pavyzdžiais gali būti Candida, Pseudomonas, Mucor, Rhizopus, Aspergillus, Bacillus, Streptomyces, Geotrichum ir Chromobacterium genties mikrobinės ir bakterinės hidrolazės arba lipazės, o taip pat fermentai iš gyvūnų audinių.
[0107] Prekybinių hidrolazių arba lipazių, kurios tinka naudoti šiame išradime, pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) Amano AK ( Pseudomonas sp.), Amano PS30 ( Pseudomonas sp.), Amano FAP ( Rhisopus javanicus), Amano AY 30 ( Candida cylindracea), Amano L ( Candida lipoiytica), Amano AP12 ( Aspergillus niger), Amano proteazė N ( Bacillus subtilis), chimotripsinas, subtilizinas, termitazė ( Thermoactinimyces vulgaris), acetilcholinesterazė, elektrinio ungurio acetilcholinesterazė, kiaulės kepenų esterazė, cholesterolesterazė, kiaulės kasos lipazė, triušio kepenų esterazė ir hidrolazės iš Geotrichum candidum, Rhizopus nigricans, Rhizopus oryzae, Aspergillus oryzae, Streptomyces griseus, Aspergillus saitoi, Aspergillus niger, Mucor miehei ir Chromobacterium viscosum.
[0108] Čia naudojamas terminas "dinaminis perskyrimas" reiškia procesą, kurio sąlygomis fermentas pasirenka vieną stereoizomerų mišinio stereoizomerą ir ji hidrolizuoja labiau nei jo optinj izomerą, tuo tarpu kai kitas optinis izomeras yra tuo pačiu metu racemizuojamas j fermento pasirenkamą stereoizomerą. Vykdant perskyrimo reakciją tokiomis sąlygomis galima didesnė nei 51 % stereoizomerų mišinio, kaip pradinės medžiagos, konversija j vieno stereoizomero produktą, esant didesniam nei 80 % optiniam grynumui. Pavyzdžiui, iš racematų stereoizomerinio mišinio bus gaunamas (R) izomerinis produktas didesne nei 51 % išeiga, esant didesniam nei 80 % optiniam grynumui, tuo tarpu (S) izomerinis reagentas racemizuosis j (R) izomerini reagentą. Tokiu būdu racemizacija yra sujungta su fermentiniu perskyrimu.
[0109] Cia naudojamas terminas "optinis grynumas" arba "enantiomerinis grynumas" taikomas tik chiraliniam centrui, pagal kurį vykdomas išradime aprašomas perskyrimas, ir yra išreiškiamas (R) arba (S) izomerinio produkto molių procentais, skaičiuojant pagal bendrą (R) ir (S) izomerinių produktų molių kiekį. Pavyzdžiui ir be apribojimų, (R)-(il) formulės junginio 80 % optinis grynumas reiškia, kad yra 80 % (R)-(ll) izomero išeiga su 20 % (S)-(ll) izomero išeiga.
[0110] Čia pateiktų sintezės metodų reakcijos yra vykdomos tinkamuose tirpikliuose, kuriuos gali lengvai pasirinkti patyręs organinės sintezės specialistas; tokiu tinkamu tirpikliu paprastai yra bet koks tirpiklis, kuris nereaguoja su pradinėmis medžiagomis (reagentais), tarpinėmis medžiagomis arba produktais temperatūrose, kuriose vykdomos reakcijos, t.y. temperatūrose, kurios yra nuo tirpiklio užšalimo temperatūros iki tirpiklio virimo temperatūros. Duota reakcija gali būti vykdoma viename tirpiklyje arba daugiau nei vieno tirpiklio.mišinyje. Priklausomai nuo konkrečios reakcijos stadijos, kiekvienai konkrečiai reakcijos stadijai gali būti pasirenkami tinkami tirpikliai. Duota reakcija taip pat gali būti vykdoma bifazinėje sistemoje, kurioje vyksta dominančių substratų racemizacija.
[0111] Tinkamais halogenintais tirpikliais yra: anglies tetrachloridas, bromdichlormetanas, dibromchlormetanas, bromoformas, chloroformas, bromchlormetanas, dibrommetanas, butilo chloridas, dichlormetanas, tetrachloretilenas, trichloretilenas, 1,1,1-trichloretanas, 1,1,2-trichloretanas, 1,1-dichloretanas, 2-chlorpropanas, heksafluorbenzenas, 1,2,4-trichlorbenzenas, o-dichlorbenzenas, chlorbenzenas, fluorbenzenas, fluortrichlormetanas, chlortrifluormetanas, bromtrifluormetanas, anglies tetrafluoridas, dichlorfluormetanas, chlordifluormetanas, trifluormetanas, 1,2-dichlortetrafluoretanas ir heksafluoretanas.
[0112] Tinkamais eterių tipo tirpikliais yra: dimetoksimetanas, tetrahidrofuranas, 1,3-dioksanas, 1,4-dioksanas, furanas, dietilo eteris, etilenglikolio dimetilo eteris, etilenglikolio dietilo eteris, dietilenglikolio dimetilo eteris, dietilenglikolio dietilo eteris, trietilenglikolio dimetilo eteris arba t-butilmetilo eteris.
[0113] Tinkamais protoninais tirpiklais, kaip pavyzdžiai ir be apribojimų, gali būti vanduo, metanolis, etanolis, 2-nitroetanolis, 2-fluoretanolis, 2,2,2-trifluoretanolis, etilenglikolis, 1-propanolis, 2-propanolis, 2-metoksietanolis, 1-butanolis, 2-butanolis, i-butilo alkoholis, t-butilo alkoholis, 2-etoksietanolis, dietilenglikolis, 1-, 2- arba 3-pentanolis, neo-pentilo alkoholis, t-pentilo alkoholis, dietilenglikolio monometilo eteris, dietilenglikolio monoetilo eteris, cikloheksanolis, anizolas, benzilo alkoholis, fenolis arba glicerolis.
[0114] Tinkamais aprotoninais tirpiklais, kaip pavyzdžiai ir be apribojimų, gali būti tetrahidrofuranas (THF), dimetilformamidas (DMF), dimetilacetamidas (DMAC), 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1 H)-pirimidinonas (DMPU), 1,3-dimetil-2-imidazolidinonas (DMI), N-metilpirolidinonas (NMP), formamidas, N-metilacetamidas, N-metilformamidas, acetonitrilas, dimetilsulfoksidas, propionitrilas, etilformiatas, metilacetatas, heksachloracetonas, acetonas, etilmetilketonas, etilacetatas, sulfolanas, N,N-dimetilpropionamidas, tetrametilkarbamidas, nitrometanas, nitrobenzenas arba heksametilfosforamidas,
[0115] Tinkamais baziniais tirpikliais yra: 2-, 3- arba 4-pikolinas, pirolas, pirolidinas, morfolinas, piridinas arba piperidinas.
