[LT] Išradimas siejasi su stambiamolėkulinių junginių chemija ir skirtas polimerinių gelių gavimui, kurie gali būti panaudojami biotechnologijoje sintetinant jų pagrindu sorbentus biomolekulių chromatografijai.@Būdo tikslas - sukurti didelio poringumo polimerinius gelius, kurie būtų tinkamai sintetinant jų pagrindu sorbentus biomolėkulių chromatografijai , eliminuojant baltymų nespecifinę sorbciją.Būdas realizuojamas vykdant suspenzinę radikalinę alil alkoholio arba jo gicidilo eterio kopolimerizaciją su etilenglikoldimetakrilatu santykiu (65,34-87,41):(34,66-12,59) mol.% neutralaus organinio tirpiklio - etilacetato arba jo mišinių su n-alkanais (1-3):1 tirpale. Kopolimerizacija vykdoma esant viršutinės organinės fazės, turinčios komonomerus ir radikalinį iniciatorių, ir apatinės disperguojančios fazės, turinčios suspenzacijos stabilizatoriaus , santykiu 1:(2-3). N-Alkanai yra tokie:heksanas, heptanas, oktanas, dekanas ir dodekanas. Disperguojančia faze naudojamas vandeninis koncentruoto kalcio chlorido (30-2 %) tirpalas su polivinilo alkoholiu arba pastarojo ir želatinos (0,5-0,1%) tirpalas.
[EN]
[0001] Išradimas priskiriamas stambiamolekulinių junginių chemijai, ir būtent polimerinių gelių gavimo būdui, pastarieji gali būti panaudoti biotechnologijoje kaip bazinėe matricos sintetinant jų pagrindu sorbentus biomo- lekulių chromatogaf i jai .
[0002] Yra žinomi didelio efektyvumo sorbentų, skirtų biologiškai aktyvių ir. edžiagų gryninimui, gavimo būčiai, naudojant agarozės arba celiuliozės matricas. Sorbentai šių matricų . pagrindu nepasižymi baltymų nespecifinės sorbcijos efektais. Tačiau pačios matricos linkusios cėl žemo mechaninio patvarumo kolapsuoti esant dideliems eliuertų tekėjimo greičiams. Tai riboja - jų panaudojimu biomolekulių preparatyvinės chromatografijos procesuose / S. Kato, E. Sada, Rates of mass tra sfer in attinity chromatograpfy. J. Eng. Japan, 13, 151- 154 ( 1930). Pakankamu mechaniniu stabilumu pasižymi sintetiniai polimerų geliai, tokie kaip Asahi- geliai / EP 0066165, C 08 F 8/ 12, G 01 N 31/ 06, B 01 J 20/ 26. 1982 m., SU 1311631, 3iul. Ko 18, 1987 m.-/. arba TSK tipo geliai / Y. Kato, K. Komiya, H. Sasaki, T. Hashimoto, Separation range and separation efficiency in high- speec gel filiration on TSK- gel SW columns. J. Chromator., 190 ( 1980) 297- 303/. Minėti geliai yra gaminami radikalinės suspensinės kopolimerizacijos metodu naudojant vimlacetatą kaip monovinilini komonornerą ir trialilizocianuratą ( Asahi- geliai) arba ( meta) akrilinės ' rūgštie.*- ir per. taeritrito esterius ( TSK- geliai) kaip susiuvimo agentus. Tačiau minėtų gelių gavimo būdai pasižymi eile trūkumų: - reikalingos papildomos darbo sąnaudos jų apmuilinimui pervedant neutralius OH- grupes turinčius gelius, ir būdingas sintetiniams geliams nespecifinės ( pagrinde hiarofooinio pobūdžio) baltymų sorbcijos lygis. Tam tikro dydžio liekamos nespecifinės baltymų sorbcijos buvimas išeiginiuose geliuose neigiamai atsiliepia gaunamų . jų pagrindų sorbentų jnonofunkci-onalumui ir
[0003] .c
[0004] Siūlomam išradimui techninio sprendimo esme labiausiai ar4timas yra polimerinių gelių - Sferonų HEMA - gavimo būdas. Šio tipo geliai-yra gaminami vykdant suspensinę radialinę 2-hidroksietilmetakrilato ir etilendimetakri-lato arba etilendiaJcrilato kopolimerizacija inertinių organinių tirpiklių - cikloheksanolio arba ciklo-heksilamino mišiniuose su oktilo arba dodecilo alkoholiais. Disperguojančia faze yra naudojamas vandeninis polovinilpirolidono arba polivinilo alkoholio tirpalas, ir krakmolas kaip suspensijos stabilizatorius. Kopolimerizacijos reakcija vykdoma 12 valandų 70°C temperatūroje /JAV pat. 1370477, C08F 1/ 11, 1974 m./.
