LT4743B

EPOTILONO DARINIAI

EPOTHILONE DERIVATIVES

Referatas

[LT] Šis išradimas yra susijęs su (I) formulės junginiais, kuriuose Q yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš (II), G yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš alkilo, alkilo su pakaitais, arilo su pakaitais arba be pakaitų, heterociklo, (III), W yra O arba NR15; X yra O arba H, H; Y yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš O; H,OR16; OR17OR17; NOR18; H,NOR19H,NR20R21; H,H; arba CHR22; OR17 OR17 gali būti ciklinis ketalis; Z1 ir Z2 yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš CH2, O, NR23, S arba SO2, kur tiktai vienas iš Z1 ir Z2 gali būti heteroatomas; B1 ir B2 yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš OR24 arba OCOR25, arba O2CNR26R27; kai B1 yra H, o Y yra OH, H, jie gali sudaryti šešianarį žiedinį ketalį arba acetalį; D yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš NR28R29, NR30COR31 arba sotaus heterociklo; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R13, R14, R18, R19, R20, R21, R22, R29 ir R27 yra pasirinkti iš grupės: H, alkilas, alkilas su pakaitais arba arilas, ir kai R1 ir R2 yra alkilas, jie gali būti susijungę, susidarant cikloalkilui; R3 ir R4 yra alkilas, ir jie gali būti susijungę, susidarant cikloalkilui; R9, R10, R16, R17, R24, R25 ir R31 yra pasirinkti iš grupės: H, alkilas arba alkilas su pakaitais; R8, R11, R12, R28, R30, R32, R33 ir R30 yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš H, alkilo, alkilo su pakaitais, arilo, arilo su pakaitais, cikloalkilo arba heterociklo; R15, R23 ir R29 yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš H, alkilo, alkilo su pakaitais, arilo, arilo su pakaitais, cikloalkilo, heterociklo, R32C=O, R33SO2, hidroksilo, O-alkilo arba O-alkilo su pakaitais; jų farmaciškai priimtinomis druskomis, bet kokiais hidratais, solvatais arba jų geometriniais, optiniais ir stereoizomerais, su išlyga, kad junginiai, kuriuose: ir W, ir X yra O; ir R1, R2, R7 yra H; R3, R4, R6 yra metilas; ir R8 yra H arba metilas; ir Z1 ir Z2 yra CH2; ir G yra 1-metil-2-(pakeistas-4-tiazolil)etenilas; Q yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, neįeina į šį išradimą.

[EN] The present invention relates to compounds of formula (I), Q is selected from the `group` consisting of (II), G is selected from from the `group` consisting of alkyl, substituted alkyl, substituted or unsubstituted aryl, heterocyclo, (III), W is O or NR15, X is O or H,H; Y is selected from the `group` consisting of O; H,OR16; OR17,OR17; NOR18; H,NOR19; H,NR20R21; H,H; or CHR22; OR17OR17 can be a cyclic ketal; Z1 and Z2 are selected from the `group` consisting of CH2, O, NR23, S or SO2, wherein only one of Z and Z2 is a heteroatom; B1 and B2 are selected from the `group` consisting of OR24, or OCOR25, or OCOR25, or CNR26R27; when B1 is H and Y is OH, H they can form form a six-membered ring ketal or acetal; D is selected from the `group` consisting of NR28R29, NR30COR31 or saturated heterocycle R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R13, R14, R18, R19, R20, R21, R22, R26 and R27 are selectedfrom the `group` H, alkyl, substituted alkyl, or aryl and when R1 and R2 are alkyl can be joint to form a cycloalkyl; R3 and R4 are alkyl can be joint to form a cycloalkyl; R9, R10, R16, R17, R24, R25. and R31 are selcted from the `group` H, alkyl, substitutedv alkyl, aryl, substituted aryl, cycloalkyl, or heterocyclo; R15, R23 and R29 are selected from the `group` consisting of H, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, cycloalkyl, heterocyclo, R32C=O, R33SO2, hydroxy, O-alkyl or O-substituted alkyl, the pharmaceutically acceptable salts thereof and any hydrates, solvates or geometric, optical and stereoisomers thereof, with the proviso that compounds wherein: W and X are both O; and R1, R2, R7 are H; and R3, R4, R6, are methyl; and R8 is H or methyl; and Z1, and Z2, are CH2; and G is 1-methyl-(2-substituted-4-thiazolyl0ethenyl; and Q is as defined above are excluded.

Aprašymas

[0001] Šis išradimas yra susijęs su epotilono dariniais, šių darinių gavimo būdais ir tarpiniais junginiais jiems gauti.

[0002] IŠRADIMO KILMĖ

[0003] Epotilonai yra makrolidiniai junginiai, kurie randa pritaikymą

[0004]

[0005] pasižymi mikrokanalėlius stabilizuojančiu poveikiu, panašiu į TAXOL, taigi ir citotoksiniu aktyvumu prieš greitai proliferuojančias ląsteles, tokias kaip auglių ląstelės, arba prieš kitokias su ląstelių hiperproliferacija susijusias ligas (žr. Angevv. Chem. Int. Ed. Engi., 1996, 35, No.13/14).

[0006]

[0007] Q yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

[0008] W yra O arba NR15;

[0009] X yra O arba H, H;

[0010] Y yra pasirinktas iš grupės, susidedančios iš O; H, OR i6; OR₁₇, OR i7;

[0011] ketalis;

[0012] S0₂, kur tiktai vienas iš Z_i ir Z₂ gali būti heteroatomas;

[0013] arba O₂CNR₂₆R₂₇; kai B₁ yra H, o Y yra OH, H, jie gali sudaryti šešianarj žiedini ketalj arba acetalį;

[0014] sotaus heterociklo;

[0015] yra alkilas, jie gali būti susijungę, susidarant cikloalkilui; kai R₃ ir R₄ yra alkilas, ir jie gali būti susijungę, susidarant cikloalkilui;

[0016] Rg, R₁₀, R1 s. R_17i R₂₄, R₂₅ ir R₃₁ yra pasirinkti iš grupės: H, alkilas arba

[0017] alkilas su pakaitais;

[0018] Rs, R₁₁, R₁₂. R₂₈, R₃₀, R₃₂, R₃₃ ir R₃₀ yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš H, alkilo, alkilo su pakaitais, arilo, arilo su pakaitais,

[0019] cikloalkilo arba heterociklo;

[0020] R₁₅, R23 ir R₂₉ yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš H, alkilo, alkilo su pakaitais, arilo, arilo su pakaitais, cikloalkilo, heterociklo, R₃₂C=0, R₃₃SO₂, hidroksilo, O-alkilo arbaO-alkilo su pakaitais;

[0021] G yra 1-metil-2-(pakeistas-4-tiazolil)etenilas;

[0022] Toliau yra duodami įvairių terminų, naudojamų aprašant šį išradimą, apibrėžimai. Šie apibrėžimai, jeigu nenurodyta kitaip konkrečiais atvejais, yra

[0023] taikomi visame aprašyme vartojamiems terminams, tiek atskirai paimti, tiek ir kaip didesnės grupės dalis,

[0024] Terminas "alkilas" reiškia tiesiosios arba šakotosios grandinės neturinčias pakaitų angliavandenilių grupes iš 1-20, geriau iš 1-7, anglies atomų.

[0025] Terminas "alkilas su pakaitais" reiškia alkilo grupę, kurioje yra, pavyzdžiui, nuo vieno iki keturių pakaitų, tokių kaip halogenas, trifluormetilas, trifluormetoksigrupė, hidroksilas, alkoksigrupė, cikloalkiloksigrupė, heterociklooksigrupė, oksogrupė, alkanoilas, ariloksigrupė, alkanoiloksigrupė, aminogrupė, alkilaminogrupė, arilaminogrupė, aralkilaminogrupė, cikloalkilaminogrupė, heterocikloaminogrupė, dipakeista aminogrupė, kurioje 2 aminogrupės pakaitai yra pasirinkti iš alkilo, arilo arba aralkilo, alkanoilaminogrupė, aroilaminogrupė, aralkanoilaminogrupė, alkanoilaminogrupė su pakaitais, arilaminogrupė su pakaitais, aralkanoilaminogrupė su pakaitais, tiolinė, alkiltiogrupė, ariltiogrupė, aralkiltiogrupė, cikloalkiltiogrupė, heterociklotiogrupė, alkiltionogrupė, ariltionogrupė, alkilsulfonilo, arilsulfonilo. aralkilsulfonilo, sulfonamidogrupė

[0026] (pvz. S0₂NH₂), sulfonamidogrupė su pakaitais, nitrogrupė, cianogrupė, karboksigrupė grupės, karbamilas (pvz. C0₂NH₂), karbamilas su pakaitais (pvz. CONH-alkilas, CONH-arilas, CONH-aralkilas arba tokie atvejai, kai prie azoto yra du pakaitai, pasirinkti iš alkilo, arilo arba aralkilo), alkoksikarbonilas, arilas, arilas su pakaitais, guanidino grupė ir heterociklai, tokie kaip indolilas, imidazolilas, furilas, tienilas, tiazolilas, pirolidilas, piridilas, pirimidilas ir pan. Kur pažymėta aukščiau, kad pakaituose taip pat yra pakaitų, tai jais gali būti halogenas, alkilas, alkoksigrupė, arilas arba aralkilas.

[0027] Terminas "halogenas" arba "hal" reiškia fluorą, chlorą, bromą ir jodą,

[0028] Terminas "arilas" reiškia monociklines arba biciklines aromatinių angliavandenilių grupes, turinčias 6-12 anglies atomų žiede, tokias kaip fenilo, naftilo, bifenilo ir difenilo grupės, ir kiekvienoje iš jų gali būti pakaitų.

[0029] Terminas "aralkilas" reiškia arilo grupę, prijungtą tiesiogiai per alkilo grupę, tokią kaip benzilas.

[0030] Terminas 'arilas su pakaitais" reiškia arilo grupę, kurioje yra, pavyzdžiui, nuo vieno iki keturių pakaitų, tokių kaip alkilas, alkilas su pakaitais, halogenas, trifluormetoksigrupė, trifluormetilas, hidroksilas, alkoksigrupė, cikloalkiloksigrupė, heterociklooksigrupė, alkanoilas, alkanoiloksigrupė, aminogrupė, alkilaminogrupė, aralkilaminogrupė, cikloalkilaminogrupė, heterocikloaminogrupė, dialkilaminogrupė, alkanoilaminogrupė, tiolinė, alkiltiogrupė, cikloalkiltiogrupė, heterociklotiogrupė, ureidogrupė, nitrogrupė, cianogrupė, karboksigrupė, karboksialkilas, karbamilas, alkoksikarbonilas, alkiltiono, ariltiono, alkilsulfonilo, sulfonamido grupės, ariloksigrupė ir pan. Šiuose pakaituose taip pat gali būti pakaitų, kaip antai halogenai, hidroksilas, alkilas, alkoksigrupė, arilas, arilas su pakaitais, alkilas su pakaitais arba aralkilas.

[0031] Terminas "cikloalkilas" reiškia sotaus ciklinio angliavandenilio žiedines sistemas, geriausia turinčias 1-3 žiedus ir 3-7 anglies atomus kiekviename žiede, kurie taip pat gali būti kondensuoti su nesočių C₃-C₇ karbocikliniu žiedu, ir jose gali būti pakaitų. Tokių grupių pavyzdžiais yra ciklopropilas, ciklobutilas, ciklopentilas, cikloheksilas, cikloheptilas, ciklooktilas, ciklodecilas, ciklododecilas ir adamantilas. Pakaitų pavyzdžiais yra viena arba daugiau aukščiau aprašytų alkilo grupių, arba viena arba daugiau grupių, aprašytų kaip pakaitai alkilo grupėje.

[0032] Terminai "heterociklas", "heterociklinis" reiškia pilnai sočias arba nesočias, aromatines arba nearomatines cikines grupes, kuriose gali būti pakaitų, pavyzdžiui, tokias, kurios yra 4-7-narės monociklinės, 7-11-narės biciklinės arba 10-15-narės triciklinės žiedinės sistemos, kuriose yra bent vienas heteroatomas bent vieną anglies atomą turinčiame žiede, Kiekviename turinčios heteroatomą heterociklinės grupės žiede gali būti 1, 2 arba 3 heteroatomai, pasirinkti iš azoto atomų, deguonies atomų ir sieros atomų, kur azoto ir sieros atomai taip pat gali būti oksidinti, o azoto atomas gali būti kvaternizuotas. Heterociklinė grupė gali būti prijungta prie bet kurio heteroatomo arba anglies atomo.

[0033] Monociklinių heterociklinių grupių pavyzdžiais yra pirolidinilas, pirolilas, indolilas, pirazolilas, oksetanilas, pirazolinilas, imidazolilas, imidazolinilas, imidazolidinilas, oksazolilas, oksazolidinilas, izoksazolinilas, izoksazolilas, tiazolilas, tiadiazolilas, tiazolidinilas, izotiazolilas, izotiazolidinilas, furilas, tetrahidrofurilas, tienilas, oksadiazolilas, piperidinilas, piperazinilas, 2-oksopiperazinilas, 2-oksopiperidinilas, 2-oksopirolidinilas, 2-oksazepinilas, azepinilas, 4-piperidonilas, piridilas, N-okso-piridilas, pirazinilas, pirimidinilas, piridazinilas, tetrahidropiranilas, letr ahidrotiopir aniias, telrahidrotiopiranilo suifonas, rnorfoiinilas, tiomorfolinilas, tiomorfoliniio sulfoksidas, tiomorfolinilo sultonas, 1,3-dioksolanas ir tetrahidro-1.1 -dioksotienilas. dioksanilas. izotiazolidinilas, tietanilas, tiiranilas, triazinilas ir triazolilas ir pan.