[0116] Tinkamais angliavandenilių tipo tirpikliais yra: benzenas, cikloheksanas, pentanas, heksanas, toluenas, cikloheptanas, metilcikloheksanas, heptanas, etilbenzenas, m-, o- arba p-ksilenas, oktanas, indanas, nonanas arba naftalenas.
[0117] Laikoma, kad čia naudojamas terminas "tinkamas tirpiklis" apima vandeni ir vandens mišinius su organiniu tirpikliu, kuriuose organiniu tirpikliu gali būti tinkamas halogenintas tirpiklis, tinkamas eterio tipo tirpiklis, tinkamas protoninis tirpiklis, tinkamas aprotoninis tirpiklis, tinkamas bazinis tirpiklis arba tinkamas angliavandenilio tipo tirpiklis. Jeigu yra naudojami vandens ir organinio tirpiklio mišiniai, tinkamiausiais organiniais tirpikliais yra acetonitrilas, toluenas, ksilenas, eteris arba alkoholis, toks kaip metanolis, etanolis, n-propanolis arba izopropanolis, n-butanolis, antrinis butanolis, tret-butanolis. Jeigu yra naudojami organiniai tirpikliai, bendras organinio tirpiklio kiekis mišinyje gali būti 0-50 % ribose alkoholiams ir 0-95 % ribose - ne alkoholiams. Tirpiklių mišinys gali būti bifazinis (I) formulės junginių reakcijai palengvinti.
[0118] Laikoma, kad čia naudojamas terminas "buferis" apima porą konjuguota rūgštis/bazė, kuri, jeigu ji ištirpinta tinkamame tirpiklyje, padeda sulaikyti tinkamo tirpiklio pH pasikeitimą, atsirandant] dėl rūgščių arba bazių pridėjimo, arba dėl praskiedimo. Konjuguotos rūgšties/bazės poras, galinčias veikti kaip tinkami buferiai pH intervale nuo maždaug 8 iki maždaug 11, gali pagaminti patyręs specialistas iš junginių, kurie apima (bet neapsiriboja) karbonatus, kaip antai NaaCOa, K2CO3, NaHCC>3 ir KHCO3; fosfatus, kaip antai Na3P04, NaaHPCU, NaH2PC>4, K3PO4, K2HPO4 ir KH2PO4; boratus, natrio 5,5-dietilbarbitūratą, glicilgliciną, etanolaminą, dietanolaminą, 2,5-dimetilimidazolą, pirofosforo rūgšti, tris(hidroksimetil)aminometaną, N-((trishidroksimetil)metil)-gliciną, 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinpropansulfonrūgšti, 2-amino-2-metil-1,3-propandioli, 2-amino-2-etil-1,3-propandiolj, 2-amino-2-metil-1-propanoli, N,N-(bis-2-hidroksimetil)gliciną, gliciną, 2-(cikloheksilamino)etansulfonrūgšti, trimetilaminą ir etilendiaminą.
[0119] Čia naudojamas terminas "paviršinio aktyvumo medžiaga" apima anijoninius, kati joninius ir nejoninius paviršiaus aktyvius agentus. Tinkamų paviršinio aktyvumo medžiagų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) tulžies rūgšties druskos, dioktilnatrio sulfosukcinatas, diosgeninas, sarkosilas, natrio dodecilsulfatas, cetilpiridinio chloridas, cetiitrimetilamonio bromidas, 3-[(3-cholamidopropil)dimetilamonio]-1-propansulfonatas, N,N-dimetildodecilamino-N-oksidas, oktilgliukozidas, polioksietileno (PEG) alkoholiai, tokie kaip PEG(23) laurilo alkoholis, PEG(10) cetilo alkoholis, PEG(20) cetilo alkoholis, PEG(9-10) lauril-miristilo alkoholis ir PEG(17) cetil-stearilo alkoholis; ir junginiai, paprastai vadinami tarpfaziniais agentais, tokie kaip benziltrimetilamonio chloridas ir trikaprilmetilamonio chloridas. Papildomais tinkamų paviršinio aktyvumo medžiagų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) polioksietileno (PEG) junginiai, tokie kaip PEG-p-f-oktilfenolio dariniai, kaip antai Triton® X-45 (PEG(5)-p-f-oktilfenolis), Triton® X-114 (PEG(7-8)-p-f-oktilfenolis), Triton® X-100 (PEG(9-10)-p-f-oktilfenolis), Triton® X-102 (PEG(12-13)-p-f-oktiIfenolis). Triton® X-165 (PEG(16)-p-f-oktilfenolis), Triton® X-305 (PEG(30)-p-f-oktilfenolis) ir PEG(9)-p-f-oktilfenolis); PEG(9-10)-nonilfenolis, žinomas kaip Triton® N-101; PEG sorbitolio esteriai,
[0120] žinomi kaip Tween® 20, Tvveen® 40, Tvveen® 60 ir Tween® 80; polioksipropilen-PEG-esteriai, žinomi kaip Pluronic® L64 ir Pluronic® L68; ir Triton® A 20.
[0121] Čia naudojamas terminas "aminorūgštis" reiškia organinį junginį, turintį
[0122] ir bazinę aminogrupę, ir rūgštinę karboksigrupę. Šis terminas apima gamtines aminorūgštis, modifikuotas ir neįprastas aminorūgštis, o taip pat aminorūgštis, kurios yra žinomos kaip atsirandančios biologiškai laisvoje arba surištoje formoje, bet jų paprastai nebūna baltymuose. Šis terminas apima modifikuotas ir neįprastas aminorūgštis, tokias kaip aminorūgštys, aprašytos, pavyzdžiui, Roberts and Vellaccio (1983) The Peptides, 5: 342-429, kuris duodamas kaip literatūros šaltinis. Modifikuotos arba neįprastos aminorūgštys, kurios gali būti naudojamos šio išradimo praktikoje, yra (bet jomis neapsiribojama) D-aminorūgštys, hidroksilizinas, 4-hidroksiprolinas, N-Cbz-blokuota aminorūgštis, ornitinas, 2,4-diaminosviesto rūgštis, homoargininas, norleucinas, N-metilaminosviesto rūgštis, naftilalaninas, fenilglicinas, (3-fenilprolinas, tret-leucinas, 4-aminocikloheksilalaninas, N-metil-norleucinas, 3,4-dehidroprolinas, N,N-dimetilaminoglicinas, N-metilaminoglicinas, 4-aminopiperidin-4-karboksirūgštis, 6-aminoheksano rūgštis, trans-4-(aminometil)-cikloheksankarboksirūgštis, 2-, 3- ir 4-(aminometil)benzenkarboksirūgštis, 1-aminociklopentankarboksirūgštis, 1-aminociklopropankarboksirūgštis ir 2-benzil-5-aminopentano rūgštis.
