MAKROLIDINIAI ANTIBIOTIKAI IR JŲ GAVIMO BŪDAS

LT3684B

MAKROLIDINIAI ANTIBIOTIKAI IR JŲ GAVIMO BŪDAS

MACROLIDE ANTIBIOTICS AND PROCESS FOR PREPARING THEREOF

Referatas

[LT] Junginiai bei jų druskos yra atvaizduoti (II) formule,@@@@@@@@kurioje@R1 žymi metilo, etilo arizopropilo grupę:@R2 žymi vandenilio atomą ar OR5 grupę (kur OR5 yra hidroksilo grupė ar pakeista hidroksilo grupė, turinti iki 25 anglies atomų) ir R3 žymi vandenilio atomą, arba R2 ir R3 kartu su anglies atomu, prie kurios jos prisijungusios, žymi >C=O grupę; ir@OR4 žymi OR5, apibrėžtą aukščiau;@su sąlyga, kad, kai R2 žymi hidroksilo grupę, OR4 yra pakeista hidroksilo grupė, bet ne metoksilo grupė.@Šie junginiai gali būti naudojami kovojant su vabzdžiais, erkėmis, nematodomis ir kitais kenkėjais.

[EN]

Aprašymas

[0001] Šis išradimas yra apie antibiotikų junginius bei jų gavimo būdus.

[0002] Jungtinės Karalystės patentinėje paraiškoje Nr. 8522699 mes aprašome S541 antibiotikų, kurie gali būti išskirti iš naujos Streptomyces rūšies fermentavimo produktų, gaminimą. S541 antibiotikai yra panašių junginių grupė su bendra ( I) formule.

[0003] Čia pateikiami dar vienos, antibiotiniu veikimu pasi-žyminčios grupės junginiai, kurie gali būti gaunami modifikuojant S541 antibiotikus, arba išskiriant juos iš Streptomyces genties mikroorganizmų kultūros. Nau-jieji išradime pateikti junginiai pasižymi antibiotiniu veikimu ir/ arba yra naudojami kaip tarpiniai junginiai, gaunant kitus aktyvius junginius ir/ arba išskiriant bei gryninant S541 antibiotikų junginius.

[0004] Pateikti išradime junginiai yra 23- ketono, 23- deoksi ir 23- hidroksilo ar pakeisto hidroksilo S541 antibiotikų analogai, turintys hidroksilą ar pakeistą hidroksilo grupę 5- padėtyje.

[0005] Tuo būdu, pagal vieną išradimo aspektą daugiausia yra gaunami junginiai, vaizduojami ( II) formule,

kurioje R 1 yra metilo, etilo ar izopropilo grupe; R 2 yra vandenilio atomas ar OR 5 grupė (kur OR 5 yra hidroksilo grupė arba pakeista hidroksilo grupė, turinti iki 23 anglies atomų), ir R 3 yra vandenilio atomas, arba R 2 ir R³ kartu su anglies atomu, prie kurio jos prisijungia, sudaro >C=0 grupę; OR⁴ atitinka OR⁵ grupę, apibrėžtą aukščiau, ir ]ų druskos su išlyga, kad, kai R 2 esti hidroksilo grupė, tuomet OR 4 buna pakeista hidroksilo grupė, tačiau ne metoksilo grupė.

[0006] Kai (I) formulės junginiai yra naudojami kaip tarpiniai junginiai, viena ar abi R 2 ir -OR 4 grupes dažniausia bus apsaugota hidroksilo grupė, ir išradimas yra būtent apie tokius apsaugotus junginius.

[0007] Kai (I) formules junginių R 2 ar OR 4 grupės yra pakeistos hidroksilo grupės, jos gali būti tokios pačios ar skirtis ir būti aciloksilo grupės [ pvz., grupė for-mulėje -OCOR⁶, -0C0₂R⁶ ar -OCSOR⁶ (kur R⁶ yra alifatinė, arailfatinė ar aromatinė grupė, pvz., alkilo, alkinilo, cikloalkilo, arilalkilo ar arilo grupė)] . formiloksilo grupė, -OR 7 grupė (kur R 7 atitinka R 6 apibrėžimą),

[0008] -0S02R 8 grupė (kur R 8 yra C_x_₄ alkilo ar C₆_₁₀ arilo grupė), sililoksilo grupė, ciklinė ar aciklinė acetal-

[0009] oksi grupė arba grupė 0C0 (CH2) nC02R9 (kur R⁹ yra vandenilio atomas ar grupė, tokia kaip apibrėžta aukščiau R⁶, o n gali turėti reikšmės 0, 1 ir 2) .

[0010] Kai R 6 ar R 7 yra alkilo grupės, pvz., C^g alkilo grupės, kaip antai, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t-butilo ar n-heptilo, šios alkilo grupės taipgi gali būti pakeistos. Jei R⁶ yra pakeista alkilo grupė, ji gali būti keičiama, pvz., vienu ar daugiau, t. y. dviem ar trimis halogenoatomais (pvz., chloro ar bromo atomais) , arba karboksilo, C1. ą alkoksilo (pvz., metoksilo, etoksilo, fenoksilo ar sililoksilo grupe. Jei R⁷ yra pakeista alkilo grupė, ji gali būti keičiama C₃_₇ cikloalkilo, pvz., ciklopropilo grupe.

[0011] Kai R⁶ ar R⁷ yra alkenilo arba alkinilo grupės, jomis gali būti, pvz., C₂-₈ alkenilo, kaip antai alilo, arba C_2-s alkinilo grupės.

[0012] Kai R⁶ ar R⁷ yra cikloalkilo grupės, jomis gali būti_^pvz., C₃_₁₂ cikloalkilas, toks kaip C₃_₇ cikloalkilas. Taigi R⁶ gali būti, pvz., ciklopropilo, ciklobutilo, ciklopentilo, ar cikloheksilo grupė. R⁷ gali būti, pvz., ciklopentilo grupė.

[0013] Kai R⁶ ar R⁷ yra arilalkilo grupės, jos dažniausiai turi nuo 1 iki 6 anglies atomų alkilinėje srityje, o arilo grupė (s) gali būti karbociklinė ar heterociklinė ir dažniausia sudaryta iš 4-15 anglies atomų, kaip antai, fenilo. Tokių grupių pavyzdžiai yra fenil C_]_₆ alkilas, kaip antai, benzilo ar fenilo grupės.

[0014] Kai R 6 ar R 7 yra arilo grupės, jomis gali būti kar-bociklinės ar heterociklinės ir dažniausia turi 4-15 anglies atomų, kaip antai, fenilo grupė.

[0015] Kuomet R² ar -OR⁴ yra -0S0₂R⁸ grupė, ja gali buti, pvz. , raetilsulfoniloksilo ar p-toluensulfoniloksilo grupė.

[0016] Kai R² ar -OR⁴ atstovauja ciklinę acetiloksilo grupę, ji gali turėti, pvz., 5-7 žiedinius narius ir būti, pvz., tetrahidropiraniloksilo grupė.

[0017] Kuomet R ar OR atstovauja sililoksilo grupę, arba R turi sililoksi pakaitalą, sililo grupė gali jungti tris grupes, kurios gali būti tokios pačios ar skirtingos iš alkilo, alkenilo, alkoksilo, cikloalkilo, aralalkilo, arilo ir ariloksilo grupių. Tokios pačios gali būti apibrėžiamos kaip ir R⁶ ir dažniausia sudaro metilo, t-butilo ir fenilo grupes. Konkretūs sililoksilo grupės pavyzdžiai yra trimetilsililoksilo ir t-butildimetilsi-liloksilo grupės.

[0018] Kai R² ar -OR⁴ atstovauja 0C0 (CH2) nC02R9 grupę, ja gali būti, pvz., 0C0C0₂R⁹ ar 0C0CH₂C0₂R⁹, kur R⁹ yra vandenilio atomas ar C_x_₄ alkilo (pvz., metilo ar etilo) grupė. (II) formulės junginiai, turintys rūgštinę grupę gali sudaryti druskas ir atitinkamas bazes. Iš tokių druskų yra šarminių metalų druskos, kaip antai, natrio ir kalio druskos.

[0019] Svarbi (II) formulės junginių grupė yra ta, kurioje R¹atstovauja metilo, etilo ar izopropilo grupę, R 2 ir R 4, kurios gali būti tokios pačios ar skirtingos, kiekviena atstovauja OR⁵ (kur OR⁵ yra hidroksilo grupė arba pakeista hidroksilo grupė, turinti iki 25 anglies atomų), ir R³ yra vandenilio atomas, ir druskos su išlyga, kad, kai R² esti hidroksi grupė, tuomet OR⁴ būna pakeista hidroksilo grupė, tačiau ne metoksilo grupė.

[0020] Kita svarbi (II) formulės junginių grupė yra ta, kurioje R¹ atstovauja metilo, etilo ar izopropilo grupę, R² ir R³ kartu su anglies atomu, prie kurio jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę bei OR 4 esti OR 5 hidroksilo grupė arba pakeista hidroksilo grupė, turinti iki 25 anglies atomų), ir jų druskos.

[0021] Dar viena svarbi (II) formulės junginių grupė yra ta, kurioje R¹ atstovauja metilo, etilo ar izopropilo gru-pę, abi, R 2 ir R 3 grupės, yra vandenilio atomai, o OR⁴esti OR⁵ (kur OR⁵ yra hidroksilo grupė arba pakeista hidroksilo grupė, turinti iki 25 anglies atomų), ir jų druskos. (II) formulės junginiuose R¹ grupė pirmiausia būna izopropilo grupė.

[0022] Grupė R pirmiausia yra vandenilio atomas ar hidroksilo grupė ar formulės -OCOR⁶ grupė [ kur R⁶ yra C^g alkilo grupė (laisvai keičiama C_į_₄ alkoksilo grupe) ar fenC^g alkilo grupė] , -0C0₂R⁶ (kur R⁶ yra C_^.g alkilo grupė, laisvai keičiama nuo vieno iki trijų halogeno atomais, pvz., trichloretilas) , -0C0C0₂H, -OR⁸ (kur R⁸ yra C^g aklilo, C₃_₇ cikloalkilo, alilo ar ciklopropilmetilo grupe) bei R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurio jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę. Svarbu, kad R² pirmiausia yra vandenilio atomas ar etoksilo, n-propoksilo, ciklopropilmetoksilo, acetoksilo, fenace-toksilo, propionoksilo, izobutirionoksilo ar ciklopro-pankarboniloksilo grupė arba R² ir R³ kartu su anglies atomu, prie kurios jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę. (II) formulės junginiuose -OR⁴ grupė yra pirmiausia hidroksilo, metoksilo, acetoksilo ar metiloksikarbonil-oksilogrupė.

[0023] Pagal išradimą svarbūs aktyvūs (II) formulės junginiai yra tie, kuriuose R¹ esti metilo, etilo, o ypatingai izopropilo grupe, R 2 yra vandenilio atomas arba etilok-silo, n-propoksilo, acetoksilo, arba propionoksilo grupe, R 3 yra vandenilio atomas arba R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurio jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę, ir OR⁴ hidroksilo, acetoksilo, arba metoksikarboniloksilo grupė.

[0024] Ypatingai svarbūs yra tie išradimo (II) formulės akty-vūs junginiai, kuriuose: 12 3 R yra izopropilo grupė, R yra vandenilio atomas, R yra vandenilio atomas, ir OR⁴ yra hidroksilo grupė; 12 3 R yra izopropilo grupė, R yra propionoksilo grupe, R vandenilio atomas, ir OR⁴ yra hidroksilo grupė;

[0025] R 1 yra izopropilo grupė, R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurios jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę, ir -OR 4 yra hidroksilo grupe;

[0026] R¹ yra izopropilo grupė, R² yra etoksilo grupė, R³ yra vandenilio atomas, ir -OR⁴ yra hidroksilo grupė; bei

[0027] R¹ yra izopropilo grupė, R² n-propoksilo grupė, R³ yra vandenilio atomas, ir -OR⁴ yra hidroksilo grupė.

[0028] R¹ yra metilo grupė, R² yra acetoksilo grupė, R³ yra vandenilio atomas, ir OR⁴ yra hidroksilo grupė.

[0029] 12 3

[0030] R yra etilo grupe, R yra acetoksilo grupė, R yra vandenilio atomas, ir OR⁴ yra hidroksilo grupė.

[0031] 12 3

[0032] R yra izopropilo grupe, R yra acetoksilo grupė, R yra vandenilio atomas, ir OR⁴ yra hidroksilo grupė.

[0033] Kaip pažymėta anksčiau, išradime pateikti junginiai ga-li būti naudojami kaip antibiotikai ir/arba kaip tarpiniai junginiai gaunant kitus aktyvius junginius ir/arba išskiriant bei gryninant S541 antibiotikų junginius. Tuo atveju kai išradimo junginiai yra numatomi naudoti kaip tarpiniai junginiai, R² ir/arba -OR⁴ grupės gali būti apsaugotos hidroksilo grupės. Suprantama, jog tokia grupė privalėtų turėti minimalų skaičių papildomų funkcinių grupių tam, kad galėtų išvengti kitų reakcijos grandžių, o taipogi turėtų būti tokia, kad iš jos būtų galima selektyviai regeneruoti hidroksilo grupę. Apsaugotų hidroksilo grupių pavyzdžiai yra gerai žinomi ir aprašyti, pvz., Theodora W. Greene leidinyje "Protective Groups in Organic Synthesis" (Wiley-Interscience, New York 1981) ir J. F. W. McOmie leidinyje "Protective Groups in Organic Chemistry" (Plenum Press, London, 1973), R² ir OR⁴ pavyzdžiai su apsau-gotomis hidroksi grupėmis yra fenoksiacetoksilo, silil-oksiacetoksilo, (pvz., trimetilsililoksiacetoksilo ir t-butildimetilsililoksiacetoksilo) , ir sililoksilo, kaip antai trimetilsililoksio ir t-butildimetilsilil-oksilo. Išradimo junginiai, turintys tokių grupių, visų pirma, yra naudojami kaip tarpiniai junginiai. Kitos grupės, tokios kaip acetoksilo, gali atstoti apsaugotą hidroksilo grupę, nors taip pat gali būti ir galu-tiniuose aktyviuose junginiuose.

[0034] Kiti aktyvūs išradimo junginiai, tinkantys kaip inter-mediatai, yra (II) formules junginiai, kuriuose R yra

[0035] -0C0C0₂H grupė. Jie ypač tinka, kai yra išskiriami bei gryninami S541 antibiotikų junginiai. Šiuo požiūriu itin naudingas yra (II) formulės junginys, kuriame R¹esti izopropilo grupė, R² yra -0C0C0₂H grupė, R³ yra vandenilio atomas ir OR 4 yra hidroksilo grupė, kuri gali būti sėkmingai naudojama išskiriant ir gryninant S541 antibiotikų jungini, pagal žemiau pateikiamą (V) formulę, kur R¹ yra izopropilo grupė, o R yra vandenilio atomas. Iš neišgryninto (V) formulės junginio galima gauti atitinkamą (II) formulės jungini,, kuriame

[0036] R² yra -0C0C0₂H, ir ji, išskirti, pvz., kristaline forma. Tuomet (V) formulės junginys gali būti regeneruotas iš esmės išgryninta forma iš pastarojo junginio, taikant čia aprašomus metodus, kurių išskyrimo ir gryninimo metodai sudaro šio išradimo požymius.

[0037] Išradimo junginiai pasižymi antibiotiniu veikimu, kaip antai, antihelmintiniu veikimu, pvz., prieš nematodas, o ypač anti-endoparazitiniu ir anti-ektoparazitiniu veikimu.

[0038] Ektoparazitai ir endoparazitai užkrečia žmones ir daugeli, gyvūnų ir yra ypatingai paplitę tarp gyvulių, kaip antai, kiaulių, avių, stambiųjų raguočių, ožkų ir paukščių, arklių ir naminių gyvūnų, kaip antai, šunų ir kačių. Parazitinės naminių gyvulių infekcijos, suke-liančios mažakraujystę, blogą mitybą ir svorio suma-žėjimą, yra pagrindinė ekonominių nuostolių priežastis visame pasaulyje.

[0039] Endoparazitų, užkrečiančių šiuos gyvūnus ir/ar žmones, gentims priklauso Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capilliara, Chabertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa, Necator, Nematodirus, Nematospiroides ( Heligomoroides), Nippostrongylus, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, Parascaris, Strongylus, Strongyloides, Syphacia, Toxascaris, Toxocara, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Uncinaria ir Vuchareria.

[0040] Tarp ektoparazitų, užkrečiančių gyvulius ir/ar žmones, yra nariuotakojų ektoparazitai, kuriems priklauso ge-liantys vabzdžiai, mėsinė musė, blusos, utėlės, erkės, siurbiantys vabzdžiai, iksodinės erkės ir kiti dvi-sparniai kenkėjai.

[0041] Ektoparazitų, užkrečiančių šiuos gyvūnus ir/ar žmones, gentims priklauso Ambylomma, Boophilus, Chorioptes, Culliphore, Demodex, Demallenia, Dermatobia, Gastrophilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophysalis, Hyalomma, Hyperderma, Ixodes, Linognathus, Lucilia, Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomoxys, ir Tabanus .