[0034] Biciklinių heterociklinių grupių pavyzdžiais yra benzotiazolilas, benzoksazolilas, benzotienilas, chinuklidinilas, chinolinllas, chinolinil-N-oksidas, tetrahidroizochinolinilas, izochinolinilas, benzimidazolilas, benzopiranilas, indolizinilas, benzofurilas, chromonilas, kumarinilas, cinolinilas, chinoksalinilas, indazolilas, pirolopiridilas, furopiridinilas (kaip antai furo[2,3-c]piridinilas, furo[3,1-b]piridinilas arba furo[2,3-b]piridinilas), dihidroizoindolilas, dihidrochinazolinilas (kaip antai 3,4-dihidro-4-okso-chinazolinilas), benzizotiazolilas, benzizoksazolilas, benzodiazinilas, benzofurazanilas, benzotiopiranilas, benzotriazolilas, benzopirazolilas, dihidrobenzofurilas, dihidrobenzotienilas, dihidrobenzotiopiranilas, dihidrobenzotiopiranilo sultonas, dihidrobenzopiranilas, indolinilas, izochromanilas, izoindolinilas, naftiridinilas, ftalazinilas, piperonilas, purinilas, piridopiridilas, chinazolinilas, tetrahidrochinolinilas, tienofurilas, tienopiridilas, tienotienilas ir panašūs.

[0035] Pakaitų pavyzdžiais yra viena arba daugiau aukščiau aprašytų alkilo grupių arba viena arba daugiau grupių, aprašytų aukščiau kaip pakaitų alkilo grupėje. Taip pat įeina mažesnieji heterociklai, kaip antai epoksidai ir aziridinai.

[0036] V formulės junginiai gali sudaryti druskas su šarminiais metalais, tokiais kaip natris, kalis ir litis, su žemės šarminiais metalais, tokiais kaip kalcis ir magnis, su organinėmis bazėmis, tokiomis kaip dicikloheksilaminas, tributilaminas, piridinas, ir aminorūgštimis, tokiomis kaip argininas, lizinas, ir pan. Tokios druskos gali būti gaunamos, pavyzdžiui, pakeičiant karboksirūgščių protonus, jeigu V formulės junginiuose yra karboksirūgšties grupė, norimu jonu terpėje, kurioje druska iškrenta j nuosėdas, arba vandeninėje terpėje, kuri po to nugarinama. Kitos druskos gali būti gaunamos specialistams žinomais būdais.

[0037] V formulės junginiai sudaio druskas su įvairiausiomis oiganinornis ir neorganinėmis rūgštimis. Tokiomis druskomis yra druskos sudarytos su vandenilio chloridu, vandenilio bromidu, metansulfonrūgštimi, hidroksietansulfon-rūgštimi, sulfato rūgštimi, acto rūgštimi, trifluoracto rūgštimi, maleino rūgštimi, benzensulfonrūgštimi, toluensulfonrūgštimi ir Įvairiomis kitomis (pvz., nitratai, fosfatai, boratai, tartratai, citratai, sukcinatai, benzoatai, askorbatai, salicilatai ir pan.). Tokios druskos yra gaunamos veikiant V formulės jungini ekvivalentiniu kiekiu rūgšties terpėje, kurioje druska iškrenta j nuosėdas, arba vandeninėje terpėje, kuri po to nugarinama.

[0038] V formulės junginiai taip pat gali būti provaistų formos. Bet koks junginys, kuris iri vivo bus paverčiamas bioaktyviu agentu (t.y. V formulės junginiu), pagal ši išradimą yra laikomas provaistų.

[0039] Pavyzdžiui, V formulės junginiuose gali būti sudaroma karboksilatinio esterio grupė. Karboksilatiniai esteriai yra patogiai pagaminami esterinant bet kurią karboksirūgšties grupę, esančią išradimo junginių žiede(uose).

[0040] Specialistams yra gerai žinomos įvairios provaistų formos. Tokių provaistinių darinių pavyzdžius galima rasti: a) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) ir Methods in Enzvmoloav. Vol.42, p. 309-396, edited by K. VVidder, et al. (Academic Press, 1985); b) ATextbook of Drug Design and Development, edited by Krosgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5, _"Design and Application of Prodrugs", by H. Bundgaard, p. 113-191 (1991); c) H. Bundgaard, Advanced Drug Deliverv Revievvs, 8, 1-38 (1992); d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences. 77, 285 (1988);ir

[0041] Taip pat reikia suprasti, kad V formulės junginių solvatai (pvz. hidratai)

[0042] irgi Įeina į šj išradimą. Solvatų gavimo būdai paprastai yra žinomi specialistams.

[0043] V formulės junginiai yra mikrokanalėlius stabilizuojantys agentai. Todėl jie tinka jvairioms vėžio formoms arba kitokių su nenormalia proliferacija susijusioms ligoms gydyti, Įskaitant (bet neapsiribojant) tokias: karcinomą, įskaitant šlapimo pūslės, krūties, storosios žarnos, inkstų, kepenų, plaučių, kiaušidžių, kasos, skrandžio, kaklo, skydliaukės ir odos karcinomą; jskaitant žvyninių suragėjusių ląstelių karcinomą;

[0044] limfoidinės kilmės hematopoetinius auglius, įskaitant leukemiją, ūmiąją limfocitinę leukemiją, ūmiąją limfoblastinę leukemiją, B-ląstelių limfomą, T-ląstelių limfomą, Hodžkino limfomą, ne-Hodžkino limfomą, plaukuotųjų ląstelių limfomą ir Burketso limfomą;

[0045] mieliodinės kilmės hematopoetinius auglius, įskaitant ūmiąją ir chroninę mielogenines leukemijas ir promielocitinę leukemiją; mezenchiminės kilmės auglius, įskaitant fibrosarkomą ir rabdomiosarkomą;

[0046] kitus auglius, jskaitant melanomą, seminomą, tetratokarcinomą, neuroblastomą ir paraminio nervinio audinio auglį;

[0047] centrinės ir periferinės nervų sistemos auglius, įskaitant astrocitomą, neuroblastomą, paraminio nervinio audinio auglį ir neurinomas; mezenchiminės kilmės auglius, įskaitant fibrosarkomą, rabdomiosarkomą ir osteosarkomą; ir

[0048] kitus auglius, Įskaitant melanomą, pigmentinę ksenodermiją, keratoaktantomą, seminomą, skydliaukės folikulinj vėžį ir teratokarcinomą.

[0049] V formulės junginiai taip pat gali inhibuoti auglių angiogenezę, veikdami nenormalią ląstelių proliferaciją. Tokios V formulės junginių priešangiogenezinės savybes taip pat gali būti naudingos gydant tam tikras susijusias su tinklainės vaskuliarizacija aklumo formas, artritą, ypatingai uždegimini artritą, išsėtinę sklerozę, restenozę ir psoriazę.

[0050] V formulės junginiai gali indukuoti arba inhibuoti apoptozę - fiziologinį ląstelių žuvimo procesą, ypatingai svarbų normaliam vystymuisi ir homeostazei. Pakitimai apoptotiniuose mechanizmuose duoda įnašą į įvairių žmogaus ligų patogen_R?ę V formulės junginiai, kaip apoptozės moduliatoriai, bus naudingi gydant įvairias žmonių ligas su apoptozės nukrypimais, įskaitant vėžį (ypatingai, bet neapsiribojant, folikulines limfomas, karcinomas su p53 mutacijomis, nuo hormonų priklausančius krūties, prostatos ir kiaušidžių auglius ir priešvėžines žaizdas, tokias kaip įgimta šeimyninė adenomatozinė polipozė), virusines infekcijas (įskaitant, bet neapsiribojant, herpeso virusą, raupų virusą, Epšteino-Baro virusą, Sindbiso virusą ir adenovirusą), autoimunines ligas (įskaitant, bet neapsiribojant, sisteminę raudonąją vilkligę, imuniškai medijuojamą glomerulonefritą, reumatinį artritą, psoriazę, uždegimines vidurių ligas ir autoimuninį cukrinį diabetą), neurodegeneracinius sutrikimus (įskaitant, bet neapsiribojant, Alchaimerio ligą, su AIDS susijusią silpnaprotystę, Parkinsono ligą, amiotrofinę šoninę sklerozę, pigmentinį retinitą, spinalinę raumenų atrofiją, ir cerebelinę degeneraciją), AIDS, mielodisplazinius sindromus, hipoplazinę anemiją, išeminius pažeidimus, susijusius su miokardo infarktais, apopleksiją ir reperfuzinį pažeidimą, aritmiją, aterosklerozę, toksinų arba alkoholio sukeltas kepenų ligas, hematologines ligas (įskaitant, bet neapsiribojant, chronišką anemiją ir hipoplazinę anemiją), stuburo-raumenų ststemos degeneracines ligas (įskaitant, bet neapsiribojant osteoporozę ir artritą), aspirinui jautrų rinosinusitą, cistinę fibrozę, išsėtinę sklerozę, inkstų ligas ir vėžinį skausmą.

[0051] Šio išradimo junginiai taip pat yra naudingi deriniuose su gerai žinomais priešvėžiniais ir citotoksiniais agentais ir gydymo būdais, įskaitant švitinimą. Jeigu jie sukomponuoti kaip pastovi dozė, tokiuse produktuose-deriniuose yra naudojamos žemiau aprašytos šio išradimo junginių dozės, o kito farmaciškai veiklaus agento - jo įprastos dozės, V formulės junginiai gali būti naudojami paeiliui su žinomais priešvėžiniais ir citotoksiniais agentais ir gydymo būdais, įskaitant švitinimą, jei derinio receptūra yra netinkama. Ypač naudingi yra citotoksinių vaistų deriniai, kuriuose antrasis pasirinktas vaistas veikia įvairiose ląstelės ciklo fazėse, pvz. S fazėje, nes šio išradimo V formulės junginiai duoda efektą G₂-M fazėje,

[0052] X.

[0053] Šio išradimo junginiai gali būti sumaišomi su farmaciniu tirpikliu arba skiedikliu, tinkamu peroraliniam, intraveniniam arba poodiniam vartojimui. Farmacinės kompozicijos gali būti pagaminamos klasikiniu būdu, naudojant kietus arba skystus tirpiklius, skiediklius ir priedus, tinkančius norimam vartojimo būdui. Peroraliniu būdu junginiai gali būti vartojami tablečių, kapsulių, granulių, miltelių ir pan. formoje. Junginiai gali būti vartojami nuo maždaug 0,05 iki 200 mg/kg/per dieną, geriau mažiau nei 100 mg/kg/per dieną, dozėmis, kaip vienkartinė dozė arba padalinta į 2-4 dozes,

[0054]

[0055] V formulės junginiai yra pagaminami pagal toliau duodamas schemas.

[0056] kuriose ^P,₃l R.;, R_o, R0 P_* ir Rti) yra tokios kaip apibudinta aukščiai;, o Pi yra deguonj apsauganti grupė.

[0057] V formulės junginiai, kuriuose W yra NR₁₅, o X yra O, gali būti pagaminami pagal 1 schemą. XII formulės junginys, kuriame P, yra deguonj apsauganti grupė, tokia kaip t-butildimetitsililas, gali būti pagaminamas iš (VI) formulės junginio žinomais būdais (t.y. Nicolaou, K.C. et al., Anqew. Chem. Int. Ed. En^gi., (1997) 36, 166-168). XII formulės junginio ir XIV formulės junginio aldolinė reakcija duoda XIII jungini. XIV formulės junginys gali būti pagaminamas žinomais būdais (t.y. Schinzer, D., et al., Eur. Chem. Chron.,

[0058] (1996) 1, 7-10). XVIII formulės aldehidas gali būti pagaminamas iš XV formulės junginio kaip parodyta 1 schemoje arba panaudojant žinomus metodus (t.y. Taylor, R.E., et al., Tetrahedron Lett., (1997), 38, 2031-2064). XIX formulės junginys gali būti pagaminamas iš XVIII junginio veikiant aminu dehidratavimo sąlygomis, tokiomis kaip katalizė p-toluensulfonrūgštimi ir aceotropinis vandens pašalinimas. XX formulės junginys gali būti pagaminamas iš XIX formulės junginio veikiant alkilinimo reagentu, tokiu kaip alkilmagnio bromidas. XXI formulės junginys gali būti pagaminamas iš XIII ir XX formulių junginių, panaudojant standartinius amidinės jungties kopuliavimo agentus (t.y. DCC, BOP, EDC/HOBT, PyBrOP). XXII formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXI formulės junginio sujungiant Į žiedą, panaudojant arba Grubbs (RuCI₂(=C_HPh)(PCY₃)₂; žr. Grubbs, R.H., et al., Anaevv. Chem. Int. Ed. Enal. : (1995) 34, 2039), arba Schrock katalizę (žr. Schrock, R.R., et al., J. Am. Chem. Soc.. (1990) 112, 3875). XXI junginio deblokavimas naudojant, pavyzdžiui, kai Pi yra t-butildimetilsililo grupė, vandenilio fluoridą acetonitrile arba tetra-n-butilamonio fluoridą THF, duoda V formulės junginį, kuriame Q yra etileno grupė, W yra NR1₅, X yra O, R₃, R4, R5, Re yra tokie, kaip aprašyta aukščiau. V formulės junginio, kuriame Q yra etileno grupė, regioselektyvus epoksidinimas, naudojant dimetiloksiraną, duoda V formulės junginj, kuriame Q yra oksirano grupė, W yra NR₁₅, X yra O ir R₃l R_4i R₅, R₁₅ yra tokie, kaip aprašyta aukščiau.