[0005] Šio tipo gelių gavimo būdo trūJcumas - aukštas baltymų nespecifinės sorbcijos lygis ant išeiginių gelių. Nespecifinė baltymų sorbčija žymiu mastu sumažinama tolimesne išeiginių gelių modifikacija* pvz», amininimo agentais, įvedant didelę jonogeninių grupių koncentraciją. Tačiau pilnai eliminuoti . nespecifinę baltymų sorbciją nepavyksta /O. Mikės, Z. Hostomska et al., Ion - exchange derivativcs of- Spheron, J. Chromatogr. 440 (1988) 287-304/. Liekamos baltymų nespecifinės sorbcijos buvimas geliuose labai neigiamai pasireiškia' naudojant pastaruosius kaip bazinę matricą specifinių sorbentų sintezei, ir baltymų gel - filtracijos procesams. Sintetinant biospecifinius sorbentus įvedamo i, matricą ligando koncentracija, kaip taisyklė, nėra aukšta.Todėl nespecifinės baltymų sorbcijos buvimas gali iškreipti biomolekulės sąveikos su imobilizuotu specifiniu - ligandu specifiškumą ir sumažinti sorbento efektyvumą- Biomolekulių gel filtracijoje nespecifinės sorbcijos. reiškiniai gali būti eliminuojami įvedant į eliuentus chaotropinius
[0006] agentus arba organinių tirpiklių priedus. Tačiau pastarųjų naudojimas gali iššaukti biomolekulių konformacijos pasikeitimus ir denatūraciją. Tai riboja savo ruožtu platesni, išeiginių gelių panaudojimą biomolekulių chromatografijai išsaugant jų natyvią struktūrą.
[0007] Išradimo tikslas - sukurti didelio poringumo polimerinius gelius, 'kurie būtų tinkami sorbento sintezei, o pastarieji neturėtų nespecifinės sorbcijos ir būtų tinkami biomolekulių Chromatografijai.
[0008] Keliamas tikslas yra pasiekiamas vykdant suspensinę radikalinę " alilo alkoholio arba aliloglicidilo eterio kop^limerizacią su etilenglikoldimetakrilatu esant jų moliniam santykiui (65, 34- 87, 41) : (34, 66-12, 59) moliniai procentai. Komonomerų mišinio polimerizacija vykdoma * inertiniuose organiniuose tirpikliuose etilacetate arba jo mišiniuose su n-alkanais santykiu (1-3):1, ir reakcija vykdoma 6 valandas 80°C temperatūroje esant viršutinės fazės, turinčios komonomerus ir raaikalinį iniciatorių, ir apatinės disperguojančios fazės, turinčios suspensijos stabilizatorių, santykiu 1: (2 — 3).