[0042] Nustatyta, kad išradime pateikti junginiai tiek in vitro, tiek in vivo yra efektyvūs prieš daugeli, en-doparazitų ir ektoparazitų. Buvo nustatyta, kad iš-radimo junginiai yra itin veiklūs prieš nematodų parazitus, kuriems priklauso Haemonchus contortus, Ostertagia circumcincta, Trichostrongylus colubiformis, Dictyocaulus viviparis, Cooperia oncophera, Ostertagia ostertagi, Nematospiroides dubius ir Nippostrongylus braziliensis, bei parazitinės erkės, kaip antai, Sarcoptes sp. ir Psoroptes sp.

[0043] Tuo būdu, išradimo junginiai yra tinkami gydant gyvulius ir žmones su endoparazitinėmis ir/ar ektopara-zitinėmis infekcijomis.

[0044] Parazitų rūšys kinta priklausomai nuo šeimininko ir vyraujančios infekcijos vietos. Todėl, pvz., Haemonchus contortus, Ostertagia circumcincta ir Trichostrongylus colubiformis paprastai užkrečia avis ir dažniausiai lokalizuojasi skrandyje ir plonajame žarnyne, o Dictyocaulus viviparis, Cooperia oncophera ir Ostertagia ostertagi paprastai užkrečia stambiuosius raguočius ir dažniausiai lokalizuojasi plaučiuose, žar-nyne ar skrandyje, atitinkamai.

[0045] Antibiotinis išradimo junginių veikiamas in vitro gali būti pademonstruotas, pvz., jų veikime prieš laisvai gyve-nančias nematodas, kaip antai, Caenorhabiditis elegans. Be to, išradimo junginiai yra naudotini kaip anti-grybiniai, pvz., prieš Candida sp. kamienus, kaip antai, Candida albicans ir Candida glabrat' a ir prieš mieles, kaip antai, Saccharomyces carlsbergensis.

[0046] Išradimo junginiai yra taipgi naudingi kovoje su ken-kėjais, vabzdžiais, erkėmis ir nematodomis, žemės ūky-je, sodininkystėje, miškininkystėje, visuomenės sveika-tingumo ir produktų išlaikymo srityse. Dirvožemio ken-kėjai ir pasėliai, kaip antai, javai (pvz., kviečiai, miežiai, kukurūzai ir ryžiai), daržovės (pvz.,soja), vaisiai (pvz., obuoliai, vynmedžiai ir citrusai), o taip pat šakniavaisiai (pvz., burokai, bulvės) gali būti sėkmingai apdoroti. Būdingi tokių kenkėjų atstovai yra vaisinės erkės ir amarai, kaip antai, Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Myzus persicae, Nephotettix cincticeps, Nilparvata lugens, Panonychus ulmi, Phorodon humuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetranychus urticae ir Trialeuroides genties nariai: nematodos, kaip antai, nariai genčių Aphelencoides, Globodera, Heterodera, Meloidogyne ir Panagrellus; drugiai, kaip antai, Heliothis, Plutella ir Spodoptera; grūdiniai straubliukai, kaip antai, Anthonomus grandis ir Sitophilus granarius; miltvabaliai, kaip antai, Tribolium castaneum; musės, kaip antai, Musca domestica; Richterio skruzdėlės; kandys-minininkės siaurasparnės; Pear psylla; Thrips tabaci; tarakonai, kaip antai, Blatella germanica ir Periplaneta americana bei moskitai, kaip antai, Aedes aegypti.

[0047] Tuo būdu, pagal išradimą yra gaunami aukščiau apibū-dintos (II) formulės junginiai, kurie gali būti naudojami kaip antibiotikai. Ypatingai, jie gali būti taikomi gyvūnų ir žmonių su endoparazitinėmis, ekto-parazitinėmis ir/ar grybelinėmis injekcijomis gydymui bei naudojami kaip pesticidai naikinant kenkėjus vabzdžius, erkes ir nematodas žemės ūkyje, sodinin-kystėje ar miškininkystėje. Jie taipgi gali būti vartojami kaip pesticidai kovai su kenkėjais ir kitomis aplinkybėmis, pvz., sandėliuose, pastatuose ar kitose visuomenės vietose ar kenkėjų židiniuose. Apskritai, šie junginiai gali būti taikomi arba šeimininkams (gy-vūnams ar žmonėms, kultūriniams augalams ar kitai aug-menijai) , arba patiems kenkėjams bei jų židiniams.

[0048] Išradimo junginiai gali būti parengti įvedimui bet kuriuo tinkamu veterinarijoje ar žmonių terapijoje būdu, todėl išradimas ir apima farmacinius mišinius, turin-čius pagal išradimą gaunamą jungini, ir pritaikytus vartoti veterinarijoje ir žmonių terapijoje. Tokie mi-šiniai gali būti pateikti vartojimui įprastu būdu, kartu su tinkamais nešikliais ar užpildais. Išradime siūlomi mišiniai yra specialiai parengti parentera-liniam (tame tarpe įvedimui i, pieno liaukas) , orali-niam, rektaliniam, vietiniam naudojimui ar implanta-vimui. Tinkami metodai ir agentai parengiant išradimo junginius naudojimui veterinarijoje ar žmonių gydyme yra aprašyti Pietų Afrikos patente Nr. 85/7049 apie S541 antibiotikų junginius.

[0049] Išradimo junginiai gali būti įvedami derinant su kitomis farmaciškai veikliomis sudėtinėmis dalimis.

[0050] Bendras dienai skirtas išradimo junginių kiekis, naudojamas tiek veterinarijos, tiek žmonių terapijoje bus intervale 1-2000 jj.g/kg svorio, geriau 10-1000 (j.g/kg, o dar geriau 100-500 fig/kg, ir šie kiekiai gali būti duodami dalimis, pvz. 104 kartus per dieną.

[0051] Išradimo junginiai gali būti parengti naudojimui bet kuriuo tinkamu būdu sodininkystėje ar žemės ūkyje, to-dėl išradimas apima mišinius, turinčius pagal išradimą gaunamą junginį ir pritaikytas vartoti sodininkystėje ar žemės ūkyje. Tokios receptūros yra sauso ar skysto tipo, pvz., dustai, kuriems priklauso dulkių pavidalo substratai ar koncentratai, milteliai, kuriems priklauso tirpūs ar drėkinami milteliai, granulės, kurioms priklauso mikrogranulės ir dispersinės granulės, tab-letės, lakios medžiagos, emulsijos, kaip antai, tirpios emulsijos ar emulguojami koncentratai, dezinfekuojantys skysčiai, pvz., šaknims ir sėkloms, trąšos sėkloms,

[0052] tabletės sėkloms, aliejiniai koncentratai, aliejiniai tirpalai, išvirkščiamasis skystis, pvz., stiebams, pul-verizuojami skysčiai, dūmai ir miglos.

[0053] Tinkami metodai ir agentai parengiant išradimo junginius naudojimui sodininkystės ar žemės ūkyje yra aprašyti Pietų Afrikos patente Nr. 85/7049 apie S541 antibiotikus.

[0054] Receptūrose veikliosios medžiagos koncentracija, paprastai, sudaro nuo 0,01 iki 99%, o dar geriau tarp 0,01 ir 40% pagal svori,.

[0055] Komerciniai produktai, paprastai, tiekiami koncentruotų mišinių pavidalu, kurie prieš naudojant yra pra-skiedžiami iki reikiamos koncentracijos, pvz., nuo 0,001 iki 0,0001% pagal svori,.

[0056] Naudojant veterinarijoje ar sodininkystėje ir žemės ūkyje bei tuomet, kai išradimo junginiai yra gaunami iš fermentavimo produktų, pageidautina naudoti visą fermentavimo buljoną, kaip veikliųjų junginių šaltini,. Taipgi tinka naudoti sausą buljoną (su miceliu) arba miceli,, atskirtą nuo buljono ir pasterizuotą, o dar geriau, išdžiovintą. Jei reikia, buljonas ar micelis gali būti paruošti mišiniuose kartu su inertiškais nešik-liais, užpildais ar skiedikliais, kaip aprašyta aukš-čiau .

[0057] Antibiotiniai išradimo junginiai gali būti įvedami ar naudojami kartu su kitomis veikliosiomis sudėtinėmis dalimis.

[0058] Be to, antibiotiniai išradimo junginiai gali būti naudojami kartu su S541 antibiotikų junginiais ar su kitais išradimo antibiotiniais junginiais. Tai įvyksta, kai, pvz., neišgryninti fermentavimo produktai yra vei-kiami išradime siūlomu būdu, neatliekant išankstinio ar vėlesnio išskyrimo; tai gali būti priimtina žemės ūky-je, kai svarbu palaikyti žemas gamybos kainas.

[0059] Išradimo junginiai gali būti gaunami pagal būdus, ap-tariamus žemiau. Keliuose iš tų būdų gali tekti ap-saugoti pradinės medžiagos hidroksilo grupę 5- ar 23-padėtyje, prieš pradedant aprašytas reakcijas. Tais atvejais, kai reakcijos yra vykdomos norint gauti rei-kiamą išradimo junginį, būtina hidroksilo grupę atpa-laiduoti nuo apsaugos. Apsaugai ar jos nuėmimui galima naudoti įprastinius metodus, išdėstytus, pvz., prieš tai minėtose Greene ir McOmie knygose.

[0060] Tuo būdu, pvz., acilo grupė, kaip antai, acetilo grupė gali būti atjungta bazinės hidrolizės metu, pvz., naudojant natrio ar kalio hidroksidus alkoholio vandeniniame tirpale, ar rūgštinės hidrolizės metu, pvz., naudojant koncentruotos sieros rūgšties metanolio tir-palą. Acetilo grupės, kaip antai, tetrahidropiranilo, gali būti atjungta, pvz., rūgštinės hidrolizės metu (naudojant šias, acto ar trifluoracto rūgštis arba atskiestą mineralinę rūgštį). Sililo grupės gali būtim atskeltos naudojant fluorido jonus (pvz., iš tetralkil-amonio fluorido, kaip antai, tetra-n-butilamonio fluorido) , vandenilio fluoridą acetonitrilo vandens tirpale ar rūgštį, kaip antai, p-toluensulforūgštį (pvz., metanolyje) . Arilmetilo grupės gali būti atskeltos pa-veikiant, pvz., Liuiso rūgštimi (pvz., boro trifluorido eteriu), kai yra tiolo (pvz., etantiolo) atitinkamame tirpiklyje, pvz., dichlormetane, pvz., kambario tempe-ratūroje. Selektyvus apsaugos 5-padėtyje nuėmimas iš-radime siūlomas 5,23-disililo junginyje gali būti atliktas naudojant tetra-n-butilamino fluoridą, o selektyvus apsaugos 5-padėtyje nuėmimas 5,23-diacetoksi-junginyje gali būti atliktas naudojant natrio hid-roksidą metanolio vandens tirpale.

[0061] Išradimo junginius, kuriuose R² ir/ar -0R⁴ yra pakeista hidroksilo grupė, paprastai galima gauti sąveikaujant S541 antibiotikų junginiams (pvz., žemiau pateiktos (V) formulės junginiai) arba jų 5- ar 23-O-monodariniams su reagentais, naudojamais pakeistos hidroksilo grupės sudarymui. Apskritai, 5-hidroksilo grupė yra aktyvesnė už 23-hidroksilo grupę.

[0062] Hidroksilo grupės 5-padėtyje apsauga lengviau panai-kinama, negu 23-padėtyje. Bendrai paėmus, 5-mono-pakeisti išradimo junginiai yra gaunami 5,23-nepakeistą S541 antibiotikų junginį veikiant ribotu reagentų kiekiu ir švelnesnėse sąlygose, o 5,23-nepakeistų junginių gavimo sąlygos nėra tokios švelnios bei naudojami di-desni kiekiai reagentų ir/ar katalizatorius. 23-Mono-pakeisti išradimo junginiai yra gaunami, pirmiausia sudarant 5,23-pakeistą jungini, ir selektyviai pa-naikinant apsaugą 5-padėtyje. 5-23-Dipakeisti šio išra-dimo junginiai, turintys skirtingus pakaitalus 5- ir 23-padėtyje gali būti gauti sąveikaujant mono-pakeistam arba 5- arba 23-padėtyje junginiui su reagentu, nau-dojamu sudaryti skirtingą pakeistą hidroksilo grupę kitoje padėtyje.

[0063] Pagal sekanti, išradimo aspektą yra siūlomas (II) for-mulės junginių gavimo būdas, kuriuose viena iš R 2 ir OR⁴yra pakeista hidroksilo grupė, o kita yra hidroksilo ar pagal aukščiau pateiktą aprašymą pakeista hidroksilo grupė, apimantis (III) formulės jungini,.

[0064]

(kurioje R yra apibrėžtas anksčiau, viena iš -0R ir -0R⁵ yra hidroksilo grupė, o kita yra hidroksilo ar pakeista hidroksilo grupė) sąveika su reagentu, tu-rinčiu paversti hidroksilo grupę pakeista hidroksilo grupe, ir, jei reikia, su po to einančiu selektyviu apsaugos nuėmimu (II) formulės junginyje, kuriame abi R 2 ir OR 4 yra pakeistos hidroksilo grupės, tam, kad butų gautas (II) formulės junginys, kuriame OR⁴ esti hidroksilo grupė, o R 2 yra pakeista hidroksilo grupė.

[0065] Apskritai, vyks acilinimo, formilinimo, sulfonilinimo, eterifikacijos, sililinimo reakcijos ar acetalio susi-darymas .

[0066] Tuo būdu, pvz., acilinimas gali būti atliekamas naudojant acilinantį agentą, kaip antai, R⁶COOH formulės rūgšti, ar jos veiklųji, darini,, kaip antai, halogen-anhidridas (pvz., chloranhidridas) , anhidridas, aktyvuotas esteris, veiklusis monokarboninės rūgšties R⁶COOH ar tiokarboninės rūgšties R€CSOH darinys. Acilinimas, naudojant halogenanhidridus ar anhidridus, gali būti atliekamas, jei reikia, kai yra rūgštį ri-šantis agentas, kaip antai, trigubas aminas (pvz., trietilaminas, dimetilininas ar piridinas), neorganinės bazės (pvz., kalcio karbonatas ar natrio bikarbonatas), ir oksiranai, kaip antai, žemesnieji 1,2-alkileno ok-sidai (pvz., etileno ar propileno oksidas), kurie su-riša vandenilio halogeną, atpalaiduotą vykstant acilinimo reakcijai.

[0067] Acilinimas, naudojant stipriai elektrofilinius chlor-anhidridus (pvz., oksalilchloridą, metoksiacetilchlo-ridą, chloracetichloridą ar bromacetilchloridą), geriau, kai yra rūgšties surišiklis, kaip antai, kalcio karbonatas, gali būti panaudotas selektyviam 23-pa-dėties pakeitimui, kad būtų gautas (II) formulės junginys, kuriame R² yra OR⁵ grupė, kur R⁵ yra pakeista hidroksilo grupė, o OR⁴ yra hidroksilo grupė.

[0068] Pageidautina, kad acilinimas, naudojant rūgštis, vyktų, kai yra kondensuojantis agentas, pvz., karbodiimidas, kaip antai, N,N'-dicikloheksilkarbodiimidas ar N-etil-N'y-dimetilaminpropilkarbodiimidas; karbonilo junginys, kaip antai, karbonildiimidazolas; ar izoksazolo druska, kaip antai, N-etil-5-fenilizoksazolo perchloratas.

[0069] Aktyvuotas esteris gali būti įprastai gautas in situ naudojant, pvz.,1-hidroksibenzotriazolį, kai yra, kaip pažymėta aukščiau, kondensuojantis agentas. Kitu atveju aktyvuotas esteris gali būti briketuoj amas.

[0070] Acilinimo reakcija gali vykti vandeninėje ar nevan-deninėje reakcijos terpėje, paprastai temperatūroje nuo -20° iki +100°C, kaip antai, nuo -10° iki +50°C.

[0071] Formilinimas gali būti vykdomas naudojant aktyvuotą skruzdžių rūgšties darinį, kaip antai, N-formilo imi-dazolą ar skruzdžių rūgšties anhidridą, esant standar-tinėms reakcijos sąlygoms.

[0072] Sulfoninimas gali vykti, kai esama aktyvaus sulfoninės rūgšties R⁸S0₃H gali vykti, sulfonilo halogenido, pvz., chlorido R⁸S0₂C1 ar sulfoninio anhidrido. Sulfonilinimas geriau vyksta, kai yra, kaip aprašyta aukščiau, atitinkamas kiekis rūgštį rišančios medžiagos.

[0073] Eterifikacij a gali būti atliekama naudojant formulės R⁷Y reagentą ( kur R⁷ yra anksčiau apibrėžta, o Y pažymėta atskeliama grupė, kaip antai, chloro, bromo ar jodo atomas arba hidrokarbilsulfoniloksigrupė, kaip antai, meziloksi ar toziloksi, arba halogenalkano-iloksigrupė, kaip antai, dichloroacetoksi). Reakcija gali vykti susidarant magnio alkoholiatui, kai naudojamas Grinjaro reagentas, kaip antai, metilmagnio halogenidas, pvz., metilmagnio jodidas, arba trialkil-sililmetilmagnio halogenidas, pvz., trimetilsililmetil-magnio chloridas, po to veikiant R ?Y reagentu.