[0123] Čia naudojamas terminas "aminorūgšties liekana" reiškia tą aminorūgšties (apibūdintos aukščiau) dali, kuri yra peptide.
[0124] Čia naudojamas terminas "peptidas" reiškia junginį, kuris susideda iš dviejų arba daugiau aminorūgščių (apibūdintų aukščiau), kurios yra sujungtos peptidine jungtimi. Terminas "peptidas" taip pat apima junginius, turinčius ir peptidinius ir nepeptidinius komponentus, tokius kaip pseudopeptidas, arba peptidą imituojančias liekanas, arba kitus ne aminorūgščių komponentus. Toks junginys, kuriame yra ir peptidinių, ir nepeptidinių komponentų, taip pat gali būti vadinamas "peptidinių analogu".
[0125] Terminas "peptidinė jungtis" reiškia kovalentinj amidinį ryšj, susidariusį atskilus vandens molekulei nuo vienos aminorūgšties karboksigrupės ir kitos aminorūgšties aminogrupės.
[0126] Šiame išradime laikoma, kad jį galima įgyvendinti bent jau daugelio gramų mastu, kilogramų mastu, daugelio kilogramų mastu arba pramoniniu mastu. Daugelio gramų mastu čia laikomas kiekis, kai bent vienos pradinės medžiagos yra 10 gramų arba daugiau, geriau - bent 50 g arba daugiau, dar geriau - bent 100 g arba daugiau. Daugelio kilogramų mastu čia laikomas kiekis, kai naudojama daugiau nei vienas kilogramas bent vienos pradinės medžiagos. Pramoniniu mastu čia laikomas toks kiekis, kuris yra kitoks nei laboratorinis mastas ir kurio pakanka, kad produktas būtų patiekiamas arba klinikiniams tyrimams, arba išdalijamas vartotojams.
[0127] Sintezė
[0128] Šio išradimo tikslas yra pateikti pakeistų izoksazolinų, kurie yra tinkami vaistų, tokių kaip junginys (X), sintezei, stereoizomerinių mišinių dinaminio perskyrimo būdus. Šio išradimo būdus, imant kaip pavyzdį, bet jų neapribojant, galima geriau suprasti remiantis 1 schema. 1 schemoje detalizuojamas bendras vienstadijinis pakeisto izoksazolin-5-ilacetato tioesterio, kuriame Y yra siera, o chiralinis centras, pagal kurį reikia išskirstyti mišinį, yra beta anglies atomas tioesterio karbonilo grupės atžvilgiu, dinaminio perskskyrimo būdas. Nors 1 schemoje produktu yra parodytas (R) stereoizomeras, kitu atveju taip pat galima gauti (S) stereoizomerą, priklausomai nuo procese naudojamos lipazės arba hidrolazės pasirinkimo. Šis (S) stereoizomeras buvo aprašytas aukščiau kaip (S)-(ll) formulės junginiai.
[0129]
[0130] Ši stadija yra vykdoma, veikiant (I) formulės junginio stereoizomerini mišinį tinkamame tirpiklyje, kuriame gali būti ištirpintas tinkamas buferis ir/arba tinkama paviršinio aktyvumo medžiaga, arba jų gali nebūti, tinkama lipaze arba hidrolaze ir racemizacijos agentu, o po to pridedama tinkamos bazės arba rūgšties baziniam pH palaikyti. Reagentų supylimo tvarka nėra lemianti, tiktai pH turi būti palaikomas pridedant bazės, kad vyktų racemizacija. Pagal bendras nuorodas, šis procesas vykdomas taip: a) supilamas tirpalas su tinkamu buferiu, tinkamu racemizacijos agentu, tinkama paviršinio aktyvumo medžiaga ir baze arba rūgštimi; b) supilamas (i) formulės junginio stereoizomerų mišinio tirpalas; c) supilamas tinkamos lipazės arba hidrolazės tirpalas; d) palaikomas pH maždaug 8,0-11,0 intervale; ir e) kontroliuojamas procesas tol, kol perskyrimas įvyksta. (R)-(ll) formulės junginiai gali būti išskiriami iš tirpalo standartiniais apdirbimo būdais, kurių pavyzdys yra parodytas 18 pavyzdyje. Pagal bendras nuorodas, galutinis tirpalas nufiltruojamas kietoms heterogeninėms medžiagoms pašalinti, jeigu tokių medžiagų yra ir jos nėra produktas, po to filtratas parūgštinamas iki pH maždaug 1,0-4,0, kad iškristų į nuosėdas (R)-(II) formulės junginiai. Heterogeninės kietos medžiagos būna tuo atveju, jei pradinės medžiagos nėra gerai tirpios tirpiklyje, jeigu lipazė arba hidrolaze yra imobilizuota ant inertinės netirpios medžiagos arba jeigu, kaip dalis
[0131] apdirbimo procedūros, buvo pridėtos kitos netirpios nufiltruojamos medžiagos. Paprastai pageidautina, kad produktas - junginiai (R)-(ll) išliktų ištirpę tirpiklyje karboksirūgščiu druskų formoje iki parūgštinimo apdirbimo metu.
[0132] Pagal bendras nuorodas, pH palaikymas maždaug 8,0-11,0 intervale gali būti atliekamas bet kokiais cheminės sintezės specialistams žinomais būdais. Tokiais būdais yra (bet jais neapsiribojama) bazės pridėjimas automatiniais titratoriais, mechaninis pridėjimas arba pridėjimas rankiniu būdu.
[0133] Labiausiai tinkamais tirpikliais yra vanduo ir vandens mišiniai su organiniais tirpikliais. Jeigu yra naudojami vandens ir organinio tirpiklio mišiniai, organiniais tirpikliais gali būti acetonitrilas, toluenas, ksilenas, eteris arba alkoholis, toks kaip metanolis, etanolis, n-propanolis ir izopropanolis. Jeigu yra naudojami organiniai tirpikliai, bendras organinio tirpiklio kiekis mišinyje gali būti 0-95 % ribose, jeigu organinis tirpiklis nėra alkoholis; geriausia, kai alkoholio kiekis yra 0-50 % ribose. Kai yra naudojami organiniai tirpikliai, procesas gali būti vykdomas bifaziniame tirpale.