[0009] Alilo alkoholio arba aliloglicidilo eterio, kaip pagrindinio komonomero, panaudojimas įgalina ivesti i polimerinio gelio grandinę hidrofilini .komponentą, turinti, erdviniu požiūriu palankiai atitolintą nuo pagrindinės makromolekulinės grandinės neutralią 0H-grųpę arba dar labiau atitolintą reakcingą epoksi-grupę, tinkamą įvairių funkcinių grupių bei specifinių ligandų prijungimui. Pastaruoju atveju susidarantį po ligandų prijungimo oksipropilinė grupuotė . atlieka intarpo tarp polimero grandinės" ir ligando vaidmenį, skatindama pilnesnį ligando specifinės sąveikos su biomolekule vyksmą.
[0010] Inertinių tirpiklių - etilacetato arba jo įvairios sudėties mišinių su n-alkanais panaudojimas, bei komonomerų. molinio santykio keitimas įgalina kryptingai reguliuoji polimerinių gelių poringumą t. y, porų dydi, ir- tūrį, jų vidinio paviršiaus plotą, porų pasisikirstymą pagal jų dydį bei liekamos nespecifinės baltymų sorbcijos ant gelių lygį.
[0011] Viršutinės organinės fazės, turinčios komonomerus bei polimerįz.aci jos iniciatorių, ir apatinės disperguo-jančios fazės, turinčios suspensijos stabilizatorių, tūrinio santykio keitimas nuo 1:2 iki 1:3 įgalina reguliuoti gelio dalelių geometrinę formą bei dydį.
[0012] Koncentruoto kalcio chlorido vandeninio tirpalo su polivinilo alkoholiu arba pastarojo ir želatinos tirpalo panaudojimas yra pakankamas suspensijos stabilizavimui, siekiant gauti sferinės formos daleles, ir apsaugoti hidrofilinio komonomero perėjimą į apatinę vandeninę fazę.
[0013] Išradimo esmė yra atskleidžiama žemiau • pateiktais pavyzdžiais.
[0014] 1. Polimeriniai geliai - alilo alkoholio kopolimerai su
[0015] etilenglikoldimetakrilatu (sąlyginis pavadinimas FSL-S-geliai).
[0016] Pavyzdys 1. Monomerinis mišinys, turintis 50 ml- (0,736 molio) alilo alkoholio (AA) IR 20 ML. (0,106 molio) etilenglikoldimetakrilato (EGDMA) (AArEGDMA 87, 41:12, 59 mol.%) ištirpinamas 75 ml. etiacetatoN. Jame ištirpinama 0. 64 g ( 1% nuo bendros monomerų masės) iniciatoriaus - azoizosviesto rūgšties dinitrilo ( ADN) ir gautas mišinys prapučiamas 10 min» laikotarpyje dujiniu azotu deguonies pašalinimui. Gautas mišinys disperguojamas maišant (250 aps/min) 1%-iamė polivinilo alkoholio (mol. masė 100000) vandeniniame tirpale, turinčiame. 200 g. ištirpinto kalcio chlorido heksahidrato (viršutinės organinės ir apatinės vandeninės fazių tūrinis santykis = 1:2). Reakcijos mišinys maišomas 6 valandas 90°C temperatūroje. Reakcijai pasibaigus, mišinys a-taušinamas iki kambario temperatūros," iškraunamas ant filtro, ir gautas gelis plaunamas ant filtro vandeniu, vandens-izopropanolio mišiniais sū didėjančia pastarojo tūrine koncentracija nuo 30 iki 100%., izopropanolio ir vanden's-izopropanolio mišiniais su mažėjančia pastarojo tūrine koncentracija nuo 100 iki 30%., ir vandeniu. Gautas kopolimeras frakcionuojamas šlapio sijojimo būdu, atrenkant gelio frakcijas 63 - 125 ir 125 - 500 mikronų dydžio. Gaunama 140 ml. gelio su daleliu dydžiu 125-500 mkm, ir 70 ml - €3 - 125 mkm.
[0017] Gautam polimeriniam geliui nustatomos šios pagrindinės savybės: vandens užlaikymas, lyginamasis -vandenyje išbrinkusio gelio tūris, baltymo nespecifinės sorbcijos lygis bei poringumo parametrai.