[0074] Kitu atveju, reakcija gali vykti, kai yra sidabro druska, kaip antai, sidabro oksidas, sidabro perchloratas, sidabro karbonatas ar sidabro salicilatas arba jų mišiniai, ir tokios sistemos tinkamumas ypač išryškėja, kuomet eterifikacij a atliekama naudojant alkilhaloge-nidą ( pvz., metiljodidą) .

[0075] Eterifikacij a gali būti įprastai atliekama tirpaluose, kaip antai, eteriuose, pvz., dietilo eteryje.

[0076] Acetalis gali susidaryti vykstant reakcijai su cikliniu ar acikliniu vinilo eteriu. Šis metodas yra itin geras tetrahydropiranilo eterių gamyboje, kai naudojamas di-hidropirano reagentas, ar 1- alkoksialkilo eterių, kaip antai, 1- etoksialkilo eteris, kai naudojamas alkilvi-nilo eterio reagentas. Pageidautina, kad reakcija vyktų esant stipriam rūgštiniam katalizatoriui, pvz., minera-linei rūgščiai, kaip antai, sieros rūgščiai, ar orga-ninei sulforūgščiai, kaip antai, p-toluensulforūgščiai, nehidroksiliniame, iš esmės bevandeniame tirpiklyje.

[0077] Aukščiau minėtoms reakcijoms gali būti naudojami be-vandeniai tirpikliai, kaip antai, ketonai (pvz., acetonas), amidai,(pvz., N,N-dimetilformamidas, N,N-dime-tilacetamidas ar heksametilfosforamidas) , eteriai (pvz., cikliniai eteriai, kaip antai, tetrahidrofuranas ar dioksanas, ir cikliniai eteriai, kaip antai, di-metoksietanas ar dietileteris), nitrilai (pvz., acetonitrilas), angliavandeniliai, kaip antai, angliavan-denilių halogenidai (pvz., metileno chloridas), ir esteriai, kaip antai, etilo acetatas, o taip pat miši-niai iš dviejų ar daugiau tokių tirpiklių.

[0078] Sililinimas gali būti atliekamas, vykstant reakcijai su sililo halogenidu (pvz., chloridu), geriausia, kai yra bazė, kaip antai, imidazolo trietilaminas ar piridinas, naudojant, pvz., dimetilformamido tirpikli.

[0079] Daugeliu atveju, pvz., kuomet (III) formulės 5,23-di-hidroksi junginys naudojamas kaip pradinė medžiaga, bus gaunamas galutinių produktų mišinys, pvz., 5-monopa-keistų ir 5,23-dipakeistų darinių mišinys. Jie gali būti atskirti taikant įprastines metodikas, pvz., chromatografija, kaip antai, silicio oksido chromatografiją ar didelio efektyvumo skysčių chromatografiją.

[0080] Pagal dar vieną išradimo būdą (II) formulės junginys, kuriame R² ir R³ žymi po vieną vandenilio atomą, gali būti gautas sąveikaujant (III) formulės junginiui, kuriame R 1 yra anksčiau apibrėžtas, ir OR 4 yra pakeista hidroksilo grupė, o R⁵ yra hidroksilo grupė, gauta pakeičiant 23-hidroksilo grupę vandenilio atomu ir nuimant apsaugą nuo OR⁴ grupės, jei reikalingas junginys, kuriame OR⁴ yra hidroksilo grupė, ir, toliau einančių pakartotiniu pakeitimu, jei norima gauti (II) formulės junginį, kuriame OR⁴ yra pakeista hidroksilo grupė.

[0081] Taigi, pradinės (III) formulės medžiagos, kuriose OR⁴yra pakeista hidroksilo grupė, o OR⁵ yra hidroksilo grupė, gali sąveikauti su reagentu, turinčiu hidroksilo grupę pakeisti atskeliama grupe tam, kad būtų gauti (IV) formulės junginiai:

[0082] [ kur R¹ ir OR⁴ yra ką tik apibrėžti, o L yra atomas ar grupė, atskeliama redukuojant, pvz., homolitinės re-dukcijos metu, kaip antai, RⁿOCSO- [ kur R¹¹ yra C^g alkilo, arilo, kaip antai, fenilo arba (C^g alkil)arilo, kaip antai, p-toluenoksitiokarboniloksilo grupė]] .

[0083] Tinkami reagentai, kurie gali būti naudojami fragmen-to L įvedimui, yra, pvz., arilo halogentionoformiatai, kaip antai, p-tolilo chlortioformiatas. Reakcija gali vykti, esant bazei, pvz. aminui, kaip antai, piridinui, kai tirpiklis yra angliavandenilio halogenidas, pvz., dichlormetanas.

[0084] Jei reikia, (IV) formulės tarpiniai junginiai gali būti išskirti.

[0085] Tada (IV) formulės tarpiniai junginiai gali būti redu-kuojami iki reikalingų (II) formulės junginių, naudojant redukuojanti agentą, kaip antai, alkilo alavo hidridą (pvz., tri-n-butilo alavo hidridą), kai yra radikalus inicijuojanti medžiaga, kaip antai, perok-sidas, azobisizobutirnitrilas ar šviesa.

[0086] Reakcija, paprastai, gali vykti, parinkus tirpikli, tarp ketono, pvz., acetono; eterio, pvz., dioksano, angliavandenilio, pvz., heksano ar tolueno; angliavandenilių halogenido, pvz., trichlorbenzeno; arba esterio, pvz., etilo ace-tato. Taipgi gali būti naudojami kelių tirpiklių mišiniai, vieni ar su vandeniu.

[0087] Reakcija gali būti vykdoma, kai temperatūra yra 0°-200°C, geriau 20°-130°C.

[0088] Pagal dar vieną išradimo būdą (II) formulės junginys, kuriame R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurio jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę, gali būti gaunamas oksiduojant (III) formulės junginį, kuriame OR 5 yra hidroksilo grupė, o OR 4 yra pakeista hidroksilo grupė, ir po to nuimant OR⁴ grupės apsaugą, jei reikalingas junginys, kuriame OR⁴ būtų hidroksilo grupė, ir esant poreikiui, atliekant pakartotiną pa-keitimą tam, kad būtų gautas (II) formulės junginys, kuriame OR 4 yra pakeista hidroksilo grupe. Reakcija gali vykti, esant oksiduojančiam agentui, kuris turi pakeisti antrąją hidroksilo grupę į okso grupę, dėl, ko ir yra gaunamas (II) formulės junginys.

[0089] Tinkami oksiduojantys agentai yra chinonai, esant van-deniui, pvz., 2, 3-dichloro-5,6-diciano-l,4-benzochino-nas ar 2,3,5,6-tetrachloro-l,4-benzochinonas; chromo (VI) oksiduojantis agentas, pvz. piridino dichromatas ar chromo trioksidas piridine; mangano oksiduojantis agentas, pvz., mangano dioksidas dichlormetane; N-halo-gensucinimidas, pvz., N-chlorsukcinimidas ar N-brom-sukcinimidas; dialkilsulfoksidas, pvz., dimetilsul-foksidas, kuomet yra aktyvuojantis agentai, N,N'-di-cikloheksilcarbodiimidas ar acilo halogenidas, pvz., oksalilo chloridas; ar sieros-piridino trioksido kom-pleksas .

[0090] Reakcija gali sėkmingai vykti, parinkus tirpikli, tarp ketono, pvz., acetono; eterio, pvz., dietilo eterio, dioksano ar tetrahidrofurano; angliavandenilio, pvz., heksano ar tolueno; angliavandenilių halogenido, pvz., chloroformo ar metileno chlorido;ar esterio, pvz., etilo acetato arba pakeisto amido, pvz., dimetilformamido. Taipgi gali būti naudojami kelių tirpiklių mišiniai, vieni ar su vandeniu.

[0091] Reakcija gali būti vykdoma, kai temperatūra yra nuo

[0092] Pagal dar vieną išradimo aspektą yra siūlomas gavimo bū- das (II) formulės junginio, kuriame R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurio jos yra prisijungusios, sudaro >C=0 grupę, o OR⁴ yra hidroksilo ar metoksi grupė, kuris apima Streptomyces genties organizmo, gebančio gaminti bent vieną išradimo junginį, kultivavimo etapą, ir, jei reikia, minėto junginio išskyrimą, o taip pat, jei reikia, OR⁴ grupės modifikavimą aukščiau aprašytais metodais.

[0093] Siūlomi mikroorganizmai, gebantys gaminti aukščiau mi-nėtas medžiagas, yra Streptomyces genties naujų rūšių kamienai, kurie buvo pavadinti Streptomyces thermoarchaensis. Šio mikroorganizmo pavyzdys, esantis dirvožemio izoliatas, buvo atiduotas (1984-jų rugsėjo 10-ąją) i, pastovią kultūrų kolekciją Nacionalinėje pramoninių ir jūrinių bakterijų Kolekcijoje, Torry Research Station, Aberdeen, United Kingdom, ir jam buvo suteiktas registracijos numeris NCIB 12015. Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 mutantai taipgi gali būti sėkmingai naudojami, ir 4 mutantiniai kamienai buvo atiduoti saugoti (1985-ųjų birželio 26-ąją) į pastovią kultūrų kolekciją Nacionalinėje pramoninių ir jūrinių bakterijų Kolekcijoje, suteikiant registracijos nu-merius NCIB 12111, NCIB 12112, NCIB 12113 ir NCIB 12114 .

[0094] Išradimo junginiai gali būti gaminami tinkamų Streptomyces organizmų, taikant įprastinius metodus, t.y. kultivuojant Streptomyces organizmas, kai terpėje yra asimiliuojami anglies, azoto ir mineralinių druskų šaltiniai.

[0095] Asimiliuojami anglies, azoto ir mineralinių druskų šal-tiniai gali būti arba paprastos, arba kompleksinės me-džiagos. Anglies šaltinius paprastai sudarys gliukozė, maltozė, krakmolas, glicerolas, melasa, dekstrinas, laktozė, sacharozė, fruktozė, karboksirūgštys, amino-rūgštys, gliceridai, alkoholiai, alkanai ir augaliniai aliejai. Anglies šaltiniai, kaip taisyklė, sudarys nuo 0,5 iki 10% svorį nuo fermentavimo terpės.

[0096] Azoto šaltinius paprastai sudarys sojos miltai, užpiltų kviečių skysčiai, distiliatų tirpalai, mielių ekstraktai, medvilnės sėklų miltai, peptonai, žemės riešutų miltai, salyklo ekstraktas, melasa, kazeinas, amino rūgščių mišiniai, amoniakas (dujos ar skystis) , amonio druskos ar nitratai. Be to gali būti naudojamas karbamidas ir kiti amidai. Azoto šaltiniai, kaip tai-syklė, sudarys nuo 0,1 iki 10% pagal svori, nuo fermentavimo terpės.

[0097] Maistingąsias mineralines druskas, kurios gali būti įtrauktos į kultivavimo terpę, sudarys įprastinės druskos, atiduodančios natrio, kalio, amonio, geležies, magnio, nikelio, kobalto, mangano, vanadžio, chromo, kalcio, vario, molibdeno, boro, fosforo, sulfato chloro ir karbonato jonus.

[0098] Streptomyces organizmai yra kultivuojami paprastai tem-peratūroje nuo 20 iki 50°C, geriau nuo 25 iki 40°C, o geriausia apie 34°C, ir pageidautina aeruoti bei su-plakti, pvz., kratant ar maišant. Iš pradžių į terpę gali būti persėtas nedidelis kiekis sporuliuotos mikro-organizmų suspensijos, tačiau vengiant augimo užlaiky-mo, auganti, organizmų pasėli, galima paruošti persėjant organizmus, esančius sporų formoje, i, nedideli, kieki, mitybinės terpės, o gautas augantis pasėlis gali būti perkeltas i, fermentavimo terpę, o dar geriau, leidžiant toliau augti, vieną ar kelis kartus persėti prieš per-nešant i, pagrindinę fermantavimo terpę. Fermentacija paprastai vyksta, esant pH intervalui nuo 5,5 iki 8,5, geriau nuo 5,5 iki 7,5.

[0099] Fermentavimas gali būti vykdomas 2-10 dienų, pvz., apie 5 dienas.

[0100] Jei iš viso fermentavimo buljono norima atskirti me-džiagą su junginiais, kurie siūlomi išradimo, arba išskirti bet kuri, atskirą jungini,, tuomet taikomos įprastinės atskyrimo ir išskyrimo metodikos. Išradimo junginiai pagrindinai yra ląstelių micelyje, bet gali būti aptikti ir fermentavimo buljone, taigi, atskyrimo metodikos gali būti taikomos ir fermentavimo buljonui po nuskaidrinimo. Suprantama, kad gali būti pasirinkti gana skirtingi atskyrimo metodai.

[0101] Išradimo junginių atskyrimui ir išskyrimui gali būti taikomi skirtingi frakcionavimo metodai, pvz., adsor-beija-eliucij a, precipitacija, dalinė kristalizacija ir tirpiklio ekstrakcija, kurie gali būti įvairiai de-rinami.

[0102] Nustatyta, kad tirpiklio ekstrakcija ir chromatografija labiausiai tinka išradimo junginių atskyrimui ir iš-skyrimui .

[0103] Po fermentavimo micelis gali būti surinktas įprastais metodais pvz., filtruojant ir centrifuguoj ant. Vėliau junginių ekstrahavimui iš micelio gali būti naudojamas atitinkamas organinis tirpiklis, kaip antai, ketonai, pvz., acetonas, metileno ketonas ar metilizobutilo ketonas; angliavandenilis, pvz. heksanas; angliavandenilio halogenidai, pvz., chloroformas, anglies tet-rachloridas ar metileno chloridas; alkoholiai, pvz., metanolis ar etanolis; arba esteriai, pvz., metil-acetatas ar etilacetatas. Suprantama, jei micelis yra vandeningas, geriau vartoti vandeninius tirpiklius.

[0104] Apskritai, siekiant optimalaus junginių išgavimo ekst-rahuojama daugiau nei vieną kartą. Pirmos ekstrakcijos metu geriau naudoti su vandeniu susimaišančius tirpiklius, kaip antai, metanoli, ar acetoną. Antibiotikai gali būti išgauti kaip nevalyti ekstraktai, pašalinus tirpikli,. Tirpiklio ekstraktus, savo ruožtu, galima ekstrahuoti, sumažinus tirpiklio tūri,, pvz., garinant. Šiame etape yra tinkamesni su vandeniu nesimaišantys tirpikliai, kaip antai, heksanas, chloroformas, metileno chloridas ar etilo acetatas arba jų mišiniai, be to, kad būtų geresnis medžiagų susiskirstymas yra papildoma reikiamu vandens kiekiu. Pašalinus su vandeniu nesimaišančią fazę, gaunamas produktas, turintis vieną ar daugiau išradimo junginių, greičiausiai ir S541 antibiotikų junginių.

[0105] Gryninimas ir/ar išradimo junginių atskyrimas gali būti atliekamas įprastų metodų pagalba, kaip antai, chromatografijos (tame tarpe didelio efektyvumo skysčių chromatografijos, "hplc") su atitinkamu sorbentu, kaip antai, silicio oksidu, nefunkcine stambiatinkle adsor-buojančia derva, pvz., derva iš polistireno su sker-siniais ryšiais, kaip antai, Amberlite XAD-2, XAD-4 ar XAD-1180 (Rohm & Haas Ltd) dervos, arba S112 derva (Kastell Ltd ar besimaišantis su organiniu tirpikliu skersaryšis dekstranas, kaip antai, Sephadex LH20 (Pharmacia UK Ltd), ar, hplc atveju, reversinės fazės sorbentai, kaip antai, angliavandeniliu surištas silicio oksidas, pvz., C₁₈-surištas silicio oksidas. Sor-bentas gali būti lovelio formos, o dar geriau - už-pildomas kolonėlėje. Nefunkcinės stambiatinklės dervos, kaip antai, XAD-1180 ar S112, atveju išplovimui tinka organiniai tirpikliai, kaip antai, acetonitrilas su vandeniu.

[0106] Silicio oksido ir sefadekso kolonėlės paprastai yra užpildomos tirpalu su junginiais ir atitinkamu tirpikliu ir, jei reikia, preš tai sumažinus tirpiklio tūrį. Kolonėlė gali būti pasirinktinai skalaujama ir vėliau išplaunama reikalingo poliaringumo tirpikliu. Silicio oksido ir sefadekso atveju galima naudoti tirpiklius, kaip antai, alkoholius, pvz., metanolį; ang-liavandenilius, kaip antai, heksaną, acetonitrilą; ang-liavandenilių halogenidus, kaip antai, chloroformą ar metileno chloridą; ar esterius, kaip antai, etilo acetatą. Taipgi gali būti naudojami tirpiklių deriniai, vienų ar su vandeniu.