[0134] Specialistams žinomų tioesterinių grupių, kurios efektyviai funkcionuos gaunant (R)-(ll) jungini, pasirinkimas yra jvairus. Plačiąja prasme, tinka bet kokia tioesterinė grupė, kuri pasižymi pakankamu sugebėjimu atitraukti elektronus, kad racemizacijos prie beta anglies atomo greitis būtų priimtinas.
[0135] Būde pagal 1 schemą (R)-(ll) formulės junginių cheminė išeiga gali būti 51-100 % ribose, geriau, kai išeiga yra 75-100 %, ir dar geriau, kai išeiga yra apie 80-100 %. Apart cheminės išeigos, (R)-(ll) formulės junginių optinis grynumas gali būti 51-100 % ribose; pageidautinas optinis grynumas yra 80-100 %, dar geriau, kai optinis grynumas yra apie 90-100 %, ir visų geriausia, kai optinis grynumas yra apie 95-100 %.
[0136] Šj išradimą, imant kaip pavyzdį bet jo neapribojant, galima toliau pademonstruoti junginio (R)-(lla) arba jo druskos gavimo būdu, remiantis 2 schema.
[0137]
[0138] Ši stadija yra vykdoma, veikiant (la) formulės junginio enantiomerų mišinį tinkamame tirpiklyje, kuriame gali būti ištirpintas tinkamas buferis ir/arba tinkama paviršinio aktyvumo medžiaga, arba jų gali nebūti, tinkama lipaze arba hidrolaze ir racemizacijos agentu, o po to pridedama tinkamos bazės arba rūgšties baziniam pH palaikyti. Reagentų supylimo tvarka nėra lemianti, tiktai pH turi būti palaikomas pridedant bazės, kad vyktų racemizacija. Pavyzdžiui, lipazė arba hidrolazė gali būti pridedama i reakcijos mišinį prieš junginį (la) arba racemizacijos agentą, ir visos aukščiau paminėtos medžiagos yra tarpusavio kontakte prieš pridedant papildomą bazės kiekį, kad būtų palaikomas bazinis pH proceso metu. Jeigu dedamas buferis arba paviršinio aktyvumo medžiaga, jie gali būti pridedami bet kuriuo metu.
[0139] Šis procesas vykdomas aerobinėje arba anaerobinėje atmosferoje, pavyzdžiui, atvirame ore, azoto arba argono atmosferoje.
[0140] Pagal bendras nuorodas, šis procesas vykdomas taip: a) supilamas tirpalas su tinkamu buferiu, tinkamu racemizacijos agentu, tinkama paviršinio aktyvumo medžiaga ir baze arba rūgštimi; b) supilamas (la) formulės junginio stereoizomerų mišinio tirpalas; c) supilamas tinkamos lipazės arba hidrolazės tirpalas; d) palaikomas pH maždaug 8,0-11,0 intervale; ir e) kontroliuojamas procesas tol, kol perskyrimas įvyksta. (R)-(lla) formulės junginys gali būti išskiriamas iš tirpalo standartiniais apdirbimo būdais, kurių pavyzdys yra parodytas 18 pavyzdyje. Pagal bendras nuorodas, galutinis tirpalas nufiltruojamas kietoms heterogeninėms medžiagoms pašalinti, po to filtratas parūgštinamas iki pH maždaug 1,0-4,0, kad iškristų j nuosėdas junginys (R)-(lla).
[0141] Labiausiai tinkamais tirpikliais yra vanduo ir vandens mišiniai su acetonitrilu, toluenu, ksilenu, eteriu, metanoliu, etanoliu, n-propanoliu arba izopropanoliu. Jeigu yra naudojami organiniai tirpikliai, bendras organinio tirpiklio kiekis mišinyje gali būti 0-50 % ribose alkoholiams ir 0-95 % ribose - ne alkoholiams. Visų geriausias tirpiklis yra vanduo.
[0142] Tinkamiausias pH šiam būdui įgyvendinti yra apie 8,0-11,0. Geriau, kai pH intervalas yra 8,5-10,0, ir visų geriausia, kai pH yra 8,5-9,5 ribose.
[0143] Buferis gali būti, arba jo gali nebūti; o kai jis yra dedamas, ji nesunkiai pasirinks specialistas. Labiausiai tinkami junginiai šio gavimo būdo buferiui pagaminti yra natrio arba kalio divandenilio fosfatas.
[0144] Labiausiai tinkama paviršinio aktyvumo medžiaga yra Triton® X-100, žinoma kaip PEG(9-10) p-f-oktilfenolis; jos pridedamas kiekis yra 0-1 gramas Triton® X-100 kiekvieniems 5 gramams (I) formulės junginio.
[0145] Labiausiai tinkamos lipazės arba hidrolazės šiam būdui yra prekybiniai fermentai, gaunami iš prekybinių šaltinių ir naudojami be papildomo gryninimo; jų pavyzdžiais yra Amano PS30 ir Amano AK. Tinkamesnis yra Amano PS30.
[0146] Pageidautinais racemizacijos agentais šiam būdui įgyvendinti yra trimetilaminas ir trietilaminas. Tinkamiausias yra trimetiiaminas. Geriausias tinkamų racemizacijos agentų koncentracijų intervalas šiame būde yra apie 0,5-10 ekvivalentų racemizacijos agento vienam ekvivalentui substrato; geriausia 2 ekvivalentai racemizacijos agento vienam ekvivalentui substrato.
[0147] Tinkamiausios bazės šiam gavimo būdui yra natrio hidroksidas ir kalio hidroksidas.
[0148] Pageidautinas temperatūrų intervalas šiam procesui yra maždaug 30-60 °C, geriau - 35-50 °C, dar geriau - 38-43 °C.
[0149] Prekybinio fermento masės santykis su substrato mase gali būti maždaug nuo 1:1 iki 1:500. Pageidautinas prekybinio fermento masės santykis su substrato mase yra 1:100; geriau -1:20, dar geriau - 1:10. Šiam santykiui jtakos turi veiklaus fermento procentinis kiekis prekybiniame preparate.
[0150] Tinkamiausias reakcijos laikas yra proceso parametras, kuris priklauso nuo reagentų koncentracijos, temperatūros, pH ir norimos gauti išeigos. Paprastai reakcija yra įvykdoma per 10-150 vai., geriausias laikas yra 30-40 vai.
[0151] Būde pagal 2 schemą (R)-(lla) junginio cheminė išeiga gali būti 51-100 % ribose, geriau, kai išeiga yra 75-100 %, ir dar geriau, kai išeiga yra apie 80-100 %. Apart cheminės išeigos, (R)-(lla) junginio optinis grynumas gali būti 51-100 % ribose; pageidautinas optinis grynumas yra 80-100 %, dar geriau, kai optinis grynumas yra apie 90-100 %, ir visų geriausia, kai optinis grynumas yra apie 95-100 %.