[0018] t,
[0019] H20 - užlaikymas (WR, ml/g) nustatomas sekančiai. Nupusiausvyrintas vandenyje gelis centrifuguojamas vandens pašalinimui, ir pasveriamas (W1).Po to gelis išdžiovinamas ir pasveriamas (W2) . H20 užlaikymas išskaičiuojamas pagal formulę:
[0020] Lyginamasis vandenyje išbrinkusio gelio -tūris {\\, cm3/g) nustatomas išmatavus 1 g šlapio, husėdusio gelio užimamą tūri,.
[0021] Baltymo nespecifinės - sorbcijos lygis- ( Nm, mg/ ml) nustatomas pagal sorfcuoto žmogaus serumo albumino kiekį, statinės sorbcijos būdu. Tam tikslui polimerinis gelis ^ inkubuojamas 2 valandų bėgyje kambario temperatūroje baltymo tirpale ( 40 - 50 mg baltymo 1, 0 ml gelio) natrio fosfa' tiniame buferyje, turinčiame 3, 0 M NaCl.
[0022] Polimerinio gelio poringumas - porų užimamas tūris, lyginamasis paviršiaus plotas,, vidutinis porų diametras ir jų - polidispersiškumas nustatomi atvirkštinės gel-chroraatografijos metodu / A. A. Gorbunov, L. Ya. Solovyova, V. A. Pasechnik, Fundamentais of the theory and practice of polymer gel- p' ermeation chromatogfapfy as a method of chromątographic porosimetry. J-Chromatogr., 448, ( 1988) 307- 332./
[0023] Polimerinių gelių, gautų pagal pvz. 1 ir žemiau pateiktų pavyzdžių aprašymus, savybės - pateikiamos lentelėse" 1- 2.
[0024] Pavyzdys 2 . AA IR EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojamas 75 ml vienodų tūrių etilacetato ir n- heksano mišįnys. Gaunama 160 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm it 30 ml - 63- 125 mkm.
[0025] Pavyzdys 3 . AA ir EGDKA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz * 1 , išskyrus tai, kad organinių tirpikliu naudojamą? 75 ml vienodų tūrių etilacetato ir n- heptano mišinys. Gaunama J10 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 65 ml - 63- 125 mkm. •
[0026] <
[0027] Pavyzdys 4» AA ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojamas 75 ml vienodų tūrių etilacetato ir n-oktano mišinys. Gaunama 140 ml gelio su daleliu dydžiu 125-500 mkm ir 65ml - 63-125 mkm.
[0028] Pavyzdys 5. AA ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojamas 75 ml vienodų tūrių etilacetato ir n-dekano mišinys. Gaunama 135' ml gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 35 ml - 63-125 mkm.
[0029] Pavyzdys 6. AA ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudoj amas.75 ml vienodų tūrių etilacetato ir •n-dodekano mišinys. Gaunama 85 ml gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 75 ml - 63-125 mkm.
[0030] Pavyzdys 7. AA ir EGDMA kopolimerizacij a vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išškyrus tai, kad monomerinio mišinio -fazė susideda iš 50 ml (0,736 molio) ali>o alkoholio, 35 ml (0,185) etilenglikoldimetakrilato (santykis AA:EGDMA = 79,88:20,12 mol.%),' 75 ml etilacetato ir 0,8 g azoizosviesto rūgšties dinitrilo. Gaunama 220 ml gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 90 ml - 63-125 mkm.
[0031] Pavyzdys 8. AA ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad naudojamas monornerinis mišinys tokios pat sudėties kaip pvz. 7, o organiniu tirpikliu naudojama 75 ml vienodų tūrių etilacetato ir n-heksano mišini,. Gaunama 250 ml gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 50 ml - 63-125 mkm.