[0107] Išradimo junginių išplovimas ir išskyrimas/gryninimas gali būti valdomas taikant įprastus metodus, kaip antai, plonasluoksnę chromatografiją ir didelio efektyvumo skysčių chromatografiją arba panaudojant apra-š^ytųjų junginių savybes.

[0108] Išradimo junginiai pirmiausia gali būti gryninami silicio oksido chromatografijos būdu, geriausia naudojant panašų a, chloroformą eliuentą: etilo acetatą, po to pasirenkant, pvz., didelio efektyvumo skysčių chromato-grafiją. Tada gautoji išgryninta medžiaga gali būti chromatografuojama sefadekso kolonėlėje su eliuentu, kaip antai, acetonitrilu, ir tuomet išradimo junginiai gali būti išskirti taikant didelio efektyvumo skysčių chromatografiją.

[0109] Po to, kai junginys gautas iš esmės gryna forma, jis yra toliau gryninamas kristalizuojant, pvz., iš metanolio, izopropanolio ar metanolio/vandens mišinio; iš-radimas apima ir tuos siūlomus išradime junginius, kurie yra kristalinėje formoje.

[0110] Tinkamai suderinus procedūrų eigą (II) formulės junginiai, ką tik aukščiau apibrėžti, buvo išskirti kietu pavidalu. Suprantama, kad gryninimo etapų seka, jų pasirinkimas, o taip pat siekiamas išgryninimo mastas gali stipriai skirtis. Kaip yra aprašyta aukščiau, gali būti naudojami junginiai, kurių grynumo laipsnis atitinka vartojimo tikslus. Naudojant žmonių terapijai, yra pageidautinas nemažesnis, negu 90%, o geriau didesnis už 95%, junginių grynumas. Veterinarijai ar kitiems tikslams bus tinkamas ir mažesnis grynumas, pvz., 50% ar mažesnis.

[0111] S541 antibiotikų (III) formulės tarpiniai junginiai, kuriuose OR⁵ yra hidroksido grupė ir OR⁴ yra hidroksilo ar metoksilo grupė, gali taipgi būti gaunami, naudojant aukščiau aprašytus fermentavimo ir atskyrimo metodus, kaip yra aprašyta, pvz., Pietų Afrikos patente Nr. 85/7049 . Kiti (III) formulės tarpiniai junginiai gali būti gauti iš šių junginių, naudojant aukščiau aprašytus metodus (II) formulės junginių gavimui. Toliau išradimą iliustruoja šios procedūros ir pa-vyzdžiai. Temperatūra visur nurodyta °C.

[0112] Junginiai yra pavadinti nurodant šaltini, "Faktoriai", kurie yra žemiau išvardinti (V) formulės junginiai

[0113]

[0114] Faktoriai A, B, C, D, E, F, ir E gali gūti gauti pagal Pietų Afrikos patentą Nr. 85/7049.

[0115] 5- Fenoksiacetoksi ir 5, 23- Difenoksiacetoksi Faktorius A

[0116] Faktorius A (2,0 g), dichlormetane (25 ml) ir piridine (0,35 ml), buvo paveiktas fenoksiacetilchlorido (0,5 ml) tirpalu dichlormetane 0° temperatūroje. Po 18 vai., esant 3°, tirpalas buvo paveiktas piridinu (1,0 ml) ir fenoksiacetilchloridu (1,0 ml) dichlormetane (5 ml) . Prieš supilant į vandeni, su ledu, tirpalas buvo mai-šomas 30 min. 0-5° temperatūroje. Papildžius eteriu (100 ml), mišinys buvo maišomas 20 min. Vandens sluoksnis ekstrahuotas eteriu. Eterio sluoksniai buvo sumai-šyti, perplauti paeiliui vandeniu ir druskos tirpalu, išdžiovinti ir išgarinti. Nuosėdas išgryninus chromatografijos būdu silicio oksido kolonėlėje, naudojant dichlormetaną: acetoną (40:1), buvo gautas titulinių junginių mišinys (1,8 g, monoacilas:diacilas = 6:1), kuris, pritaikius, atvirkščių fazių preparatyvinę hplc, buvo išskaidytas ir gauti 5- fenoksiacetoksi Faktorius A, 5 (CDC1₃) turi būti 6,8 iki 7,4 (m; 5H) ir 4,66 (s; 2H) ; m/z turi 746, 728, 710, 594 ir 576, ir 5, 23-difenoksiacetoksi Faktorius A, 8 (CDC1₃) turi nuo 6,8 iki 7,4 (m, 10H), 4,60 (s, 2H) ir 4,70 (s, 2H).

[0117] 2 pavyzdys

[0118] 5- Fenoksiacetoksi- 23-( 4- metilfenoksitionkarboniloksi) Faktorius A

[0119] 5-Fenoksiacetoksi Faktorius A (747 mg), esantis dichlormetane (10 ml) , 0°C temperatūroje ir azoto atmosferoje buvo paveiktas piridinu (0,81 ml) , o po to 4-metilfenilo chlortionformiatu (0,75 g), esančiu dichlormetane (2 ml) . Gautas tamsus tirpalas buvo maišo-mas 15 min. 0°C temperatūroje, o vėliau 22 vai, be šal-dymo. Tirpalas supiltas i, šaltą vandeni, ir druskos tirpalą, po to ekstrahuotas eteriu. Sujungti eterio sluoksniai buvo perplauti vandeniu ir druskos tirpalu, išdžiovinti ir išgarinti. Nuosėdas išgryninus chromatografijos silicio dioksido ir atvirkščių fazių pre-paratyvinės hplc pagalba, buvo gautas titulinis junginys (430 mg), 8 (CDC1₃) turi 3,34 (m; 1H) , 3,58 (m,

[0120] 1H) f 3,97 (dlO; 1H) , 4,72 (s; 2H) , 5,4 (m; 1H) , 5,59 (d6; 1H) ir nuo 6,9 iki 7,4 (m; 9H) m/z turi 728, 616, 576, 466, 464, 448, 354, 297, 247, 219 ir 151.

[0121] 5- Tret- butildimetilsililoksiacetoksi Faktorius A

[0122] Faktorius A (2,144 g), esantis sausame eteryje (25 ml) ir piridine (2,5 ml),0°C temperatūroje ir azoto atmosferoje buvo paveiktas, lašinant, t-butildimetilsilil-oksiacetilchloridu (1,2 g ) eteryje (10 ml) . Mišinys buvo maišomas 90 min. 0° temperatūroje, po to i, ji, vėl buvo lašinamas rūgšties chloranhidridas (1,10 g) eteryje. Mišinys buvo maišomas 60 min. 0° temperatūroje ir supiltas i, šaltą vandeni, ir eteri,. Vandens sluoksnis išplautas eteriu. Susimaišę organiniai sluoksniai buvo perplauti vandeniu ir druskos tirpalu, išdžiovinti ir nugarinti. Nuosėdas išgryninus chromatografijos būdu silicio oksido kolonėlėje, naudojant dichlormet-aną:acetoną (25:1), buvo gautas titulinis junginys 5 (CDC1₃) turi 0,09 (s; 6H) , 0,78 (d6; 3H) , 0,90 (s; 9H) , 0,93 (d6; 3H) , 0,97 (d6; 3H) , 1,03 (d6; 3H) , 1,51 (s; 3H) , 1,59 (s; 3H), 1,74 (s, 3H) , 3,32 (m; 1H) , 3,52 (dlO; 1H) , 3,64 (m; 1H) , 3,74 (dlO; 1H) , 3,82 (m;lH), 4,32 (s; 2H), 5,75 (d5; 1H) , m/z turi 784, 766, 748, 595, 577, 484, 466, 354, 314, 297, 265, 247, 237, 219, ir 151.

[0123] Faktorius A (250 mg) ir imidazolas (163 mg) valytame dimetilformamide (10 ml) buvo paveikti t-butilsimetil-sililo chloridu (197 mg). Tirpalas buvo maišomas 2 vai. ir supiltas i, šaltą vandenį. Mišinys kruopščiai iš-ekstrahuotas eteriu, o eterinių ekstraktų mišinys buvo išdžiovintas ir išgarintas. Nuosėdas išgryninus chromatografijos būdu silicio oksido kolonėlėje, naudojant dichlormetano:acetono (10:1) eliuentą, buvo gautas titulinis junginys (235 mg), 8 (CDC1₃) turi 0,13 (s; 6H) , 0,80 (d6; 3H) , 0,92 (s; 9H) , 0,96 (6d; 3H) , 1,00 (d6; 3H) , 1,03 (d6; 3H) , 1,53 (s; 3H) , 1,60 (s; 3H) , 1,80 (s; 3H), 3,37 (m; 1H) , 3,56 (dlO; 1H) , 3,64 (m; 1H) , 3,75 (dlO; 1H) ir 4,43 (d5; 1H) , m/z turi 726, 708, 691, 651, 633, 466 448, 354, 314, 297, 265, 247, 219, ir 151.

[0124] Faktorius A (3,0 g) piridine (20 ml) , esant -5°, buvo paveiktas acto rūgšties anhidridu (8 ml) ir gautas tirpalas paliktas 3° temperatūroje 20 vai. Pridėjus ben-zeno (100 ml) , tirpalas buvo koncentruojamas vakuume. Gautą aliejų išgryninus chromatografijos būdu silicio oksido kolonėlėje, naudojant dichlormetano:acetono (40:1) eliuentą, buvo gautas Faktorius A 5-acetatas (2,06 g), turintis 5,23-diacetatą (10%). Junginius at-skyrus atvirkščių fazių preparatyvinės hplc metodo pagalba, buvo gautas 5- acetoksi Faktorius A (79% išei-ga), X_max (EtOH) 244, 5 nm (E^* 462), 8 (CDC1₃) turi 2,14

[0125] (s; 3H) , m/z turi 654, 594 ir 576, bei 5, 23- diacetoksi Faktorius A (6,5% išeiga), 8 (CDC1₃) turi 2,01 (s; 3H) ir 2,13 (s; 3H), m/z turi 696 ir 636.

[0126] Faktoriaus A (600 mg) valytame piridine tirpalas (1,0 ml) buvo paveiktas pertekliniu rūgšties anhidridu (0,50 ml) ir keliais 4-N,N-dimetilaminpiridino kristalais. Po 24 vai. kambario temperatūroje mišinys buvo supiltas i, eteri, ir po to organinė fazė paeiliui buvo plaunama 2N chloro rūgštimi, sočiu natrio bikarbonato tirpalu ir, pabaigoje, druskos tirpalu. Po sausos organinės fazės garinimo gauta derva buvo išgryninta naudojant chromatografijai Merck Kieselgel 60, 230-400 silicio oksido mišinį (45 g). Praleidus pro kolonėlę su dichlormetanu:eteriu (9:1), buvo gautas titulinis junginys bespal-vių putų pavidalu (560 mg), [ct]^ + 169° (c 0,48,

[0127] 1. t. 211-213°, [a]^² + 200° (c, 0,40 CHC13) , ^ma?H

[0128] 238,5 (30,400 ir 245 nm (e_^ 32,500); 3440 (OH) ir 1781 cm"¹ (acetoksi ir esteris); 5 (CDC1₃) turi 4,90 (m, 1H) , 4,04 (d, 6Hz, 1H) , 3,96 (d, 10Hz, 1H) , 3,58 (m, 1H) , 3,32 (m, 1H) , 2,14 (s, 3H) , 1,75 (s, 3H) , 1,67 (d 6Hz, 3H), 1,60 (s, 3H) , 1,52 (s, 3H) , 0,99 (d, 6Hz, 3H) , ir 0,71 (d 7Hz, 3H) . m/z=668 (M+) , iš Faktoriaus C (312 mg) . Reakcijos mišinį geriau pilti d, etilo acetatą, negu i, eteri,, ir, pabaigoje, kristalinti, trinant su diizopropilo eteriu.

[0129] Į išmaišytą ir atšaldytą (0-5°) 6 pavyzdžio junginio (530 mg), esančio metanolyje (10 ml) , tirpalą buvo įlašintas natrio hidroksido (30 mg) vandeninis tirpalas (1 ml) . Po 1,3 vai. mišinys buvo supiltas i, etilo ace-

[0130] tatą ir po to organinė fazė paeiliui buvo plaunama 2N vandenilio chlorido rūgštimi, vandeniu ir, pabaigoje, druskos tirpalu. Nugarinus sausą organinę" fazę buvo gauta geltona derva, kuri, ištirpinta dichlormetane, buvo praleidžiama pro Merck Kieselgel 60 kolonėlę su 230-400 mešų silicio oksidu (50 g) , pagamintu tokiame pačiame tirpiklyje. Praleidus pro kolonėlę su dichlormetanu:eteriu (9:1), buvo gautas titulinis junginys, kuris, išgarinus n-pentano tirpalą, įgavo beveik be-spalvės kietos medžiagos pavidalą. Ši medžiaga (330 mg) turėjo [a]p³ + 166° (c 0,64 CHC13) , X.įįįĮj§^H 239 (26, 500 ir 245 nm (e_max 29,300); vmax (^CHBr₃) 3540, 3460 (OH) ir 1712 cm"¹ (esteris); 5 (CDC1₃) turi 4,89 (m, 1H) , 4,27 (t, 6Hz, 1H) , 3,93 (d, 6Hz, 1H) , 3,91 (d 10 Hz, 1H) , 3,55 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,85 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,03 (d, 6Hz, 3H), 0,98 (d 6Hz, 3H), 0,94 (d 6Hz, 3H), ir 0,69 (d 7Hz, 3H). m/z = 654 (M+) .

[0131] [a\l³ + 139° (c 0,52, CH2C12) ; ?Sa? 244, 5 nm (_8raax29, 400); v_max (CHBr₃) 3550, 3480 (0H) ; 1716 (esteris ir acetatas) ir 1255 cm^-1 (acetatas); 5 (CDC1₃) turi 4,91 (q, 3Hz, 1H); 2,03 (s, 3H) ir 1,64 (d, 7Hz, 3H) ir 1,60 (s, 3H); m/z = 626 (M+) , iš 7 pavyzdžio junginio baltos amorfinės kietos medžiagos pavidalu.

[0132] Oksalilo chlorido (1,96 ml) tirpalas sausame dichlormetane (25 ml) buvo paveiktas -70° temperatūroje azoto atmosferoje lašinant i, ji, dimetilsulf oksido (3,19 ml) tirpalą sausame dichlormetane (15 ml) , ir po to laši-nant i, jį 5-acetoksi Faktoriaus A tirpalą (4,91 g) sausame dichlormetane (30 ml). Gautasis tirpalas buvo mai-šomas 1,5 vai. -70° temperatūroje prieš įlašinant i, ji, trietilamino (12,6 ml) sausame dichlormetane (40 ml) tirpalą. Reakcijos mišinys buvo maišomas 1,25 vai. ne-šaldant ir vėliau supiltas i, šalto vandens ir eterio (1:1) mišinį. Vandens sluoksnis ekstrahuotas eteriu. Sujungti organiniai sluoksniai buvo perplauti vandeniu, druskos tirpalu, išdžiovinti ir nugarinti. Likusias pu-tas chromatografuojant silicio okside su dichlormetano:acetono (9:1) tirpikliu, buvo gautas titulinis j unginys (3,4 g), 5 (CDC1₃) 3,33 (m; 1H) , 3,49 (m, 1H) , 3,70 (dlO; 1H) ir 5,52 (d5; 1H) , m/z turi 652, 634, 609, 591, 574, 482, 263, 235 ir 151.

[0133] Į 10 pavyzdžio junginio (276 mg), esančio metanolyje (5 ml) 0° temperatūroje, tirpalą buvo įlašintas 2N-natrio hidroksido (0,42 ml) metanolyje (1,0 ml) tirpalas. Prieš supilant i, šaltą vandenį, tirpalas buvo paliktas 5 vai. 5° temperatūroje. Mišinys buvo ekstrahuojamas eteriu ir etilo acetatu. Sujungti organiniai sluoksniai buvo plaunami druskos tirpalu, išdžiovinti ir nugarinti iki liks kieta medžiaga, kurią išgryninus preparaty-viniu plonasluoksnės chromatografijos būdu naudojant dichlormetano:acetono (10:1) tirpiklį, gautas titulinis

[0134] junginys (140 mg), 5 (CDC1₃) 3,28 (ra; 1H) , 3,48 (m; 1H), 3,70 (dlO; 1H) ir 4,28 (tR⁷; 1H) , m/z 592, 549, 482, 370, 263, 235 ir 151.

[0135] 0,4 ral Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 sporų suspensija, ištirpinta 10% glicerolio, buvo naudojama 250 ml Erlenmeyer kolboje esančiai 50 ml terpei užsėti, susidedančiai iš 15,0 gL 1 D-gliukozės, 15,0 gL^-1 glicerolio, 15,0 gL^-1 sojos peptono, 3,0 gL 1 NaCl ir 1,0 gL^-1CaC0₃, ir gaminant papildytai distiliuotu vandeniu iki 1 L. Prieš autoklavuojant, vandeniniu NaOH tirpalu buvo nustatomas pH lygus 7,0.