[0152] Tinkamiausia atmosfera šiam būdui įgyvendinti yra azoto atmosfera.
[0153] Šiame būde galimų naudoti maišymo būdų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) fizinis arba mechaninis maišymas, leidimas per tirpalą nereaktingų dujų arba reaktoriaus indo sukimas apie ašį. Tinkamiausias būdas yra maišymas maišikliu.
[0154] Sio išradimo junginiai gali būti pagaminami Įvairiais būdais, gerai žinomais organinės sintezės specialistams. Šio išradimo junginius galima susintetinti, naudojant žemiau aprašytus būdus kartu su organinėje sintezėje žinomais būdais arba jų variacijomis, kurios yra suprantamos šios srities specialistams. Tinkamiausiais būdais yra (bet jais neapsiribojama) žemiau aprašyti būdai.
[0155] Visi čia cituojami literatūros šaltiniai yra pridedami pilnoje apimtyje.
[0156] Aprašyme naudojami tokie sutrumpinimai:
[0157]
[0158] Kitas tioesteriu gavimo būdas susijęs su oksazolino pakaitą turinčios karboksirūgšties (pagamintos pagal 3 schemą arba panaudojant 3 schemos tarpinio hidroksiminoilo chlorido ciklinio prijungimo prie 3-buteno rūgšties reakciją) chloranhidrido kondensacija arba su norimo tiolio vario druska
[0159] (druska pagaminama pagal Adams et ai. iOrg. Syn., 1962, 42, 22)) pagal Reissig and Scherer ( Tetrahedron Lett., 1980, 21, 4259) metodą, arba su tioliu, katalizatoriumi naudojant kobalto(ll) chloridą, pagal Ahmad and lqbal (' Tetrahedron Lett., 1986, 27, 3791) metodą (3b schema).
[0160] Ciklinis prijungimas taip pat gali būti vykdomas su buteno rūgšties tioesteriu, kaip parodyta 3c schemoje, panaudojant panašias j aukščiau aprašytas chemines reakcijas.
[0161] Suprantama, kad šios srities specialistas gali pagaminti (I) formulės pakeistus izoksazolinus iš aldehidinę grupę turinčių pradinių medžiagų metodais, panašiais į 3 schemoje aprašytus ir pavyzdžiais pailiustruotus metodus, arba bet kokiais kitais jvairiais literatūroje paskelbtais metodais. Izoksazolinų pavyzdžiai arba izoksazolinų gavimo būdai yra aprašyti (bet jais neapsiribojama) US 4,970, US 5,489,562, US 4,256,898, US 4,933,464, US 952,700, PCT tarptautinėje publikacijoje WO 95/14681, PCT tarptautinėje publikacijoje WO 95/14680 ir PCT tarptautinėje publikacijoje WO 95/24398. Papildomus publikuotus izoksazolinų arba izoksazolinų gavimo būdų pavyzdžius galima rasti Comprehensive Organic Synthesis (Trost ed.) Pergamon Press, New York, 4, 1991 ir The Chemistry of Heterocyclic Compounds: F/Ve and Six- Membered Compounds with Nitrogen and Oxygen (VViley ed.) Interscience Publishers, J. Wiley & Sons, New York, 1962.
[0162] Toliau duodami pavyzdžiai yra laikomi skirtais šiam išradimui pailiustruoti. Šie pavyzdžiai yra pateikti išradimui paaiškinti ir neturi būti priimami kaip apribojantys jo apimti.
[0163] 25 cm x 4,6 cm Zorbax® RXC8 kolonėlė, 40 °C temperatūra (Rockland Technology Inc.); 280 nm; tirpiklių sistema: A yra 0,1 % trifluoracto rūgštis vandenyje, B yra 20 % trifluoracto rūgštis acetonitrile, A/B santykis yra 80/20, kai T = 0 min, 25/75 - kai T = 10 min, 80/20 - kai T = 20 min; 1,00 ml/min; 2,0
[0164] 25 cm x 4,6 cm Bakerbond Chiralcel® OJ 10 ^m kolonėlė Daicel Chemical Industry Limited); 38 °C temperatūra; 280 nm; tirpiklių sistema yra etanolis/heksanas/trifluoracto rūgštis (20/85/0,25); 2,0 įiI ~1 mg/1,0 ml koncentracijos tirpalo injekcija; 0,90 ml/min.
[0165] Tokios pačios kaip ir HPLC B SĄLYGOS, išskyrus tai, kad etanolio/heksano/trifluoracto rūgšties santykis yra 60/40/0,25, o srauto greitis yra 0,50 ml/min.
[0166] Bakerbond Chiralcel® AS (250x4,6 mm; 10 mikronų dalelės) 25 °C temperatūra; 280 nm; tirpiklių sistema: 85 % anglies dioksidas, 15 % etanolis, turintis 1 % (pagal tūrj) trifluoracto rūgšties; slėgis: 200 atm,; srauto greitis 1,0 ml/min.; 5 f_il ~1 mg/1 ml koncentracijos tirpalo injekcija. Sulaikymo laikai: (R)-(lla) - 11,6 min; (S)-(lla) -14,0 min; (S)-(IV) - 7,4 min; (R)-(IV) - 6,7 min.
[0167] Junginio la, kuriame R1 yra n- propilas, gavimas
[0168]
[0169] j 1-propantiolio (98,0 g, 1,29 mol) ir THF (850 ml) tirpalą 4 °C temperatūroje pridedama 2,6 M heksilličio tirpalo heksanuose (500 ml, 1,30 mol), palaikant temperatūrą <15 °C. Temperatūra sumažinama iki 4 °C ir pridedama chlortrimetilsilano (175 ml, 1,38 mol), palaikant temperatūrą <15 °C. Suspensija sušildoma iki kambario temperatūros, nufiltruojama ir kietos medžiagos plaunamos 1:1 THF/heksanais (100 ml). Filtratas atšaldomas iki 10 °C ir pridedama aliuminio chlorido (120 g, 0,70 mol), palaikant temperatūrą <21 °C. Pridėjus junginio (IV) (200,0 g, 0,70 mol), suspensija pavirinama su grįžtamu šaldytuvu 20 min, ir virinama tol, kol HPLC (A sąlygos) rodo, kad reakcija jvyko (po 50 min.). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 16 °C. Pridedama vandens (850 ml) <30 °C temperatūroje, po to tolueno (525 ml). Atskiriami sluoksniai, ir vandeninis sluoksnis vėl ekstrahuojamas toluenu (100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami vandeniu (3 x 400 ml), nufiltruojama ir pašildoma iki 40 °C. Pridedama heptano (1300 ml) 38-40 °C temperatūroje, kad išsikristalintų tioesteris. Suspensija atšaldoma iki 4 °C, palaikoma 3 vai, nufiltruojama, ir kietos medžiagos plaunamos heptanu. Išdžiovinus kristalus, gaunamas junginys (la-3) (189,5 g, 94 %), kuris yra gelsvos kietos granulės. Analitinis, mėginys buvo pagamintas perkristalinant iš etilacetato/heptano. Lyd. temp. 67,1-68,2 °C; 1H BMR (CDCI3, 300 MHz): 1,00 (t, 3H), 1,50-1,70 (m, 2H), 2,80-2,95 (m, 3H), 3,05-3,10 (m, 2H), 3,50-3,60 (dd, 1H), 5,05-5,15 (m, 1H), 7,60-7,80 (m, 4H). Analizė: išskaičiuota pagal C15Hl6N202S (288,33): C 62,48; H 5,59; N 9,71; S 11,11; rasta: C 62,38; H 5,58; N 9,67; S 11,03. DSGMS (NH3-CI) m/ z 289,101399 (M + H), išskaičiuota pagal CisH^NaOaS 289,101075.