[0059] Kitu atveju VIII formulės junginys gali būti pagaminamas veikiant XXIII formulės jungini magniu ir chloranhidridu (R₅CH₂COCI), gaunant XXIV formulės jungini (žr.. pavyzdžiui, Heathcock, C.; et ai., J. Orą. Chem., 1990, 55, 1114-1117); po to vykdant jo ozonolizę gaunamas VIII formulės junginys, kaip parodyta 2 schemoje.

[0060] Kitu atveju XIV formulės junginys gali būti pagaminamas pagal 3 schemą. XXV formulės junginio ir pseudoefedrino reakcija duoda XXVI formulės jungini. XXVII formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXVI formulės junginio alkilinant pentenilhalogenidu, kaip antai 5-brompentenu, pagal Meyers metodą (t.y. Meyers, A., et al., J. Am. Chem. Soc.. 1994, 116, 9361-9362). XXVIII formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXVII formulės junginio panaudojant redukcijos agentą, kaip antai ličio pirolidinilborhidridą. XXVIII formulės junginio oksidinimas naudojant, pavyzdžiui, piridinio chlorchromatą duoda XIV formulės jungini. Tiesioginis XXVII formulės junginio pavertimas i XIV formulės jungini gali būti atliekamas panaudojant redukcijos agentą, kaip antai ličio trietoksi-aliuminio hidridą.

[0061] Kitu atveju XX formulės junginys gali būti pagaminamas iš alilglicino pagal 4 schemą. Alilglicinas gali būti N-blokuojamas naudojant žinomus metodus, ir gaunamas XXIX formulės junginys, kuriame P₂ yra tinkama N-blokuojanti grupė, kaip antai t-butoksikarbonilas, Kai, esant reikalui, R₂g nėra vandenilis, XXX formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXIX formulės junginio, alkilinant alkilhalogenidu, esant bazės, kaip antai natrio hidrido. XXXI formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXX formulės junginio naudojant N.O-dimetilhidroksilaminą ir standartinius kopuliavimo agentus, kaip antai EDCI ir HOBT. XXXII formulės junginys gali būti pagaminamas iš hidroksamato XXXI veikiant metaloorganiniu reagentu, kaip antai alkil- arba arilmagnio halogenidu. XXXII junginio olefininimas pagal VVittig'ą duoda XXXIII formulės junginį (VVittig'o reagentas yra pagaminamas kaip aprašyta Danishefsky, S.E.; et al., J. Org. Chem., 1996, 61, 7998-7999). XXXIII formulės junginio N-deblokavimas, panaudojant šioje srityje žinomus metodus, duoda XX formulės jungini.

[0062] V formulės junginiai, kuriuose W yra NR,₅l X yra deguonis, o G yra 1,2-dipakeistas olefinas, gali būti pagaminami pagal 5 schemą. XXXV formulės junginys gali būti pagaminamas panaudojant XXXII junginio olefininimą pagal VVittig'ą. XXXIV formulės junginys gali būti pagaminamas specialistams žinomais būdais. XXXVI formulės junginys gali būti pagaminamas N-deblokuojant XXXV formulės junginį žinomais būdais. XXXVII formulės junginys gali būti pagaminamas pagal XXXVI ir XIII junginio kopuliavimo reakciją, panaudojant standartinius kopuliavimo agentus, kaip antai EDCI ir HOBT. XXXVIII formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXVII formulės junginio pagal 1 schemoje aprašytus XXII formulės junginio gavimo būdus. Naudojant 1 schemoje aprašytus būdus (o ir p stadijas), XXXVIII formulės junginys gali būti paverčiamas i V formulės junginius, kuriuose W yra NR₁₅, X yra deguonis, o G yra 1,2-dipakeistas olefinas.

[0063] V formulės junginys, kuriame ir W, ir X yra deguonis, o G yra 1,2-dipakeistas olefinas, gali būti pagaminamas pagal 6 schemą. XXXX formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXIX formulės junginio veikiant alkilinimo agentu, kaip antai alilmagnio bromidu. Enantiomeriškai grynas XXXX gali būti pagaminamas naudojant chiralinius reagentus (žr. pavyzdžiui, Taylor, R.E.; et al., Tetrahedron Lett., 1997, 38, 2061-2064; Nicalaou, K.C.; et al., Angevv. Chem. Int. Ed. Engi., 1997, 36, 166-168; Keck, G., et al., J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 8467). XXXXI formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXX ir XIII formulių junginių panaudojant standartinius esterinimo metodus, kaip antai DCC ir DMAP. XXXXII formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXXI formulės junginio ciklinant olefiną, kaip aprašyta 1 schemoje XXII junginiui gauti. V formulės junginiai, kuriuose ir W, ir X yra deguonis, G yra 1,2-dipakeistas olefinas, gali būti pagaminami iš XXXXII formulės junginio deblokuojant (kur O yra etileno pru^pė) ir, jeiau pagoiciauiarria, e^poksidinant (kur Q yra oksirano grupė) kaip aprašyta aukščiau.

[0064] V formulės junginys, kuriame ir W, ir X yra deguonis, o G yra alkilas, alkilas su pakaitais, arilas, heteroarilas, bicikloarilas arba bicikloheteroarilas, gali būti pagaminami pagal 7 schemą. XXXXIV formulės junginys gali būti pagaminamas alilinant XXXXIII formulės junginj, kuriame G yra alkilas, alkilas su pakaitais, arilas, heteroarilas, bicikloarilas arba bicikloheteroarilas, veikiant alilinimo reagentu, kaip antai alilmagnio bromidu. XXXXV formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXXIV formulės junginio per esterinimą XIII formulės junginiu naudojant, pavyzdžiui, DCC ir DMAP. XXXXVI formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXXV formulės junginio sudarant žiedą, kaip aprašyta aukščiau. Pagal aukščiau duotoje 1 schemoje parodytus metodus XXXXVI formulės junginys gali būti paverčiamas V formulės junginiais deblokuojant, o po to epoksidinant.

[0065] V formulės junginys, kuriame W yra NR₁₅, X yra deguonis, o G yra alkilas, alkilas su pakaitais, arilas, heteroarilas, bicikloarilas arba bicikloheteroarilas, gali būti pagaminamas pagal 8 schemą. XXXXVII formulės junginys gali būti pagaminamas veikiant XXXXIII formulės jungini, kuriame G yra alkilas, alkilas su pakaitais, arilas, heteroarilas, bicikloarilas arba bicikloheteroarilas, aminu dehidratacijos sąlygomis. XXXXVII! formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXXVII formulės junginio veikiant alilinimo agentu, kaip antai alilmagnio bromidu. XXXXIX formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXXVIII formulės junginio ir XIII formulės junginio pagal standartines amidinės jungties kopuliavimo metodikas, naudojant, pavyzdžiui, EDCI ir HOBT. L formulės junginys gali būti pagaminamas iš XXXXIX formulės junginio sudarant žiedą, kaip aprašyta aukščiau. Pagal aukščiau duotoje 1 schemoje parodytus metodus L formulės junginys gali būti paverčiamas V formulės junginiais deblokuojant, o po to epoksidinant.

[0066]

[0067] V formulės junginiai, kuriuose G yra 1,2-dipakeista etilo grupė, gali būti pagaminami iš V formulės junginių, kuriuose G yra 1,2-dipakeista etileno grupė, hidrinant su katalizatoriumi, kaip antai paladžiu ant anglies, kaip parodyta 13 schemoje. Be to, V formulės junginiai, kuriuose G yra 1,2-dipakeista ciklopropilo grupė, gali būti pagaminami iš V formulės junginių, kuriuose G yra 1,2-dipakeista etileno grupė, ciklopropilinant su dijodmetanu ir cinko-vario pora, kaip parodyta 4 schemoje.

[0068] V formulės junginys, kuriame Z_i yra deguonis, gali būti pagaminamas payai 14 schemą. LXVii formulės junginys gali būti pagaminamas iš aiia-hidroksiesterio LXVI ir 3-buten-1-il-trifluormetansulfonato (arba su 3-butenilbromidu ir sidabro triflatu). LXVII formulės junginys gali būti redukuojamas redukcijos agentu, kaip antai diizobutilaliuminio hidridu, ir gaunamas LXVIII formulės junginys. Kitu atveju, LXVIII formulės junginys gali būti gaunamas iš LXVII formulės junginio pagal dviejų stadijų metodiką, apimančią redukciją ličio borhidridu ir oksidinimą piridinio chlorchromatu. Šis LXVIII formulės junginys gali būti pakeistas XIV formulės junginiu iš 1 schemos ir gaunamas LXIX formulės junginys. Tolesnis LXIX apdorojimas pagal aukščiau aprašytus metodus duoda V formulės jungini, kuriame Z_i yra deguonis.

[0069] Panašiu būdu V formulės junginys, kuriame Zi yra NR₂₃, gali būti pagaminamas pagal 15 schemą. LXXI formulės junginys gali būti pagaminamas iš alfa-aminoesterio LXX ir 3-buten-1-il-bromido. LXXI formulės junginys gali būti redukuojamas redukcijos agentu, kaip antai diizobutilaliuminio hidridu, ir gaunamas LXXII formulės junginys. Kitu atveju, LXXil formulės junginys gali būti gaunamas iš LXXI formulės junginio pagal dviejų stadijų metodiką, apimančią redukciją ličio borhidridu ir oksidinimą piridinio chlorchromatu. Šis LXXII formulės junginys gali būti pakeistas XIV formulės junginiu iš 1 schemos ir gaunamas LXXIII formulės junginys. Tolesnis LXXIII apdorojimas pagal aukščiau aprašytus metodus duoda V formulės jungini, kuriame Zi yra NR₂₃.

[0070] V formulės junginys, kuriame Z₂ yra deguonis, gali būti pagaminamas pagal 16 schemą. LXXV formulės junginys gali būti pagaminamas iš beta-hidroksiesterio LXXIV ir alkilinimo agento, kaip antai alilbromido (arba alilbromido ir sidabro triflato). LXXV formulės junginys gali būti redukuojamas redukcijos agentu, kaip antai diizobutilaliuminio hidridu, ir gaunamas LXXVI formulės junginys. Kitu atveju, LXXVI formulės junginys gali būti gaunamas iš LXXV formulės junginio pagal dviejų stadijų metodiką, apimančią redukciją ličio borhidridu ir oksidinimą piridinio chlorchromatu. Šis LXXVI formulės junginys gali būti pakeistas XIV formulės junginiu iš 1 schemos ir gaunamas LXXVII formulės junginys. Tolesnis LXXVII apdorojimas pagal aukščiau aprašytus metodus duoda V formulės jungini, kuriame Z₂ yra deguonis.

[0071] Panašiu būdu V formulės junginys, kuriame Z₂ yra NR₂₃. gali būti pagaminamas pagal 17 schemą. LXXIX formulės junginys gali būti pagaminamas iš beta-aminoesterio LXXVIII ir alilinimo agento, kaip antai alilbromido. LXXIX formulės junginys gali būti redukuojamas redukcijos agentu, kaip antai diizobutilaliuminio hidridu, ir gaunamas L_XXX formulės junginys. Kitu atveju, LXXX formulės junginys gali būti gaunamas iš LXXIX formulės junginio pagal dviejų stadijų metodiką, apimančią redukciją ličio borhidridu ir oksidinimą piridinio chlorchromatu. Šis LXXX formulės junginys gali būti pakeistas XIV formulės junginiu iš 1 schemos ir gaunamas LXXXI formulės junginys. Tolesnis LXXXI apdorojimas pagal aukščiau aprašytus metodus duoda V formulės junginį, kuriame Z₂ yra NR₂₃.

[0072] V formulės junginys, kuriame W yra deguonis arba NR₁₅, o Y yra H,H, gali būti pagaminamas pagal 18 schemą. V formulės junginys gali būti paverčiamas L_XXXII formulės junginiu, kuriame P4 ir P₅ yra hidroksilą apsaugančios grupės, veikiant reagentu tokiu kaip t-butildimetilsililtriflatas. LXXXIII formulės junginys gali būti pagaminamas iš LXXXII formulės junginio veikiant Lavvesson'o reagentu. LXXXIV formulės junginys gali būti pagaminamas iš LXXXIII formulės junginio panaudojant redukcijos agentą,

[0073] N

[0074] kaip antai tri-n-butilalavo hidridą, kai W vra deguonis, arba veikiant metilo jodidu ir natrio borhidridu, kai W yra NR i5. Atskėlus LXXXIV formulės junginio

[0075] blokuojančias grupes, pavyzdžiui, vandenilio fluoridu, kai P₄ ir P₅ yra sililo grupės, gaunamas V formulės junginys, kuriame W yra deguonis arba NR₁₅, o Y yra H,H.