[0136] Kolba buvo laikoma 2 dienas 28° temperatūroje kraty-tuve, besisukančiame 250 aps./min, o kolba judėjo 50 mm skersmens apskritimu. Tuomet 4 ml porcijomis buvo už-sėta kiekviena iš keturių plokščiadugnių 2 L taplos kolbų su 200 ml tokios pačios terpės, po to kolbos buvo inkubuojamos tomis pačiomis sąlygomis 2 dienas.

[0137] Tada 4 kolbų turiniu buvo užsėtas 70 litrų fermenta-toriaus indas su ta pačia terpe, tik papildyta polipro-pileno glikoliu 2000 (0,06%). Propilenglikolis 2000 buvo pridedamas putojimo, vykstančio fermentavimo metu, suvaldymui. Fermentavimas vyko 28° temperatūroje intensyviai maišant ir aeruojant, kad ištirpusio deguonies kiekis būtų didesnis nei 30% nuo i,sotinimo. Po 24 fermentavimo valandų 800 ml ir 9 litrų porcijos buvo per-keltos atitinkamai, 70 litrų fermentatorių, turinti, 40 litrų terpės, ir 700 litrų fermentatorių su 450 lit-rų terpės. Terpė šiuose fermentatoriuose buvo sudaryta iš 2,5 gL^-1 D-gliukozės; 25,0 gL"¹ salyklinio dekstrino (MD30E) ; 12,5 gL^-1 Arkasoy 50; 1,5 gL^-1 runkelių me-lasos; 0,125 gi^/1 K₂HP0₄; 1,25 gL"1 CaC0₃ (Ar) ir 0,6 gL"¹silicono 1520 (Dow Corning), papildant distiliuotu vandeniu iki 1 L. Prieš sterilizuojant pH nustatomas 6,5 su vandeniniu H₂S0₄ tirpalu.

[0138] Minėtieji fermentavimo procesai vyko 34° temperatūroje intensyviai maišant ir aeruojant, kad ištirpusio deguonies kiekis būtų didesnis nei 30% nuo isotinimo. Jei reikia, buvo pridedamas stabdantis putojimą polipropi-lenglikolis 2000. Po 24 vai. vandeniniu H₂S0₄ tirpalu buvo pakoreguotas pH, nustatant jį 7,2. Fermentavimo produktai buvo surenkami ir sujungiami po 4 dienų.

[0139] Iš gauto bendro buljono (423 L), centrifuguojant Sharples PS16AY cenrifugoje, buvo surinktas micelis (10,4 kg). Micelis buvo intensyviai maišomas metanolyje (50 L) .40 min., po to nufiltruotas. Nuosėdos resuspenduotos metanolyje (27 L) ir vėl nufiltruotos. Tuomet abu fil-tratai (55 L) kartu buvo sumaišyti su vandeniu (27 L) ir 60-80 petrolio eteriu (30 L) ir maišomi 20 min.

[0140] Fazės buvo atskiriamos Westfalia MEM1256 centrifugoje, vėliau metanolio fazė (75 L) buvo sumaišyta papildomai su vandeniu (38 L) ir 60-80 petrolio eteriu (30 L). Po 20 min, fazės vėl atskirtos centrifuguojant, emulsijos suardymui į petrolio eterio fazę buvo pridėtas acetonas (2 L). Trečią kartą sumaišius metanolio fazę (110 L) su vandeniu (38 L) ir 60-80 petrolio eteriu (30 L) , fazės buvo atskiriamos kaip ir anksčiau. Vėl, kad būtų suar-dyta emulsija, i, petrolio eterio fazę buvo pridėtas acetonas (3 L).

[0141] Trys heksano fazės buvo sujungtos (90 L) ir koncent-ruojamos, esant žemam slėgiui (garinimo temperatūra 25°) . Koncentratas buvo džiovinamas natrio sulfatu (3 Kg) ir po to nugarinamas iki aliejaus.

[0142] Aliejus buvo ištirpintas dichlormetane (0,5 L) ir nufiltruotas pro Dicalite 478. Tirpalas (0,9 L) buvo paduodamas i kolonėlę (150x10 cm) su šilučio oksidu (Merck) 6 L/val greičiu, praplautas dichlormetanu (4 L) ir praleistas pro kolonėlę su chloroformo:etilacetato (3:1 pagal tūri,) mišiniu. Frakcija, išsiplovusi tarp 14,6 ir 33,3 L buvo koncentruota iki kietos medžiagos, savo ruožtu, ištirpinta chloroformo:etilacetato (3:1 pagal tūri,) mišinyje.

[0143] Tirpalas buvo dar kartą chromatografuojamas silicio oksido kolonėlėje su tuo pačiu tirpikliu. Frakcija, iš-siplovusi tarp 14,5 ir 31,5 L buvo išdžiovinta iki kietos medžiagos ir vėl ištirpinta chloroformo:etil-acetato (3:1 pagal tūri,) mišinyje. Šis tirpalas buvo dar kartą chromatografuojamas silicio oksido kolonėlėje tomis pačiomis kaip ir anksčiau sąlygomis, o frakcija, išsiplovusi tarp 14 ir 31 L buvo išdžiovinta iki kieto būvio.

[0144] Kieta medžiaga buvo ištirpinta 70% pagal tūri, acetonitrilo vandeniniame (1,23 L) tirpale, i, kurį, kad tirpalas būtų skaidrus, buvo pridėtas atitinkamas metanolio kiekis. Tirpalas buvo chromatografuojamas po 5 ml Spherisorb ODS2 kolonėlėje. 70% acetonitrilas buvo lei-džiamas i, kolonėlę 20 ml/min greičiu, kuris po 21 min. buvo padidintas iki 34 mL/min. Kiekvieno kiekio frakcijos, išsiplovusios tarp 12,4 ir 16 L buvo surinktos ir ištirpintos tokiame pačiame tūryje vandens. Tada šis tirpalas buvo paduodamas i, Montedison S112 kolonėlę su stambiatinkliu polistirenu (2 L). Kolonėlė buvo išplau-ta 35% acetonitrilu ir pro ją praleistas acetonas. Frakcija, išsiplovusi tarp 0,5 ir 1,25 L, buvo išdžio-vinta iki kietos medžiagos.

[0145] Kietoji medžiaga buvo ištirpinta acetonitrile (20 ml) ir chromatografuota Sephadex LH20 kolonėlėje tokiame pačiame tirpiklyje. Frakcijos, išsiplovusios tarp 1,08 ir 1,26 L buvo surinktos ir išdžiovintos iki kieto būvio.

[0146] Kieta medžiaga buvo ištirpinta 60% acetinitrilo (10 ml) su pakankamu kiekiu etanolio, kad būtų skaidrus tirpalas. Vėl buvo chromatografuojama 2 ml kiekiais Spherisorb ODS2 kolonėlėje, praleidžiant 60% acetonit-rilą 25 mL/min greičiu. Frakcijos, išsiplovusios tarp 0,95 ir 1,08 L buvo surinktos kartu, džiovinamos iki kieto būvio. Ši kieta medžiaga buvo ištirpinta chlo-roforme (5 ml) ir chromatografuojama Merck silicio oksido gelio 60 kolonėlėje. Vėliau ji buvo išplauta chloroformu 10 mL/min greiču, o frakcija, išsiplovusi tarp 400 ir 790 mL, išdžiovinta ir gautas kieto būvio titulinis junginys (33 mg) . Branduolių magnetinio rezonanso spektras patvirtino, kad junginyje yra 23-keto Faktoriaus A. E.I. masių spektroskopinės analizės būdu nustatytas molekulės jonas, esant 610, o kiti cha-rakteringi fragmentai buvo 592, 549, 498, 482, 370, 263 ir 151.

[0147] Pritaikius hplc, buvo patvirtinta, kad pavyzdžio 23-keto Faktorius A yra analogiškas ketonui, gaunamam Faktoriaus A cheminės oksidacijos metu.

[0148] Į 2 pavyzdžio jungini, (350 mg) ir azobisizobutirnitrilą

[0149] (25 mg) sausame toluene (20 min.) 120° temperatūroje azoto atmosferoje buvo įlašintas tri-n-butilalavo hid-rido tirpalas (0,5 ml) sausame toluene. Po 90 min. fliuktavimo tirpalas buvo atšaldytas ir išgarintas. Nuosėdas chromatografuojant silicio oksido kolonėlėje su dichlormetano:acetono (40:1) tirpikliu buvo gautas

[0150] titulinis junginys (280 mg), 8 (CDC1₃) 3,32 (m; 1H) , 3,42 (dlO; 1H) , 3,57 (m; 1H) , 4,71 (s; 2H) , 5,59 (d6; 1H) , ir nuo 6,8 iki 7,4 (m; 5H) , m/z 730_/ 712, 578, 560, 468, 450, 356, 314, 299, 249, 248, 221, ir 151.

[0151] 13 pavyzdžio junginys (240 mg) buvo įdėtas i, sotų amo-niako metanolyje (10 ml) tirpalą - 5° temperatūroje. Tirpalas buvo maišomas 2 vai. 0°-10° temperatūroje, po to garinamas iki sauso būvio. Nuosėdų chromatografijai silicio oksido kolonėlėje naudojant dichlormetano:acetono (20:1) tirpikli, buvo gautas titulinis junginys (180 mg), 5 (CDC1₃) 3,27 (m; 1H) , 3,42 (d9; 1H) , 3,54 (m;lH) ir 4,29 (t6; 1H) , m/z 596, 578, 560, 468, 450, 356, 314, 299, 249, 248, 221 ir 151.

[0152] 5-acetoksi Faktoriaus A (3,46 g) piridine (30 ml) tirpalas atšaldytas ledo vonioje ir paveiktas metansul-forūgšties anhidridu (2,2 g). Po 30 min. tirpalas buvo paliktas iki jo temperatūra susilygins su aplinkos, vėliau per 60 min. buvo paskirstytas tarp etilo acetato ir vandenilio chlorido rūgšties, naudojant paeiliui sotų vandenini, natrio bikarbonato tirpalą ir sotų druskos tirpalą. Išdžiovinus organini, tirpalą (Na₂S0₄) ir išgarinus tirpikli,, likusios putos buvo chromatografuojamos silicio oksido kolonėlėje (Merck Art 9385) su heksanu (60°-80°)/etilo acetatu (3:1) ir iš-plaunamos tokiu pačiu tirpikliu. Sujungus pagrindinio komponento atitinkamas frakcijas ir išgarinus tirpikli,, buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (2,08 g)

[0153] [ a] jį + 154° (c=0,56; CHC13) , ^ maS 3 247 nm <E 29070);

[0154] v max (CHBr3) , 3550, 3470 (OH) ir 1735, 1715 (esteris) ; 8 (CDC1₃) 4,90 (m, 1H), 3,05 (s, 3H) ir 2,16 (s, 3H) .

[0155] Faktorius B (250 mg) , tozilo anhidridas (204 mg) ir keli 4-N,N-dimetilaminpiridino kristalai buvo kartu maišomi 24 vai. sausame piridine (0,5 ml). Supylus gautą tirpalą į eterį, organinė fazė buvo paeiliui praplauta 2N vandenilio chlorido rūgštimi, sočiu vandeniniu natrio bikarbonato tirpalu ir, pabaigoje, druskos tirpalu. Išgarinus išdžiovintą (Na₂S0₄) eterini, sluoksnį, buvo gauta nevalyta medžiaga, kuri kartu su dichlormetanu buvo paduota i silikagelio (50 g, Merck Kieselgel 60, 203-400 mišinys) kolonėlę su toku pačiu tirpikliu. Po išplovimo su dichlormetanu:eteriu (9:1) buvo gautas pagrindinis komponentas, kuris buvo toliau gryninamas taikant hplc. Gautas dervos pavidalo titulinis junginys [oc]_jp + 173° (c, 0,84, CHC1₃)^; ^A._max (EtOH

[0156] 235 (30,000) ir 244, 5 nm ( emax 30, 800); v_max ( 1708 cm"¹(esteris); 8 (CDC1₃) 7,82 (d, 10Hz, 2H) , 7,29 (d, 10Hz 2H) , 4,83 (kv, 3Hz, 1H), 3,50 (s, 3H) ir 2,43 (s, 3H) ;

[0157] Į 5-acetoksi Faktoriaus A (325 mg) tirpalą sausame eteryje buvo įdėtas sidabro karbonatas (1 g) , po to jodbutanas (0,5 ml) ir sidarbo perchloratas (550 mg). Po 20 vai. maišymo kambario temperatūroje i, mišinį įdėtas kolidinas (0,5 ml). Pamaišius dar 20 min., miši-nys buvo nufiltruotas, o filtratas buvo paeiliui per-

[0158] plautas 2N vandenilio chlorido rūgštimi, sočiu vandeniniu natrio bikarbonato tirpalu ir vandeniu. Iš-džiūvusi organinė fazė buvo garinama iki beveik visiško sausumo, o aliejus buvo išgrynintas chromatografiniu būdu kolonėlėje su Merck Kieselgel 60, 203-400 mišiniu. Naudojant kolonėlėje heksano:etilo acetato (3:1) eliu-entą, buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (276 mg) [a]^² + 160° (c 0,94, CHC1₃)

[0159] Faktorius A (1 g, apie 70% grynumo) ir kalcio karbonatas (1,5 g) buvo maišomi kartu su dichlormetanu (20 ml) 21° temperatūroje ir į gautąją suspensiją sykiu įdėtas perteklinis oksalilo chlorido kiekis (1,0 ml). Po 4-5 min. d, mišinį buvo įpiltas vanduo (15 ml) , o dar po 5 min. 2M HC1 (10 ml) ir etilo acetatas (70 ml) . Organinė fazė atskirta, perplauta vandeniu ir druskos tirpalu, po to paveikta spalvą naikinančia medžio ang-limi. Po 5-10 min. organinis tirpalas buvo filtruojamas fazes atskiriančiu popieriumi, o tirpiklis atskirtas nuo filtrato desorbuoj ant. Nuosėdos, esančios eteryje (50 ml) , buvo nuskaidrintos fitruojant pro "Hyflo", ir pašalinus tirpiklį, buvo gautos pilkai gelsvos putos. Stipriai plakant šią medžiagą su diizopropilo eteriu (apie 7 ml) ir perplovus gautą kietąją medžiagą su diizopropi'lo eteriu ir n pentanu buvo gautas kris-talinio būvio titulinis junginys (750 mg) . v_raax (CHBr₃) nuo 3360 iki 3600 (OH) , 1805 (rūgšties monomeras) ir 1720 cm¹ (rūgšties dimeras ir esteriai); 8 (CDC1₃) 4,30 (d, 5Hz, 1H) ir 5,14 (m, 1H).

[0160] 23-hemioksalato Faktoriaus A (500 mg) dichlormetane (30 ml) tirpalas buvo intensyviai maišomas su vandeniniu natrio hidroksidu (1,54 g ištirpinti 30 ml H₂0) 2 vai. 21° temperatūroje. Surinkus organinę fazę, van-deninė fazė buvo perplauta nedideliu dichlormetano kiekiu. Organinės fazės buvo sujungtos, perplautos su 2M HCl, tuomet išdžiovintos (Na₂S0₄) ir, desorbavus iš tirpiklio, buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (430 mg). Remiantis palyginimu, atliktu hplc, su auten-tišku Faktoriaus A pavyzdžiu, buvo parodyta, kad junginys yra Faktorius A.

[0161] Faktoriaus A (306 mg) ir sukcininio anhidrido tirpalas (60 mg) sausame piridine (0,5 ml) buvo maišomas 24 vai. 22° temperarūroj e. Praskiedus mišinį eteriu, organinė fazė buvo perplauta 2N vandenilio chlorido rūgštimi ir druskos tirpalu. Po išdžiovinto eterinio sluoksnio iš-garinimo gautos putos, iš kurių atvirkščių fazių pre-paratyvinės hplc pagalba buvo gautas titulinis junginys . Eteryje produktas iškrito i nuosėdas baltos amorfinės medžiagos pavidalu, pridėjus n-pentano, [a]2D2

[0162] + 125° (c 0,44, CHC1₃); 245 nm (e_max 30,700); vmax (CHBr₃) 3490 (OH) 3,300-2,00 (C0₂H), 1730 (rūgšties karbonilas) ir 1710 cm"¹ (esteris); 5 (CDC1₃) 2,74 (s, 4H) . m/z = 712 (M+) .

[0163] 5- Acetoksi, 23- Etiloksialkiloksi Faktorius A*

[0164] 5-acetoksi Faktorius A (320 mg) ir perteklinio etilo oksalilo chlorido valytame dichlormetane (6 ml) tirpalas buvo maišomas kartu su kalcio karbonatu (300 mg) 1 vai. Mišinys, praskiestas eteriu, buvo supiltas i so-tų natrio bikarbonatą ir, prieš supilant i, etilo acetatą, buvo 20 min. maišomas. Išgarinus sausą (Na₂S0₄) organinę fazę, buvo gauta derva (325 mg) , kuri dichlormetane buvo paduota d, Merck Kieselgel 60, 70-230 silicio oksido mišinio (25 g) kolonėlę su tokiu pačiu tirpikliu. Išplovus kolonėlę dichlormetanu, o vėliau dichlormetanu:eteriu (95:5), buvo gautas baltų putų pavidalo titulinis junginys (2 65 mg) [a]2 D 3 + 157 (c 0,41, CHC13) ; ??? 245 nm <s_max 32, 800); vmax (CHBr₃) 3530, 3480 (OH) , 1760 ir 1735 cm 1 (esteriai) ; 8 (CDC1₃) nuo 5,4 iki 5,6 (m, 2H) , 5,05 (m; 1H) ; 4,32 (q, 7Hz, 2H), 2,13 (s, 3H) ir 1,35 (t, 7Hz, 3H).