[0170] Junginio la, kuriame R1 yra n- butilas, gavimas
[0171]
[0172] Naudojant tokią pačią, kaip ir 1 pavyzdyje, metodiką, junginys (IV)
[0173] (11,5 g, 40,0 mmol) veikiamas AICI3 (6,8 g, 52 mmol) ir n-butiltiotrimetilsilanu (pagamintu panašiu būdu, kaip aprašyta 1 pavyzdyje, iš 1 -butantiolio), ir gaunamas n-butiltioesteris (la-4) (10,6 g, 88 %), kuris yra balta kieta medžiaga. Analitinis mėginys buvo pagamintas perkristalinant iš etilacetato/heptano. Lyd. temp. 61,8-69,0 °C; 1H BMR (CDCI3, 300 MHz): 7,73 (kv, 4H), 5,3-5,1 (m, 1H), 3,52 (dd, 1H), 3,3-3,0 (m, 2H), 3,0-2,8 (m, 3H), 1,55 (kv, 2H), 1,38 (h, 2H), 0,92 (t, 3H). Analizė: išskaičiuota pagal C16Hi8N202S (302,34): C 63,55: H 6,00; N 9,26: S 10,60: rasta: C 63,62: H 5,89; N 9,20; S 10,63. DSGMS (NH3-CI) mfc 303,116758 (M + H), išskaičiuota pagal C16Hi8N202S 303,116725.
[0174]
[0175] Junginio (IV) (5,64 g, 19,70 mmol), ličio hidroksido monohidrato (0,92 g, 21,93 mmol), metanolio (10 ml), THF (30 ml) ir vandens (10 ml) tirpalas 0 °C temperatūroje maišomas 130 min, kol HPLC (A sąlygos) parodė, kad hidrolizė įvyko. Mišinys parūgštinamas 1N HCI iki pH 7. Lakios medžiagos nugarinamos vakuume, o liekana dar parūgštinama iki pH 1 kone. HCI (bendras tūris -30 ml). Kietos medžiagos nufiltruojamos, plaunamos vandeniu, ir išdžiovinus gaunamas junginys ±(lla) (4,42 g, 97 %), kuris yra gelsvi milteliai. Grynumas ir nechiralinės spektrinės savybės buvo tokios pačios kaip ir junginio (R)-(lla).
[0176]
[0177] Junginio ±(Ila) (4,00 g, 17,4 mmol) suspensija metanolyje (100 ml) 0 °C temperatūroje veikiama tionilo chloridu (2,0 g, 16,8 mmol) ir leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. Po 28 vai. lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir lieka metilo esteris (V) (4,25 g, 100 %), kuris yra geltoni milteliai.
[0178] n- Propiltioesterio ( la- 3) gavimas iš junginio ± ( lla)
[0179]
[0180] Junginio ±(lla) (8,0 g, 34,9 mmol), tionilo chlorido (9,6 g, 81 mmol) ir acetonitrilo (100 ml) tirpalas maišomas 50 °C temperatūroje N2 atmosferoje 0,5 vai. Tirpiklis ir tionilo chlorido perteklius nugarinami vakuume, o liekana vėl ištirpinama 100 ml acetonitrilo. Tirpalas veikiamas CUSCH2CH2CH3 (6,2 g, 45,3 mmol), pagaminto panašiu būdu, kaip aprašyta anksčiau butilo analogo atveju (R. Adams et al. Org. Synth., 42, 22), 50 °C temperatūroje N2 atmosferoje 2 vai. Mišinys nugarinamas vakuume iki sausos liekanos. Tirpikliai nugarinami vakuume, gauta ruda kieta medžiaga sumaišoma su etilacetatu (100 ml), ir mišinys nufiltruojamas. Filtratas plaunamas 0,1 N HCI (2x100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgS04l nufiltruojamas ir nugarinamas iki sausos liekanos. Gauta kieta medžiaga išdžiovinama vakuume, ir gaunamas (la-3) (7,2 g, 72 %), kuris yra geltona kieta medžiaga.
[0181] Etiltioesterio ( la- 2) gavimas
[0182]
[0183] Naudojant panašią i 5 pavyzdyje aprašytą metodiką, junginys ± (Ha)
[0184] (4,0 g, 17,4 mmol) veikiamas tioniio chloridu (5,2 g, 44 mmol), o po to CuSCH2CH3 (3,2 g, 26 mmol), ir gaunamas tioesteris (la-2) (3,1 g, 65 %), kuris yra gelsva kieta medžiaga. Analitinis mėginys buvo pagamintas, perkristalinant iš etilacetato/heptano. Lyd, temp. 92,0-93,1 °C. 1H BMR (CDCIs, 300 MHz): 1,20-1,30 (t, 3H), 2,80-3,0 (m, 3H), 3,10-3,22 (m, 3H), 3,50-3,60 (dd, 1H), 5,05-5,15 (m, 1H), 7,70-7,80 (dd, 4H). Analizė: išskaičiuota pagal C14H14N2O2S (274,32): C 61,29: H 5,14; N 10,21; S 11,68; rasta: C 61,45; H 5,23; N 10,15; S 11,96. DSGMS (NH3-CI) m/ z 275,085274 (M + H), išskaičiuota pagal C14H14N2O2S 275,085425.
[0185] 7 pavyzdys
[0186]
[0187] Junginio (IV) (1,00 g, 3,49 mmol) suspensija metanolyje (10 ml) 0 °C temperatūroje veikiama tioniio chloridu (0,31 ml, 4,25 mmol) ir leidžiama sušilti iki kambario temperatūros, Po 3 dienų lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir gaunamas metilo esteris (V) (0,88 g, 100 %).