[0076] V formulės junginys, kuriame W ir Y yra deguonis, o R, yra alkilas arba alkilas su pakaitais, gali būti pagaminamas pagal 19 schemą, V formulės junginys gali būti blokuojamas, gaunant LXXXXV formulės jungini, kuriame P₅ ir P₆ yra hidroksilą blokuojančios grupės, veikiant reagentu, tokiu kaip t-butildimetilsililtrifluormetansulfonatu. DOOOCVI formulės junginys gali būti pagaminamas iš LXXXXV formulės junginio veikiant redukcijos agentu, kaip antai natrio borhidridu. LXXXXVII formulės junginys gali būti pagaminamas iš LXXXXVI formulės junginio blokuojant hidroksilo grupę, kur P7 yra, pavyzdžiui, p-metoksibenzilas, panaudojant p-metoksibenziltrichloracetimidatą. Blokuojančių grupių P₅ ir P₆ atskėlimas iš LXXXXVII formulės junginio, panaudojant, pavyzdžiui, vandenilio fluoridą piridine, kai P₅ ir P₆ yra t-butildimetilsililo grupės, duoda LXXXXVIII formulės jungini, kuris po to gali būti selektyviai blokuojamas, panaudojant, pavyzdžiui, t-butildimetilsililo chloridą ir gaunamas LXXXXIX formulės junginys, kuriame P₈ yra t-butildimetilsililo grupe, C formulės junginys gali būti pagaminamas iš LXXXXIX formulės junginio veikiant baze, kaip antai ličio diizopropilamidu, po to veikiant alkilinimo agentu, kaip antai metilo jodidu. C formulės junginys gali būti blokuojamas, gaunant Cl formulės jungini, kuriame P₉ yra hidroksilą blokuojanti grupė, veikiant reagentu, tokiu kaip t-butildimetilsililtrifluormetansulfonatas. Cll formulės junginys gali būti pagaminamas iš Cl formulės junginio atskeliant P₇ grupę, pavyzdžiui, DDQ, kai P₇ yra p-metoksibenzilo grupė. V formulės junginys, kuriame W ir Y yra deguonis, o R₁ yra alkilas arba alkilas su pakaitais, gali būti pagaminamas iš Cll formulės junginio ji oksidinant, pavyzdžiui, TPAP/NMO, po to atskeliant blokuojančias grupes, pavyzdžiui, vandenilio fluoridu, kai P₈ ir P₉ yra sililo grupės. Šis V formulės junginys gali būti toliau oksidinamas dimetildioksiranu, kaip parodyta 1 schemoje, ir gaunamas atitinkamas V formulės epoksidas.

[0077] V formulės junginys, kuriame X yra deguonis, o Q yra olefinas, gali būti pagaminamas iš V formulės junginio, kuriame X yra deguonis, o Q yra oksirano žiedas, veikiant reaktingu metalocenu, kaip antai titanocenu, cirkoniocenu arba niobiocenu, kaip parodyta 20 schemoje (žr. pavyzdžiui, R. Schobert and U. Hohlein, Svnlett (1990), 465-466).

[0078] V formulės junginys, kuriame X yra deguonis, o W yra NR1₅l kur R_i5 yra vandenilis, gali būti pagaminamas iš V formulės junginio, kuriame ir X, ir W yra deguonis, pagal 21 schemą. CIII formulės junginys gali būti pagaminamas iš V formulės junginio, kuriame ir X, ir W yra deguonis, pagaminant pi-alilpaladžio kompleksą, panaudojant, pavyzdžiui, paladžio tetrakistrifenilfosfiną, o po to veikiant natrio azidu (zr. pavyzdziui, Murahashi, S.-l.; et al. J. Org. Chem., 1989, 54, 3292). Po to CIII formulės junginys redukuojamas redukcijos agentu, kaip antai trifenilfosfinu, ir gaunamas CIV formulės junginys. V formulės junginys, kuriame X yra deguonis, o W yra NR₁₅. kur R,₅ yra vandenilis, gali būti pagaminamas iš CIV formulės junginio sudarant makrolaktamini ciklą, panaudojus, pavyzdžiui, difenilfosforilazidą arba bromtripirolidinofosfonio heksafluorfosfatą (PyBroP).

[0079] V formulės junginys, kuriame X yra deguonis, o W yra NR₁₅, kur R₁₅ yra alkilas, alkilas su pakaitais, arilas, heteroarilas, cikloalkilas, heterociklinė grupė, O-alkilas, O-alkilas su pakaitais, gali būti pagaminamas iš V formulės junginio, kuriame ir X, ir W yra deguonis, pagal 22 schemą. CV formulės junginys gali būti pagaminamas iš V formulės junginio, kuriame ir X, ir W yra deguonis, pagaminant pi-alilpaladžio kompleksą, panaudojant, pavyzdžiui, paladžio tetrakistrifenilfosfiną, o po to veikiant pirminiu aminu. V formulės junginys, kuriame X yra deguonis, o W yra NR,₅l kur R₁₅ alkilas, alkilas su pakaitais, arilas, heteroarilas, cikloalkilas, heterociklinė grupė, OH, O-alkilas, O-alkilas su pakaitais, gali būti pagaminamas iš V formulės junginio sudarant makrolaktamini ciklą, panaudojant, pavyzdžiui, difenilfosforilazidą arba bromtripirolidinfosfonio heksafluorfosfatą (PyBroP). Tuo atveju, kai R₁₅ yra OH, gali reikėti atskelti blokuojančią grupę, tokią kaip t-butildimetilsililas, nuo tarpinio junginio, kuriame R₁₅ yra O-t-butildimetilsililas.

[0080] V formulės junginiu biologinis aktyvumas iri vitro buvo įvertintas tokiu būdu:

[0081] Dvigubo ciklinimo (2X) veršiuko smegenų tubulinas buvo pagamintas pagal VVilliams ir Lee (žr. VVilliams, R.C., Jr., and Lee, J. C. Preparation of tubulin from brain. Methods in Enzvmoloov 85, Pt.D: 376-385, 1982) metodiką ir laikomas skystame azote iki panaudojimo. Tubulino polimerizacijos gebos kiekybinis Įvertinimas atliekamas pagal modifikuotą Svvindell et al. (žr. Svvindell, C.S., Krauss, N.E., Horvvitz, S.B., and Ringei, I. Biologically active taxol analogues with deleted A-ring side chain substituents and variable C - 2 configutations. J. Med. Chem. 34: 1176-1184, 1991) metodiką. Šios modifikacijos dalinai duoda tubulino polimerizacijos gebos išraišką kaip bet kurio duoto junginio efektyvią koncentraciją. Šiame metode i tubuliną, esanti polimerizacijos buferyje (0,1 M MES, 1 mM EGTA, 0,5 mM MgCI₂, pH 6,6), 37 °C temperatūroje Beckman'o (Beckman Instruments) DU 7400 modelio UV spektofotometro mikrokiuvetėse pridedama įvairios koncentracijos junginio, ištirpinto polimerizacijos buferyje. Naudojama galutinė mikrokanalėlių baltymo koncentracija yra 1,0 mg/ml, o junginio koncentracijos paprastai yra 2,2, 5,0 ir 10 (.iM. Rankiniu būdu nustačius tiesinės srities pradini ir galutini laikus, apimant mažiausiai 3 laiko taškus, kas 10 sek, išmatuoti pradiniai OD pokyčio polinkiai apskaičiuojami pagal prietaise esančią programą. Šiomis sąlygomis tiesiniai nukrypimai buvo <10"⁶, polinkiai buvo 0,03-0,002 optinio tankio vienetų/per minutę ribose, o maksimalus optinis tankis buvo 0,15 optinio tankio vienetų. Efektyvi koncentracija (EC₀._oi) yra apibrėžiama kaip interpoliuojant gauta koncentracija, kuri gali sukelia pradinį 0,01 OD/per minutę greičio polinkį, ir yra apskaičiuojama pagal formulę: EC₀,_0i = koncentracija/polinkis. ED₀,_0i reikšmės yra išreiškiamos iš 3 skirtingų koncentracijų gautų reikšmių vidurkiu su standartiniu nukrypimu. Šio išradimo junginių EC_0l0i reikšmės yra 0,01-1000 nM ribose.

[0082] Citotoksiškumas buvo Įvertintas panaudojant HCT-116 žmogaus storosios žarnos karcinomos ląsteles pagal MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-karboksimetoksifenil)-2-(4-sulfenil)-2H-tetrazolis, vidinė druska) testą, aprašytą T.L. Riss, et al.. Comparison of MTT, XTT, and novel tetrazolium compound MTS for iri vitro proliferation and chemosensitivity assays, Mol. Biol. Cell 3 (Suppl.):184a, 1992. Ląstelėmis buvo padengiamos 96 duobučių mikrotitro plokštelės po 4000 ląstelių/duobutei ir po 24 valandų pridedama vaisto ir atliekama serija praskiedimų. Ląstelės inkubuojamos 37 °C temperatūroje 72 vai., po to pridedama tetrazolio dažo (MTS, galutinė koncentracija 333 mg/ml) kartu su elektronus sujungiančiu agentu - fenazino metosulfatu - gaunant 25 liM koncentraciją (galutinė koncentracija). Gyvų ląstelių dehidrogenazė redukuoja MTS. susidarant medžiagai, kuri sugeria 492 nm bangos ilgio šviesą, ką galima nustatyti spektrofotometriškai. Kuo didesnis optinis tankis, tuo didesnis gyvų ląstelių skaičius. Rezultatai išreiškiami IC_5o. kuri yra vaisto koncentracija, reikalinga 50 % inhibuoti ląstelių proliferaciją (t.y. optini tanki esant 450 nm bangos ilgiui), lyginant su neapdorotomis kontrolinėmis ląstelėmis. Šio išradimo junginių IC₅₀ reikšmės yra 0,01-1000 nM ribose.

[0083]

[0084] [ 4S-[ 4R^ I7S*, 8R*, 9R*, 15R*( E)]]- 4, 8- Dihidroksi- 5, 5, 7, 9- tetrametil- 16-[ 1-metii-2-(2-metil-4-iiuzoiii)eteniij - l-aza-13(E)-cikloiieki>adeceu-2,6-uionai>

[0085] j maišomą morfoliną (165,5 g, 1,9 mol) pilamas izobutiraldehidas (173 ml, 1,9 mol) tokiu greičiu, kad reakcijos temperatūra neviršytų 30 °C. Supylus izobutiraldehidą, reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 2 vai., po to prie kolbos prijungiama Dino-Starko gaudyklė ir kaitinama iki 160 °C 20 vai. Tada reakcijos mišinys atvėsinamas iki kambario temperatūros ir prie kolbos prijungiamas distiliacijos aparatas su Vigro kolonėle. Distiliacija giliame vakuume duoda 135 g (50 %) A junginio, kuris yra skaidri bespalvė alyva. MS (M+H, 1₄2).

[0086] j maišomą propionilo chlorido (44 ml, 0,50 mol) tirpalą eteryje (135 ml) 0 °C temperatūroje azoto atmosferoje per 45 min. supilamas A junginio (69 g, 0,50 mol) tirpalas eteryje (135 ml). Supylus tirpalą, reakcijos mišinys maišomas ir virinamas su grižtamu šaldytuvu 2 vai., po to maišomas kambario temperatūroje 16 vai. Reakcijos mišinys nufiltruojamas ir ant filtro esanti medžiaga perplaunama eteriu (50 ml). Lakios medžiagos nugarinamos vakuume. Liekana ištirpinama H₂0 (80 ml) ir nustatomas tirpalo pH lygus 4. įpilama eterio (80 ml) ir bifazinis mišinys maišomas 16 vai, Reakcijos mišinys supilamas į dalijamąjį piltuvą, atskiriami sluoksniai ir vandeninis sluoksnis ekstrahuojamas eteriu (5 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami (MgS0₄), nufiltruojami ir nugarinami vakuume. Nudistiliavus liekaną giliame vakuume, gaunama 10,4 g (16 %) B junginio, kuris yra skaidri bespalvė alyva. MS (M-H, 127).

[0087] j (-)-B-metoksidiizopinokamfenilborano (25,7 g, 81 mmol) tirpalą eteryje (80 ml) 0 °C temperatūroje azoto atmosferoje per 1,5 vai. pridedama 1,0 M alilmagnio bromido eteryje (77 ml, 77 mmol). Reakcijos mišinys maišomas 25 °C temperatūroje 1 vai., po to koncentruojamas vakuume. Liekana ekstrahuojama pentanu (2 x 150 ml), po to ekstraktai nufiltruojami per celitą azoto atmosferoje. Sumaišyti ekstraktai nugarinami vakuume ir

[0088] gaunamas B-alildiizopinokamfenilboranas. Ši medžiaga ištirpinama eteryje (200 ml) ir atšaldoma iki -100 °C azotu. Per 1 vai. -78 °C temperatūroje supilamas B junginio (11,42 g, 89 mmol) tirpalas eteryje (90 ml). Reakcijos mišinys maišomas dar 0,5 vai. ir Įpilama metanolio (1,5 ml). Reakcijos mišinys sušildomas iki kambario temperatūros, veikiamas 3N NaOH (32 ml) ir 30 % H₂0₂ (64 ml), po to virinamas su grįžtamu šaldytuvu 2 vai. Reakcijos mišinys atvėsinamas iki kambario temperatūros, atskiriami sluoksniai ir organinė fazė plaunama H₂0 (500 ml). Sumaišyti vandeniniai perplovimo tirpalai ekstrahuojami eteriu (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai plaunami sočiu NaCI (100 ml), džiovinami (MgS0₄), nufiltruojami ir sukoncentruojami vakuume. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (250 ml), atšaldoma iki 0 °C ir pridedama diizopropiletilamino (93 ml, 535 mmol). J maišomą tirpalą lėtai, kad temperatūra nepakiltų aukščiau 10 °C, pilamas tret-butildimetilsililtrifluormetansulfonatas (69 g, 260 mmol). Supylus šį reagentą, reakcijos mišinys supilamas j vandenj (650 ml), atskiriami sluoksniai ir vandeninis sluoksnis ekstrahuojamas CH₂C!₂ (2 x 650 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami (Na₂S0₄), nufiltruojami ir sukoncentruojami vakuume. Liekana gryninama sparčiosios chromatografijos metodu, eliuuojant heksanais, po to 10 % EtOAc/heksanuose, ir gaunama 17,2 g (78 %) C junginio, kuris yra skaidri, bespalvė alyva. Buvo rasta, kad enantiomerinis perteklius yra 94 %: jis nustatytas šio alkoholio Mosher'io esterio ¹H BMR analizės metodu. ¹³C BMR (CDCb, 80 MHz) 5 215,8, 136,1, 116,5, 52,8, 39,0, 31.9, 26,0, 22,4. 20,1, 18,1, 7,6, -3,6, -4,4.