[0032] Pavyzdys 9. AA ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analodiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad naudojamas monornerinis mišinys tokios pat sudėties'kaip pvz. 7, o organiniu tirpikliu naudojama -75 ml vienodų tūrių etilacetato i' r n- oktano mišini,. Gaunama 180 ml gelio s. u dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 60ml - 63-125 mkm. Pavyzdys 10 . AA ir EGDMA kop' olimer žacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad naudojamas monomerinis mišinys tokios pat sudėties kaip pvz. 7, o organiniu tirpikliu naudojama 75 ml vienodų tūrių, eiilačetato ir n- dekano mišinį. Gaunama 190 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 40 ml - 63- 125 mkm.
[0033] Pavyzdys 11 . AA ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 1, išskyrus tai, kad naudojamas monomerinis mišinys tokios pat sudėties kaip pvz. 7, o organiniu' tirpikliu naudojama 75 ml vienodų tūrių etilacetato ir n- dodekano mišinį- Gaunama 180 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 45 ml - 63- 125 mkm.
[0034] Vandens užlaikymas ( WR), lyginamasis vandenyje išbrinkusio gelio tūris ( VR) ir albumino nespecifinės sorbcijos lygis ( NJ
[0035] Duomenys, pateikti lervtelėse 1-2, . rodo, kad polimeriniai geliai gauti alilo alkoholio ir etilenglikoldimetakrilato pagrindu disponuoja labai didelio diametro poromis, i kurias gali skverbtis ne tiktai stambios baltymų-makromolekulės, bet ir virusai. Pateiktas šio tipo gelių sintezės būdas įgalina kryptingai keisti jų poringumą ir atitinkamai baltymų nespecifinės sorbcijos lygi,. Šio tipo gelia-i gali būti panaudoti sintetinant jų pagrindu sorbentus visiems biopolimerų chromatografijos ' tipams, išskyrus gel-chromatografiją. Žmogaus serumo albumino nespecifinės sorbcijos ant Sferono 100000 (27,1 mg/ml) ir analogiško
[0036] 4 aprašymą (0,8 mg/ml).- palyginimas (lent. 1) rodo, kad bendras nespecifinės baltymų sorbęijos lygis ant polimerinių gelių, gautų pagal siūlomą būdą, yra žymiai mažesnis, ir gali būti kryptingai reguliuojamas keičiant monomerinio mišinio sūdėtį, tirpiklius ir jų mišinių sudėti,. 2. Polimeriniai geliai - aliloglicidilo eterio ir etilenglikoldimetakrilato kopolimerai (sąlyginis pavadinimas FSL-SE-geliai).
[0037] Pavyzdys 12. Į 2-jų litrų talpos trigurklę kolbą su mechaniniu maišikliu, termometru ir grįžtamu šaldytuvu supilamas monomerinis mišinys, susidedantis iš 100 ml (0,694 mol) aliloglicidilo eterio (AGE) ir 40 ml (0,212 mol) etilenglikoldimetakrilato (santykis AGE:EGDMA = 76, 61:23, 39. mol.%).Po to į mišinį įpilama 150 ml etilacetato ir 1,40 g iniciatorius - azoizosviesto rūgšties • dinitrilo. Mišinys prapučiamas 20 min. laikotarpyje dujiniu azotu ir disperguojamas maišant (250-300 aps/min) 870-yje ml 2% vandeniniame polivinilo alkoholio (mol. masė 100000} tirpale, turinčiame 4, 35 g želatinos (organinės ir vandeninės fazių santykis = 1:3). Reakcijos mišinys maišomas 6 valandas 80°C temperatūroje. Po to reakcijos mišinys atšaldomas iki kambario temperatūros ir filtruojamas. Polimerinis gelis . plaunamas ant filtro vandeniu, vandens-izopropanolio mišiniais su didėjančia tūrine pastarojo koncentracija nuo 25 iki 100%, izopropanoliu, .vandens-izopropanolio mišiniais su mažėjančia pastarojo tūrine koncentracija nuo 100 iki25% ir vandeniu.. Gautas gelis f rakcionuojamas šlapio sijojimo būdu, atsrėnkant
[0038] t
[0039] frakcijas su dalelių dydžiu 63-125 ir 125-500 mkm.