[0165] 5-acetoksi, 23-etiloksaliloksi Faktoriaus A (50 mg) metanolyje (1 ml) tirpalas, turintis koncentruotos sieros rūgšties (0,01 ml) buvo laikomas 17 vai. 21° tempe-ratūroje. Supylus mišinį i, etilo acetatą, organinė fazė palaipsniui virto neutralia medžiaga. Produktas buvo gryninamas chromatografiškai Merck Kieselgel 60, 70-230 silicio oksido mišinio (25 g) kolonėlėje, naudojant iš pradžių dichlormetano, o po to dichlormetano:eterio (9:1) išplaunančiuosius tirpiklius. Buvo gautas be-spalvės dervos pavidalo titulinis junginys (25 mg) , [cc]p3 + 147° (c 0,28 CHCI3) , ^S_ax^H 245 nm (e_max 26,600); (v_max (CHBr₃) 3530, 3480 (OH) , 1763, 1737 ir 1710 cm"¹

[0166] (esteriai); 8 (CDC1₃) 4,29 (br. t., 7Hz, 1H) , 5,09 (m, 1H) ir 3,88 (s, 3H).

[0167] 5- Acetoksi- 23- ciklopropilkarboniloksi Faktorius A

[0168] 5-acetoksi Faktoriaus A (140 mg) tirpalas piridine (1 ml) buvo paveiktas ciklopropankarboksirūgšties chloridu (0,08 ml) . Po 3 vai. reakcijos mišinys buvo paskirstytas tarp etilo acetato ir 2N vandenilio chlorido rūgšties. Organinė fazė buvo atskirta ir perplauta paeiliui 2N vandenilio chlorido rūgštimi ir sočiu vandeniniu natrio bikarbonato tirpalu. Išdžiovinus orga-ninį tirpalą (Na₂S0₄) ir išgarinus tirpikli, buvo gautas aliejus, kuris buvo chromatografuojamos silicio oksido kolonėlėje (Merck Art 9385; 80 ml) su heksanu (60°-80°)/etilo acetatu (3:1), ir išplaunamas su tokiu pačiu tirpikliu. Sujungus atitinkamas pagrindinio junginio frakcijas ir išgarinus tirpikli,, buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (70 mg), [a]^ 4- 143° (c=0,54;

[0169] CHC13) ; ^_max^l3 250,2 (s = 20310); vmax (CHBr3) 3550, 3470 (OH) ir 1733, 1712 (esteris); 5 (CDC1₃) 2,16 (s; 3H) , 3,33 (m, 1H) , 3,88 (d, J 10Hz, 1H) , 5,01 (m; 1H) ir (5,5-5,6 (m; 2H) .

[0170] Iš 5-Acetoksi Faktoriaus A (0,28 g) ir ciklopentilkar-bonilchlorido (0,2 ml) buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (0,17 g). [ct]p^ + 149° (c=0, 475; CDC13) ;

[0171] i 23- Ciklopropilkarboniloksi Faktorius A

[0172] Maišomas 5-acetoksi-23ciklopropilkarboniloksi Faktoriaus A (230 mg) metanolyje (15 ml) tirpalas buvo at-šaldytas ledo vonioje ir paveiktas 3% vandeniniu natrio hidroksido tirpalu (0,5 ml) . Po 5 vai., per kurias reakcijos mišinys šilo iki kambario temperatūros, tirpalas buvo paskirstytas tarp etilo acetato ir 2N vandenilio chlorido rūgšties. Organinė fazė buvo atskirta ir perplauta paeiliui 2N vandenilio chlorido rūgštimi (x2), išdžiovinta (Na2S04) , o tirpiklis išga-rintas. Nuosėdos buvo chromatografuojamos silicio oksido kolonėlėje (Merck Art 9385; 150 ml) su heksanu (60°-80°)/etilo acetatu (3:1), ir išplaunamas tokiu pačiu tirpikliu. Sujungus atitinkamas pagrindinio junginio frakcijas ir išgarinus tirpikli,, buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (170 mg). [a]D 9 o + 146° (c=0,46;,

[0173] CHC1₃); ^maxl3 250, 2 nm (s = 20090); v_max (^CHBr₃) 3550, 3480 (OH) ir 1709 (esteriai); 8 (CDC1₃) 3,26 (m; 1H) , 3,88 (d, J 10Hz, 1H) , 4,29 (t, J 7Hz, 1H) ir 5,01 (m; 1H) .

[0174] Nuėmus apsaugą 5-acetoksi-23-ciklopentilkarboniloksi Faktoriuje A (0,25 g) buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (0,215 g) [a]^ +141° (c=0,63; CHC13) ;

[0175] ^ maxl3 250, 2 nm ( e = 19990); v max (CHBr₃) 3550, 3480 (OH) 1710 (esteris); 5 (CDC1₃) 2,74 kvintetas, J 7Hz, 1H) , 3,26 (m; 1H) , 3,91 (d, J 10Hz, 1H) , 4,30 (t, J 7Hz, 1H) ir 4,95 (m; 1H) .

[0176] 27 pavyzdys

[0177] 23- Ciklopropilkarboniloksi- 5- metoksikarboniloksi Faktorius A

[0178] 23-ciklopropilkarboniloksi Faktoriaus A (0,1 g) sausame dichloretane (15 ml) tirpalas buvo atšaldytas ledo vonioje ir paveiktas piridinu (0,2 ml), vėliau 1M me-tilchlorformiato tirpalu dichloretane (0,3 ml). Po 20 min. tirpalas buvo praskiestas dichloretanu ir perplautas 2N vandenilio chlorido rūgštimi, tuomet iš-džiovintas natrio sulfatu ir išgarintas tirpiklis. Nuo-sėdos buvo chromatografuojamos silicio oksido kolo-nėlėje (Merck Art 9385; 100 ml) su heksanu (60°-80°)/etilo acetatu (3:1) , ir išplaunamas tokiu pačiu tirpikliu. Sujungus atitinkamas pagrindinio junginio frakcijas ir išgarinus tirpiklį, buvo gautas putų pavidalo titulinis junginys (0,106 g), + 149°

[0179] (C=0, 63; CHC13) ; ???'3 250,2 (e = 20470); v_max (CHBr₃) 3470 (OH), 1745 (karbonatas), 1710 (esteris); 998 (C-O); 5 CDCI₃) 5,56 (s; 1H) , 5,01 (m; 1H) , 3,88 (d, J 10Hz, 1H), 3,83 (s; 3H), 0,67 (d; J 7Hz; 1H).

[0180] Faktoriaus A, 5-acetato (131 mg), izobutirilchlorido (0,05 ml) , piridino (0,1 ml) ir 4-dimetilaminopiridino (25 mg) tirpalas sausame dichloretane (10 ml) maišomas 16 vai. 20° temperatūroje. Tirpalas praskiestas dichloretanu (30 ml) , perplautas 2N vandenilio chlorido rūgštimi ir išdžiovintas (magnio sulfatu), o po to nugarintas iki sauso būvio. Nuosėdos buvo chromatografuojamos Kieselgel 60 (15 g) . Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (4:1) buvo gautas be-spalvių putų pavidalo titulinis junginys (57 mg),

[0181] [ a] q° + 159° (c=₀,₆₁ CHCI3) , \^x (EtOH) 244 nm (s 30,4000),

[0182] v_max (CHBr₃) 3480 (OH), ir 1713 cm"¹ (esteriai), 8 (CDC1₃) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 4,95 (m, 1H) , 3,93 (d, J 10Hz, 1H), 2,55 (septetas, J 7Hz, 1H), 2,17 (s; 3H), 1,20 (d; J 7Hz; 6H) ir 0,70 (d; J 7Hz; 3H).

[0183] Faktoriaus A (306 mg), n-butano rūgšties anhidrido (0,33 ml) ir 4-dimetilaminpiridino (244 mg) piridine (5 ml) tirpalas buvo maišomas 18 vai. 20° temperatū-roje, po to įpiltas i, etilo acetato ir 2N vandenilio chlorido rūgšti, (kiekvieno po 50 ml) . Organinė fazė buvo perplauta 2N vandenilio chlorido rūgštimi, sočiu natrio bikarbonatu (25 ml) ir druskos tirpalu (25 ml), išdžiovinta (magnio sulfatu) ir nugarinta iki sauso būvio. Nuosėdos buvo chromatografuojamos Kieselgel 60 (40 g). Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (5:1), buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (200 mg), [a] ^ + 144° (c 1,13, CHC13) , X_max(EtOH) 245 nm (s 31, 800), v_max (CHBr₃) 1720 cm¹ (esteriai), 5 (CDCI₃) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 4,94 (m, 1H) , 3,92 (d, J 10Hz, 1H) , 2,39 (t, J 7Hz, 2H), 2,28 (t, J 7Hz, 2H) ir 0,70 (d, J 7Hz, 3H), m/z = 752 (M+).

[0184] [a]p° + 159° (c 0,69, CHC13) , 7_^ (EtOH) 244 nm (e 29,900),

[0185] v_max (CHBr₃) 3470 (OH) ir 1730 ir 1710 cm 1 (esteriai) , 8 ( CDCI3) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 4,95 (m, 1H) , 3,91 (d, J 10Hz, 1H), 2,16 (s, 3H), 1,22 (s, 9H) , ir 0,68 (d, J

[0186] 7Hz, 3H) , iš Faktoriaus A, 5-acetato (131 mg) ir piva-loilo chlorido (0,06 ml).

[0187] [ a]| ° + 153° (c 0,59 CHC13) , ? (EtOH) 236 nm (s 36,200), v max (CHBr₃) 3460 (OH) ir 1730 ir 1707 cm 1 (esteriai) , 5 (CDC1₃) 8,21 (d, J 7Hz, 2H), 7,56 (t, J 7Hz, 1H), 7,44 (t, J 7Hz, 2H) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 4,07 (d, J 10Hz, 1H) , 2,17 (s, 3H) ir 0,75 (d, J 7Hz, 3H) , iš Faktoriaus A, 5-acetato (327 mg) ir benzoinės rūgšties anhidrido (339 mg).

[0188] Faktorius A, 5, 23- dibenzoatas ( 370 mg) ir 5- benzoatas

[0189] Iš Faktoriaus A (613 mg) ir benzoilo chlorido (0,35 ml); iš pradinių frakcijų buvo gautas titulinis dibenzoatas, [ a]jį0 + 86° (c 0,65, CHC13) , ^ (EtOH) 236 nm (s 46,200), v_max (CHBr₃) 3480 (OH) , 1710 (esteriai) , ir 1602 ir 1585 cm^-1 (fenilas), 8 (CDC1₃) nuo 8,2 iki 8,0 (m, 4H) , nuo 7,7 iki 7,5 (m, 2H), 7,46 (t, J 7Hz, 4H), 5,61 (s, 1H), 4,07 (d, J 10Hz, 1H), ir 0,76 (d, J 7Hz, 3H) .

[0190] Iš sekančių frakcijų buvo gautas titulinis benzoatas, tąjį}0 + 80° (c 0,61, CHC13) , ? (EtOH) 237 nm (s 39,200),

[0191] v_max (CHBr₃) 3500 (OH) , 1712 (esteriai) , ir 1601 ir 1585 cm"¹ (fenilas), 5 (CDC1₃) 8,09 (d, J 7Hz, 2H) , 7,58 (t, J 7Hz, 1H), 7,45 (t, J 7Hz, 2H), 5,60 (s, 1H) , 3,83 (m, 1H), 3,76 (d, JlOHz, 1H) ir 0,81 (d, J 7Hz, 3H).

[0192] Faktoriaus A (123 mg) ir piridino (0,1 ml) sausame dichlormetane tirpalas (5 ml) maišomas 0° temperatūroje ir įpiltas chloracetilo chloridas (0,3 ml lM-tirpalo dichlormetane). Gautasis tirpalas buvo maišomas 15 min., tuomet papildomai pridėtas chloracetilo chloridas (0,1 ml lM-tirpalo), ir dar maišoma 15 min. Tirpalas buvo praskiestas dichlormetanu (50 ml) , perplautas 2N vandenilio chlorido rūgštimi (2x20 ml) ir sočiu natrio bikarbonatu (20 ml) , išdžiovintas (magnio sulfatu) ir nugarintas iki sauso būvio. Nuosėdos (140 mg) buvo gryninamos chromatografiškai, naudojant Kieselgel 60 (15 g). Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (4:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (90 mg), [a]o° + 143° (c 1,11, CHC13) , (EtOH) 245,5 nm (s 30,400), v_max (CHBr₃) 3500 (OH) , 1760 (chloracetatas) ir 1710 cm"¹ (esteris), 5 (CDC1₃) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 4,18 (s, 2H) , apie 3,81 (m, 1H) , 3,74 (d, J 10Hz, 1H) ir 0,80 (d, J 7Hz, 3H) , m/z = 752 (_M+, 35C1) .

[0193] Faktoriaus A, 5-chloracetato (276 mg) ir piridino di-chromato (602 mg) sausame N,N-dimetilformamide (10 ml) tirpalas buvo maišomas 48 vai. 20° temperatūroje, po to supiltas i etilo acetato (50 ml) ir 2N vandenilio chlorido rūgšties (25 ml) mišinį. Organinė fazė buvo perplauta 2N vandenilio chlorido rūgštimi ir sočiu natrio bikarbonatu, išdžiovinta (magnio sulfatu) ir nugarinta iki sauso būvio. Nuosėdos buvo gryninamos chromatografuojant Kieselgel 60 (25 g). Išplovus kolo-nėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (4:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (85 mg) , [a]j5° + 120° (c 1,05 CHC1₃), (EtOH) 245 nm (e 26,500),

[0194] v_max (CHBr₃) 3480 ( OH) , 1760 (chloracetatas) ir 1715 cm"¹(esteris ir ketonas), 8 (CDC13) nuo 5,5 iki 5,7 (m, 2H) , 4,17 (s, 2H), 3,72 (d, J 10Hz, 1H) , 2,50 (s, 2H) ir 0,85 (d, J 7Hz, 3H) , m/z = 686 (M+, 35C1) .

[0195] [ a]p° + 132° (c 0,77, CHC13) , (EtOH) 245,5 nm (s 32,500),

[0196] v_max (CHBr₃) 3495 (OH) , 1730 (bromacetatas) ir 1712 cm"¹(esteris), 8 (CDC13) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 3,97 (d, J 12Hz, 1H), 3,90 (d, J 12Hz, 1H) , 3,81 (m, 1H) , 3,75 (d, J 10Hz, 1H) ir 0,81 (d, J 7Hz, 3H) , iš Faktoriaus A (613 g) ir bromacetilo bromido (0,13 ml) .

[0197] Faktoriaus A, 5-chloracetato (365 mg) , chloracetilo chlorido (0,21 ml) ir kalcio karbonato (265 mg) sausame dichlormetane (15 ml) tirpalas buvo maišomas 48 vai. 20° temperatūroje. Gautoji suspensija buvo ištirpinta dichlormetane (50 ml) , tuomet perplauta 2N vandenilio chlorido rūgštimi ir sočiu natrio bikarbonatu, išdžio-vinta (magnio sulfatu) ir nugarinta iki sauso būvio. Nuosėdos buvo gryninamos chromatografuojant Kieselgel 60 (30 g). Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (4:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (167 mg), [ oc] q^ + 151° (c 1,17, CHC13) ,

[0198] A.max (EtOH) 245,5 nm (s 29, 400), v_max (CHBr₃) 3470 (OH) ir 1725 cm¹ (esteriai), 8 (CDC13) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 5,00 (ra, 1H) , 4,17 (s, 2H) , 4,10 (d, J 15Hz, 1H) , 4,02 (d, J 15Hz, 1H), 3,92 (d, J 10Hz, 1H) ir *0,73 (d, J 7Hz, 3H) , m/z = 764 (M+, 35C1) .

[0199] [a]p° + 157° (c, 0,75, CHC13) , ^ (EtOH) 244 nm (e 32,300),

[0200] v_max (CHBr₃) 3560 ir 3480 (OH) , 1740 (metoksiacetatas) ir 1712 cm"¹ (esteris), 5 (CDC1₃) 5,01 (m, 1H) , 4,28 (t, J 7Hz, 1H), 4,01 (s, 2H) , 3,89 (d, J 10Hz, 1H) , 3,46 (s, 3H) ir 0,71 (d, J 7Hz, 3H) , iš Faktoriaus A (184 mg) ir metoksiacetilo chlorido (0,3 ml).