[0089] Per C junginio (10,8 g, 38 mmol) tirpalą CH₂CI₂ -78 °C temperatūroje burbuliukais leidžiamas 0₃, kol tirpalas išlieka mėlynas (1 vai.). Tada burbuliukais leidžiamas 0₂ 15 min. ir po to 30 min. - N₂; per ši laiką tirpalas pasidaro skaidrus. Po to piridedama trifenilfosfino (10 g, 38 mmol), reakcijos mišinys sušildomas iki -35 °C ir laikomas 16 vai. Lakioj medžiagos i ii lai iiOo _iukuJinU, iib_'kčiiiCl Cji y i ii 1 tUi u l.*. Op a' Ci o Oi 00 Cl Ii' Oi ficUOCji ufijOO metodu, eliuuojant 8 % EtOAc/heksanuose ir gaunama 8,9 g (74 %) D junginio, kuris yra skaidri bespalvė alyva. ¹H BMR (CDCb, 300 MHz) 5 9,75 (m, 1 H), 4,53 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,40-3,60 (m, 4H), 1,10 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,98 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,07 (s, 3H), 0,04 (s, 3H).

[0090] Į D junginio (390 g, 13,6 mmol) tirpalą t-butanolyje (75 ml) pridedama 2-metil-2-buteno (5,85 ml, 55,2 mmol) ir po to kambario temperatūroje sulašinamas natrio chlorito (4,61 g, 40,8 mmol) ir monobazinio natrio fosfato (2,81 g, 20,4 mmol) tirpalas H₂0 (15 ml). Reakcijos mišinys maišomas 0,5 vai., po to tirpikliai nugarinami vakuume. Į liekaną įpilama H₂0 (150 ml), po to ekstrahuojama EtOAc (3 x 150 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai džiovinami (MgS0₄), nufiltruojami ir lakios medžiagos nugarinamos vakuume. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu, eliuuojant 20 % EtOAc/heksanai/ 1% AcOH, gaunama 3,79 g (92 %) E junginio, kuris yra skaidri bespalvė klampi alyva. MS (M + H, 303).

[0091] J LiCI (6,9 g, 0,16 mol) ir tik ką paruošto ličio diizopropilamido (Aldrich, 2,0 M tirpalas heptane/etilbenzene/THF, 27,6 ml, 55 mmol) suspensiją papildomame kiekyje THF (70 ml) -78 °C temperatūroje per 10 min. sulašinamas (R,R)-N-(2-hidroksi-1-metil-2-feniletil)-N-metilproionamido (6,0 g, 27 mmol, Meyers, A.G. et al. J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 9361) tirpalas THF (30 ml). Ryškiai geltonas reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje (1 vai.), 0 °C temperatūroje (15 min.) ir 25 °C temperatūroje (5 min.), po to vėl atšaldomas iki 0 °C ir veikiamas 5-brom-1-penteno (4,8 ml, 40 mmol) tirpalu THF (5 ml). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje (24 vai.), supilamas i sotu vandenini NH₄CI (100 ml) ir EtOAc (100 ml). Atskiriamos dvi fazės ir vandeninė fazė vėl ekstrahuojama EtOAc (3 x 100 ml). Organiniai ekstraktai sumaišomi, plaunami sočiu vandeniniu NaCI (200 ml), džiovinami (Na₂S0₄) ir koncentruojami vakuume. Po sparčiosios ohromatoarafiios (SiO-, 4.0 x crn. ? % MeOH-CHOU) gaunamas F junginvs

[0092] (6,9 g, 88 %), kuris yra gelsva alyva. MS (ESI⁺): 290 (M + H) + ; MS (ESI'): 288,2 (M-H)\

[0093] j 250 ml talpos apvaliadugnę kolbą 0 °C temperatūroje jpilama pirolidino (2,6 ml, 30 ml), po to pridedama BH₃-THF komplekso (1,0 M THF, 31 ml, 30 mmol). Borano-pirolidino kompleksas sušildomas iki 25 °C (1 vai.), vėl atšaldomas iki 0 °C ir per 30 min. atsargiai lašinamas n-butillitis (1,6 M heksane, 19 ml, 30 mmol), palaikant vidinę temperatūrą žemiau 5,5 °C. Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje dar 30 min., po to per 10 min. sulašinamas F junginio (3,0 g, 10 mmol) tirpalas THF (23 ml). Reakcijos mišinys maišomas 25 °C temperatūroje (6 vai.), po to skaldomas lašinant vandenini 3N HCI (25 ml). Tada reakcijos mišinys supilamas j vandenini 1N HCI (200 ml) ir ekstrahuojamas Et₂0 (4 x 80 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai plaunami 1:1 sotaus vandeninio NaCI - vandeninio 1N HCI mišiniu (2 x 150 ml) ir koncentruojami vakuume, j liekaną Įpilama vandeninio NaOH tirpalo (1N, 200 ml) ir suspensija maišoma 30 min. Mišinys ekstrahuojamas Et₂0 (3 x 100 ml), sumaišyti eteriniai sluoksniai plaunami 1:1 sotaus vandeninio NaCI - vandeninio 1N NaOH mišiniu (2 x 200 ml), džiovinami (Na₂S0₄) ir sukoncenntruojami vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (Si0₂, 4,0 x 25 cm, gradientinis eliuavimas 15-25 % Et₂0-pentane) gaunamas G junginys (1,26 g, 95 %), kuris yra bespalvė alyva. [cx]25d -11 (c 12, CH₂CI₂).

[0094] G junginio (0,24 g, 1,9 mmol) tirpalas CH₂CI₂ (6 ml) veikiamas piridinio chlorchromatu (0,61 g, 2,8 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas 25 °C temperatūroje 5 vai. Gauta tamsiai ruda klampi suspensija perleidžiama per silikagelio-celito sluoksneli (celitas 1,0x1 cm ant Si0₂ viršaus, 1,0 x 5 cm, eliuuojama 50 ml CH₂CI₂). Vakuume nugarinus tirpikli, gaunamas bespalvės alyvos pavidalo negrynintas H junginys (0,15 g, 63 %), kuris yra pakankamai nn'noo [r nnli hufi mi irlriinr-pr>c- tnlimnrnncn rnnUr* iim 'H Rf\/iR f^nri f, rtl-|v ^ J ' ' C_! — " ■ ' * -' - J"' 1 1 - ■ ^ I 4, ^ . - , , . ^ .... ^ , CD₂CI₂) 6 9,62 (s, 1H), 5,88-5,68 (m, 1H), 5,13-4,92 (m, 2H), 2,37-2,24 (m,

[0095] 1H), 2,15-2,05 (m, 2H), 1,62-1,78 (m. 1H), 1,51-1,32 (m, 3H), 1,07 (d, 3H, J =

[0096] I. (3S,6R,7S,8S)-3-tref-Butildimetilsiloksi-4,4,6,8-tetrametil-7-hidroksi-5-okso-12-trideceno rūgštis

[0097] j paruoštą LDA tirpalą (Aldrich, 2,0 M tirpalas heptane/etilbenzene/THF, 3,8 ml, 7,6 mmol) papildomame THF kiekyje (25

[0098] ml) -78 °C temperatūroje per 3 min. sulašinamas E junginio (1,0 g, 3,4 mmol) tirpalas THF (5 ml). Reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje (10 min.), sušildomas iki -40 °C (20 min.), vėl atšaldomas iki -78 °C ir supilamas H junginys (0,56 g, 4,4 mmol) THF (5 ml), Reakcijos mišinys sušildomas iki - 40 °C, maišomas 1 vai. ir praskiedžiamas sočiu vandeniniu NH4CI (50 ml). Atskiriami sluoksniai ir vandeninė fazė ekstrahuojama EtOAc (4 x 50 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami sočiu vandeniniu NaCI (100 ml), džiovinami (Na₂S04) ir koncentruojami vakuume. Po išskirstymo sparčiosios chromatografijos (Si0₂. 2,5 x 20 cm, gradientinis eliuavimas 2-5 % MeOH-CHCI₃) ir po to HPLC (YMC S-10, ODS, 30x500 mm kolonėlė, eliuuojama MeOH esant 20 ml/min. srauto greičiui) metodais gaunamas norimas sin-aldolis -1 junginys (0,60 g, 43 %) - ir nepageidaujamas diastereomeras (0,32

[0099] ): 427,3 (M-H)\

[0100] Stereochemija buvo patvirtinta tiesiogiai palyginant tolimesnių darinių - esterių (naudojamų epotilono C sintezėje) ir to paties anksčiau K.C, Nicolaou et al. Anaevv. Chem. int. Ed. Enal. 1997, 36, 166 aprašyto tarpinio junginio 13C ir 1H BMR spektrus.

[0101] J. (S)-2-[N-[(fref-Butiloksi)karbonil]amino]-4-penteno rūgštis

[0102] L-2-amino-4-penteno rūgšties (NovaBiochem, 3,0 g, 26 mmol) tirpalas THF-H₂O (1:1, 200 ml) 0 °C veikiamas NaHCC>3 (6,6 g, 78 mmol), o po to di-

[0103] N.

[0104] ir maišomas 16 vai. Atsargiai pilant sočią vandeninę citrinos rūgštį 0 °C temperatūroje mišinio pH padaromas lygus 4, ir mišinys ekstrahuojamas EtOAc (4 x 50 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami sočiu vandeniniu NaCI (75 ml), džiovinami (Na₂S0₄) ir koncentruojami vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (Si0₂, 4,0 x 6 cm, gradientinis eliuavimas 5-10 % MeOH-CHCI₃) gaunamas J junginys (5,5 g, 99 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI"): 429.3 (2M-H)\ 214,1 (M-H)\

[0105] K. (S)-2-[N^2-[(fref-Butiloksi)karbonil]amino]-N-metoksi-N-metil-4-pentenamidas

[0106] J junginio (2.9 g, 13 mmol) tirpalas CHCI₃ (55 ml) 0 °C temperatūroje veikiamas iš eilės N.O-dimetiIhidroksilamino hidrochloridu (1,4 g, 15 mmol), 1-hidroksibenzotriazolu (2,0 g. 15 mmol), 4-metilmorfolinu (4,4 ml, 40 mmol) ir 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimido hidrochloridu (3,4 g, 18 mmol). Reakcijos mišinys palaipsniui sušildomas iki 25 °C, maišomas 16 vai. ir praskiedžiamas H₂0 (100 ml). Atskiriami sluoksniai, ir vandeninė fazė ekstrahuojama EtOAc (3 x 75 ml). Sumaišytos organinės fazės plaunamos vandeniniu 5 % HCI (100 ml), sočiu vandeniniu NaHC0₃ (100 ml), sočiu vandeniniu NaCI (100 ml), džiovinamos (Na₂S0₄) ir koncentruojamos vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (Si0₂, 3,0 x 20 cm, gradientinis eliuavimas 25-50 % EtOAc-heksanu) gaunamas K junginys (2,5 g, 71 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI⁺): 258,9 (2M-H) + , 214,1 (M + H) + , 202,9 (M-izobutilenas), 158,9 (M-BOC): MS (ESP): 257,2 (M-H)\

[0107] K junginio (2,5 g, 1,0 mmol) tirpalas THF (65 ml) 0 °C temperatūroje veikiamas metilmagnio bromidu (3,0 M Et₂0, 8,1 ml, 2,4 mmol). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje (2,5 vai.) ir atsargiai supilamas i sotų vandeninį NH₄CI (100 ml). Atskiriami sluoksniai ir vandeninis sluoksnis ekstrahuojamas EtOAc (3 x 75 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai plaunami sočiu vandeniniu NH₄CI (75 ml), H₂0 (75 ml), sočiu vandeniniu NaCI (75 ml),

[0108] v. džiovinami (MgSO,-,) ir koncentruojami vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (Si0₂l 3,0 x 20 cm, gradientinis eliuavimas 10-25 % EtOAc-

[0109] heksanu) gaunamas (S)-3-[N-[(frer-biitiloksi)karbonil]amino]-5-heksen-2-onas (2,2 g, 67 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI⁺): 213,9 (M + H) + , 157,9 (M-izobutilenas), 113,9 (M-BOC: MS (ESI"): 212,2 (M-H)".