[0188] Tai gali būti įvykdoma tokiu pačiu būdu, kaip ir (IV) pavertimas į (la-3) 1 pavyzdyje (išeiga 98 %). Grynumas ir spektrinės savybės yra tokios pačios kaip ir 6 pavyzdyje pagaminto etiltioesterio.
[0189] Vinilacto rūgšties n-propiltioesterio gavimas
[0190] Tionilchlorido (8,4 g, 71 mmol) ir vinilacto rūgšties (5,0 g, 58 mmol) tirpalas maišomas kambario temperatūroje 10 min., po to šildomas 50 °C temperatūroje 4 vai. Gautas tirpalas veikiamas bevandeniu CoCI2 (0,20 g, 1,7 mmol) ir 1-propantioliu (4,8 g, 63 mmol). Mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį azoto atmosferoje. Šis mišinys supilamas į 1:1 vandens:etilacetato mišinį (200 ml). Organinis sluoksnis atskiriamas, o vandeninis sluoksnis ekstrahuojamas 15 ml etilacetato. Sumaišytos organinės fazės plaunamos 0,5 M K2HP04 tirpalu (3x50 ml), po to 50 ml vandens. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana chromatografuojama per silikagelį, eliuuojant heksanu, ir gaunamas vinilacto rūgšties n-propiltioesteris (4,8 g, 57 %), kuris yra bespalvė alyva. 1H BMR (CDCI3, 300 MHz): 0,9-1,0 (t, 3H), 1,5-1,7 (m, 2H), 2,8-2,9 (t, 2H), 3,15 (d, 2H), 5,08-5,15 (m, 2H), 5,8-6,0 (m, 1H). Analizė: išskaičiuota pagal C7H12OS (144,23): C 58,29; H 8,38; rasta: C 57,93; H 8,03.
[0191] Vinilacto rūgšties n-propiltioesterio cikloprijungimas prie p-cianobenzaldehido, susidarant junginiui (la-3)
[0192] p-Cianobenzaldehido chloroksimo (2,10 g, 11,63 mmol), vinilacto rūgšties propiltioesterio 2,01 g, 12,00 mmol) ir DMF (20 ml) mišinys 0 °C temperatūroje veikiamas trietilamino (1,24 g, 12,25 mmol) tirpalu 4 ml DMF 145 min. Mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir maišoma dar 1,5 vai. Druskos nufiltruojamos ir perplaunamos 5 ml DMF. Filtratas sulašinamas į 160 ml praskiesos HCI, norint nusodinti kietą medžiagą,
[0193] atšaldomas iki 4 °C ir nufiltruojama ši kieta medžiaga. Ši kieta medžiaga išdžiovinama vakuume, ir gaunamas junginys (la-3) (1,95 g, 59 %), kuris yra gelsvos granulės. Grynumas yra panašus, o spektrinės savybės tokios pačios kaip medžiagos, gautos iš (IV).
[0194] Metilo esterio (V) gavimas cikloprijungimo būdu
[0195] Cikloprijungimas vykdomas taip pat, kaip ir 10 pavyzdyje, išskyrus tai, kad kaip vinilacto rūgšties darinys yra naudojamas metilo 3-butenoatas (0,93
[0196] g, 9,29 mmol), ir gaunamas metilo esteris (V) (1,39 g, 54 % išeiga, išskaičiuota pagal 76 % produkto grynumą, nustatytą HPLC metodu, A sąlygos). Analitinis mėginys buvo pagamintas, perkristalinant iš etilacetato/heptano. Lyd. temp.: 121,0-123,3 °C; 1H BMR (CDCI3, 300 MHz): 7,65 (kv, 4H), 5,3-5,1 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H), 3,11 (dd, 1H), 2,86 (dd, 1H), 2,65 (dd, 1H). Analizė: išskaičiuota pagal C13H12N2O3S (244,25): C 63,93, H 4,95, N 11,47; rasta: C 63,92, H 5,04, N 11,43. DSGMS (NH3-CI) m/ z 245,092772 (M + H), išskaičiuota pagal C13H12N2O3S 245,092617.
[0197] Lipazės pasirenkamos pagal jų efektyvumą hidrolizuoti tioesterj, supilant j 2 drachmų indą mišinį, kurio komponentų santykiai yra maždaug tokie:
[0198] Šis mišinys maišomas mažu Teflon® padengtu maišymo strypeliu alyvos vonioje 40-45 °C temperatūroje ir kontroliuojamas HPLC metodu (A, B arba C sąlygos).
[0199] Junginio ( la- 2) hidrolizė į ( R)-( lla), panaudojant Amano lipazę AK
[0200] Buvo panaudota 12 pavyzdyje aprašyta lipazės parinkimo metodika (racemizacijos agentas buvo DBU). HPLC (C sąlygos) parodė, kad 90-95 %
[0201] (R) esterio hidrolizavosi j (R)-(lla) (R liekanos smailė buvo per maža, kad ją būtų galima suintegruoti).
[0202] Junginio ( la), kuriame Y- R1 yra S- izobutilas, hidrolizė į ( R)-( lla),
[0203] Buvo panaudota 12 pavyzdyje aprašyta lipazės parinkimo metodika (racemizacijos agentas buvo DBU). HPLC (D sąlygos) parodė, kad ee% junginiui (R)-(lla) yra 63 %.
[0204] Junginio ( la), kuriame Y- R1 yra S- izobutilas, hidrolizė į ( R)-( lla),
[0205] Buvo panaudota 12 pavyzdyje aprašyta lipazės parinkimo metodika (racemizacijos agentas buvo DBU). HPLC (D sąlygos) parodė, kad ee% junginiui (R)-(lla) yra 85 %.
[0206] Junginio ( la- 4) hidrolizė j ( R)-( lla), panaudojant Amano lipazę AK
[0207] Buvo panaudota 12 pavyzdyje aprašyta lipazės parinkimo metodika (racemizacijos agentas buvo DBU). HPLC (D sąlygos) parodė, kad ee% junginiui (R)-(lla) yra 95 %.
[0208] Junginio (la-4) hidrolizė į (R)-(lla), panaudojant Amano lipazę PS30
[0209] Buvo panaudota 12 pavyzdyje aprašyta lipazės parinkimo metodika (racemizacijos agentas buvo DBU). HPLC (D sąlygos) parodė, kad ee% junginiui (R)-(lla) yra 87 %.