[0201] [oc]p° + 129° (c 0,75, CHCI3) , ? (EtOH) 244 nm (s 25,900), v_max (CHBr₃) 3550 ir 3470 (OH) , ir 1745 bei 1708 cm"¹(esteriai), 5 (CDC1₃) 7,30 (t, J 8Hz, 2H) , 7,00 (t, J 8Hz, 1H) , 6,94 (d, J 8Hz, 2H), 5,02 (m, 1H) , 4,68 (d, J 16Hz, 1H) , 4,58 (d, J 16Hz, 1H), 4,30 J 7Hz, 1H) , 3,92 (d, J 10Hz, 1H) ir 0,67 (d, 7Hz, 3H) iš Faktoriaus A (184 mg) ir fenoksiacetilo chlorido (0,38 ml).

[0202] Faktorius A, 5, 23- di- ( 2, 2, 2- trichloretil) karbonatas

[0203] [ajp⁰ + 110° (c 0,94, CHC13) , (EtOH) 244 nm (s 28,000), v_raax (CHBr₃) 3550 ir 3460 (OH) , 1750 (karbonatas) ir 1710 cm¹ (esteris), 8 (CDC1₃) 5,60 (s, 1H) , 4,89 ir 4,75

[0204] (AB kv, J 12Hz, 2H), 4,85 (m, 1H) , 4,81 ir 4,71 (AB kv. J 14Hz, 2H) , ir 0,79 (d, J 7Hz, 3H) , iš Faktoriaus A (306 mg) ir 2,2,2-trichloretilo chlorformiato (0,14 ml) .

[0205] Faktorius A, 23-( 2, 2, 2- trichloretil) karbonatas

[0206] Faktoriaus A, 5,23-di-(2,2,2-trichloretil)karbonatas (200 mg) dioksane (10 ml) tirpalas buvo maišomas maž-daug 20° temperatūroje, ir buvo pridėtas lM-natrio hidroksidas (0,5 ml). Gautasis tirpalas buvo maišomas dar 30 min., tuomet pridėtas lM-natrio hidroksidas (1 ml) ir maišyta dar 1 vai. Tirpalas buvo praskiestas etilo acetatu (50 ml) , perplautas 2N vandenilio chlorido rūgštimi, išdžiovintas (magnio sulfatu) ir nugarintas iki sauso būvio. Nuosėdos buvo gryninamos chromatografuojant Kieselgel 60 (15 g). Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (2:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (80 mg) , [ a] p° + 142° (c 0,92 , CHC13) , X_max (EtOH) 245 nm (s 29,200), v_max (CHBr₃) 3560 ir 3500 (OH) , 1745 (karbonatas) ir 1710 cm^-1 (esteris), 5 (CDC1₃) 5,40 (s, 1H) , 4,80 ir 4,70 (AB kv, J 14Hz, 2H), 4,28 (m, 1H) ir 0,79 (d, J 7Hz, 3H).

[0207] Faktorius A, 5- acetatas, 23-( 2, 2, 2- trichloretil) karbonatas ( 385 mg) [ a]| ° + 140° (c 1,07, CHC13) , ? (EtOH)

[0208] 245,5 nm ( e 29,200), v_max (CHBr₃) nuo 3300 iki 3620 (OH) , 1738 (karbonatas) ir 1720 cm 1 (esteris), 8 (CDC1₃) turi 5,53 (s, 1H), 4,81 ir 4,70 (AB kv, J 14Hz, 2H) , 4,84 (m, 1H) , 3,98 (d, J 10Hz, 1H) , 2,16 (s, 3H) ir 0,79 (d, J 7Hz, 3H) iš Faktoriaus A, 5-acetato (393 mg) ir 2,2,2-trichloretilchlorformiato (2 ml lM-tirpalo dichlormetane).

[0209] Faktoriaus A (306 mg), n-butano rūgšties anhidrido (0,33 ml) ir 4-dimetilaminopiridino (244 mg) piridine (5 ml) tirpalas buvo maišomas 18 vai. 20° temperatūroje ir tada įpiltas i, etilo acetato ir 2N vandenilio chlorido rūgšties (kiekvieno po 50 ml) mišinį. Organinė fazė buvo perplauta 2N vandenilio chlorido rūgštimi, sočiu natrio bikarbonatu (25 ml) ir druskos tirpalu (25 ml), išdžiovinta (magnio sulfatu) ir nugarinta iki sauso būvio. Nuosėdos buvo gryninamos chromatografuojant Kieselgel 60 (40 g). Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu (5:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (200 mg) , [a]^ 9 n + 144°

[0210] (c 1,13, CHC13) , ? (EtOH) 245 nm (s 31,800), (CHBr₃) 1720 cm¹ (esteris), 8 (CDC1₃) nuo 5,5 iki 5,6 (m, 2H) , 4,94 (m, 1H) , 3,92 (d, J 10Hz, 1H) , 2,39 (t, J 7Hz, 2H) , 2,28 (t, J 7Hz 2H) ir 0,70 (d, J 7Hz, 3H) , m/z = 752 ( M+).

[0211] Faktoriaus A 5,23-di-n-butirato (160 mg) metanolyje (10 ml) tirpalas buvo maišomas 0° temperatūroje, ir buvo pridėtas lM-natrio hidroksidas (0,25 ml). Gautasis tirpalas buvo maišomas dar 90 min. nuo 0 iki 5° tempe-ratūroje, tuomet dar pridėta lM-natrio hidroksido (0,25 ml) ir maišyta sekančias 4 vai. Tirpalas buvo įpiltas i, etilo acetato (50 ml) ir 2N vandenilio chlorido rūgšties (25 ml) mišinį, tuomet organinė fazė perplauta vandeniu, druskos tirpalu ir išdžiovinta (magnio sulfatu) bei nugarinta iki sauso būvio. Nuo-sėdos buvo gryninamos chromatografuoj ant Kieselgel 60

[0212] ( 20 g). Išplovus kolonėlę petrolio eteriu:etilo acetatu ( 2:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys ( 68 mg), [ a]^ + 164° ( c 1, 03, CHC13) , X_max( EtOH) 244, 5 nra ( s 29, 600), v_max ( CHBr3) 3550ir 3470 ( OH) , ir 1710cm_ 1 ( esteriai), 5 ( CDC13) 4, 93 ( m, 1H) , 4, 28 ( t, J 7Hz 1H) , 3, 91 ( d, J 10Hz, 1H) , 2, 28 ( t, J 7Hz, 2H) , 1, 65 ( m, 2H) , 0, 94 ( t, J 7Hz, 3H) ir 0, 69 ( d, J 7Hz, 3H), m/ z = 682 ( M+).

[0213] [ a] p° + 169° ( c 0, 81, CHC1₃), L ( EtOH) 245 nm ( s 26, 600),

[0214] v_max ( CHBr3) nuo 3300 iki 3610 ( OH) , 1735 ( karbonatas) ir 1710 cm- 1 ( esteris), 8 ( CDC13) 5, 40 ( s, 1H) , 4, 28 ( m, 1H) , 3, 94 ( d, J 10Hz, 1H) , 3, 77 ( s, 3H) , ir 0, 76 ( d, J 7Hz, 3H) , m/ z=670 ( M+), iš Faktoriaus A, 5- acetato, 23-( 2, 2, 2- trichloretil) karbonato ( 300 mg).

[0215] [ a] p° + 152° ( c, 0, 6, CHC13) , X_max ( EtOH) 244, 5 nm ( 8 28, 200), v_max ( CHBr3) 3530 ir 3460 ( OH) , 1740 ( karbonatas) ir 1707 cm- 1 ( esteris), 8 ( CDC13) 5, 55 ( s, 1H), 3, 82 ( s, 3H) , 3, 42 ( d, J 10Hz, 1H) ir 0, 69 ( d, J 4Hz, 3H) , iš 23- deoksi Faktoriaus A ( 90 mg) ir metilchlor-formiato ( 0, 3 ml lM- tirpalo dichlormetane).

[0216] [ a] jį° + 162° ( c 1, 04, ( CHC13) , X_max ( EtOH) 245 nm ( s 28, 900), v_max ( CHBr3) nuo 3320 iki 3620 ( OH) , 1748

[0217] (chloracetatas) ir 1710 cm 1 (esteris) 8 (CDC1₃) turi 5,42 (s, 1H) , 4,28 (m, 1H) , 4,09 ir 4,01 (AB kv, J 15Hz, 2H), 3,91 (d, J 10Hz, 1H) ir 0,73 (d, J 7Hz, 3H) , m/z=688 (_M+, ³⁵_C1), iš Faktoriaus A (306 mg) ir chloracetilo chlorido (0,2 ml) .

[0218] [a]{3° + 157° (c, 0,96, CHC13) , ^max (EtOH) 244, 5 nm (s 30,200), v_raax (CHBr₃) 3500 (OH) ir 1720 cm"¹ (esteriai), 8 (CDC1₃) turi 5,52 (s, 1H) , 3,93 (d, J 10Hz, 1H) , 2,43 (kv, J 7Hz, 2H) , 2,32 (kv, J 7Hz, 2H) , 1,18 (t, J 7Hz, 3H), 1,16 (t, J 7Hz, 3H) ir 0,70 (d, J 7Hz, 3H) , m/z=724(M+), iš Faktoriaus A (613 mg) ir propano rūgšties anhidrido (0,5 ml) .

[0219] [ajp⁰ + 168° (c 1,03, CHCI3) , ? (EtOH) 244, 5 nm (s 30, 600), v_max (CHBr₃) 3550 ir 3480 (OH) , ir 1710 cm"¹(esteris), 8 (CDC1₃) 5,39 (s, 1H) , 4,27 (m, 1H) , 3,91 (d, J 10Hz, 1H), 2,31 (kv, J 7Hz, 2H), 1,14 (t, J 7Hz, 3H) ir 0,69 (d, J 7Hz, 3H), m/z=668(M+), iš Faktoriaus A, 5,23-dipropionato (327 mg),panašiu būdu kaip ir junginiui iš 43 pavyzdžio.

[0220] Faktorius A, 5- metilo karbonatas, 23- ketonas ( 830 mg)

[0221] [a]p° + 132° (c 0,82, CHC13) , A,raax (EtOH), 245 nm ( e 29,800). Infraraudonųjų spindulių ir branduolių magnetinio rezonanso spektroskopijos duomenys buvo panašūs

[0222] i, junginio, aprašyto 40 pavyzdyje, iš Faktoriaus A, 23-ketono (916 mg) ir metilo chlorformiato (0,23 ml).

[0223] Faktorius A, 5- benzilo karbonatas, 23- ketonas ( 57 mg)

[0224] [a]p° + 99° (c 0,4, CHC1₃), Xaax (EtOH) 245,5 nm (₈ 29, 600),

[0225] v_max (CHBr₃) 3600, 3550 ir 3480 (OH) , 1740 (karbonatas) ir 1715 cm"¹ (esteris ir ketonas), 8 (CDC1₃), nuo 7,5 iki 7,2 (m, 5H), 5,57 (s, 1H), 5,21 (s, 2H), 3,70 (d, J 10Hz, 1H) , 2,49 (s, 2H) ir 0,86 (d, J 6Hz, 3H) , iš Faktoriaus A, 23-ketono (92 mg) ir benzilchlorformiato (0,05 ml).

[0226] Į 5-acetoksi Faktoriaus A (325 mg) valytame eteryje tirpalą buvo pridėtas sidabro karbonatas (1 g) , po to jodbutanas (0,5 ml) ir sidabro perchloratas (550 mg). Tirpalas buvo maišomas 20 vai. kambario temperatūroje, tada pridėtas kolidinas (0,5 ml) . Pamaišius dar 20 min., mišinys buvo nufiltruotas ir filtratas paeiliui perplautas su 2N vandenilio chlorido rūgštimi, sočiu vandeniniu natrio bikarbonato tirpalu ir vandeniu. Išdžiovinta organinė fazė buvo garinama iki beveik sauso būvio, ir aliejus buvo gryninamas chromatografijos būdu Merck Kieselgel 60 su 230-400 silicio oksido mišiniu (100 ml) . Išplovus kolonėlę heksanu:etilo acetatu (3:1), buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (276 mg, 78%) + 160° (c 0,94,

[0227] CHCI3) , X_max (EtOH) 245 nm (s 28, 300); 5 (CDC1₃) 3,16 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,59 (m, 1H).

[0228] [a]^¹ + 174° (c 1,74, CHC1₃), Xmax (EtOH) 244 nm (_Bmax28,360), v_max (CHBr₃) 3470 (OH) ir 1732, 1710 (esteriai) ir 998 cm"¹ (C-O) 8 (CDC1₃) turi 5,5-5,6 (m; 2H) , 3,96 (d 10; 1H), 3,49 (m; 1H) , 3,37 (dd 6, 10; 1H) , 3,17 (dd, 6,10; 1H) , 2,16 (s; 3H) , 0,76 (d 7; 3H) , 0,44 (m; 2H) , 0,22 (m; 2H) iš 5-acetoksi Faktoriaus A ir brom-metilciklopropano, panašiai kaip ir junginiui 17 pa-vyzdy j e.

[0229] 5- Butildimetilsililoksi- 23- metoksi Faktorius A

[0230] Metilmagnio jodido eteryje (0,35 ml 3M tirpalo) tirpalas buvo pridėtas kambario temperatūroje azoto atmosferoje i 5-t-butildimetilsililoksi-Faktorius A (239 mg) sausame heksametilfosfortriamide (18 ml) tir-palą, maišomą magnetine maišykle. Po 30 min. pridėjus jodmetaną (0,4 ml) , gautas mišinys buvo maišomas 5 vai., praskiestas eteriu (100 ml) ir gerai praplautas vandeniu. Tuomet eterio tirpalas buvo praplautas druskos tirpalu (50 ml), ir organinė fazė nugarinta. Gautos putos (280 mg) buvo gryninamos chromatografijos būdu 230-400 mešų Merck Kieselgel 60 kolonėlėje (80 ml). Išplovus kolonėlę heksanu:etilo acetatu (5:1), buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys (46%)

[0231] [ccjp¹ + 142° (c 1,13, CHCI3) , A_^x (EtOH) 244 nm (s 27,900);

[0232] vraax (CHBr₃) 3460 (OH) , 1708 (plati; esteris) ir 995 cm"¹(C-O); 6 (CDCI₃) 4,42 (m; 1H) , 3,92 (d 10; 1H) , 3,3-3,4 (m; 2H), 3,32 (s; 3H) , 0,92 (s; 9H) , 0,75 (d 7; 3H) , 0, 12 (s; 6H) .

[0233] 5- t- Butildimetilsililoksi- 23- n- propiloksi Faktorius A

[0234] [ a]p1 + 153° (c 1,16, CHC1₃), Ka* (EtOH) 244 -nra (ą_^ 29,950),

[0235] v_max (CHBr₃) 3460 (OH) , 1705 (esteris) ir 995 cm¹ (C-O) , 5 (CDCI₃) 4,44 (m, 1H) , 3,96 (d 10; 1H) , 3,56 (m; 1H) , 3,45 (m; 1H) , 3,14 (m; 1H) , 0,93 (s, 9H) , 0,75 (d, 7; 3H) , 0,13 (s, 6H), iš 5-butildimetilsililoksi Faktoriaus A ir 1-jodpropano.

[0236] [a]^¹ + 143,9° (c 0,9, CHC1₃), ?S? 239 (28,700) ir 245 nm (^smax 31,000); v_max (CHBr₃) 3490 (OH) , 1730 ir 1710 (esteris); 8(CDC1₃) 0,81 (d, 7Hz; 3H) , 0,99 (d, 7Hz, 3H), 1,00 (t, 7Hz, 3H) , 1,53 (s; 3H) , 1,59 (s; 3H) , 1,75 (s; 3H), 2,16 (s; 3H), 3,32 (m; 1H), 3,65 (m; 1H), 4,04 (d, 6Hz; 1H) ir 5,35 (m; 2H) , m/z = 640 (M+) , iš Faktoriaus D (2,5 g) ir acto rūgšties anhidrido (0,47 ml) panašiai kaip ir junginys iš 5 pavyzdžio.

[0237] l.t. 147-149° rombai iš pentano eterio [a]D o -i + 152,6° (c 0,9, CHC1₃), ^_maS^H 232, 5 (21, 500), 238 (26, 600), ir 244, 5 nm (^emax 28, 800); v_max (CHBr₃) 1720 cm^-1 (esteris); 8 (CDC1₃) 0,72 (d, 6Hz; 3H) , 0,99 (d, 6Hz; 3H) , 1,01 (t, 7Hz; 3H), 1,53 (s; 3H) , 1,60 (s; 3H) , 1,75 (s; 3H) , 2,02 (s; 3H), 2,15 (s; 3H), 3,31 (m; 1H), 4,04 (d, 6Hz, 1H) 4,91 (m; 1H) ir nuo 5,5 iki 5,6 (m; 2H) . m/z=682 (M+) , iš Faktoriaus D (439 mg) ir acto rūgšties anhidrido (0,25 ml) , panašiai kaip ir junginio iš 6 pa-vyzdžio .