[0110] M. ( S)- 4-[ 3-[ N-[( fref- Butiloksi) karbonil] amino]- 2- metil- 1( E), 5-heksadienil]- 2- metiltiazolas

[0111] j 2-metil-4-tiazolilmetildifenilfosfino oksido (2,5 g, 8,0 mmol, Danishefsky et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 7998) tirpalą THF (38 ml) -78 °C temperatūroje per 5 min. sulašinamas n-butillitis (1,6 M heksane, 5,2 ml, 8,4 mmol). Gautas spindintis oranžinis mišinys pamaišomas 15 min. -78 °C temperatūroje ir veikiamas L junginio (0,81 g, 3,8 mmol) tirpalu THF (5 ml). Palaikius -78 °C temperatūroje 10 min., šaldymo vonia nuimama, ir reakcijos mišinys paliekamas sušilti iki 25 °C (2 vai.). Mišinys supilamas j sotų vandenini NH₄CI (50 ml) ir atskiriami sluoksniai. Vandeninė fazė ekstrahuojama Et₂0 (3 x 50 ml), ir sumaišyti organiniai ekstraktai plaunami iš eilės H₂O (75 ml). sočiu vandeniniu NaHG0₃ (75 ml), sočiu vandeniniu NaCI

[0112] (75 ml), džiovinami (Na_įS04) ir koncentruojami vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (Si0₂, 4,0 x 30 cm, gradientinis eliuavimas 10-20 % EtOAc-heksanu) gaunamas M junginys (0,23 g, 18 %), kuris yra bespalvė alyva, kartu su regeneruotu pradiniu ketonu (20-30 %). MS (ESI⁺): 309,1 (M+H)⁺, 253,0 (M-izobutilenas); MS (ESI"): 307,3 (M-H)".

[0113] Argono atmosferoje 0 °C temperatūroje (30 min.) M junginys (0.15 g, 0,49 mmol) veikiamas 4,0 N HCI 1,4-dioksane (5 ml). Lakios medžiagos nugarinamos vakuume ir gauta balta putų pavidalo medžiaga ištirpinama šaltame prisotintame vandeniniame NaHC0₃ (3 ml). Tirpalas ekstrahuojamas EtOAc (4 x 10 ml), sumaišyti EtOAc sluoksniai džiovinami (Na₂S0₄) ir koncentruojami vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (S1O₂, 1,0 x 5 cm, gradientinis eliuavimas 5-₁0 % MeOH-CHCI₃) gaunamas N junginys (88 mg,

[0114] 88 %), kuris yra bespalve alyva. MS (ESI⁺): 209,0 (M + H) + ; MS (ESI"): 207,2

[0115] O. (3S,6R,7S,8S)-N-(S)-[1-(2-Metil-4-tiazolil)-2-metil-1(E),5-heksadien-3-il]-3-fref-butildimetilsiloksi-4,4,6,8-tetrametil-7-hidroksi-5-okso-12-tridecenamidas

[0116] M junginio (88 mg, 0,42 mmol) tirpalas DMF (1,3 ml) 0 °C temperatūroje veikiamas iš eilės I junginiu (0,15 g, 0,35 mmol), 1-hidroksibenzotriazolu (49 mg, 0,36 mmol) ir l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimido hidrochloridu (0,10 g, 0,52 mmol). Reakcijos mišinys palaipsniui sušildomas iki 25 °C, maišomas 15 vai. ir praskiedžiamas H₂0 (3 ml). Mišinys ekstrahuojamas EtOAc (3 x 10 ml), ir sumaišytos organinės fazės plaunamos vandeniniu 5 % HCI (10 ml), sočiu vandeniniu NaHCC>3 (10 ml), sočiu vandeniniu NaCI (10 ml), džiovinamos (Na₂S04) ir koncentruojamos vakuume. Po sparčiosios chromatografijos (Si0₂, 1,5 x 20 cm, 2,5 % MeOH-CHCI₃) gaunamas O junginys (0,17 g, 77 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga. MS (ESr): 619,3 (M + H)+.

[0117] P. [4S-[4R^*,7S^*,8R^*,9RM5R^*(E)]]-4-tref-Butildimetiisiloksi-8-hidroksi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13(E)-cikloheksadecen-2,6-dionas

[0118] O junginio (17 mg, 27 mmol) tirpalas degazuotame benzene (8,0 ml) Ar atmosferoje veikiamas Grubb^:o katalizatoriumi [bis(tricikloheksilfosfin)benzilidin-rutenio dichloridas, Strem Chemicals, 11 mg, 14 mmol], Reakcijos mišinys maišomas 25 °C temperatūroje 15 vai. ir vėl veikiamas papildoma katalizatoriaus porcija (5,0 mg, 4,5 mmol). Dar po 7 vai. benzenas nugarinamas vakuume ir juoda klampi liekana perleidžiama per silikagelio sluoksneli (1,0x3 cm), eliuuojant Et₂0 (25 ml). Sukoncentravus eliuatą vakuume, gaunamas geometrinių izomerų 5:1 (E/Z), kuriuos galima atskirti, mišinys. PTLC (Si0₂, 1 mm plokštelė, 2 eliuavimai 1:1:1 heksano-tolueno-etilacetato tirpalu) duoda E-izomerą - P jungini (5,1 mg, 34 %) ir atitinkamą Z izomerą (1,0 mg, 6,7 %). P junginys: MS (ESI⁴): 1181,7 (2M + H)"\ 591,4 (i'vi-f H)'. Z-izomeras: MS (EST): 1181,5 (2M +H) + , 613,2 (M + Na) + , 591,2 (M + H) + ; MS (ESI"): 589,3 (M-H)".

[0119] Q. [4S-[4R^*,7S^*,8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-Dihidroksi-5,5,7,9-tetrametiM6-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13(E)-cikloheksadecen-2,6-dionas

[0120] Į 1 drachmos talpos ampulę su P junginiu (2,3 mg, 3,9 mmol) CH₂CI₂ (0,4 ml) 0 °C temperatūroje pridedama trifluoracto rūgšties (0,1 ml). Reakcijos mišinys hermetiškai uždaromas prileidus Ar ir maišomas 0 °C temperatūroje. Po 4 vai. lakios medžiagos nugarinamos pastovia Ar srove 0 °C temperatūroje. Į liekaną Įpilama sotaus vandeninio NaHC0₃ (1 ml) ir EtOAc (1 ml) ir atskiriami sluoksniai. Vandeninė fazė ekstrahuojama EtOAc (4 x 1 ml), sumaišyti EtOAc sluoksniai džiovinami (Na₂S04) ir koncentruojami vakuume. Po PTLC (Si0₂, 20 x 10 x 0,025 cm, eliuuojama 5 % MeOH-CHCI₃) gaunamas [4S-[4R*,7S*,8R*,9RM5R*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1 -aza-13(E)-cikloheksadecen-2,6-dionas (1,3 mg, 68 %), kuris yra balta plėvelė. MS (ESI⁺): 953,5 (2M + H) + , 477,3 (M + H) + ; MS (ESI"): 475,5 (M-H)".

[0121] Pagal anksčiau parodytas reakcijų schemas gali būti pagaminami tokie junginiai: [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11 R*, 12R*, 16S*]]-7,11 -dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,13,17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11 R*. 12R*. 16S*]]-7,11 -dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazo!il)etenil]-4,13,17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas: [4S-[4R*, 7S*,8R*, 9R*,15R*(E)]]-4.8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1,10-dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-rlmnas: [4S-[4R\7S^*,8R^*.9RM5R^*(E)]]-4.8-dihidroksi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazo!il)etenil]-1l10-dioksa-13-cikloheksadecen-2.6-dionas; [1S-[1 R*.3R*(E).7R*.10S*,11 R*112R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8.8.10,12,16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4.14,17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-dionas; [1S-[1 R*,3R*(E).7R*.10S*t11 R*. 12R*.16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,14,17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [4S-[4R*l7S\8R\9RM5R*(E)]]-4.8-dihidroksi-5.5l7l9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1,11-dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas: [4S-[4R*,7S*,8R*.9RM5R*(E)]]-4.8-dihidroksi-5,5,7.9-tetrametil-16-[1-m eti I-2- (2-m eti I -4-ti azol i I) eten i I ] -1.11 -dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [1S-[1R*.3R*(E)l7R\10S*l11R*,12R*.16S*]]-7,11-dihidroksi-8.8,10,12.16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-9-onas; [1S-[1 R*,3R* (E).7R*,1 OS*. 11 R*. 12R*,16S*]]-7.11 -dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-9-onas: [1S-[1R*l3R*(E),7R*,10S\11RM2R*.16S*]]-7,11-dihidroksi-3,8,8,10,12,16-heksametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-dionas; [1S-[1 R*,3R*(E),7RM0S*,11 RM2R*,16S*]]-7.11-dihidroksi-3,8,8,10.12-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [4S-[4R*.7S*.8R*.9RM5R*(E)]]-4.8-dihidroksi-5.5,7,9,13,16-heksametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [4S-[4R^*,7S^*,8R^*.9RM5R^*(E)]]-4.8-dihidroksi-5,5,7,9,16-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [1S-[1 R*.3R*(E).7R*.10S*.11 R*.12R*.16S*]]-7.11-dihidroksi-6_l8l8_l10l12,16-heksametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [1S-[1 R*.3R*(E).7R*.10S*.11 R*.12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-6,8,8,10,12-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-dionas; [4S-[4R^*,7S^*.8R^*.9R^*_ll5R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5l7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazoli!)etenil]-l-aza-13-cikloheksadecen-2l6-dionas; [1 S-[1 R*,3R* (E) .7RM OS*. 11 R*. 12R*. 16S*]]-7.11 -dihidroksi-4,8,8,10,12,16-heksametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [1S-[1 R*,3R*(E).7R*. 10S*,11 R*.12R*.16S*]]-7.11 -dihidroksi-4.8,8,10_l12-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [4S-[4R^*.7S^*.8R_',,9R^*,15R^*(E)]]-4_l8-dihidroksi-1,5,5,7,9,13-heksametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [4S-[4R^*l7S^*.8R^*.9R^*.15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-1,5,5,7,9-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [1 S-[1 R*.3R*(E).7R*,10S*,11 R*,12RM6S*]]-7,11 -dihidroksi-8,8,10,12_I16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-13-aza-4_l17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-dionas; [1 S-[1 R*,3R*(E) .7R*. 10S*,11 R*.12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8.10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-13-aza-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas; [4S-[4R^*,7S^*_l8R^*.9R^*l15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-10-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [4S-[4R*l7S*.8R*.9RM5R*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolii)etenil]-10-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [ 1 S- [1 R* .3R* (E). 7RM OS*. 11 R*, 12RM 6S*] ]-7.11 -dihi droksi-8,8,10,12.16-pentametil-3-[1 -m eti I -2-(2-meti I -4-ti azol i I) eteni I ] -14-aza-4,17-dioksabiciklo[14.l.0]heptadekan-5,9-dionas;[1S-[1R*,3R*(E).7RM0S*.11R*.12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8l10,12-tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-14-aza-4.17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas;[4S-[4R^*,7S^*,8R^*.9R^*.15R^*(E)]]-4.8-dihidroksi-5.5.7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-11-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas;[4S-[4R^*.7S^*.8R^*.9R^*.15R^*(E)]]-4.8-dihidroksi-5,5,7l9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-11-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-dionas; [1 S-[1 R*,3R*.7R*. 10S*, 11 R*. 12R*. 16S*]]-N-fenil-7,11 -dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-5.9-diokso-4.17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-3-karboksamidas;[1S-[1R*,3R*,7R\10SM1R*.12R*.16S*]]-N-fenil-7l11-dihidroksi-S.S.IO.^-tetrametil-S.g-diokso^.^-dioksabiciklotM.I.OJheptadekan-S-karboksamidas;[4S-[4R^*,7S^*_l8R^*,9R^*,15R^*]]-N-fenil-4,8-dihidroksi-5,5,7I9_l13-pentametil-2,6-diokso-l-oksa-13-cikloheksadecen-16-karboksamidas: [4S-[4R^*.7S^*,8R^*.9R^*,15R^*]]-N-fenil-4,8-dihidroksi-5l5.7,9-tetrametil-2.6-diokso-1-oksa-13-cikloheksadecen-16-karboksamidas:[1S-[1R^*.3R^*(E),7R^*,10S^*,11R^*.12R^*,16S^*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10.12,16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)ciklopropil]-4.17-dioksabiciklo[14.l.0]heptadekan-5,9-dionas;[1S-[1R^*.3R^*(E).7R^*.10S^*.11R^*.12R^*l16S^*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)ciklopropil]-4.17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas. 3 pavyzdys

[0122] [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11 -Dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas

[0123] A. (3S,6R,7S,8S,12R,13S,15S)-15-Azido-12,13-epoksi-4,4,6,8,12,16-heksametil-7-hidroksi-17-(2-metil-4-tiazolil)-5-okso-16-heptadeceno rūgštis

[0124] Epotilono B (0,35 g, 0,69 mmol) tirpalas degazuotame THF (4,5 ml) veikiamas katalitiniu kiekiu (80 mg, 69 mmol) tetrakis(trifenilfosfin)paladžio(0), ir suspensija maišoma 25 °C temperatūroje Ar atmosferoje 30 min, Gautas ryškiai geltonas homogeninis tirpalas veikiamas visas iš karto natrio azido (54 mg, 0,83 mmol) tirpalu degazuotame H₂0 (2,2 ml). Reakcijos mišinys pašildomas 45 °C temperatūroje 1 vai., praskiedžiamas H₂0 (5 ml) ir ekstrahuojamas EtOAc (4x7 ml). Organiniai ekstraktai plaunami sočiu vandeniniu NaCI (15 ml), džiovinami (Na₂S0₄) ir koncentruojami vakuume. Liekana gryninama sparčiosios chromatografijos metodu (Si0₂, 3,0 x 15 cm, 95:5,0:0,5 CHCb-MeOH-AcOH) ir gaunamas A junginys (0,23 g, 61 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI⁺): 551 (M + H) + ; MS (ESI'): 549 (M-H)".