[0210] Junginio (la-3) dinaminis perskyrimas, pagaminant jungini (R)-(lla)
[0211] Vandens (2,7 I), NaH2P04 (275 g, 2,29 mol) ir 25 % vandeninio trimetilamino (330 ml, 1,27 mol) tirpalas pašarminamas 6N NaOH (80 ml) iki pH 8,35, I gautą tirpalą jdedama junginio (la-3) (180,0 g, 0,635 mol), Triton® X100 (15 g) ir lipazės PS30 (18,3 g). Ši suspensija maišoma 40-42 cC temperatūroje, o pH palaikomas 9,0-9,5 ribose retkarčiais pridedant 6N NaOH. Reakcija kontroliuojama HPLC metodu (C sąlygos) 2 dienas tol, kol junginys (la-3) pilnai pavirsta (>99,5 % pagal plotą) j jungini (R)-(lla). Mišinys atšaldomas iki kambario temperatūros, ir kietos medžiagos (lipazė) nufiltruojamos. (R)-(lla) nusodinamas pilant 50 % H3P04 (450 m!), kol pH pasiekia 3. Kieta medžiaga nufiltruojama ir perplaunama du kartus po 200 ml vandens. Išdžiovinus šią kietą medžiagą vakuume, gaunama 143,0 g (98,3 %ee, pagal HPLC, B sąlygos) gelsvos kietos medžiagos. Ši medžiaga ištirpinama 2 I etanolio ir perkristalinama atšaldant iki 3 °C. Kristalai nufiltruojami, perplaunami etanoliu (200 ml), ir išdžiovinus vakuume gaunamas junginys (R)-(lla) (129,4 g, 89 %), kuris yra spindintys milteliai. Lyd. temp.: 198-200 °C; 99,7 % ee (HPLC D sąlygos). 1H BMR (DMSO-d6, 300 MHz) 12,46 (s, 1 H), 7,89 (kv, 4H), 5,15-4,95 (m, 1H), 3,63 (dd, 1H), 3,20 (dd, 1 H), 2,70 (m, 2H). Analizė: išskaičiuota pagal C12H10N2O4 (230,22) C 62,61, H 4,38, N 12,17; rasta: C 62,39, H 4,49, N 11,98,
[0212] Junginio (la-2) dinaminis perskyrimas, pagaminant jungini (R)-(lla)
[0213] Panaudojant 18 pavyzdyje aprašytas sąlygas, 1,0 g (3,48 mmol) etiltioesterio (la-2) hidrolizuojama j (R)-(lla) (0,63 g, 75 %), kuris yra nevisai balti kristalai (97,3 % ee, HPLC D sąlygos).
[0214] Junginio (la-4) dinaminis perskyrimas, pagaminant jungini (R)-(Ila)
[0215] Panaudojant 18 pavyzdyje aprašytas sąlygas, 5,0 g (15,8 mmo!) n-butiltioesterio (la-4) hidrolizuojama Į (R)-(lla) (3,38 g, 91,4 %), kuris yra bespalvės adatos (99,4 % ee, HPLC D sąlygos).
[0216] Junginio (la-2) dinaminis perskyrimas, vietoj trimetilamino racemizacijos agentu naudojant trietilaminą
[0217] Panaudojant panašias j 18 pavyzdyje aprašytas sąlygas, 2,0 g (7,3 mmol) etiltioesterio (la-2), pridėjus 70 % vandeninio etilamino (0,33 g, 5,12 mmol), hidrolizuojama į (R)-(lla) (0,78 g, 45 %), kuris yra balti kristalai (92,4 %ee, HPLC D sąlygos).
[0218] Junginio (la-3) dinaminis perskyrimas, nenaudojant buferio
[0219] Junginys (la-3) (0,90 g, 3,12 mmol) hidrolizuotas pagal panašią j 18 pavyzdyje aprašytą metodiką, išskyrus tai, kad nebuvo pridėta buferio, o po trimetilamino pridėjimo buvo pilama 1N HCI, kad pH būtų sumažintas iki 9,5. Po tipiško apdorojimo buvo išskirtas (R)-(lla) (0,42 g, 58 %), kuris yra balta kieta medžiaga (98,8 % ee, HPLC B sąlygos).
[0220] Junginio ( la- 3) dinaminis perskyrimas, pagaminant ( R)-( lla),
[0221] Junginys (la-3) (10,0 g, 34,9 mmol) hidrolizuotas pagal panašią j 18 pavyzdyje aprašytą metodiką, išskyrus tai, kad nebuvo pridėta paviršinio aktyvumo medžiagos. Po tipiško apdorojimo buvo išskirtas (R)-(lla) (7,4 g, 92 %), kuris yra balta kieta medžiaga (98,2 % ee, HPLC B sąlygos).
1. Optiškai aktyvaus junginio, kurio formulė (R)-(ll) arba (S)-(ll):
2. Optiškai aktyvaus junginio, kurio formulė (R)-(ll):
3. Optiškai aktyvaus junginio, kurio formulė (R)-(lla):
4. Būdas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad tinkama lipazė yra Amano PS30 arba Amano AK.5.Būdas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad racemizacijos agentą pasirenka iš trimetilamino, trietilamino, tripropilamino ir tributilamino.6. Būdas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad tinkamas tirpiklis yra arba vanduo, arba vandens ir organinio tirpiklio mišinys, kuriame organinį tirpiklį pasirenka iš metanolio, etanolio, propanolio, izopropanolio, acetonitrilo, tolueno, ksileno ir eterio.7. Būdas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad tinkamas pH yra maždaug 8,0 -11,0 ribose.8. Būdas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad į tinkamą tirpiklį dar prideda ir buferio, kad būtų lengviau išlaikyti tinkamą pH, pridedant bazės.9. Būdas pagal 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad tinkama lipazė yra Amano PS30 arba Amano AK.10.Būdas pagal 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad racemizacijos agentą pasirenka iš trimetilamino, trietilamino, tripropilamino ir tributilamino.11. Būdas pagai 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad tinkamas tirpiklis yra arba vanduo, arba vandens ir organinio tirpiklio mišinys, kuriame organinį tirpiklį pasirenka iš metanolio, etanolio, propanolio, izopropanolio, acetonitrilo, tolueno, ksileno ir eterio.12. Būdas pagal 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad tinkamas pH yra maždaug 8,0 -11,0 ribose.13. Optiškai aktyvaus junginio, kurio formulė (R)-(lla):
23. Optiškai aktyvaus junginio, kurio formulė (R)-(lla):
24. Būdas pagal 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad i tinkamą tirpikli prideda dar ir tinkamos nejoninės, katijoninės arba anijoninės paviršinio aktyvumo medžiagos.
25. Optiškai aktyvaus junginio, kurio formulė (R)-(lla):