[0040] Gautam polimeriniam geliui nustatoma epok§i- grupių kondentracija (CE, mkmol/ml) ir poringumo parametrai. Epoksi-grupės nustatomos inkubuojant gelio pavyzdį natrio tiosulfato tirpale, titruojant išsiskiriančius reakcijos metu hidroksilo jonus standartiniu HCl tirpalu /J. Turkova, Afininė chromatografija, p. 241-242,'1980 m. /.
[0041] Ce=24-25 mkmol/ml.
[0042] Polimerinių gelių, gautų pagal pvz. 12 ir. žemiau pateiktų pavyzdžių aprašymus, savybės pateikiamos lentelėje3.
[0043] Pavyzdys 13. AGE ir EGDMA kopolimerizacij ja vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojama 150 ml vienodų tūrių etilacetato ir n-oktano mišinio. Gaunama 200 ml gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 50 ml - 63-125 mkm. CE=6-15 mkmol/mL.
[0044] Pavyzdys 14. AGE ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, iš'skyrus tai, kad naudojama 150 ml organinių tirpiklių mišinio kaip pvz. 13, esant jų tūriniam santykiui 3:1. Gaunama 400 ml'1 gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm ir 150 ml - 63-125 mkm. Ce=20 mkmol/ml.
[0045] Pavyzdys 15. AGE ir EGDMA kopolimerizacij a vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išskyrus tai, kad naudojama 150 ml organinių tirpiklių mišinio, susidedančio iš 112,5 ml etilacetato ir'37,5 ml n-heksano. Gaunama 400 ml gelio su dalelių dydžiu 125-500 mkm. ir 150 ml - 63-125 mkm. ČE=30 mkmol/ml.
[0046] Pavyzdys 16. AGE ir EGDMA kopolimerizacij a vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojama 150 ml vienodų tūrių etilacetato ir n-dekano mišinį. Gaunama 260 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm. ir 120 . ml. - 63- 125 mkm. CE=8- 12, 5 mkmol/ ml.
[0047] Pavyzdys ^ 17 . AGE ir EGDMA kopolimerizacija - vykdoma analogiškai kaip pvz. 12# išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojama 150 ml mišinio,, susidedančio iš 112, 5 ml ętilacetato ir 37, 5 ml. n- dekano. Gaunama 500 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm. ir 15 ml
[0048] Pavyzdys ~~~ 18 . AGE ir EGDMA kopolimerizaci ja vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, . išskyrus tai, kad organiniu tirpikliu naudojama 150 ml vienodų tūrių etilacetato ir n- dodekano mišinį- Gaunama 200 ml. gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm. ir 30 ml - 63- 125 mkm- CE=5, 5- 6, 0 mkmol/ ml.
[0049] Pavyzdys 19 . AGE ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išskyrus tai, kad , monomerinio mišinio ' fazė susideda iš 100 ml ( 0, 694 molio) aliloglicidilo eterio, 70 ml ( 0, 370 molio) etilenglikoldimetakrilato { santykis AGErEGDMA = 65, 34:34, 66 moį.%) 150 ml etilacetato " ir 1, 86 g azoizosviesto rūgšties dinitrilo, o vandeninės fazės, turinčios polivinilo alkoholį ir želatiną tūris lygus 960 ml. Gaunama 280 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 60 ml - 63- 125 mkm. CE=30- 38 mkmol/ ml.
[0050] Pavyzdys 20 . AEG ir EGDMA kopolimerizacij a vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išskyrus- tai, kad naudojamas monomerinis mišinys tokios pat sudėties kaip pv2. 19, o organiniu tirpikliu naudojama 150 ml vienodų tūrių etilacetato ir n- heksano mišinį. Gaunama 200 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 50 ml - 63 - 125 mkm, CE=20 - 24 mkmol/ ml.