[0125] B. (3S,6R,7S,8S,12R,13S,15S)-15-Amino-12,13-epoksi-4,4,6,8,12,16-heksametil-7-hidroksi-17-(2-metil-4-tiazolil)-5-okso-16-heptadeceno rūgštis

[0126] A junginio (0,23 g, 0,42 mmol) tirpalas THF (4,0 ml) 25 °C temperatūroje veikiamas H₂0 (23 ml, 1,25 mmol) ir su polimeru surištu

[0127] v trifenilfosfinu (Aldrinh. polistirenas susiūtas su 2 % DVB. 0,28 g, 0,84 mmol). Gauta suspensija maišoma 25 °C temperatūroje Ar atmosferoje (32 vai.),

[0128] nufiltruojama per celito sluoksneli ir koncentruojama vakuume. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (Si0₂, 1,5 x 10 cm, gradientinis eliuavimas nuo 95:5,0:0,5 iki 90:10:1,0 CHCh-MeOH-AcOH), gaunamas B junginys (96 mg, 44 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI⁺): 525,2 (M+H)⁺; MS (ESI'): 523,4 (M-H)\

[0129] Kitu atveju, i 25 ml talpos apvaliadugnę kolbą, kurioje yra A junginys (0,26 g, 0,47 mmol) ir Pt0₂ (0,13 g, 50 % pagal masę) Ar atmosferoje įpilama absoliutaus EtOH. Gautas juodas mišinys maišomas esant 1 atmosferos H₂ slėgiui 10 vai., po to sistema prapučiama N₂ ir pridedama dar viena porcija Pt0₂ (65 mg, 25 % pagal masę). Vėl reakcijos mišinys maišomas po H₂ sluoksniu 10 vai. Po to sistema prapučiama N₂, ir reakcijos mišinys nufiltruojamas per celito sluoksneli, eliuuojant CH₂CI₂ (3 x 25 ml). Tirpikliai nugarinami vakuume, ir išgryninus liekaną taip kaip aprašyta aukščiau, gaunamas B junginys (0,19 g, 75 %).

[0130] Kitu atveju, A junginio (20 mg, 36 mmol) tirpalas THF (0,4 ml) veikiamas trifenilfosfinu (19 mg, 73 mmol) Ar atmosferoje. Reakcijos mišinys pašildomas iki 45 ⁿC, maišoma 14 vai., po to atšaldoma iki 25 °C. Gautas iminofosforanas veikiamas amonio hidroksidu (28 %, 0,1 ml) ir vėl reakcijos mišinys sušildomas iki 45 °C. Po 4 vai, lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir išgryninus liekaną taip kaip aprašyta aukščiau, gaunamas B junginys (13 mg, 70 %).

[0131] C. [1S-[1R^*,3R^*(E),7R^*,10S^*,11R^*,12R^*,16S^*]]-7,11-Dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas

[0132] B junginio (0,33 g. 0,63 mmol) tirpalas degazuotame DMF (250 ml) 0 °C temperatūroje Ar atmosferoje veikiamas kietu NaHC0₃ (0,42 g, 5,0 mmol) ir difenilfosforilazidu (0,54 ml, 2,5 mmol). Gauta suspensija maišoma 4 °C temperatūroje 24 vai., 0 °C temperatūroje praskiedžiama fosfatiniu buferiu (250 ml, pH = 7) ir ekstrahuojama EtOAc (5 x 100 ml). Organiniai ekstraktai plaunami 10 % vandeniniu LiCI (2 x 125 ml), džiovinami (Na^SCV, ir koncentruojami vakuume. Liekana pirmiausia gryninama sparčiosios chromatografijos metodu (Si0₂, 2,0 x 10 cm, gradientinis eliuavimas 2-5 % MeOH-CHCb), po to naudojant Chromatotron (2 mm S1O₂, GF rotorius, gradientinis eliuavimas 2-5 % MeOH-CHCI₃) ir gaunamas norimas junginys (0.13 g, 40 %), kuris yra bespalvė alyva: 'H BMR (CDCI₃, 400 MHz) 5 6,98 (s, 1 H), 6,71 (d, 1H, NH. J = 8,1 Hz), 6,56 (s, 1H), 4,69-4,62 (m, 1H), 4,18-4,12 (m, 1H), 4,01-3,96 (m, 1H), 3,86 (s, 1H), 3,38-3,34 (m, 1H), 2,82 (dd, 1H, J = 5,6, 6,0 Hz), 2,71 (s, 3H), 2,58 (s, 1H), 2,43 (dd, 1 H, J = 9,0, 14,5 Hz), 3,34 (dd, 1H, J = 3,0, 14,5 Hz), 2,1₄ (s, 3H), 2,05-1,92 (m, 2H), 1,82-1,41 (eilė multipletų, 7H), 1,35 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 1,18 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,14 (s, 3H), 1,00 (d, 3H, J = 6,8 Hz); MS (ESI + ): 507,2 (M + H) + : MS (ESI"): 505,4

[0133] (M-H)\

[0134] Į dvigurklę kolbą pridedama susmulkintų magnio drožlių (24 mg, 1,0 mmol). Kolba išdžiovinama liepsna vakuume ir atšaldoma prileidžiant argono, jdedama bis(ciklopentadienil)titano dichlorido (250 mg, 1,0 mmol), o po Įpilama bevandenio THF (5 ml). Maišoma suspensija vakumuojama žemu vakuumu, ir reakcijos kolba pripildoma argono. Po 1,5 vai. raudona suspensija patamsėja, pavirsta homogeniniu tamsiai žaliu tirpalu ir sureaguoja beveik visas metalinis magnis. Paimama dalis šio tirpalo (3,5 ml,0,70 mmol, 3,5 ekv.) ir atšaldoma iki -78 °C argono atmosferoje. Į šj tirpalą pridedama epotilono A (99 mg, 0,20 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys sušildomas iki kambario temperatūros ir maišomas 15 min. Lakios medžiagos nugarinamos vakuume, liekana chromatografuojama du kartus per silikageli (25 g), eliuuojant 35 % EtOAc/heksanais ir gaunama 76 mg (80 %) epotilono C, kuris yra gelsva klampi alyva.

[0135] 5 pavyzdys

[0136]

[0137] B junginys (0,860 g, 1,68 mmol, 1,0 ekv.) ištirpinamas bevandeniame DMF (0.00250M, 672 ml) ir degazuojama vieną valandą kambario temperatūroje. Tirpalas atšaldomas iki 0 °C ir argono atmosferoje pridedama bevandenio natrio rūgščiojo karbonato (1,13 g, 13,4 mmol, 4,0 ekv.) ir difenilfosforilazido (1,85 g, 6,72 mmol, 8,0 ekv.). Reakcijos mišinys laikomas 4 °C temperatūroje argono atmosferoje ir maišomas 16 vai. Po to reakcijos mišinys atšaldomas iki -60 °C ir reakcijai sustabdyti lėtai pilamas fosfatinis buferis pH 7 (400 ml). Temperatūra palaikoma žemiau -30 °C. Šiam mišiniui leidžiama lėtai sušilti iki kambario temperatūros ir ekstrahuojama etilacetatu (1 litras). Vandeninis sluoksnis plaunamas etilacetatu (4 x 300 ml). Organiniai ekstraktai sumaišomi, plaunami 10 % LiCI (500 ml), džiovinami (natrio sulfatas), nufiltruojami ir sukoncentruojami vakuume. Alyvos pavidalo liekana gryninama preparatinės HPLC metodu (YMC S-15 ODS 50x500 mm kolonėlė, 45 min/gradientas, 0-100 % B, 50 ml/min, sulaikymo laikas = 35 min., A = 5 % acetonitrilo/95 % vandens, R = 5 % vandens/95 % acetonitrilo)_. Reikiamo? frakcijos sukoncentruojamos vakuume ir po liekanos liofilizavimo iš

[0138] vandeninio acetonitrilo gaunamas norimas junginys (0,220 g, 26,0 % išeiga), kuris yra bespalvė kieta medžiaga. MS (ESI⁺): 493 (M + H)+; MS (ESI"): 491

[0139] (M-H)\

[0140]

[0141] [4S-[4R^*,7S^*,8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-Dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-13(Z)-cikloheksadecen-2,6-dionas

[0142] Volframo heksachloridas (0,19 g, 0,49 mmol, 0,5 ekv.) ištirpinamas THF (5,0 ml) ir tirpalas atšaldomas iki -78 °C. Iš karto supilamas n-butilličio tirpalas heksane (1,6 M, 0,63 ml, 1,0 mmol, 1,0 ekv.) ir per 20 min. reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros (šylant iki kambario temperatūros tirpalas pasidaro tamsiai žalias). Kambario temperatūroje i 4C jungini (0,020 g, 0,039 mmol, 1,0 ekv.) pridedamas pagaminto volframo reagento 0,1 M tirpalas (0,79 ml, 0,079 mmol, 2,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 30 min., po to skaldomas sočiu NaHC0₃ (2,0 ml). Suskaldytas tirpalas praskiedžiamas vandeniu (10 ml) ir ekstrahuojamas CH₂CI₂ (4x 20 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai džiovinami (Na₂S0₄), nufiltruojami ir koncentruojami vakuume. Neorganinės medžiagos pašalinamos praleidžiant liekaną per silikagelio sluoksnelį (eliuuojama 19/1 CHCh/MeOH). Eliuatas koncentruojamas vakuume. Liekana gryninama PHPLC metodu (YMC S5 ODS 30-100 % B, A = 5 % vandeninis CH₃CN, B = 95 % vandeninis CH₃CN, 3 ml/min., 220 nm, 30 min. gradientas) ir reikiamos uakcijos suKoncei ui uojamob vaKUume. Lipiu Kieta medžiaga iioi' iiizuujaiiia iš vandeninio acetonitrilo ir gaunamas norimas junginys (4,3 mg, 29 %), kuris yra balta kieta medžiaga. TLC: Rf = 0,57 (9/1 CHCh/MeOH, detektuojama UV); DSGMS: (M + H)+ apskaičiuota = 491,29436, rasta = 491,2934.

[0143]

[0144] A. [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11- Dihidroksi-8)8,10,12,16- pentametil-3-[1- metil-2-(2- metil-4- tiazolil) etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0] heptadekan-5,9- diono N- oksidas

[0145] Epotilono B (2,0 g, 3,9 mmol) tirpalas CH₂CI₂ (30 ml) veikiamas 3-chiorperoksibenzenkarboksirūgštimi (1,0 g, 5,9 mmol) 25 °C temperatūroje Ar atmosferoje 2 vai. Pridedama dar 0,5 g (3,0 mmol) 3-chlorperoksibenzen-karboksirūgšties ir reakcijos mišinys maišomas 2 vai. Reakcijos mišinys nufiltruojamas ir filtratas sukoncentruojamas vakuume. Liekana ištirpinama EtOAc (100 ml), plaunama sočiu vandeniniu NaHCC>3 (75 ml), 5 % vandeniniu Na₂S0₃ (75 ml), H₂0 (75 ml), džiovinama (Na₂S0₄) ir koncentruojama vakuume. išorvninus linkana. s^parčiosios chromatografijos metodu (SifV, A 5 x 30 cm, 2-10 % MeOH-CHCI₃ gradientinis eliuavimas) gaunamas A junginys

[0146] (1,04 g, 50 %). kuris yra balta kieta medžiaga. MS (ESI⁺): 524,3 (M + H)+; MS (ESI"): 522,5 (M-H)\

[0147] B. [ 1S-[ 1R*, 3R*( E), 7R*, 10S*, 11R*, 12R*, 16S*]]- 7, 11- Dihidroksi-8, 8, 10, 12, 16- pentametil- 3-[ 1- metil- 2-( 2- hidroksimetil- 4- tiazolil) etenil]-4, 17- dioksabiciklo[ 14. 1. 0] heptadekan- 5, 9- dionas ( epotilonas F)

[0148] J A junginio (0,46 g, 0,88 mmol) tirpalą CH₂CI₂ (10 ml) esantį vamzdyje, kuri galima sandariai uždaryti, Ar atmosferoje pridedama 2.6-lutidino (0,82 ml, 7,0 mmol) ir trifluoracto rūgšties anhidrido (0,87 ml, 6,2 mmol). Reakcijos indas sandariai uždaromas Ar atmosferoje, šildomas 75 °C temperatūroje (12 min.), atvėsinamas iki 25 °C ir lakios medžiagos pašalinamos nepertraukiama N₂ srove. Po to reakcijos indas patalpinamas i gilų vakuumą ir vakuumuojama 15 min. Gauta liekana ištirpinama MeOH (10 ml) ir veikiama amonio hidroksidu (28-30 % NH₃ vandenyje, 1,0 ml). Mišinys šildomas 45 °C temperatūroje (10 min.) ir lakios medžiagos nugarinamos vakuume. Negrynas reakcijos mišinys gryninamas HPLC metodu (YMC S-15 ODS 30 x 500 mm kolonėlė, 50 % acetonitrilas-H₂0 izokratinėse sąlygose, srauto greitis = 20 ml/min., sulaikymo laikas = 28 min.). Reikiamos frakcijos sukoncentruojamos vakuume ir po liofilizavimo iš vandeninio acetonitrilo gaunamas C junginys (0,22 g, 48 %), kuris yra balta kieta medžiaga. MS (ESI⁺): 524,3 (M + H) + , 1047,6 (2M + H) + ; MS (ESI'): 522,5 (M-H)'.