[0238] [ail¹ + 150° (c 0,5, CHC1₃), ?tmaSH 238 (29,200) ir 244,5 nm (ą_^ 15,600); (CHBr₃) 3300, 3590 (OH) ir 1710 cm"¹(esteris); 8 (CDC1₃) 0,72 (d, 7Hz; 3H) , 0,99 (d, 7Hz; 3H), 1,01 (t, 7Hz; 3H) , 1,53 (s, 3H) , 1,60 (s, 3H) , 1,86 (s, 3H), 3,26 (m; 1H), 3,95 (d, 6Hz; 1H), 4,26 (t, 6Hz; 1H) , ir 4,91 (m; 1H) . m/z = 640 (M+) , iš 5,23-diacetoksi Faktoriaus D (207 mg), panašiai kaip ir junginio iš 8 pavyzdžio.

[0239] l.t. 228-230° [a]^¹ + 84° (c 0,6, CHC13) , ?Įį? 244, 5 nm (s_max 31,100); v_max (CHBr₃) 3500 (OH) , 1732 ir 1714 cm"¹(esteris ir ketonas); 8 (CDC1₃) 0,86 (d, 6Hz; 3H), 0,98 (d, 7Hz; 3H), 1,00 (t, 7Hz; 3H), 1,49 (s, 3H), 1,67 (s; 3H), 1,74 (s; 3H), 2,14 (s; 3H), 3,33 (m; 1H), 4,03 (d, 6Hz; 1H) ir 5,5-5,6 (m; ■ 2H) . m/z = 638 (M+) . Iš 5-acetoksi Faktoriaus D (336 mg) , panašiai kaip ir junginys iš 10 pavyzdžio.

[0240] [a]p¹ + 84 (c 0,4, CHCI3) , ^_maS^H 244, 5 nm (e_max 28, 000);

[0241] v_max (CHBr₃) 3550 ir 3500 (OH) , ir 1712 cm 1 (esteris ir ketonas); 8 (CDC1₃) 0,86 (d, 6Hz; 3H) , 0,98 (d, 7Hz; 3H) , 1,00 (t, 7Hz; 3H) , 1,50 (s, 3H) , 1,68 (s, 3H) ,

[0242] 1,86 (s, 3H), 3,27 (m, 1H) , 3,73 (d, 10 Hz, 1H) , 3,95 (d, 6 Hz, 1H) ir 4,27 (t, 6 Hz; 1H), iš 5-acetoksi-23-keto Faktoriaus D (96 mg), panašiai kaip ir junginys iš 11 pavyzdžio.

[0243] [ a] p° + 140° (c, 0,92, CHC13) , ^v_max (CHBr₃) 3550 ir 3470

[0244] (OH) , ir 1730 cm"¹ (esteriai), 6 (CDC1₃) 7,32 (s, 5H) , 5,0 m, 1H), 4,29 (t, J 7Hz, 1H), 3,88 (d, J 10Hz, 1H), 3,62 (s, 2H) ir 0,54 (d, J 7Hz, 3H) buvo gauta panašiai kaip ir junginys 38 pavyzdyje iš Faktoriaus A (306 mg) ir fenilacetato chlorido (0,33 ml).

[0245] 5-acetoksi-23-etoksi Faktorius A (806 mg) metanolyje (18 ml) tirpalas buvo atšaldytas ledo vonioje, pridėtas 1 N vandeninis natrio hidroksidas (1,3 ml), ir gautas šviesiai geltonas tirpalas maišomas 1,25 vai. Tirpalas buvo praskiestas etilo acetatu (80 ml) , tuomet perplautas paeiliui 1N vandenilio chlorido rūgštimi, vandeniu ir druskos tirpalu. Sausa organinė fazė buvo nugarinta ir gauta derva buvo gryninama chromatografiniu būdu, naudojant 230-400 mešų Merck Kieselgel 60 ko-lonėlę (200 ml). Išplovus kolonėle su 15% etilo acetatu dichlormetane, buvo gautas bespalvis putų pavidalo titulinis junginys (623 mg) [ cc] q^ + 178° (c 1,13,

[0246] CHC13) , X_max (EtOH) 244 nm (s 29, 400); 5 (CDC1₃) 4,29 (t,7; 1H), 3,65 (m; 1H) , 3,47 (m; 1H) , 3,26 (m; 2H) , 1,15 (t, 7; 3H).

[0247] 23- n- Butoksi Faktorius A (61%) buvo gautos bespalvės putos [oc]^1 + 161° (c 1,47, CHC13) . A._max (EtOH) 244 nm ( E 33, 100); 5 (CDC1₃) 4,30 (t, 7; 1H) , 3,60 (m; 1H) , 3.43 (m; 1H) , 3,17 (m; 2H) iš 5-acetoksi-23-n-butoksi-Faktoriaus A.

[0248] 23- n- Propoksi Faktorius A (83%) buvo gautos bespalvės putos [ajp¹ + 165° (c 1,01, CHC13) , X_max (EtOH) 245 nm ( s 30, 970); 6 (CDC1₃) 4,29 (t, 7; 1H) , 3,55 (ra; 1H) , 3.44 (m; 1H), 3,13 (m; 1H) iš 5-acetoksi-23-n-propoksi-Faktoriaus A.

[0249] 23- Metoksi Faktorius A (66%) buvo gautos bespalvės putos [a]p^X + 175° (c 1,01, CHC12) , 1max (EtOH) 244 nm (e 19,100); 5 (CDCI₃) 4,29 (t, 7; 1H) , 3,40 (m; 1H) , 3,33 (s; 3H), iš 5-acetoksi-23-metoksi Faktoriaus A.

[0250] 23- Ciklopentiloksi Faktorius A (75%) buvo gautos be-spalvės putos [oc]^ + 160° (c 1,65, CHCI3) , X_max (EtOH)

[0251] 244 nm (e 19, 800); 8 (CDC1₃) 4,29 (t, 7; 1H) , apie 3,96 (silpnas m; 1H) , 3,95 (d, 5; 1H) , 3,91 (d, 10; 1H) , 3,46 (m; 1H) , 0,69 (d, 7; 3H) iš 5-acetoksi-23-ciklopentiloksi Faktorius A.

[0252] Sidabro salicilatas (872 mg) buvo pridėtas į 5-acetoksi Faktoriaus A (207 mg) ir alilo jodido (1,0 ml) sausame eteryje (25 ml) tirpalą, ir, prieš filtruojant, mišinys buvo maišomas 4 dienas kambario temperatūroje. Nugarinus filtratą, buvo gautas geltonas aliejus, kuris bu-vo gryninamas chromatografijos būdu 230-400 mešų Merck Kieselgel 60 kolonėlėje. Išplovus su dichlormetano:etilo acetatu (19:1) buvo gautas bespalvių putų

[0253] 21 o pavidalo titulinis junginys (105 mg) , [a]D + 152°

[0254] (c 1,00 CHC13) , A._max (EtOH) 245 nm (e 28400, 8 (CDC1₃) 3,54 (m, 1H) , 4, 14 (m, 1H) .

[0255] (b) 5- Acetoksi- 23- n- propiloksi Faktorius A, iš 5-acetoksi Faktoriaus A ir n-propilo jodido. Po gryninamo chromatografijos būdu 230-400 mešų Merck Kieselgel 60, kolonėlėje išplovimo heksanu:etilo acetatu (3:1) buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys [ a]2 D2

[0256] + 160° (c 0,75 CHCI3) , A._raax (EtOH) 245 nm (e, 27600), 5 (CDCI₃) 3,33 (s, 3H) , 3,39 (m, 1H) .

[0257] (c) 5- Acetoksi- 23- metoksi Faktorius A, iš 5-acetoksi Faktoriaus A ir metilo jodido. Buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys [ a] D 9 o + 159° (c 0,98

[0258] CHCI3) , A,max (EtOH) 245 nm (e 27600), 5 (CDC1₃) 3,33 (s, 3H), 3,39 (m, 1H) .

[0259] 5- Acetoksi- 23- etoksi Faktorius A iš 5-acetoksi Faktoriaus A ir etilo jodido. Buvo gautas bespalvių putų pavidalo titulinis junginys [<x]q^ + 167° (c 1,02 CHC13) ,

[0260] * max ( EtOH) 245 nm ( e 28070), 5 ( CDC13) 3, 25 ( m, 1H) , 3, 46 ( m, 1H) , 3, 64 ( m, 1H) , panašiu būdu, kaip ir 17 pavydžio junginys.

Apibrėžtis

1. Junginys ir jo druskos pagal ( II) formulę,

kurioj eR¹ žymi metilo, etilo ar izopropilo grupę;R² žymi vandenilio atomą ar OR⁵ grupę ( kur OR⁵ yra hidroksilo grupė ar pakeista hidroksilo grupė, turinti iki 25 anglies atomų) ir R³ žymi vandenilio atomą, arba R² ir R³ kartu su anglies atomu, prie kurio jos prisijungusios, žymi ) C = 0 grupę; irOR⁴ žymi OR⁵, apibrėžtą aukščiau;su sąlyga, kad, kai R 2 žymi hidroksilo grupę, OR 4 yra pakeista hidroksilo grupė, bet ne metoksilo grupė.

2. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad R¹ yra izopropilo grupė.

3. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad R 1 yra izopropilo grupė, R 2 yra vandenilio atomas ar etoksilo, n- propoksilo, acetoksilo ar propionoksilo grupė, ir R³ yra vandenilio atomas ar R² ir R³ kartu su anglies atomu, prie kurio jos prisijungusios, sudaro }C=O, ir OR⁴ yra hidroksilo, acetoksilo ar metiloksi-karboniloksilo grupė.

4. Junginys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad:12 3 R yra izopropilo grupė, R yra vandenilio atomas, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra hidroksilo grupė;12 3 R yra izopropilo grupė, R yra propionoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir OR 4 yra hidroksilo grupe;R 1 yra izopropilo grupė, R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurio jos prisijungusios, žymi >C = 0 grupę ir -OR⁴ yra hidroksilo grupė;R 1 yra izopropilo grupė, R 2 yra etoksilo grupė, R 3 yra vandenilio atomas ir -OR⁴ yra hidroksilo grupė;12 3 R yra izopropilo grupė, R yra n-propoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir -OR⁴ hidroksilo grupė;12 3 R yra metilo grupė, R yra acetoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra vandenilio atomas;12 3 R yra etilo grupe, R yra acetoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra hidroksilo grupė; arba12 3 R yra izopropilo grupė, R yra acetoksilo grupė, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra hidroksilo grupė.5. Žmonių gydymui ir veterinarijai tinkama kompozicija, besiskirianti tuo, kad jos sudėtyje kartu su vienu ar keliais nešikliais ir/ar užpildais yra veiklus kiekis bent vieno junginio pagal 1 punktą.6. Kenkėjus reguliuojanti kompozicija, skirta kovai su kenkėjais, pavyzdžiui, žemės ūkyje, sodininkystėje ar miškininkystėje, besiskirianti tuo, kad jos sudėtyje kartu su vienu ar keliais nešikliais ir/ar užpildais yra veiklus kiekis bent vieno junginio pagal 1 punktą.7. Junginio pagal 1 punktą gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad:(a) junginys, kuriame viena ar abi R² ir OR⁴ yra pakeistos hidroksilo grupės, gaunamas, sąveikaujant ati-tinkamam junginiui, kuriame viena ar abi R 2 ir OR 4 yra hidroksilo grupės, su hidroksilą keičiančiu reagentu, sąveikos metu OR⁴ esant apsaugotai hidroksilo grupei, gaunami junginiai, kuriuose OR 4 yra -OH;(b) junginys, kuriame R 2 ir R 3 abi yra vandenilio atomai, gaunamas, redukuojant atitinkamą junginį, kuriame R² yra homolitiškai redukuojamas atomas ar grupė;(c) junginys, kuriame R 2 ir R 3 kartu žymi okso grupę, gaunamas oksiduojant atitinkamą junginį, kuriame R² yra-OH, OR 4 yra apsaugota hidroksilo grupė, gaunant junginius, kuriuose OR 4 yra -OH;(d) junginys, kuriame R² ar OR⁴ yra hidroksilo grupė, gaunamas, atskeliant apsauginę grupę nuo atitinkamo junginio, kuriame R² ar OR⁴ yra apsaugota hidroksilo grupė;(e) (II) formule atvaizduojamos rūgšties druska, gaunamas, veikiant rūgšti, baze ar paverčiant vieną druską kita jonų apykaitos keliu; arba(f) junginys, kuriame R² ir R³ kartu žymi okso grupę ir OR 4 yra -OH ar metoksi, gaunamas, kai yra kultivuojamas

12 3 R yra izopropilo grupė, R yra vandenilio atomas, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra hidroksilo grupė;12 3 R yra izopropilo grupė, R yra propionoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir OR 4 yra hidroksilo grupe;R 1 yra izopropilo grupė, R 2 ir R 3 kartu su anglies atomu, prie kurio jos prisijungusios, žymi >C = 0 grupę ir -OR⁴ yra hidroksilo grupė;R 1 yra izopropilo grupė, R 2 yra etoksilo grupė, R 3 yra vandenilio atomas ir -OR⁴ yra hidroksilo grupė;12 3 R yra izopropilo grupė, R yra n-propoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir -OR⁴ hidroksilo grupė;12 3 R yra metilo grupė, R yra acetoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra vandenilio atomas;12 3 R yra etilo grupe, R yra acetoksilo grupe, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra hidroksilo grupė; arba12 3 R yra izopropilo grupė, R yra acetoksilo grupė, R yra vandenilio atomas ir OR⁴ yra hidroksilo grupė.5. Žmonių gydymui ir veterinarijai tinkama kompozicija, besiskirianti tuo, kad jos sudėtyje kartu su vienu ar keliais nešikliais ir/ar užpildais yra veiklus kiekis bent vieno junginio pagal 1 punktą.6. Kenkėjus reguliuojanti kompozicija, skirta kovai su kenkėjais, pavyzdžiui, žemės ūkyje, sodininkystėje ar miškininkystėje, besiskirianti tuo, kad jos sudėtyje kartu su vienu ar keliais nešikliais ir/ar užpildais yra veiklus kiekis bent vieno junginio pagal 1 punktą.7. Junginio pagal 1 punktą gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad:(a) junginys, kuriame viena ar abi R² ir OR⁴ yra pakeistos hidroksilo grupės, gaunamas, sąveikaujant ati-tinkamam junginiui, kuriame viena ar abi R 2 ir OR 4 yra hidroksilo grupės, su hidroksilą keičiančiu reagentu, sąveikos metu OR⁴ esant apsaugotai hidroksilo grupei, gaunami junginiai, kuriuose OR 4 yra -OH;(b) junginys, kuriame R 2 ir R 3 abi yra vandenilio atomai, gaunamas, redukuojant atitinkamą junginį, kuriame R² yra homolitiškai redukuojamas atomas ar grupė;(c) junginys, kuriame R 2 ir R 3 kartu žymi okso grupę, gaunamas oksiduojant atitinkamą junginį, kuriame R² yra-OH, OR 4 yra apsaugota hidroksilo grupė, gaunant junginius, kuriuose OR 4 yra -OH;(d) junginys, kuriame R² ar OR⁴ yra hidroksilo grupė, gaunamas, atskeliant apsauginę grupę nuo atitinkamo junginio, kuriame R² ar OR⁴ yra apsaugota hidroksilo grupė;(e) (II) formule atvaizduojamos rūgšties druska, gaunamas, veikiant rūgšti, baze ar paverčiant vieną druską kita jonų apykaitos keliu; arba(f) junginys, kuriame R² ir R³ kartu žymi okso grupę ir OR 4 yra -OH ar metoksi, gaunamas, kai yra kultivuojamas(a) junginys, kuriame viena ar abi R² ir OR⁴ yra pakeistos hidroksilo grupės, gaunamas, sąveikaujant ati-tinkamam junginiui, kuriame viena ar abi R 2 ir OR 4 yra hidroksilo grupės, su hidroksilą keičiančiu reagentu, sąveikos metu OR⁴ esant apsaugotai hidroksilo grupei, gaunami junginiai, kuriuose OR 4 yra -OH;(b) junginys, kuriame R 2 ir R 3 abi yra vandenilio atomai, gaunamas, redukuojant atitinkamą junginį, kuriame R² yra homolitiškai redukuojamas atomas ar grupė;(c) junginys, kuriame R 2 ir R 3 kartu žymi okso grupę, gaunamas oksiduojant atitinkamą junginį, kuriame R² yra-OH, OR 4 yra apsaugota hidroksilo grupė, gaunant junginius, kuriuose OR 4 yra -OH;-OH, OR 4 yra apsaugota hidroksilo grupė, gaunant junginius, kuriuose OR 4 yra -OH;(d) junginys, kuriame R² ar OR⁴ yra hidroksilo grupė, gaunamas, atskeliant apsauginę grupę nuo atitinkamo junginio, kuriame R² ar OR⁴ yra apsaugota hidroksilo grupė;(e) (II) formule atvaizduojamos rūgšties druska, gaunamas, veikiant rūgšti, baze ar paverčiant vieną druską kita jonų apykaitos keliu; arba(f) junginys, kuriame R² ir R³ kartu žymi okso grupę ir OR 4 yra -OH ar metoksi, gaunamas, kai yra kultivuojamas

LT3684B