[0051] A w
[0052] Pavyzdys 21 . AGE ir EGDMA kopolimerizacija vykdoma analogiškai kaip pvz- 12, išskyrus tai, kad naudojamas monomęrinis mišinys tokios pat sudėties kaip pvz. 19, o organiniu tirpikliu naudojama 150 ml vienodų tūrių etilacetato ir n- oktano mišini. Gaunama 220 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 50 ml . - 63- 125 mkm. CE=14- 20 mkmol/ ml.
[0053] Pavyzdys 22 . AGE ir EGDMA kopolimerizacij a . vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išškyrus tai, kad naudojamas monomęrinis mišinys tokios pat sudėties kaip pvz. 19, o organiniu tirpikliu • naudojama 150 ml vienodų . tūrių etilacetato ir n- dodekano mišini,. Gaunama 150 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm ir 30 ml -. 63- 125 mkm. CE=11- 13 mkmol/ ml.
[0054] Pavyzdys 23 . AGE ir EGDMA kopolimerizaci j- a vykdoma analogiškai kaip pvz. 12, išskyrus tai, kad naudojamas monomęrinis mišinys tokios pat sudėties kaip pvz. 19, o
[0055] • organiniu tirpikliu naudojama 150 ml viedodų tūrių etiacetato ir n- dekano mišini,. Gaunama 600 ml gelio su dalelių dydžiu 125- 500 mkm. CE=18- 19 mkmol/ ml.
[0056] Duomenys pateikti lentelėje 3 rodo, kad polimeriniai geliai aliloglicido eterio ir etilenglikoldimetakrilato pagrindu taip pat pasižymi dideliu poringumu, pakankamu stambių biomolekulių prasiskverbimui i, juos. Šio tipo geliai yra labiau monofunkciniai porų dydžio atžvilgiu ir tinkami biomolekulių gel-filtraciniams procesams.
[0057] Gautų polimerinių gelių tinkamumą sorbentų sintezei ir pastarųjų tinkamumą biomolekulių chromatografijai iliustruoja žemiau pateikiami pavyzdžiai.
[0058] Pavyzdys 24. Gelio FSL-S-42 karboksimetilinio darinio sintezė.
[0059] • aprašymą, supilama maišant nedidelėmis dalimis 55 ml 4 6% natrio šarmo tirpalo, ir gauta suspensija paliekama 1 valandai inkubuotis. Po to suspensija pernešaraja į
[0060] trigurklę 250 ml talpos kolbą, turinčią grįžtamą šaldytuvą, termometrą ir mechaninį maišiklį, ir' maišant supilamas 27 g (0,145 mol.) monojodacto rūgšties tirpalas 50 ml vandens. Reak'cijos mišinys maišomas 30 min. kambario ir 6 valandas 80°C temperatūroje. Gautas sorbentas nufiltruojamas ir plaunamas vandeniu, 2 N HC1 tirpalu ir" vandeniu iki neutralios plovimo vandenų pH reikšmės-
[0061] Katijonito joninė talpa pagal Na+ jonus lygi 50 mkg-ekv/ml. -% »
[0062] Sorbento tinkamumas baltymų chromatografijai įvertinamas pagal Citochromo c (0,02 Na fosfatinis buferis pH 8,0), žmogaus serumo albumino (0,02 M Na acetatinis buferis pH 4,0). ir Tripsino (0,02 M Na fosfatinis buferis pH "7,1) statinę sorbciją, inkubuojant sorbento pavyzdžius baltymo tirpale 2 vai. kambario temperatūroje, ir desorbuojant baltymus su 1 4 H NaCl tirpalu. Sorbento sorbcinis imlumas baltymui ir pastarojo desorbcijos išeiga pateiktos lentelėje 4.