[0149] C. ( 3S, 6R, 7S, 8S, 12R, 13S, 15S)- 15- Azido- 3, 7- dihidroksi- 12, 13- epoksi-4, 4, 6, 8, 12, 16- heksametil- 17-( 2- hidroksimetiI- 4- tiazolil)- 5- okso- 16( E)-heptadeceno rūgštis

[0150] B junginio (0,18 g, 0,34 mmol) tirpalas degazuotame THF (3,0 ml) veikiamas katalitiniu kiekiu (40 mg, 3,4 x 10_"² mmol) tetrakis(trifeniIfosfin)pa!adžio(0) ir suspensija maišoma 25 °C temperatūroje Ar atmosferoje 30 min. Gautas ryškiai geltonas homogeninis tirpalas tuoj pat veikiamas natrio azido (27 mg, 0,41 mmol) tirpalu degazuotame vandenyje (1,5 ml). Reakcijos mišinys šildomas 45 °C temperatūroje 1 vai., praskiedžiamas H₂0 (5 ml) ir ekstrahuojamas EtOAc (4 x 10 ml). Organiniai ekstraktai plaunami sočiu vandeniniu NaCI (15 ml), džiovinami (Na₂S0₄) ir koncentruojami vakuume. Liekana gryninama sparčiosios chromatografijos metodu (Si0₂, 2,5 x 15 cm, gradientinis eliuavimas nuo 95:5 CHCI₃-MeOH iki 95:5,0:0,5 CHCI₃-MeOH-AcOH) ir gaunamas C junginys (39 mg, 20 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI⁺): 567,₄ (M + H) + , 1133,6 (2M + H) + ; MS (ESI"): 565,5 ( M-H)", 1131,8 (2M-H) + .

[0151] D. ( 3S, 6R, 7S, 8S, 12R, 13S, 15S)- 15- Amino- 3, 7- dihidroksi- 12, 13- epoksi-4, 4, 6, 8, 12, 16- heksa meti 1- 17-( 2- hidroksi meti l- 4- tiazol i l)- 5- okso- 16 ( E)-heptadeceno rūgštis

[0152] J 10 ml talpos apvaliadugnę kolbą su C junginiu (40 mg, 71 mmol) ir Pt0₂ (12 mg, 30 % pagal masę) argono atmosferoje jpilama absoliutaus etanolio (3 ml). Gautas juodas mišinys maišomas esant vienos atmosferos H₂ slėgiui 10 vai. Pro to sistema prapučiama N₂, ir reakcijos mišinys nufiltruojamas per nailono membraną (plaunama 25 ml MeOH). Tirpikliai

[0153] nugarinami vakuume ir gaunamas putu pavidalo D junginys (29 mg, 76 %),

[0154] kuris yra pakankamai grynas ir jį galima naudoti tolimesnėje stadijoje. LCMS: 541,3 (M + H)+.

[0155]

[0156] A. [1S-[1R*,3R*(E).7RM0S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-fref-butildifenilsililoksimetil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabicik!o[14.1.0]heptadekan-5,9-dionas

[0157] 7E junginio (6,8 mg, 13 mmol) tirpalas CH₂CI₂ (0,5 ml) 0 °C temperatūroje Ar atmosferoje veikiamas trietilaminu (2,7 ml, 20 mmol), 4- N, N-dimetilaminopiridinu (0,2 mg, 1,3 mmol) ir fref-butildifenilsililo chloridu (3,7 ml, 14 mmol). Reakcijos mišinys palaipsniui sušildomas iki 25 °C (1 vai.), atšaldomas iki 0 °C, skaldomas pilant vandeninį sotų NaHCŪ₃ (1 ml) ir ekstrahuojamas EtOAc (4x2 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai plaunami sočiu NaCI tirpalu (5 ml), džiovinami (Na₂S04) ir koncentruojami vakuume. Liekana gryninama sparčiosios chromatografijos metodu (S1O₂, 1,0x5 cm, gradientinis eliuavimas 2-5 % MeOH-CHCI₃) ir gaunamas A junginys (7 mg, 71 %), kuris yra bespalvė alyva. MS (ESI⁺): 761,5 (M + H)+; MS (ESI'): 759,7

[0158] (M-H)\

[0159]

[0160] B. [ 4S-[ 4R*, 7S*, 8R*, 9R*, 15R*(E)]]- 4, 8- Dihidroksi- 5, 5, 7, 9, 13- pentametil-16-[ 1- metil- 2-( 2- hidroksimetil- 4- tiazolil) etenil]- 1- aza- 13( Z)-cikloheksadecen- 2, 6- dionas

[0161] Volframo(IV) chlorido (0,10 g, 0,25 mmol) tirpalas bevandeniame THF (5,0 ml) -78 °C temperatūroje veikiamas n-BuLi (1,6 M heksanuose, 0,32 ml, 0,50 mmol) argono atmosferoje. Reakcijos mišinys sušildomas iki 25 °C temperatūros per 40 min., po to vėl atšaldomas iki 0 °C. Į 1 drachmos talpos indą su A junginiu (7,0 mg, 9,2 mmol) 0 °C temperatūroje argono atmosferoje įpilama dalis gauto tamsiai žalio homogeninio tirpalo (0,2 ml, 20 mmol). Reakcijos mišinys sušildomas iki 25 °C, pamaišomas 30 min,, skaldomas įpilant sotaus vandeninio NaHC0₃ (0,5 ml) ir ekstrahuojamas EtOAc (4 x 1 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai džiovinami (Na₂S04) ir koncentruojami vakuume. Liekana gryninama preparatinės TLC metodu (S1O₂, 20 x 20 x 0,025 cm, eliuuojama 5 % MeOH-CHCI₃) ir gaunamas B junginio silil-blokuoto (13Z) izomero kartu su nedideliu kiekiu (<10 %) mažesniojo (13E) izomero neperskiriamas mišinys, kuris tuoj pat deblokuojamas tolimesnėje stadijoje.

[0162] Šis B junginio silil-blokuotų izomerų mišinys (2,3 mg, 3,1 mmol) 25 °C temperatūroje veikiamas 0,3 ml HF-piridino buferinto tirpalo THF (2:1:0,5 THF/piridino/HF-piridino tirpalas iš Aldrich Chemical Co.). Po 1 vai. reakcijos mišinys neutralizuojamas sočiu vandeniniu NaHC0₃ (0,5 ml) ir ekstrahuojamas EtOAc (4 x 1 ml). Sumaišyti organiniai ekstraktai plaunami sočiu vandeniniu NaHC0₃ (1 ml), džiovinami (Na₂S0₄) ir lakios medžiagos nugarinamos vakuume. Liekana gryninama preparatinės TLC metodu (Si0₂, 20 x 10 x 0,025 cm, eliuuojama 5 % MeOH-CHCI₃) ir gaunamas plonos plėvelės pavidalo norimas junginys (13Z-izomeras) kartu su neatskiriamu kiekiu (<10 %) mažesniojo (13E) izomero (0,96 mg, 20 % per dvi stadijas). MS (ESI⁺): 507,3 (M + H) + ; MS (ESI"): 505,6 (M-H)\

Apibrėžtis

1. Junginys, kurio formulė:

2. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame:

3. Junginys pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:[1 S-[1 R* .3R* (E), 7R*. 10S*. 11 R*. 12R*. 16S*]]-7,11 -dihidroksi-8,8.10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,13,17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-diono;[1 S-[1 R*,3R*(E)17R*.10S*.11 R*.12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8.8,10,12-tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,13.17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-diono;[4S-[4R^*,7S^*,8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-l,10-dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[4S-[4R^*.7S^*,8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4_l8-dihidroksi-5_l5,7_l9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-l,10-dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1 S-[1 R*.3R*(E).7R*.10S*.11 R*,12R*,16S*]]-7.11-dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3- [1 -metil-2-(2-metii-4-tiazolil)etenil]-4,14,17-trioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[1S-[1R*.3R*(E)l7RM0SM1R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3- [1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4.14,17-trioksabiciklo[14.l.0]heptadekan-5,9-diono;[4S-[4R^*,7S^*l8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1,11-dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[4S-[4R^*,7S^*_l8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5_l5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-l. 1 l-dioksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1 S-[1 R* ,3R*(E) ,7R*, 10SM1 R*. 12R*, 16S*]]-7.11 -dihidroksi-8,8_l10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-9-ono;[1 S-[1 R* ,3R*(E) ,7R*, 10S*. 11 R*, 12R*. 16S*] ]-7.11 -dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-9-ono;[1 S-[1 R* ,3R*(E) ,7R*, 10S* ,11 R*. 12R*. 16S*]]-7,11 -dihidroksi-3,8,8.10.12,16-heksametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiaklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[1 S-[1 R*.3R*(E) ,7R*. 10S*. 11 R* .12R*. 16S*]]-7,11 -dihidroksi-3,8,8,10.12-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[4S-[4R* ,7S*,8R* ,9R*. 15R* (E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7.9,13,16-heksametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[4S-[4R^*,7S^*_l8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9,16-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1S-[1R*,3R*(E).7R*,10SMlR*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10.12.16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-diono:[1 S-[1 R*.3R* (E) ,7R*, 10SM1RM 2R*. 16S*]]-7,11-dihidroksi-6,8,8_l10,12-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[1S-[1R^*,3R^*(E),7R^*,10SM1R^*.12R^*.16S^*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12_I16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[1S-[1 R*,3R*(E),7R*.10S*,11 R*.12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8.8,10,12-tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[4S-[4R^*,7S^*,8R^*_l9R^*,15R^*(E)]]-4_l8-dihidroksi-5,5.7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13-cikloheksadecen-2,6-diono:[4S-[4R^*,7S^*_l8R^*_l9R^*.15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5_I5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1 S-[1 R*,3R*(E),7R*,1 OSM1 R*,12R*,16S*]]-7,11 -dihidroksi-4,8,8,10,12.16-heksametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-diono;[1 S-[1 R*,3R*(E) ,7R*,1 OSM 1 R*, 12R*, 16S*]]-7,11-dihidroksi-4,8,8,10,12-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono; [4S-[4R^*l7S^*,8R^*,9R^*,15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-1,5.5,7t9,13-heksametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[4S-[4R^*l7S^*.8R^*.9R^*_l15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-1.5.5.7.9-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-l-aza-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1 S-[1 R* ,3R* (E) ,7R*. 10SM1 R*. 12R*, 16S*]]-7,11 -dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-13-aza-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[1S-[1 R\3R*(E),7R*,10S*. 11 R*, 12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metii-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-13-aza-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-diono;[4S-[4R^*,7S^*,8R^*l9R^*,15R^*(E)]]-4,8-dihidroksi-5.5,7,9l13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-10-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[4S-[4R*.7S\8R*,9R*l15R*(E)]]-4l8-dihidroksi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-10-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1 S-[1 R* ,3R*(E) ,7R*, 10S*. 11 R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-14-aza-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5.9-diono;[1S-[1R*,3R*(E),7RM0S\1 1 R*, 12R*, 16S*]]-7,11 -dihidroksi-8,8,10.12-tetrametil-3-[1 -m etil -2-(2-m eti l-4-ti azol i I) eteni I ] -14-aza-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[4S-[4R*,7S*.8R\9RM5R*(E)]]-4.8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metii-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-11-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[4S-[4R\7S*,8R*,9R*.15R*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-1l-aza-1-oksa-13-cikloheksadecen-2,6-diono;[1 S- [1 R* ,3R* ,7R*,1 0S*,11 R*,12R*,16S*]]-N-fenil-7,11 -dihidroksi-8,8.10,12,1 6-pentametil-5,9-diokso-4.17-dioksabiciklo [14.1.0]heptadekan-3-karboksamido; [1S-[1R*,3R*,7RM0SM1R*t12RM6S*]]-N-fenil-7,11-dihidroksi-S.S.IO.^-tetrametil-S^-diokso^.^-dioksabiciklofM.I.Ojheptadekan-S-karboksamido;[4S-[4R^*,7S^*,8R^*,9R^*,15R^*]]-N-fenil-4,8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-2,6-diokso-1 -oksa-13-cikloheksadecen-16-karboksamido;[4S-[4R^*_l7S^*,8R^*,9R^*,15R^*]]-N-fenil-4,8-dihidroksi-5,5,7,9-tetrametil-2,6-diokso-1 -oksa-13-cikloheksadecen-16-karboksamido;[1S-[1R^*,3R^*(E),7R^*,10S^*,11R^*,12R^*,16S^*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)ciklopropil]-4,17-dioksabiciklo[14.1.0]heptadekan-5,9-diono;[1S-[1R*l3R*(E),7RM0S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroksi-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)ciklopropil]-4,17-dioksabiciklo[14.1,0]heptadekan-5,9-diono;[4S-[4R*, 7S*,8R*, 9R*,15R*(E)]]-4,8-dihidroksi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[1-metil-2-(2-hidroksimetil-4-tiazolil)etenil]-1-aza-13(Z)-cikloheksadecen-2,6-diono;ir jų farmaciškai priimtinų druskų, solvatų ir hidratų.

4. Junginys pagal 1 punktą, skirtas panaudoti vėžio gydymui.

5. Junginys pagal 1 punktą, skirtas panaudoti ligos, susijusios su ląstelių hiperproliferacija, gydymui.

6. Junginys pagal 1 punktą, skirtas panaudoti antiangiogeninio efekto gavimui pacientui.

Brėžiniai