[0063] o Į 100 ml talpos trigurklę kolbą supilama 50 ml gelio, gauto pagal pvz. 22 aprašymą, 11,1 g (0,09 mol.) bevandenio Na2S04, ir 27,25 ml distiliuoto vandens. Reakcijos mišinys paliekamas 1 vai. , kambario temperatūroje, ir reakcija tęsiama maišant suspensiją 4 vai 95°C temperatūroje. Reakcijos mišinys ataušinamas iki kambario temperatūros, sorbentas nufiltruojamas ir plaunamas ant filtro vandeniu. Po to- sorbentas pernešamas i, stiklinę ir baigiamas plauti vandeniu de.kantuojant. Sorbento imlumas pagal Na+ jonus nustatomas titruojant H+ formos pavyzdi, standartiniu 5 mH Na OH tirpalu, ir yra lygus 12 mkmol/ml.
[0064] Sorbento tinkamumas biomolekulių chromatografijai įvertinamas pagal jaučio Tripsino statinę sorbciją 0,02 M Na acetatiniame buferyje pH 5,0. Tam tikslui sorbento - pavyzdys atplautas nurodytu buferiu, inkubuojamas 2 vai kambario temperatūroje baltymo tirpale (pradinė
[0065] t
[0066] koncentracija 20 mg/ml, 1,5 ml tirpalo 1 ml sorbento) ir sorbuotas baltymas eliuuojamas 1M NaCl tirpalu buferyje pH 5,0. Sorbento imlumas tripsinui lygus -. 16 mg/ml, baltymo desorbcijos išeiga siekia 86-90%.
[0067] Tuo būdu pateikiamas polimerinių gelių būdas, naudojant momentinius mišinius, susidedančius iš alilo alkoholio arba alilo-glicidilo eterio ir etilenglikoldimetakrilato, ir organinių tirpiklių mišinius, sudarytus iš etilacetato ir n-alkanų, įgalina kyptingai reguluoti gelių poringumą bei baltymų nespecifinės sorbcijos lygi,- Tai įgalina savo ruožtu gelius panaudoti sintetinant sorbentus, kurie yra monofunkciniai prijungto ligando atžvilgiu. Duomenys pateikti lentelėje 4 ir pvz. 25 rodo, kad gaunami gelių pagrindu sorbentaį yra tinkami biomolekulių chromatografijai, užtikrinant praktiškai kiekybinę pastarųjų Resorbcijos išeigą.
1. Būdas gauti polimeriniams geliams, skirtiems sorbent^ sintezei, vykdant suspensinę radikalinę kssmoriomerų mišinio, turinčio monomerą su viena dviguba jungtimi ir susiuvimo agentą su dviem dvigubomis jungtimis polimerizaciją inertiniame organiniame tirpiklyje, dalyvaujant iniciatoriui ir vykdant procesą vandeninėje disperguojančioje fazėje, turinčioje suspensijos stabilizatorių, besiskiriantis tuo, kaTd pagrindiniu monomeru, turinčiu vieną dvigubą jungti, naudoja alilo alkoholį arba aliloglicidilo eterį, o susiuvimo agentu. - etilenglikoldimetakrilatą esant jų moliniam santykiui (65,34 - 87,41) .: (34, 66 - 12,59) mol.%; organiniu tarpikliu naudoja etilacetatą arba jo mišinius su n-alkanais tūriniu santykiu (1-3):1, ir kopolimerizaciją vykdo esant viršutinės organinės fazės, turinčios komonomerus ir iniciatorių, ir apatinės disperguojančios fazės, turinčios suspensijos stabilizatorių, tūriniam santykiui 1 : (2 - 3).
2. Būdas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad n-alkanais naudoja heksaną,. heptaną, oktaną, dekaną ir dodekaną.
3. Būdas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad disperguojančia faze naudoja vandenini, koncentruotą kalcio chlorido ir polivinilo alkoholio tirpalą, arba vandenini, polivinilo alkoholio ir želatinos tirpalą.
4. Būdas pagal 3 punktą, besiskiriantis tuo, kad kalcio chlorido koncentracijat yra - 30±2%, polivinilo alkoholio - 1-2%, želatinos - 0,5±0,1%..